交叉引物等温扩增检测猪肉源性成分 被引量：17

1

作者 冯涛 李素芳 +2 位作者 毛梦娇 邵柔铭 潘家荣 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1207-1212,共6页

肉制品掺假现象已成为我国食品行业重点关注的问题。本研究使用交叉引物恒温扩增技术(Cross priming amplification,CPA)和核酸试纸条检测相结合的方法快速检测肉制品中猪肉成分。对猪线粒体的D-loop基因序列设计特异性的引物和探针,通... 肉制品掺假现象已成为我国食品行业重点关注的问题。本研究使用交叉引物恒温扩增技术(Cross priming amplification,CPA)和核酸试纸条检测相结合的方法快速检测肉制品中猪肉成分。对猪线粒体的D-loop基因序列设计特异性的引物和探针,通过优化引物浓度及反应条件,确立最佳反应体系。实验结果表明,CPA扩增系统对猪源性成分的检测特异性良好,对单猪源性成分的检出限为1 ng/μL,对混合肉制品中猪源性成分的检出比例为10%(相当于10 ng/μL)。同时核酸试纸条可以快速检测CPA扩增产物,结果与凝胶电泳系统检测保持一致。本研究建立的CPA-核酸试纸条检测方法是一种特异、高效的肉制品中猪肉成分检测方法,可以为肉制品质量控制提供有效的新手段。 展开更多

关键词 交叉引物恒温扩增 核酸试纸条 D-loop基因 猪

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免疫层析试纸条技术及其在转基因检测中的应用 被引量：10

2

作者 夏启玉 李美英 +3 位作者 杨小亮 肖苏生 贺萍萍 郭安平 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期101-110,共10页

转基因检测是转基因生物安全监管的重要环节。目前需要一种适合于大规模筛查的快速检测转基因成分的方法,以扩大转基因生物安全的监测范围。免疫层析试纸条是一种快速免疫分析技术,是目前常用的快速检测方法之一,具有操作简单、样品量... 转基因检测是转基因生物安全监管的重要环节。目前需要一种适合于大规模筛查的快速检测转基因成分的方法,以扩大转基因生物安全的监测范围。免疫层析试纸条是一种快速免疫分析技术,是目前常用的快速检测方法之一,具有操作简单、样品量少、检测快速、成本低等优点,已在医学、食品和环境等多个领域广泛应用。介绍了免疫层析试纸条的组成结构、检测原理及免疫标记物,并总结了其在转基因检测方面的研究进展。 展开更多

关键词 免疫层析试纸条 免疫标记物 转基因检测 蛋白试纸条 核酸试纸条

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CPA-核酸试纸条快速检测霍乱弧菌方法的建立与优化 被引量：7

3

作者 秦强 朱金玲 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期167-171,共5页

用交叉引物恒温扩增技术(Cross priming amplification,CPA)和核酸试纸条检测方法(Nucleic acid test strip detection methord)快速检测霍乱弧菌。根据霍乱弧菌的MDH基因序列设计特异性的引物和探针,通过对反应体系与反应条件进行优化... 用交叉引物恒温扩增技术(Cross priming amplification,CPA)和核酸试纸条检测方法(Nucleic acid test strip detection methord)快速检测霍乱弧菌。根据霍乱弧菌的MDH基因序列设计特异性的引物和探针,通过对反应体系与反应条件进行优化,确立最佳反应体系,并将CPA方法与PCR法进行比较与评价。对霍乱弧菌的检测具有高度特异性,对霍乱弧菌的检出极限达到了6×102CFU/mL,高于PCR,而且具有较好的稳定性。交叉引物恒温扩增技术(Cross priming amplification,CPA)-核酸试纸条检测方法(Nucleic acid test strip detection methord)是一种特异、灵敏、快速、简便的霍乱弧菌的检测方法。 展开更多

关键词 霍乱弧菌 交叉引物恒温扩增技术 核酸试纸条检测方法

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CPA恒温扩增技术检测炭疽芽胞杆菌方法的建立 被引量：6

4

作者 赵婷婷 孙文铮 +2 位作者 杨宇 王旺 王静 《中国国境卫生检疫杂志》 CAS 2014年第4期247-250,263,共5页

目的建立一种简便的新型交叉引物恒温核酸扩增结合层析试纸条方法,快速可视化检测炭疽芽胞杆菌核酸。方法通过序列比对挑选出炭疽芽胞杆菌质粒上的特异性基因pXO2,设计引物、探针并合成标记,建立核酸恒温扩增反应体系,用金标免疫层析试... 目的建立一种简便的新型交叉引物恒温核酸扩增结合层析试纸条方法,快速可视化检测炭疽芽胞杆菌核酸。方法通过序列比对挑选出炭疽芽胞杆菌质粒上的特异性基因pXO2,设计引物、探针并合成标记,建立核酸恒温扩增反应体系,用金标免疫层析试纸条快速检测扩增产物,并测试方法的灵敏度和特异性。结果建立的核酸恒温扩增结合金标条方法检测炭疽芽胞杆菌,采用阳性质粒DNA优化实验条件,灵敏度可达5.4pg/反应体系;建立的检测方法检测炭疽Sterne疫苗株的灵敏度为6×103CFU/ml;与枯草芽胞杆菌、苏云金芽胞杆菌、矮小芽胞杆菌、蜡样芽胞杆菌、蕈状芽胞杆菌等相似菌株无交叉反应。结论本研究建立的方法对炭疽芽胞杆菌检测具有很好的敏感性、特异性,为生物恐怖因子现场检测提供了新方法,在国境检疫及公共卫生安全领域有较好的应用前景。 展开更多

关键词 炭疽芽胞杆菌 交叉引物(CPA) 恒温扩增技术 核酸试纸条检测方法

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黄瓜绿斑驳花叶病毒核酸试纸条检测技术的建立 被引量：6

5

作者 霍亚云 张永江 +3 位作者 李为民 朱罗罗 胡林 尤其敏 《北方园艺》 CAS 北大核心 2017年第10期100-103,共4页

以黄瓜绿斑驳花叶病毒(cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)阳性样品为研究对象,根据其外壳蛋白基因设计3条引物和2条探针,探针5′端分别用生物素和荧光进行标记;利用这套引物和探针在59℃进行RT-PCR恒温扩增90min,扩增产物用核... 以黄瓜绿斑驳花叶病毒(cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)阳性样品为研究对象,根据其外壳蛋白基因设计3条引物和2条探针,探针5′端分别用生物素和荧光进行标记;利用这套引物和探针在59℃进行RT-PCR恒温扩增90min,扩增产物用核酸试纸条进行检测。用其它5种同样侵染葫芦科作物的植物病毒作为对照进行试验,以期确定试纸条检测方法的特异性。将梯度稀释后的总RNA作为模板进行检测,以确定该方法的灵敏度。结果表明:该试验建立的核酸试纸条检测方法对CGMMV具有特异性,能够有效区分CGMMV及同样侵染葫芦科作物的黄瓜花叶病毒(CMV)、辣椒轻斑驳病毒(PMMoV)、烟草花叶病毒(TMV)、番茄花叶病毒(ToMV)和小西葫芦黄花叶病毒(ZYMV);同时该方法也具有较高的灵敏度,可检测低至24.300ng·μL^(-1)的总RNA。因此该试验建立的核酸试纸条法可用于CGMMV的快速检测。 展开更多

关键词 黄瓜绿斑驳花叶病毒 核酸试纸条 检测

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CPA-核酸试纸条检测鸭肉源性成分方法的建立和优化 被引量：6

6

作者 冯涛 杨韩 +2 位作者 张颖洁 李素芳 潘家荣 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期2151-2159,共9页

为建立简单、有效的动物源性成分定性检测方法,根据交叉引物恒温扩增技术(CPA)原理,以鸭属线粒体D-loop基因序列设计引物和探针,优化反应体系与恒温扩增条件,并配合核酸试纸条显色,建立鸭肉源性成分的快速检测方法。结果表明,建立的鸭D-... 为建立简单、有效的动物源性成分定性检测方法,根据交叉引物恒温扩增技术(CPA)原理,以鸭属线粒体D-loop基因序列设计引物和探针,优化反应体系与恒温扩增条件,并配合核酸试纸条显色,建立鸭肉源性成分的快速检测方法。结果表明,建立的鸭D-loop基因CPA扩增体系中交叉引物、内引物、外引物分别为0.6、0.3、0.1μmol·L-1,Mg SO4为8 mmol·L-1。在63℃、60min恒温扩增条件下,单一鸭源性DNA成分检出限为0.1 ng·μL-1,对混合肉制品中鸭肉成分的检出比例为1%(相当于1ng·μL-1)。本研究建立的鸭源性成分检测方法为肉制品掺假鉴定提供了有效的手段。 展开更多

关键词 交叉引物恒温扩增 核酸试纸条 D-loop基因 鸭肉成分

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基于PCR-核酸试纸条快速鉴定鹿茸及其伪品的实验研究 被引量：5

7

作者 徐宁 邵博宇 +7 位作者 于文莹 迟凯月 马玉贺 马秋贺 艾金霞 李明成 高丽君 夏薇 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第18期1528-1534,共7页

目的 通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)与核酸试纸条相结合的方法,实现鹿茸真伪的可视化检测。方法 采用十二烷基硫酸钠(sodium dodecylsulfate, SDS)碱变性法提取正品及伪品鹿茸样品基因组DNA,通过查找细胞色素C氧... 目的 通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)与核酸试纸条相结合的方法,实现鹿茸真伪的可视化检测。方法 采用十二烷基硫酸钠(sodium dodecylsulfate, SDS)碱变性法提取正品及伪品鹿茸样品基因组DNA,通过查找细胞色素C氧化酶亚基I(COI)特异性位点,应用Primer 3.0软件设计鹿茸特异引物,摸索PCR最佳反应体系及条件,建立PCR-核酸试纸条及琼脂糖凝胶电泳鉴定鹿茸真伪的最优条件。同时,通过克隆测序,验证鹿茸真伪鉴定的准确性。结果 本实验中正品鹿茸在PCR-核酸试纸条上均出现两条带,阴性对照及伪品出现一条带,与琼脂糖凝胶电泳结果吻合,且试纸条检测的灵敏度可达1 ng·μL^(-1)。对9个市售鹿茸样品检测,正品鹿茸5个,合格率为45%。结论 自主构建的PCR-核酸试纸条检测方法简单、快速、特异性较好,可在较短时间内实现鹿茸真伪的可视化检测,检测结果稳定,为中药材鉴定提供又一新的方法。 展开更多

关键词 聚合酶链式反应 鹿茸 核酸试纸条 可视化 DNA指纹

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快速鉴定松茸及其制品的可视化核酸试纸条方法建立

8

作者 朱建宇 尹荣 +2 位作者 王艳双 常明珠 周亭亭 《食品科技》 CAS 北大核心 2024年第5期342-348,共7页

松茸(Tricholoma matsutake)是一种稀有、珍贵的野生食用菌,至今还无法人工栽培,目前菌菇市场中存在大量假冒松茸商品。文章建立了快速鉴定松茸及其制品的可视化核酸试纸条法。该方法设计特异性引物,通过聚合酶链式反应(Polymerase Chai... 松茸(Tricholoma matsutake)是一种稀有、珍贵的野生食用菌,至今还无法人工栽培,目前菌菇市场中存在大量假冒松茸商品。文章建立了快速鉴定松茸及其制品的可视化核酸试纸条法。该方法设计特异性引物,通过聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)扩增特异性鉴定松茸特异性基因标志物,优化扩增条件为退火温度63 ℃、15个循环。扩增产物使用胶体金核酸试纸条检测,松茸样本均出现2条红色条带,同时凝胶电泳验证可扩增出352 bp特异性DNA片段。其他菌类及空白对照均在质控线出现1条红色条带,检测线无显色条带,且凝胶电泳无扩增条带,结果特异良好。该方法灵敏度高、稳定性强,模板DNA的最低检出量为0.1 ng/μL,检测试纸条可在常温保存至少12个月。所建立的松茸特异性基因标志物成分检测的可视化核酸试纸条方法检测性能优异,结果稳定可视、操作简便,适用于松茸原料和加工制品的现场检测。 展开更多

关键词 松茸 快速鉴定 聚合酶链式反应 核酸试纸条 可视化检测

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核酸试纸条检测技术在口岸检疫中的应用前景

9

作者 陈展册 钟勇 +4 位作者 郑斯竹 赵晓丽 高文娜 陈舒娴 杜智欣 《中国口岸科学技术》 2024年第7期4-12,共9页

近年来,随着我国进出口贸易量增加,进境货物携带动植物疫病疫情传入风险也随之增加,现场检疫工作急需能够适应口岸快速检验检疫的技术。核酸试纸条检测技术是一种灵敏度高、特异性强、检测时间短、操作简单的可视化检测技术,在食品安全... 近年来,随着我国进出口贸易量增加,进境货物携带动植物疫病疫情传入风险也随之增加,现场检疫工作急需能够适应口岸快速检验检疫的技术。核酸试纸条检测技术是一种灵敏度高、特异性强、检测时间短、操作简单的可视化检测技术,在食品安全、临床诊断等领域已有相关研究及应用。本文分析了实验室现有检测技术在口岸检疫中的现状,阐述了核酸试纸条检测技术的原理与进展,综述了该技术在口岸检疫中卫生检疫、食品安全检测、动植物检疫、中药材鉴别等领域的研究及应用,并探讨了该技术在口岸检疫工作中的应用前景。 展开更多

关键词 核酸试纸条 检测技术 口岸检疫 应用前景

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碳青霉烯类和喹诺酮类双重耐药核酸胶体金试纸条快速检测方法的建立及试剂盒研制

10

作者 潘蓓珍 杨继飞 +4 位作者 王岳峰 刘岩 周钰娇 马玉贺 孙丽媛 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期2386-2390,2398,共6页

目的:建立双重核酸胶体金试纸条快速检测鲍曼不动杆菌(Ab)OXA和par C耐药基因的方法并研制试剂盒。方法:采用加热煮沸法提取Ab的DNA,根据NCBI选择Ab的OXA和par C基因序列作为靶基因片段,设计引物并分别用6-FAM、地高辛和生物素进行标记... 目的:建立双重核酸胶体金试纸条快速检测鲍曼不动杆菌(Ab)OXA和par C耐药基因的方法并研制试剂盒。方法:采用加热煮沸法提取Ab的DNA,根据NCBI选择Ab的OXA和par C基因序列作为靶基因片段,设计引物并分别用6-FAM、地高辛和生物素进行标记,研发耐药基因检测试剂,采用双重核酸胶体金试纸条实现快速、可视化检测。采用分子克隆、测序技术克隆阳性对照品评价试剂盒的特异性、灵敏度和稳定性。结果:水煮法提取的Ab DNA浓度和纯度较好。克隆测序后的质粒DNA与GenBank数据库中基因序列的同源性均为100%;试剂盒的特异性良好,仅Ab出现阳性,其他菌属等均为阴性;双重核酸胶体金试纸条中Ab的DNA浓度降到10-3ng/μl时仍出现红色线,与电泳的最低检测限10-2ng/μl相比,灵敏度高出10倍;试剂盒分别在第3、6和9个月进行检测,稳定性较好。结论:本研究建立的Ab双重耐药检测试剂盒可同时检测Ab的OXA和par C耐药基因,具有高灵敏度、强特异性、快速简便等优点,为临床Ab碳青霉烯类和喹诺酮类抗生素耐药检测提供了一种新型快速的检测方法。 展开更多

关键词 鲍曼不动杆菌 OXA par C 分子克隆 胶体金 核酸试纸条

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平贝母PCR-核酸试纸条快速检测方法的建立和评价

11

作者 马玉贺 商聪慧 +7 位作者 马秋贺 李涛 刘悦 潘蓓珍 高丽君 李明成 夏薇 曲永梅 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1773-1778,共6页

本研究针对平贝母的ITS2序列设计特异性鉴别引物,优化反应体系及条件,构建PCR-核酸试纸条实现可视化检测平贝母。通过分子克隆及测序技术,构建平贝母DNA阳性对照品,制定质量标准。对建立的方法进行性能评价,检测其灵敏度、特异性和重复... 本研究针对平贝母的ITS2序列设计特异性鉴别引物,优化反应体系及条件,构建PCR-核酸试纸条实现可视化检测平贝母。通过分子克隆及测序技术,构建平贝母DNA阳性对照品,制定质量标准。对建立的方法进行性能评价,检测其灵敏度、特异性和重复性,对市售样品进行真伪鉴定。结果显示,基于ITS2序列可对平贝母及其混伪品进行区分。正品平贝母PCR产物滴定于试纸条上显示T、C线两条带,伪品与阴性对照只显示C线一条带,与琼脂糖凝胶电泳结果吻合。特异性为100%,PCR-核酸试纸条灵敏度可达0.1 ng·μL^(-1),高于凝胶电泳检测10倍。16个平贝母市售样品中11个合格,5个不合格。综上,本研究建立的平贝母PCR-核酸试纸条检测方法特异、快速、精准、可视化,可为平贝母检测提供新的技术思路。 展开更多

关键词 平贝母 分子克隆 ITS2序列 核酸试纸条 可视化

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交叉引物恒温扩增技术结合核酸试纸条检测沙门菌方法的建立 被引量：3

12

作者 朱淑英 张兵 《中国卫生检验杂志》 CAS 2023年第9期1079-1081,1106,共4页

目的 建立一种快速检测沙门菌的交叉引物恒温扩增技术(CPA)-核酸试纸条法。方法 收集不同来源的15株沙门菌和非沙门菌,作为实验用菌株,使用加热煮沸法提取细菌DNA核酸;对CPA方法进行敏感性和特异性研究,并与沙门菌荧光定量PCR法进行比... 目的 建立一种快速检测沙门菌的交叉引物恒温扩增技术(CPA)-核酸试纸条法。方法 收集不同来源的15株沙门菌和非沙门菌,作为实验用菌株,使用加热煮沸法提取细菌DNA核酸;对CPA方法进行敏感性和特异性研究,并与沙门菌荧光定量PCR法进行比较与评价。结果 特异性试验结果显示,本研究建立的CPA-核酸试纸条法对15种沙门菌的检测阳性率达100%,对15株非沙门菌检测结果全部为阴性。灵敏性试验结果显示,对沙门菌的纯菌液灵敏度检测极限为1.6 cfu/ml,模拟样本的检测限达到160 cfu/g,与荧光定量PCR法一致。结论 该方法检测沙门菌具有检测时间短、扩增效率高、灵敏度高、特异性强、操作简便等特点,可应用于沙门菌快速检测。 展开更多

关键词 沙门菌 交叉引物恒温扩增技术 核酸试纸条

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PCR-核酸试纸条检测方法鉴别蛤蚧真伪 被引量：3

13

作者 迟凯月 马玉贺 +8 位作者 马秋贺 刘悦 李涛 刘馨悦 高丽君 母润红 李明成 夏薇 曲永梅 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期1484-1493,共10页

目的:蛤蚧为我国的名贵中药材,建立PCR-核酸试纸条检测方法对蛤蚧进行定性鉴别。方法:通过碱裂解法提取蛤蚧及其伪品的基因组DNA,以蛤蚧细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(CoⅠ)为靶基因,设计特异性引物,确定合适的PCR-核酸试纸条反应体系以及反应... 目的:蛤蚧为我国的名贵中药材,建立PCR-核酸试纸条检测方法对蛤蚧进行定性鉴别。方法:通过碱裂解法提取蛤蚧及其伪品的基因组DNA,以蛤蚧细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(CoⅠ)为靶基因,设计特异性引物,确定合适的PCR-核酸试纸条反应体系以及反应条件。结果:通过PCR-核酸试纸条对蛤蚧进行定性分析,正品蛤蚧在PCR-核酸试纸条上均出现2条带,伪品以及阴性对照均出现1条带。结论:PCR-核酸试纸条检测方法可实现短时间内蛤蚧可视化检测,操作方便,结果准确,可以为蛤蚧的DNA分子鉴别提供技术保障。 展开更多

关键词 蛤蚧 真伪 鉴别 核酸试纸条 靶基因 聚合酶链式反应(PCR)

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呼吸道真菌感染核酸胶体金试纸条快速检测方法的建立和评价 被引量：3

14

作者 姜菲菲 宋伶俐 +3 位作者 潘蓓珍 王岳峰 李昊宇 孙丽媛 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期222-230,共9页

目的:采用聚合酶链式反应(PCR)技术和胶体金技术建立一种呼吸道真菌感染核酸胶体金试纸条检测方法,并对其检测效果进行评价。方法:根据GenBank数据库选择真菌内转录间隔区(ITS)基因片段作为靶基因,应用DNAMAN软件对真菌ITS基因片段进行... 目的:采用聚合酶链式反应(PCR)技术和胶体金技术建立一种呼吸道真菌感染核酸胶体金试纸条检测方法,并对其检测效果进行评价。方法:根据GenBank数据库选择真菌内转录间隔区(ITS)基因片段作为靶基因,应用DNAMAN软件对真菌ITS基因片段进行分析,并分别在真菌通用引物5'端用生物素(Biotin)和异硫氰酸荧光素(FITC)进行修饰标记;建立PCR体系,进行体系的最佳条件优化;确定胶体金免疫层析试纸条标记链霉亲和素的最佳标记量和质控线及检测线最佳包被物浓度,组装核酸胶体金试纸条,对试纸条的特异度、灵敏度、重复性和稳定性进行验证。结果:水煮法提取白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌DNA,浓度为180μg·L^(-1)以上,纯度为1.60~2.10;在pH 7.0条件下,每100μL胶体金溶液中制备胶体金标记链霉亲和素最佳标记量为3.3μg,质控线包被Biotin化牛血清白蛋白(BSA-Biotin)浓度为2.00 g·L^(-1),检测线包被抗FITC抗体浓度为1.00 g·L^(-1)。核酸试纸条的特异度与电泳结果一致,仅白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌出现阳性结果,与金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、乙型溶血性链球菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌和大肠埃希菌等常见呼吸道感染细菌无交叉反应。灵敏度检测,白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌的DNA浓度分别为10-4、10-2和10-3 mg·L^(-1)时核酸试纸条仍可准确检出,而普通PCR电泳结果显示白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌最低检测浓度分别为0.01、1.00和0.10 mg·L^(-1);重复性检测,在不同实验室不同操作人员对核酸试纸条进行验证,结果一致,重复性良好;稳定性检测,核酸试纸条在第6、9和12个月进行检测,结果符合预期,稳定性良好。结论:本研究建立的呼吸道真菌感染核酸胶体金试纸条可以检测白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌等真菌,特异度和灵敏度均较高, 展开更多

关键词 呼吸道感染 真菌 胶体金 核酸试纸条

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黄瓜细菌性角斑病菌交叉引物恒温扩增检测技术 被引量：3

15

作者 霍亚云 张永江 +4 位作者 李为民 朱罗罗 胡林 尤其敏 赵文军 《植物检疫》 北大核心 2017年第5期44-47,共4页

黄瓜细菌性角斑病是我国黄瓜生产上的重要病害之一,其病原菌为Pseudomonas syringae pv.lachrymans。根据该病原菌甘油醛-3-磷酸脱氢基因保守序列设计引物和探针,建立了交叉引物恒温扩增和核酸试纸条检测技术。菌体DNA检测灵敏度可达0.5... 黄瓜细菌性角斑病是我国黄瓜生产上的重要病害之一,其病原菌为Pseudomonas syringae pv.lachrymans。根据该病原菌甘油醛-3-磷酸脱氢基因保守序列设计引物和探针,建立了交叉引物恒温扩增和核酸试纸条检测技术。菌体DNA检测灵敏度可达0.55 ng,纯菌直接检测灵敏度基本可达到单个细菌。所测试的5株黄瓜细菌性角斑病菌和染病黄瓜叶片均为阳性,其他13株对照菌株均为阴性。该方法灵敏度高,且操作简单,对设备要求低等,适合基层实验室应用。 展开更多

关键词 黄瓜细菌性角斑病菌 交叉引物恒温扩增 核酸试纸条 检测

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非洲猪瘟病毒可视化重组酶辅助扩增检测方法的建立与初步应用 被引量：2

16

作者 岳怀宁 李艳蕊 +6 位作者 张亚楠 苏恺 袁晨 逯纪成 孙泰然 薛文阁 宋勤叶 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第5期19-25,共7页

为了建立非洲猪瘟病毒(ASFV)重组酶辅助扩增(RAA)与核酸检测试纸条相结合的可视化RAA检测方法,本试验根据ASFV的B646L基因(编码p72蛋白)保守区设计特异性的引物和探针,通过优化引物和探针浓度、反应温度和反应时间,确定反应的最佳体系... 为了建立非洲猪瘟病毒(ASFV)重组酶辅助扩增(RAA)与核酸检测试纸条相结合的可视化RAA检测方法,本试验根据ASFV的B646L基因(编码p72蛋白)保守区设计特异性的引物和探针,通过优化引物和探针浓度、反应温度和反应时间,确定反应的最佳体系和扩增条件;检测建立的可视化RAA方法的特异性和灵敏性,分析建立方法与非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒对临床样品检测结果的符合率。结果显示,建立的可视化RAA方法的反应体系为25μL,在38℃恒温条件下反应20 min即可在5 min内读取结果;与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(PRV)等均不发生交叉反应;单个反应可检测到48.75拷贝的病毒核酸。初步临床应用结果显示,建立的可视化RAA方法与商品化的非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒检测结果一致,其阴性和阳性符合率均为100%。本试验成功建立的基于ASFV B646L基因的可视化恒温扩增方法具有反应时间短、特异性和灵敏度高、操作便捷等优势,适合现场快速检测和诊断,具有进一步开发潜力。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 B646L基因 重组酶辅助扩增技术 可视化 核酸检测试纸条

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重组酶聚合酶扩增核酸试纸条快速检测诺如病毒方法的建立与应用 被引量：2

17

作者 于浩洋 冯春燕 +5 位作者 史喜菊 王彩霞 刘晓飞 仇松寅 吴绍强 林祥梅 《质量安全与检验检测》 2023年第3期25-31,共7页

旨在建立快速检测GⅠ型诺如病毒的方法与快速检测GⅡ型诺如病毒的方法。分别以GⅠ型NoV特异性保守序列作为靶序列设计并合成RPA引物Nov-GⅠ-F、Nov-GⅠ-R与探针Nov-GⅠ-probe、以GⅡ型NoV特异性保守序列作为靶序列设计并合成RPA引物Nov-... 旨在建立快速检测GⅠ型诺如病毒的方法与快速检测GⅡ型诺如病毒的方法。分别以GⅠ型NoV特异性保守序列作为靶序列设计并合成RPA引物Nov-GⅠ-F、Nov-GⅠ-R与探针Nov-GⅠ-probe、以GⅡ型NoV特异性保守序列作为靶序列设计并合成RPA引物Nov-GⅡ-F、Nov-GⅡ-R与探针Nov-GⅡ-probe,利用RPA检测试剂盒建立RPA扩增体系,并通过核酸检测试纸条对扩增产物进行分析鉴定。通过检测不同拷贝数的重组GⅠ型NoV阳性质粒对GⅠ型NoV快速检测方法的灵敏度进行评价,通过检测不同拷贝数的重组GⅡ型NoV阳性质粒对GⅡ型NoV快速检测方法的灵敏度进行评价,并与普通PCR方法和实时荧光PCR方法进行比较;以星状病毒、MS2噬菌体基因组、人轮状病毒和人腺病毒重组质粒作为模板对GⅠ型NoV快速检测方法与GⅡ型NoV快速检测方法的特异性进行评价;应用建立的两种方法对市场上采集的20份食品样品进行GⅠ型NoV检测与GⅡ型NoV检测。GⅠ型NoV快速检测方法与GⅡ型NoV快速检测方法检测到最低质粒拷贝数均为101 copies/μL,且两种检测方法对其余病毒均具有良好特异性;对于从市场采集的潜在携带NoV的食品样品进行检测,结果均为阴性。本研究建立的针对GⅠ型NoV快速检测方法与GⅡ型NoV快速检测方法相较于普通PCR与实时荧光PCR具有检测时间短、特异性强、灵敏度高以及检测操作简单快捷的优点,更适用于市场流通领域食品及医学检测等现场快速检测的应用。 展开更多

关键词 GⅠ型诺如病毒 GⅡ型诺如病毒 重组酶聚合酶扩增(RPA) 核酸检测试纸条

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中药全蝎快速鉴定方法的开发与应用 被引量：2

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作者 孟媛 孙淼 +6 位作者 吴楠 周童 李洋洋 张宇彤 李明成 高丽君 艾金霞 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期396-402,共7页

目的构建一种能够可视化快速鉴定中药全蝎及其伪混品的方法。方法应用改良十二烷基硫酸钠碱变性(SDS)法提取基因组DNA。选取细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因序列设计全蝎特异性引物,进行标记。优化聚合酶链式反应(polymerase chain rea... 目的构建一种能够可视化快速鉴定中药全蝎及其伪混品的方法。方法应用改良十二烷基硫酸钠碱变性(SDS)法提取基因组DNA。选取细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因序列设计全蝎特异性引物,进行标记。优化聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)体系,克隆制备全蝎阳性质控品作为对照。构建PCR产物检测试纸条,鉴定市售样品的真伪。结果只有正品中药全蝎在286 bp处扩增出特异性条带,且试纸条的检测结果为阳性,检测灵敏度达到1.0×10^(-2)ng·μL^(-1)。20个全蝎市售样品中18个正品样品,2个不合格样品。结论建立的中药全蝎可视化试纸条检测的方法特异、灵敏、稳定、简单、快速,为中药全蝎的真伪鉴定提供了安全可行的方法。 展开更多

关键词 全蝎 改良十二烷基硫酸钠碱变性法 聚合酶链式反应 分子克隆 核酸试纸条

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环介导等温扩增-核酸试纸条快速检测牛肉源性成分 被引量：3

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作者 吴晓芳 沈月华 +1 位作者 徐德顺 卢忠豪 《中国卫生检验杂志》 CAS 2021年第17期2073-2075,共3页

目的建立快速检测牛肉源性成分的环介导等温扩增(LAMP)-核酸试纸条方法。方法用直接加热煮沸方法提取鲜肉标本中的DNA;根据牛属特异性的16S基因序列片段设计引物和探针,优化扩增温度和扩增时间;结合核酸试纸条显色,将建立的快速检测方... 目的建立快速检测牛肉源性成分的环介导等温扩增(LAMP)-核酸试纸条方法。方法用直接加热煮沸方法提取鲜肉标本中的DNA;根据牛属特异性的16S基因序列片段设计引物和探针,优化扩增温度和扩增时间;结合核酸试纸条显色,将建立的快速检测方法与商品化的荧光定量PCR试剂盒比较。结果 LAMP检测方法的最佳反应条件为65℃30 min,5 min内通过扩增产物显色肉眼即可判断结果;具有高度特异性,只有牛肉标本出现特异性扩增;最低检测限为10μg;与荧光PCR方法比较,两者检测结果一致。结论环介导等温扩增-核酸试纸条检测方法具有提取核酸方便、高效、敏感、检测时间短以及防污染等优点,非常适用在基层检验机构以及农贸市场、超市的现场快速检测。 展开更多

关键词 环介导等温扩增 核酸试纸条 牛肉源性成分 快速检测

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剪股颖粒线虫环介导等温扩增检测技术研究 被引量：2

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作者 俞禄珍 张博文 +3 位作者 焦彬彬 戚龙君 田沂民 宋绍禕 《植物检疫》 北大核心 2019年第5期27-31,共5页

剪股颖粒线虫(Anguina agrostis)是牧草上重要的病原线虫,被我国列入检疫性有害生物名单。本研究根据剪股颖粒线虫的rDNA-ITS区序列设计特异性的引物和探针,建立了环介导等温扩增和核酸试纸条检测技术。结果表明,该LAMP-核酸试纸条检测... 剪股颖粒线虫(Anguina agrostis)是牧草上重要的病原线虫,被我国列入检疫性有害生物名单。本研究根据剪股颖粒线虫的rDNA-ITS区序列设计特异性的引物和探针,建立了环介导等温扩增和核酸试纸条检测技术。结果表明,该LAMP-核酸试纸条检测法的特异性强,供试2个剪股颖粒线虫虫株均为阳性,其他23种线虫均为阴性;灵敏度高,最低检测限为3.15ng,检测灵敏度达1/400条2龄幼虫。该法操作简单,对设备要求低,适合口岸推广应用。 展开更多

关键词 剪股颖粒线虫 环介导等温扩增 核酸试纸条 检测

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