猪瘟病毒非结构蛋白NS3和NS5B多克隆抗体的制备和鉴定 被引量：4

1

作者 侯金秀 郑阳 +4 位作者 李照耀 胡峰 陈熊男 张云娜 周斌 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期1093-1099,共7页

[目的]本试验旨在制备特异性鼠抗猪瘟病毒(CSFV)非结构蛋白NS3和NS5B的多克隆抗体。[方法]根据CSFV NS5B基因序列设计1对特异性引物,以CSFV石门株为模板PCR扩增NS5B基因,同时根据大肠杆菌对密码子的偏嗜性优化了NS3密码子,并将NS3和NS5... [目的]本试验旨在制备特异性鼠抗猪瘟病毒(CSFV)非结构蛋白NS3和NS5B的多克隆抗体。[方法]根据CSFV NS5B基因序列设计1对特异性引物,以CSFV石门株为模板PCR扩增NS5B基因,同时根据大肠杆菌对密码子的偏嗜性优化了NS3密码子,并将NS3和NS5B基因分别克隆至原核表达载体p Cold I,转化至大肠杆菌Rossetta 2(R2),经0. 1mmol·L-1IPTG诱导后进行融合蛋白的表达和纯化,常规免疫BALB/c小鼠制备抗血清。应用Western blot和间接免疫荧光技术鉴定了多克隆抗体的特异性。[结果]Western blot结果显示,该抗血清不仅能识别原核和真核表达的NS3和NS5B蛋白,也能识别细胞中感染的CSFV并产生特异性条带;间接免疫荧光检测结果表明,2种抗血清除均能与胞浆中的CSFV粒子发生反应外,也能识别宿主细胞中真核表达的NS3和NS5B蛋白。[结论]本试验成功表达了NS3和NS5B,且用其制备的抗血清具有生物学功能,为深入探究猪瘟病毒致病机制奠定了基础。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 非结构蛋白3(ns3) ns5B 原核表达 多克隆抗体 鉴定

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丙型肝炎病毒NS3基因真核质粒的构建及其在人肝细胞中的诱导表达

2

作者 李君武 江静 许小亮 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期495-501,共7页

目的:进行丙型肝炎病毒非结构蛋白3基因真核表达载体的构建,并分析其在体外培养的人肝细胞中的表达。方法:从含有丙肝病毒全长基因的重组质粒pBRTM/HCV1-3011表达载体中PCR扩增出HCV NS3基因片段,将其与表达载体pcDNA3.1(-)重组,得到重... 目的:进行丙型肝炎病毒非结构蛋白3基因真核表达载体的构建,并分析其在体外培养的人肝细胞中的表达。方法:从含有丙肝病毒全长基因的重组质粒pBRTM/HCV1-3011表达载体中PCR扩增出HCV NS3基因片段,将其与表达载体pcDNA3.1(-)重组,得到重组的真核表达载体pcDNA3.1(-)/NS3。然后采用阳离子多聚体将其转染人肝细胞QSG7701,以免疫组织化学SP法及Western Blotting检测HCV NS3蛋白的表达。结果:所得到的NS3片段正确,序列正确,所构建的真核质粒成功转染QSG7701细胞并表达蛋白,表达的NS3蛋白相对分子质量为70 000。结论:成功构建了丙型肝炎病毒非结构蛋白3基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)/NS3,并且该载体在体外培养的人肝细胞中能有效表达特异性HCV NS3蛋白。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 非结构蛋白3 蛋白表达

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基于非结构蛋白1(NS1)的黄病毒感染诊断研究进展 被引量：3

3

作者 仝舟 严景华 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期82-89,共8页

蚊虫传播的黄病毒造成的传染病是人类健康的重要威胁,有效的早期精确诊断对预防与控制黄病毒感染并及时有效开展病患救治至关重要。然而由于黄病毒在血液中核酸可检测窗口短,核酸检测手段难以发挥优势,必须要通过血清学的诊断与病毒分... 蚊虫传播的黄病毒造成的传染病是人类健康的重要威胁,有效的早期精确诊断对预防与控制黄病毒感染并及时有效开展病患救治至关重要。然而由于黄病毒在血液中核酸可检测窗口短,核酸检测手段难以发挥优势,必须要通过血清学的诊断与病毒分离予以佐证,而血清学检测也要面对黄病毒之间存在的交叉反应问题。本文介绍了基于黄病毒非结构蛋白1(NS1)建立的检测手段。NS1蛋白在病人血清中含量很高是良好早期诊断靶标,基于NS1蛋白的黄病毒血清学诊断的检测窗口较长、灵敏度高、特异性强,具有独特的优势。尤其是2016年寨卡病毒暴发以来基于NS1的检测技术在灵敏度与特异性上得到快速与多元的发展,为黄病毒的精确检测带开启了新的局面。 展开更多

关键词 黄病毒 非结构蛋白1 感染诊断 特异性抗体

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重组表达丙型肝炎病毒非结构蛋白2(NS2)及其血清抗NS2抗体检测方法的建立与评价 被引量：1

4

作者 余雨 成军 +1 位作者 戴玉柱 梅传忠 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期361-367,共7页

目的重组表达丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白2(NS2),建立并评价基于化学发光法的血清抗NS2抗体的检测方法。方法以HCV 1b基因型的NS2核苷酸序列质粒(PUC-NS2)为模板,构建包含NS2全序列的重组质粒(pGEX-KG-NS2);诱导NS2蛋白原核表达,将纯... 目的重组表达丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白2(NS2),建立并评价基于化学发光法的血清抗NS2抗体的检测方法。方法以HCV 1b基因型的NS2核苷酸序列质粒(PUC-NS2)为模板,构建包含NS2全序列的重组质粒(pGEX-KG-NS2);诱导NS2蛋白原核表达,将纯化后的NS2融合蛋白包被于微孔板,基于化学发光法制备抗NS2抗体检测试剂盒,并对其方法学指标进行评价。结果成功诱导获得相对分子质量(M_(r))约51000的NS2融合蛋白;并制备血清抗NS2抗体检测试剂盒,试剂盒方法学评价:精密度试验(批内变异系数4.60%~9.17%,批间变异系数6.62%~10.09%)结果良好,空白限和检出限的相对发光强度比值(RLIR)分别为1.57、4.80(r=0.9870),分析测量范围(AMR)为1.63~44.50 RLIR;准确度试验:平均回收率为99.4%,类风湿因子等阳性血清标本对本试验无交叉反应,试剂盒15个月内稳定,45例HCV感染者血清抗NS2抗体阳性率为20%(9/45)。结论获得了原核表达的HCV NS2并制备了检测血清抗NS2抗体的试剂盒。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒(HCV) 非结构蛋白2(ns2) 抗ns2抗体

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H5N1流感病毒NS1蛋白D92E变异趋势的分析 被引量：2

5

作者 范俊婉 郭敬 +2 位作者 于成接 张安定 金梅林 《中国病毒病杂志》 CAS 2012年第6期436-439,共4页

目的分析H5N1流感病毒NS1蛋白D92E的变异趋势,为研究禽流感病毒的致病性及其逃避宿主免疫应答提供科学依据。方法利用美国国立生物技术信息中心(NCBI)的流感数据库,搜索2000年以前以及2000年以后世界各地流行的A/human/H5N1、A/avian/H... 目的分析H5N1流感病毒NS1蛋白D92E的变异趋势,为研究禽流感病毒的致病性及其逃避宿主免疫应答提供科学依据。方法利用美国国立生物技术信息中心(NCBI)的流感数据库,搜索2000年以前以及2000年以后世界各地流行的A/human/H5N1、A/avian/H5N1、A/swine/H5N1流感病毒的相关信息,然后进行NS1蛋白序列比对,分析其变异趋势。结果 2000年以前H5N1流感病毒NS1蛋白第92位大部分是谷氨酸,而2000年以后H5N1流感病毒的NS1蛋白第92位大部分是天冬氨酸。结论 H5N1流感病毒的NS1蛋白第92位天冬氨酸的存在有可能增强了病毒的抵抗力和毒力。 展开更多

关键词 H5N1流感病毒 非结构蛋白ns1 D92E突变

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A型流感病毒非结构蛋白NS1的研究进展 被引量：1

6

作者 潘朋歌 《安徽农业科学》 CAS 2016年第10期154-156,159,共4页

对NS1蛋白的进化、结构、调节病毒的致病性等进行了综述,在此基础上,对抗流感病毒药物及其防控技术进行了展望,以期为流感病毒的预防和治疗提供更多的可能性。

关键词 A型流感病毒 非结构蛋白ns1 致病性 功能 结构

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表达2型登革病毒NS1重组麻疹病毒的拯救及鉴定 被引量：2

7

作者 张勇侠 陈宗香 +5 位作者 高雅丽 罗心梅 丛聪 康庄 赵婷 刘兰军 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期860-868,共9页

以麻疹病毒沪-191疫苗株(MVS191)为载体构建表达2型登革病毒非结构蛋白NS1(DENV2NS1)的重组麻疹病毒。将编码DENV2NS1 6×His蛋白的核酸序列用Bsi WI和BssHII酶切位点插入至载体pT7-MVF23ATU上,然后构建载体pT7F123DENV2NS1 6×... 以麻疹病毒沪-191疫苗株(MVS191)为载体构建表达2型登革病毒非结构蛋白NS1(DENV2NS1)的重组麻疹病毒。将编码DENV2NS1 6×His蛋白的核酸序列用Bsi WI和BssHII酶切位点插入至载体pT7-MVF23ATU上,然后构建载体pT7F123DENV2NS1 6×His,最后构建获得插入了外源基因DENV2 NS1 6×His的载体pT7MVS191-DENV2NS1 6×His。质粒pT7MVS191-DENV2NS1 6×His与表达麻疹病毒N、P、L蛋白的辅助质粒共转染BSRT7细胞完成病毒包装后,在Vero细胞内增殖,完成重组病毒的拯救。重组病毒在Vero细胞上传至第4代,基因测序证明重组病毒中成功插入了外源基因DENV2NS1 6×His;Western Blot、原位免疫荧光反应可检测到重组病毒中麻疹病毒N蛋白及外源抗原DENV2NS1 6×His的表达;重组病毒增值特性与疫苗株MVS191相似;P1至P4代的重组病毒滴度稳定在6log10CCID50/mL～6.5log10CCID50/mL之间;P4代重组病毒免疫家兔,兔抗血清中麻疹病毒中和抗体效价大于1∶160;Western Blot可检测到免疫兔血清中DENV2NS1的抗体。本文成功构建了以麻疹病毒为载体,表达外源抗原DENV2NS1的重组病毒,为以麻疹病毒为载体的登革疫苗研发奠定基础。 展开更多

关键词 麻疹病毒沪-191疫苗株 登革病毒(DENV) 非结构蛋白ns1 重组病毒 原位免疫荧光

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DNA微点阵分析丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4B对信号传导相关基因表达的影响 被引量：1

8

作者 吕琪 郑义 +3 位作者 宋林立 李忠新 李瑜珍 周小梅 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2006年第2期90-94,共5页

目的采用DNA微点阵(DNAmicroarray)技术检测致癌相关基因的表达水平,研究丙型肝炎病毒(hepatitisCvirus,HCV)非结构蛋白NS4B在HCV致癌中的作用。方法通过建立稳定表达NS4B的细胞系,用微点阵技术研究NS4B对细胞基因表达的影响,实时定量RT... 目的采用DNA微点阵(DNAmicroarray)技术检测致癌相关基因的表达水平,研究丙型肝炎病毒(hepatitisCvirus,HCV)非结构蛋白NS4B在HCV致癌中的作用。方法通过建立稳定表达NS4B的细胞系,用微点阵技术研究NS4B对细胞基因表达的影响,实时定量RT-PCR分析微点阵结果中的两个上调基因(DKK1,FYN)和两个下调基因(AKR1C1,v-fos)的表达,对细胞中AKR1C1的活性进行酶学分析。结果在2308个信号途径相关的基因中,34个基因表达上调,56个基因表达下调。在表达有明显差异的基因中,大部分原癌基因表达上调,而大部分抑癌基因的表达下调;一些基因与细胞压力有关。实时定量RT-PCR和AKR1C1的酶学分析进一步证实了DNA微点阵的结果。结论HCV-NS4B在HCV的致癌过程中起一定作用。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 DNA微点阵 非结构蛋白ns4B

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丙肝病毒NS5A蛋白对NS5B的RdRP活性影响的研究 被引量：1

9

作者 罗宏 秦伟平 +4 位作者 马媛媛 岛上哲朗 村上清史 何芳 赵连三 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 2004年第5期795-799,共5页

丙型肝炎病毒 (Hepatitis C virus,HCV )非结构蛋白 (Nonstructural,NS) 5 A在 HCV基因组复制中的作用目前尚不清楚。本文研究 His- NS5 A对 NS5 B的 RNA依赖性 RNA酶 (Rd RP)活性的影响 ,以了解 NS5 A在HCV RNA复制中的作用。采用变性 ... 丙型肝炎病毒 (Hepatitis C virus,HCV )非结构蛋白 (Nonstructural,NS) 5 A在 HCV基因组复制中的作用目前尚不清楚。本文研究 His- NS5 A对 NS5 B的 RNA依赖性 RNA酶 (Rd RP)活性的影响 ,以了解 NS5 A在HCV RNA复制中的作用。采用变性 -复性方法 ,纯化大肠杆菌表达的重组组氨酸 NS5 A融合蛋白。 GST结合洗脱实验 (GST pull- down assay)研究 NS5 A和 NS5 B是否结合。以不同的摩尔浓度比 ,将纯化的 NS5 B和 NS5 A蛋白混合 ,检测 NS5 A对 NS5 B的 Rd RP活性的影响。获得高得率的纯化 His- NS5 A蛋白。重组 NS5 A蛋白可在体外与NS5 B结合并抑制后者的 Rd RP活性。本研究报道了纯化重组 His- NS5 A蛋白的变性 -复性方法 ,结果显示纯化的重组 NS5 A在体外可与 NS5 B相互结合 ,并明显抑制 NS5 B Rd RP活性。提示了 HCV NS5 A在病毒复制中的可能作用。 展开更多

关键词 ns5A蛋白 RP HCV 活性 体外 丙肝病毒 纯化 复性 变性 基因组

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登革病毒非结构蛋白3（NS3）研究进展

10

作者 李莉莉 李玉华 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期549-555,共7页

登革病毒是一种流行于热带亚热带地区的虫媒传播类病毒，可以引起登革热、登革出血热和登革休克综合征等严重的人类疾病。登革病毒基因共编码3个结构蛋白和7个非结构蛋白。其中非结构蛋白3（NS3）的主要功能包括蛋白水解酶和RNA解旋酶... 登革病毒是一种流行于热带亚热带地区的虫媒传播类病毒，可以引起登革热、登革出血热和登革休克综合征等严重的人类疾病。登革病毒基因共编码3个结构蛋白和7个非结构蛋白。其中非结构蛋白3（NS3）的主要功能包括蛋白水解酶和RNA解旋酶等功能。其中,蛋白水解酶功能可以与宿主细胞内的水解酶一同将病毒基因组转录翻译后的总蛋白质水解成为有功能活性的单个蛋白质。解旋酶功能则与病毒基因组RNA的复制、转录翻译密切相关。本文中将对登革病毒非结构蛋白3的蛋白质结构与功能以及相关的抗病毒药物的研究进展进行系统的综述。 展开更多

关键词 登革热病毒 非结构蛋白3 抗病毒

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流感病毒对环氧合酶-2表达的影响及其机制探讨

11

作者 喻明 胡耀仁 +1 位作者 高国生 胡爱荣 《中国卫生检验杂志》 北大核心 2014年第22期3283-3285,共3页

目的探讨流感病毒对环氧合酶2(COX-2)表达的影响及其调节机制。方法流感病毒感染A549细胞,将其非结构蛋白NS1真核表达载体与COX-2基因启动子的报告质粒p COX-2-Luc共转染A549细胞,测定其荧光素酶活性,采用反转录PCR和Western印迹法检测C... 目的探讨流感病毒对环氧合酶2(COX-2)表达的影响及其调节机制。方法流感病毒感染A549细胞,将其非结构蛋白NS1真核表达载体与COX-2基因启动子的报告质粒p COX-2-Luc共转染A549细胞,测定其荧光素酶活性,采用反转录PCR和Western印迹法检测COX-2 mRNA和蛋白表达的变化。结果流感病毒上调mRNA和蛋白的表达,其NS1蛋白能显著激活COX-2基因启动子的活性,并上调COX-2 mRNA和蛋白的表达,激活作用呈剂量依赖关系。结论流感病毒通过其NS1蛋白上调COX-2的表达。 展开更多

关键词 流感病毒 非结构蛋白ns1 环氧合酶2

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丙型肝炎病毒非结构蛋白3稳定细胞系的建立

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作者 倪念亲 王娟娟 +1 位作者 陈进 李子博 《实用预防医学》 CAS 2011年第5期813-815,共3页

目的利用丙型肝炎病毒非结构基因NS3的真核表达载体(pCMV-Tag1-NS3)在HEK293细胞中进行表达。方法通过酶切分析和DNA序列分析鉴定pCMV-Tag1-NS3重组载体构建正确后,通过脂质体介导转染HEK293细胞,用RT-PCR和Western blotting证实丙型肝... 目的利用丙型肝炎病毒非结构基因NS3的真核表达载体(pCMV-Tag1-NS3)在HEK293细胞中进行表达。方法通过酶切分析和DNA序列分析鉴定pCMV-Tag1-NS3重组载体构建正确后,通过脂质体介导转染HEK293细胞,用RT-PCR和Western blotting证实丙型肝炎非结构蛋白NS3基因(HCV-NS3)表达。结果 RT-PCR结果显示HCV-NS3基因的mRNA在转染的HKK293细胞中表达,Western blotting结果也显示蛋白质能正确表达。结论成功构建了实现HCV-NS3过表达的稳定HEK293细胞系,为获得HCV非结构蛋白3的重组蛋白以及早期诊断试剂的研制与筛选药物提供了基础。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 非结构蛋白 基因转染

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