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永生化人成牙本质细胞样细胞系的建立 被引量:22
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作者 王捍国 肖明振 +2 位作者 赵守亮 郝建军 张进 《第四军医大学学报》 北大核心 2003年第10期876-878,共3页
目的 :建立永生化人成牙本质细胞系 .方法 :采用脂质体转染法 ,将人端粒酶逆转录酶 (hTERT)基因导入原代人成牙本质细胞样细胞 .培养液加G4 18筛选约 1mo后 ,抗性细胞克隆形成 ,滤纸片法转移、扩增并连续培养 .检测转染细胞内hTERT的基... 目的 :建立永生化人成牙本质细胞系 .方法 :采用脂质体转染法 ,将人端粒酶逆转录酶 (hTERT)基因导入原代人成牙本质细胞样细胞 .培养液加G4 18筛选约 1mo后 ,抗性细胞克隆形成 ,滤纸片法转移、扩增并连续培养 .检测转染细胞内hTERT的基因整和和表达 ,初步分析细胞系的生物学特征 .结果 :hTERT稳定转染入目的细胞 ,表达mRNA及其蛋白 .转染后共获得 5个细胞克隆 ,克隆 5b来源的细胞在体外长期连续培养下生长良好 ,具有较高碱性磷酸酶活性 ,在转录水平表达成牙本质细胞特异性标志牙本质涎磷蛋白 ,细胞核型正常 .该细胞系至今传代 5 6代 ,约 6mo,命名为hTERT hOd l.结论 展开更多
关键词 成牙质细胞 永生化 细胞系 端粒 末端转移酶
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体外人牙髓细胞的连续培养 被引量:11
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作者 何飞 谭颖徽 杨峥嵘 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第7期836-839,共4页
目的 探讨体外连续培养过程中人恒牙牙髓细胞向成牙本质样细胞分化的可行性。方法 采用细胞连续培养、酶动力学法、透射电镜观察、免疫组化等方法 ,对体外人牙髓细胞在连续培养过程中的生物学特性进行研究。结果 部分人牙髓细胞在体... 目的 探讨体外连续培养过程中人恒牙牙髓细胞向成牙本质样细胞分化的可行性。方法 采用细胞连续培养、酶动力学法、透射电镜观察、免疫组化等方法 ,对体外人牙髓细胞在连续培养过程中的生物学特性进行研究。结果 部分人牙髓细胞在体外可以出现复层生长 ,形成细胞结节 ,并可进一步钙化 ;与成牙本质细胞相似 ,它们具有高碱性磷酸酶活性 ,可合成Ⅰ型胶原 ,其超微结构有许多与成牙本质细胞相似的特征 ,胞间基质中可见膜被基质小泡 ,某些基质小泡内含针状晶体。结论 体外连续培养的人牙髓细胞可向成牙本质细胞分化 ,此过程可作为研究体内牙髓损伤修复细胞增殖。 展开更多
关键词 牙髓细胞 成牙本质细胞 细胞分化 细胞培养 牙髓损伤
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BMP-2诱导人牙髓细胞分化过程中miRNA表达谱的变化 被引量:7
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作者 包丽荣 赵文青 +2 位作者 林田 陆彦玲 吴煜 《上海口腔医学》 CAS CSCD 2017年第5期476-483,共8页
目的:筛选出骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)诱导人牙髓细胞(human dental pulp cells,h DPCs)成牙本质向分化时差异表达的微小RNA(miRNAs)。方法:以BMP-2诱导液培养h DPCs 14 d作为诱导组,以未诱导的h DPCs为对照... 目的:筛选出骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)诱导人牙髓细胞(human dental pulp cells,h DPCs)成牙本质向分化时差异表达的微小RNA(miRNAs)。方法:以BMP-2诱导液培养h DPCs 14 d作为诱导组,以未诱导的h DPCs为对照组,实时定量PCR检测成牙本质相关基因:牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)、牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein-1,DMP-1)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的表达;通过miRNA芯片筛选h DPCs向成牙本质细胞分化过程中差异表达的miRNAs,采用实时定量PCR对结果进行验证;应用生物信息学软件进行靶基因预测,初步推测BMP-2诱导h DPCs分化过程中涉及的通路及功能。采用SPSS 18.0软件包对数据进行统计学分析。结果:实时定量PCR结果显示,各目的基因(DSPP、DMP-1、ALP)在诱导组的表达均高于对照组(P<0.05)。基因芯片结果显示,h DPCs成牙本质向诱导后,差异表达的miRNAs有36个,包括上调20个和下调16个。实时定量PCR对其中5个miRNAs的验证结果与芯片结果基本一致。生物信息学分析显示,基因的功能分布为37.8%与生物过程有关,29%与细胞成分有关,33%与分子功能有关,约有0.2%的基因未检测出具体功能和作用。结论:在h DPCs经BMP-2诱导向成牙本质细胞分化过程中,存在miRNA表达谱变化,为进一步研究差异表达的miRNAs在h DPCs分化过程中的作用及其靶基因的生物学效应奠定了基础。 展开更多
关键词 牙髓细胞 BMP-2 MIRNA 牙本质细胞 基因表达谱
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基质金属蛋白酶在健康牙齿和龋齿成牙本质细胞中的表达 被引量:6
4
作者 王晓春 于海燕 +2 位作者 毕佳锐 陈瑶 毕良佳 《天津医药》 CAS 北大核心 2013年第1期12-14,I0002,共4页
目的比较基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、MMP-8在健康牙齿和龋齿中的表达,探讨MMP在龋病进展中的作用。方法选取健康第三磨牙和龋病第三磨牙各30个,利用明胶酶谱、Western-blot、免疫组化的方法,对比研究MMP-2、MMP-9、MMP-8在健康牙齿... 目的比较基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、MMP-8在健康牙齿和龋齿中的表达,探讨MMP在龋病进展中的作用。方法选取健康第三磨牙和龋病第三磨牙各30个,利用明胶酶谱、Western-blot、免疫组化的方法,对比研究MMP-2、MMP-9、MMP-8在健康牙齿和龋齿中的表达。结果免疫组化染色显示,3种蛋白在健康牙齿和龋齿成牙本质细胞层均有表达,且在健康牙齿中呈弱阳性,在龋齿中成强阳性。在健康和龋病成牙本质细胞上清液中均检测到一条相对分子质量为5×104的MMP-8条带,且其在龋齿成牙中的表达强度(22.71±1.73)高于健康牙齿(17.22±1.22),差异有统计学意义。在健康牙齿本质细胞培养液中,可检测到MMP-2的酶原和活性酶,MMP-9仅有酶原形式,龋齿组中MMP-2、MMP-9的水平(10.26±1.89)、(6.74±2.43)高于相应健康组(6.62±1.68)、(2.60±1.08),差异有统计学意义。结论 MMP-2、MMP-9、MMP-8可能在龋病进展中发挥作用。 展开更多
关键词 基质金属蛋白酶2 基质金属蛋白酶8 基质金属蛋白酶9 成牙质细胞 龋齿
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Notch配体Delta1对人牙髓干细胞分化的影响 被引量:4
5
作者 何飞 杨峥嵘 谭颖徽 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2005年第4期181-184,共4页
目的:探讨Notch配体Delta1对体外人牙髓干细胞(dentalpulpstemcells,DPSCs)向成牙本质细胞分化能力的影响。方法:利用逆转录病毒载体建立高表达人Delta1基因的人牙髓干细胞系;实验分三组,正常牙髓干细胞组、转导细胞组及混合组(正常与... 目的:探讨Notch配体Delta1对体外人牙髓干细胞(dentalpulpstemcells,DPSCs)向成牙本质细胞分化能力的影响。方法:利用逆转录病毒载体建立高表达人Delta1基因的人牙髓干细胞系;实验分三组,正常牙髓干细胞组、转导细胞组及混合组(正常与转导细胞比例为100∶1),分别进行体外分化诱导。倒置显微镜观测各组细胞各生长期出现的时间;VonKossa染色计数各组形成钙化结节数;Westernblot法检测各组细胞牙本质涎磷蛋白表达。结果:与正常牙髓干细胞相比,转导细胞各生长期出现时间明显提前,形成的钙化细胞结节数目显著增加,牙本质涎磷蛋白表达显著升高。结论:Delta1基因转导牙髓干细胞仍保持了体外向成牙本质细胞分化的能力;Notch-Delta1信号与分化诱导因子协同作用可促进人牙髓干细胞向成牙本质细胞分化。 展开更多
关键词 DELTA NOTCH 人牙髓干细胞 成牙本质细胞 分化
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骨形态发生蛋白-2、-4、-6、-7和-9差异性介导永生化成牙本质细胞成骨分化 被引量:3
6
作者 李静 张艺 王金华 《上海口腔医学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期242-249,共8页
目的:研究永生化成牙本质细胞(immortalized odontoblasts,iODs)的间充质干细胞表型和骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)-2、-4、-6、-7和-9差异介导iODs成骨分化的作用.方法:使用SV40 T抗原永生化成牙本质细胞(odontobla... 目的:研究永生化成牙本质细胞(immortalized odontoblasts,iODs)的间充质干细胞表型和骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)-2、-4、-6、-7和-9差异介导iODs成骨分化的作用.方法:使用SV40 T抗原永生化成牙本质细胞(odontoblasts),建立iOD细胞株,并连续检测BMP的内源性表达.使用Ad-Easy技术合成表达BMP和GFP的重组腺病毒,使用MTT试剂盒检测iOD的增殖能力.通过免疫荧光检测iOD的间充质干细胞表面标志物.在体外,使用半定量RT-PCR、碱性磷酸酶活性、茜素红染色及油红0染色检测iOD的成骨和成脂分化能力.最后,使用micro-CT和组织学分析评估体内形成的异位矿化组织的体积和密度.采用SPSS 21.0软件包中的单因素方差分析和Scheffe的多重比较检验对结果进行分析.结果:SV40T抗原有效地永生化OD.iOD细胞株保持良好的增殖活性,表达间充质干细胞表面标志物并具有多向分化能力.相比BMP-4、-6和-7,BMP-2和BMP-9具有更强的介导iOD的成骨分化作用.结论:ODs和成骨生长因子(如BMP-2和BMP-9)可用作骨组织生物工程的有效策略. 展开更多
关键词 骨形态发生蛋白 成牙本质细胞 永生化 成骨分化
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修复性牙本质形成过程中一氧化氮的功能——I:一氧化氮合成酶的表达 被引量:3
7
作者 梅予锋 《临床口腔医学杂志》 2007年第1期29-32,共4页
目的:观察大白鼠磨牙窝洞制备后,修复性牙本质形成过程中一氧化氮合酶NOS的表达。方法:大白鼠磨牙窝洞制备后制作冰冻切片,免疫组化染色观察成牙本质细胞与牙髓细胞中一氧化氮合酶的表达。结果:正常大白鼠磨牙中,内皮型一氧化氮合酶(eN... 目的:观察大白鼠磨牙窝洞制备后,修复性牙本质形成过程中一氧化氮合酶NOS的表达。方法:大白鼠磨牙窝洞制备后制作冰冻切片,免疫组化染色观察成牙本质细胞与牙髓细胞中一氧化氮合酶的表达。结果:正常大白鼠磨牙中,内皮型一氧化氮合酶(eNOS)呈阳性反应,而诱导型一氧化氮合酶(iNOS)呈阴性反应。牙体制备后即刻,损伤的成牙本质细胞中两种一氧化氮合酶均呈弱阳性反应;制备1d后,在牙髓牙本质界中浸润的中性粒细胞中表现为诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的强阳性反应,并在制备3d后,扩展至全部牙髓细胞;同阶段,内皮型一氧化氮合酶(eNOS)在上述细胞中,均呈弱阳性反应。制备7d后,修复性牙本质深部成牙本质细胞中,诱导型一氧化氮合酶(iN-OS)呈阴性反应,而内皮型一氧化氮合酶(eNOS)呈阳性反应。结论:一氧化氮参与了修复性牙本质形成过程中成牙本质细胞的分化与功能调节。 展开更多
关键词 一氧化氮合成酶 成牙本质细胞 修复性牙本质
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Notch-2在大鼠牙髓炎中的时空分布及其意义 被引量:3
8
作者 马亮 张亚庆 +1 位作者 王胜朝 黄贞贞 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期798-802,共5页
目的:研究单纯开髓导致大鼠牙髓炎进程中Notch-2在牙髓损伤修复中的作用。方法:通过开髓建立大鼠牙髓炎模型,用免疫组织化学染色方法研究Notch-2的时空表达变化及其意义。结果:牙髓损伤早期(3 d),牙髓间充质细胞和牙髓成纤维细胞中Notc... 目的:研究单纯开髓导致大鼠牙髓炎进程中Notch-2在牙髓损伤修复中的作用。方法:通过开髓建立大鼠牙髓炎模型,用免疫组织化学染色方法研究Notch-2的时空表达变化及其意义。结果:牙髓损伤早期(3 d),牙髓间充质细胞和牙髓成纤维细胞中Notch-2均呈弱阳性表达,成牙本质细胞为阴性表达。牙髓损伤中期(5 d),靠近损伤区的成牙本质细胞深层细胞Notch-2阳性表达达到高峰;同时,新生毛细血管内皮细胞呈强阳性表达。牙髓损伤晚期(7 d),Notch-2在牙髓间充质细胞、血管内皮细胞中表达均减弱,而在成牙本质细胞阳性表达达到高峰。牙髓损伤末期(14 d),Notch-2仅在成牙本质细胞下层细胞中尚有微弱表达,而其余牙髓细胞均为阴性表达。对照组正常牙髓组织Notch-2表达为阴性。结论:Notch-2在牙髓损伤应激情况下在牙髓间充质细胞和成牙本质细胞中上调表达,对于启动牙髓自我修复、诱导牙髓间充质细胞功能性分化以及抑制受损成牙本质细胞凋亡、维系和调动其相对正常的生理功能可能具有重要作用。 展开更多
关键词 Notch-2 牙齿 成牙本质细胞 损伤修复
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Matrilin-4对大鼠牙髓损伤后修复性牙本质形成的促进作用 被引量:3
9
作者 谢金芳 孟琳 +4 位作者 高华丽 李雪洋 胡雪 张颖丽 尹硕 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期73-77,I0005,共6页
目的:研究Matrilin-4对大鼠牙髓损伤后修复性牙本质形成的作用,探讨其作为新型盖髓剂的可能性。方法:28只雄性Wistar大鼠,在大鼠的双侧上颌第一磨牙牙合面备洞至露髓后,左侧用含Matrilin-4的胶原蛋白海绵盖髓(Matrilin-4组),右侧用含磷... 目的:研究Matrilin-4对大鼠牙髓损伤后修复性牙本质形成的作用,探讨其作为新型盖髓剂的可能性。方法:28只雄性Wistar大鼠,在大鼠的双侧上颌第一磨牙牙合面备洞至露髓后,左侧用含Matrilin-4的胶原蛋白海绵盖髓(Matrilin-4组),右侧用含磷酸盐缓冲溶液(PBS)的胶原蛋白海绵盖髓(PBS组),双侧均用玻璃离子封洞。分别于3、7、14和28d灌流固定处死大鼠并取上颌双侧第一磨牙标本,HE染色和免疫组织化学染色观察分析各组大鼠修复性牙本质形成及成牙本质细胞中牙本质涎蛋白(DSP)的表达情况。结果:HE染色,3d时与PBS组比较,Matrilin-4组穿髓孔下方较少量炎症细胞聚集,并可见明显的血管扩张;7d时2组穿髓孔下方炎症反应加重,但Matrilin-4组明显轻于PBS组,且可见前期牙本质形成;14d时Matrilin-4组露髓区域可被较连续完整的修复性牙本质桥覆盖;28d时,与PBS组比较,Matrilin-4组穿髓孔下方可见厚而完整的修复性牙本质桥,牙本质桥下面有重组的成牙本质细胞层。免疫组织化学染色,2组大鼠成牙本质细胞中DSP阳性表达强度在术后3、7和14d呈逐渐增强趋势,28d时减弱;盖髓后各时间点Matrilin-4组大鼠成牙本质细胞中DSP阳性表达强度均强于PBS组,且14d时阳性表达达高峰。与PBS组比较,3、7和14d时Matrilin-4组大鼠成牙本质细胞中DSP阳性表达强度明显升高(P<0.01)。结论:Matrilin-4对牙髓损伤后修复性牙本质的形成具有促进作用。 展开更多
关键词 Matrilin-4 牙髓损伤修复 盖髓剂 成牙本质细胞
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瞬时感受器电位香草酸受体3离子通道蛋白在人成牙本质细胞中的表达 被引量:2
10
作者 梁春云 吴声 +1 位作者 胡德渝 阙克华 《中华口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期679-682,共4页
目的通过免疫组织化学法研究瞬时感受器电位香草酸受体3(transientreceptorpotentialvanilloid3,TRPV3)离子通道蛋白在人成牙本质细胞(odontoblasts,OD)中的表达,以进一步丰富人OD离子通道的研究。方法选取18~25岁患者因正畸拔... 目的通过免疫组织化学法研究瞬时感受器电位香草酸受体3(transientreceptorpotentialvanilloid3,TRPV3)离子通道蛋白在人成牙本质细胞(odontoblasts,OD)中的表达,以进一步丰富人OD离子通道的研究。方法选取18~25岁患者因正畸拔除的健康完整的第三磨牙20颗,HE染色确定组织切片质量,牙本质涎磷蛋白(dentinsialophosphoproteins,DSPP)抗体染色定位OD层,通过TRPV3通道蛋白特异性抗体染色分析TRPV3通道蛋白在人牙髓组织中的分布情况,重点观察TRPV3通道蛋白在OD层的分布特点,并用ImageProPlus软件半定量比较冠根不同部位ODTRPV3通道蛋白的表达情况。结果免疫组化结果显示冠根部牙髓OD胞体TRPV3通道蛋白表达阳性,冠部明显强于根部。OD细胞突起亦有TRPV3通道蛋白阳性表达,ImageProPlus分析显示,TRPV3通道蛋白在冠部OD细胞突起的表达(积分吸光度值为2516±162)与根髓外侧(积分吸光度值为2224±150)、根髓内侧(积分吸光度值为2121±92)比较,差异均有统计学意义(P〈0.05);根髓外侧与内侧相比差异无统计学意义(P〉0.05)。结论人OD明显表达TRPV3通道蛋白,且在不同部位牙髓OD中存在表达差异。 展开更多
关键词 TRPV阳离子通道 免疫组织化学 成牙本质细胞
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成牙本质细胞中上游刺激因子1表达的原位杂交研究 被引量:2
11
作者 吴礼安 文玲英 +1 位作者 杨富生 刘勇 《上海口腔医学》 CAS CSCD 2003年第2期120-122,共3页
目的检测、证实成牙本质细胞中上游刺激因子1(USF1)mRNA的表达。方法用前期制备的T—USF1质粒作模板,借助特异性引物PCR扩增USF1cDNA片段,回收、随机引物法地高辛标记;培养成牙本质细胞MDPC-23,制备细胞爬片,原位杂交方法检测。结果成... 目的检测、证实成牙本质细胞中上游刺激因子1(USF1)mRNA的表达。方法用前期制备的T—USF1质粒作模板,借助特异性引物PCR扩增USF1cDNA片段,回收、随机引物法地高辛标记;培养成牙本质细胞MDPC-23,制备细胞爬片,原位杂交方法检测。结果成牙本质细胞胞浆中有较强的蓝紫色颗粒。结论首次证实体外培养的成牙本质细胞中有USF1mRNA表达,为深入研究USF1分子对成牙本质细胞生长、分化和矿化影响提供了实验依据。 展开更多
关键词 成牙本质细胞 上游刺激因子1 原位杂交 MRNA PCR 细胞生长 体外培养
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FGF8辅助牙源性上皮诱导hDPSCs分化为成牙本质细胞及牙髓细胞 被引量:2
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作者 刘皓 姜建萍 +6 位作者 张娟娟 潘智芳 李孟杰 梁铮 赵翔宇 孙岩 刘晓影 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期730-734,共5页
目的:研究成纤维细胞生长因子8(FGF8)对成人牙髓干细胞(hDPSCs)定向分化为成牙本质细胞及牙髓组织的影响。方法:首先分离、克隆培养hDPSCs,通过流式细胞术检测细胞表面标志物鉴定hDPSCs;矿化液中添加50μg/L的FGF8诱导hDPSCs分化,通过re... 目的:研究成纤维细胞生长因子8(FGF8)对成人牙髓干细胞(hDPSCs)定向分化为成牙本质细胞及牙髓组织的影响。方法:首先分离、克隆培养hDPSCs,通过流式细胞术检测细胞表面标志物鉴定hDPSCs;矿化液中添加50μg/L的FGF8诱导hDPSCs分化,通过real-time PCR检测分化后的细胞中牙本质涎磷蛋白(DSPP)、碱性磷酸酶(ALP)、骨涎蛋白(BSP)和核心结合因子α1(Cbfa-1)在mRNA水平的表达;E11.5小鼠牙源性上皮联合FGF8与hDPSCs细胞团重组,再将组织块种植于裸鼠肾囊膜下培养,通过DNA原位杂交鉴定成牙本质细胞及牙髓细胞的来源。结果:成功分离培养hDPSCs,其表面标志物CD29和CD90呈阳性表达;经FGF8诱导的hDPSCs形成较明显的矿化结节,并且牙本质特异性蛋白DSPP、BSP及Cbfa-1表达量上调;E11.5小鼠牙源性上皮联合FGF8可以诱导hDPSCs分化为成牙本质细胞及牙髓细胞。结论:FGF8能够辅助牙源性上皮定向诱导hDPSCs分化为成牙本质细胞及牙髓细胞,并形成牙本质及牙髓腔结构。 展开更多
关键词 成纤维细胞生长因子8 成人牙髓干细胞 成牙本质细胞
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人牙髓细胞在离体牙髓腔内向成牙本质细胞样细胞分化的研究 被引量:2
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作者 朱轶萍 张光东 吴友农 《口腔医学》 CAS 2008年第1期18-20,共3页
目的观察人牙髓细胞在离体牙髓腔内向成牙本质细胞样细胞分化的潜能。方法将原代培养的人牙髓细胞接种至处理过的离体牙髓腔内,2周后固定、脱钙、包埋、切片、染色,显微镜下观察其生长及分化情况。结果牙髓细胞在牙本质表面生长良好,部... 目的观察人牙髓细胞在离体牙髓腔内向成牙本质细胞样细胞分化的潜能。方法将原代培养的人牙髓细胞接种至处理过的离体牙髓腔内,2周后固定、脱钙、包埋、切片、染色,显微镜下观察其生长及分化情况。结果牙髓细胞在牙本质表面生长良好,部分细胞伸出胞质突伸入牙本质小管中,表现出成牙本质细胞样细胞的形态。结论牙本质可以诱导牙髓细胞向成牙本质细胞样细胞分化,可为组织工程化牙髓的研制提供实验依据。 展开更多
关键词 组织工程 牙髓细胞 成牙本质细胞 牙本质
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基于单细胞测序技术构建小鼠磨牙牙髓细胞的发育图谱 被引量:1
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作者 温泉 任惠惠 +3 位作者 赵玉鸣 闫文娟 葛立宏 陈小贤 《中华口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期442-450,共9页
目的通过在单细胞水平分析小鼠磨牙细胞间异质性,构建牙髓细胞发育的时空图谱,进一步揭示牙齿发育的过程和调控机制。方法分别收集出生后0、3 d的C57BL/6小鼠下颌第一磨牙各10颗,制备单细胞悬液,采用单细胞转录组测序(single-cell RNA s... 目的通过在单细胞水平分析小鼠磨牙细胞间异质性,构建牙髓细胞发育的时空图谱,进一步揭示牙齿发育的过程和调控机制。方法分别收集出生后0、3 d的C57BL/6小鼠下颌第一磨牙各10颗,制备单细胞悬液,采用单细胞转录组测序(single-cell RNA sequencing,scRNA-seq)技术进行测序。从本课题组前期研究中提取出生后7 d小鼠磨牙scRNA-seq数据,与0、3 d数据进行合并分析。使用Seurat程序对测序数据进行质控、标准化、降维和聚类分析;Monocle程序进行拟时序分析,预测发育轨迹;Scillus程序进行基因本体分析,对细胞功能进行注释。使用原位杂交技术对标记基因进行体内定位,明确不同亚群细胞的体内分布和时空变化。结果Seurat分析显示小鼠磨牙细胞具有26个细胞亚群,可分为牙髓细胞、牙囊细胞、上皮细胞、免疫细胞、内皮细胞、管周细胞、胶质细胞和红细胞等八大类细胞,其中牙髓细胞包含5个亚群:成熟牙髓细胞,标记基因为柯萨奇病毒腺病毒受体(coxsackie virus and adenovirus receptor,Cxadr);牙乳头细胞,标记基因为SPARC相关模块化钙结合蛋白2(SPARC related modular calcium binding 2,Smoc2);周期细胞,标记基因为Ⅱ型DNA拓扑异构酶(DNA topoisomeraseⅡalpha,Top2a);前成牙本质细胞,标记基因为棕榈酰蛋白羧酸酯酶(notum palmitoleoyl-protein carboxylesterase,Notum);成牙本质细胞,标记基因为牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,Dspp)。随着牙胚发育,成熟牙髓细胞的比例逐渐增加,周期细胞和成牙本质细胞比例逐渐降低。原位杂交染色和基因本体分析结果显示,Cxadr+成熟牙髓细胞定位于牙冠上部,主要功能为成骨和“细胞外结构组织”;Smoc2+牙乳头细胞位于根尖,主要功能与“细胞外结构组织”和器官发育相关;Top2a+周期细胞位于牙冠下部,进行有丝分裂;Notum+前成牙本质细胞邻近上皮根鞘,和Dspp+成牙本质细胞的主要功能 展开更多
关键词 牙髓 牙乳头 单细胞转录组测序 牙齿发育 成牙本质细胞 细胞图谱 小鼠 近交C57BL
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牙髓炎成牙本质细胞P2X7受体表达意义 被引量:2
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作者 姜威 李恩东 +2 位作者 李月玲 俞明 陈劼 《临床军医杂志》 CAS 2016年第3期309-312,共4页
目的探讨成牙本质细胞中P2X7受体(P2X7R)表达在牙髓炎发病及病情进展中的意义。方法取轻度牙髓炎、重度牙髓炎患者和健康者第三磨牙各20例,采用Real-time PCR法检测P2X7R mRNA表达水平,采用Western blotting法检测P2X7R蛋白表达水平;另... 目的探讨成牙本质细胞中P2X7受体(P2X7R)表达在牙髓炎发病及病情进展中的意义。方法取轻度牙髓炎、重度牙髓炎患者和健康者第三磨牙各20例,采用Real-time PCR法检测P2X7R mRNA表达水平,采用Western blotting法检测P2X7R蛋白表达水平;另采用ELISA法检测上述第三磨牙供者的血清样本中IL-1β、IL-6和TNF-α等炎症因子水平。结果按健康组、轻度牙髓炎组、重度牙髓炎组的顺序,第三磨牙成牙本质细胞中P2X7R mRNA和蛋白表达水平均显著增高,患者血清中IL-1β、IL-6的水平显著增高;轻度牙髓炎患者血清中TNF-α与健康人比较,显著升高(P<0.05);但重度牙髓炎患者与轻度牙髓炎患者比较,血清中TNF-α则显著降低(P<0.05)。在轻度牙髓炎患者中,P2X7R mRNA表达与IL-1β水平显著正相关(P<0.05),P2X7R蛋白表达与IL-1β、IL-6和TNF-α水平均呈正相关(P<0.05);在重度牙髓炎患者,P2X7R mRNA表达与IL-1β和IL-6水平均呈正相关(P<0.05),P2X7R蛋白表达与IL-1β和IL-6水平均呈正相关(P<0.05)。结论成牙本质细胞P2X7R表达在牙髓炎发病和病情进展过程中表达增高,且该过程伴随IL-1β、IL-6和TNF-α等炎症因子表达增加。 展开更多
关键词 牙髓炎 P2X7受体 成牙本质细胞 白介素-1Β 白介素-6 肿瘤坏死因子-Α
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支架微观形貌和力学性能对管状牙本质再生的影响 被引量:2
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作者 刘艺萍 王珏 +4 位作者 田子璐 翟培淞 王展麒 周延民 倪世磊 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期314-318,共5页
管状牙本质在牙体组织和牙再生过程中具有重要意义,因其不仅是原发性牙本质的结构特征,同时也能够影响牙的感觉功能的发挥和牙髓细胞的分化并可以为牙齿提供强有力的机械支持。支架是组织工程牙本质再生的三要素之一。多数牙本质再生的... 管状牙本质在牙体组织和牙再生过程中具有重要意义,因其不仅是原发性牙本质的结构特征,同时也能够影响牙的感觉功能的发挥和牙髓细胞的分化并可以为牙齿提供强有力的机械支持。支架是组织工程牙本质再生的三要素之一。多数牙本质再生的实验涉及对支架微观形貌和力学性能的研究。支架材料的微观形貌和力学特征对成牙本质细胞分化、黏附等行为产生重要影响,直接影响着再生牙本质的组织结构。 展开更多
关键词 管状牙本质 支架 成牙本质细胞 再生 牙本质
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成釉细胞和成牙本质细胞的极性及其相关调控分子 被引量:1
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作者 周怡君 闫广兴 +6 位作者 刘苍维 张雪 胡月 郝新青 赵欢 史册 孙宏晨 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期309-313,共5页
成釉细胞和成牙本质细胞极性的形成,对二者的分化及功能至关重要,而极性相关分子在这一过程中发挥着不容忽视的作用。本文就成釉细胞和成牙本质细胞的极性形成过程及其相关调控分子的作用作一综述。
关键词 成釉细胞 成牙本质细胞 细胞极性
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SEMA 3A及其受体NRP-1在大鼠切牙中的表达和意义 被引量:1
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作者 王艳芝 吕琳琳 +1 位作者 张婷 李纾 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 北大核心 2014年第9期518-521,共4页
目的:研究脑信号蛋白3A(Semaphorin3A,SEMA3A)及其受体神经毡蛋白-1(Neuropilin-1,NRP-1)在大鼠切牙的成釉细胞、成牙本质细胞及牙周膜中的定位表达,并探究其在大鼠牙齿发育中的可能意义。方法:取6周龄Wistar大鼠的下颌骨常规脱钙、梯... 目的:研究脑信号蛋白3A(Semaphorin3A,SEMA3A)及其受体神经毡蛋白-1(Neuropilin-1,NRP-1)在大鼠切牙的成釉细胞、成牙本质细胞及牙周膜中的定位表达,并探究其在大鼠牙齿发育中的可能意义。方法:取6周龄Wistar大鼠的下颌骨常规脱钙、梯度乙醇脱水、石蜡包埋,沿颊舌向切片后分别进行HE和免疫组化染色;显微镜下观察Sema3a、Nrp-1在各组成细胞中的表达、分布。结果:在分泌期成釉细胞和成牙本质细胞中Sema3a、Nrp-1均呈阳性表达;在牙周膜细胞中Sema3a呈阳性表达,而Nrp-1的表达为阴性。结论:SEMA3A、NRP-1可能在牙齿硬组织发育中具有重要的意义。 展开更多
关键词 SEMA 3A NRP-1 成釉细胞 成牙本质细胞 牙周膜细胞
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牙髓细胞成牙本质分化的体外诱导:诱导因子及机制揭示 被引量:1
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作者 邹慧儒 Steven Brookes Xuebin Yang 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第37期6051-6058,共8页
背景:研究表明牙髓细胞在一定条件下经诱导可以向成牙本质细胞方向分化,该过程由信号网络调控。目的:综述牙髓细胞向成牙本质细胞方向分化的诱导因子及作用机制的研究进展。方法:应用计算机检索1998年1月至2014年7月中国知网(CNKI)和万... 背景:研究表明牙髓细胞在一定条件下经诱导可以向成牙本质细胞方向分化,该过程由信号网络调控。目的:综述牙髓细胞向成牙本质细胞方向分化的诱导因子及作用机制的研究进展。方法:应用计算机检索1998年1月至2014年7月中国知网(CNKI)和万方数据库相关文献,检索词"牙髓细胞,成牙本质细胞分化"限定文献语言种类为中文。同时计算机检索同期PubMed数据库相关文献,检索词"dental pulp cells,odontoblastic differentiation",限定文献种类为英文。初检所得文献467篇。包括中文214篇,英文253篇。对于初检文献,阅读标题和摘要进行初筛,排除因研究目的与本研究无关者或内容重复性的研究,最终纳入63篇文章进行综述。结果与结论:不同的诱导因子可以作为调控器,文章系统归纳了牙髓细胞在不同的诱导因子作用下,例如:骨形态发生蛋白、β-甘油磷酸钠、抗坏血酸及多种生长因子等,通过相关信号通路信号转导在一定程度上参与牙髓细胞向成牙本质细胞分化定向诱导。但成牙本质细胞分化是一个复杂的过程,进一步从细胞及分子水平研究成牙本质分化诱导因子及相关机制对于牙齿再生治疗临床应用具有重要意义。 展开更多
关键词 干细胞 诱导 牙髓细胞 成牙本质细胞分化 信号转导
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成牙本质细胞中上游刺激因子1对骨桥素表达调控的研究 被引量:1
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作者 吴礼安 文玲英 +1 位作者 杨富生 王小竞 《中华口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期663-664,共2页
目的检测成牙本质细胞中上游刺激因子1(upstream stimulatory factor 1,USF1)对骨桥素表达的影响。方法培养成牙本质细胞 MDPC-23,稳定转染 PCMV-USF1和酸性-USF(A-USF)质粒,提取总 RNA,半定量反转录聚合酶链反应检测骨桥素的表达水平,... 目的检测成牙本质细胞中上游刺激因子1(upstream stimulatory factor 1,USF1)对骨桥素表达的影响。方法培养成牙本质细胞 MDPC-23,稳定转染 PCMV-USF1和酸性-USF(A-USF)质粒,提取总 RNA,半定量反转录聚合酶链反应检测骨桥素的表达水平,并对结果进行统计学分析。结果筛选出稳定转染 USF1和 A-USF 的抗性克隆,USF1、A-USF 转染组和对照组骨桥素相对灰度比值分别为:60.33%±4.51%、229.33%±7.09%、110.00%±15.62%,转染组与对照组差异有统计学意义(P<0.01)。结论 USF1可调控成牙本质细胞骨桥素 mRNA 转录,该作用被 A-USF 部分阻断。 展开更多
关键词 牙本质生成 逆转录聚合酶链反应 成牙本质细胞
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