健脾理气方对功能性消化不良大鼠十二指肠MLCK和PGE2-cAMP通路的影响 被引量：14

1

作者 赵鲁卿 常雄飞 张声生 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2019年第3期335-339,共5页

目的观察健脾理气方对功能性消化不良(functional dyspepsia,FD)模型大鼠十二指肠肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)和前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)-环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)通路的影响... 目的观察健脾理气方对功能性消化不良(functional dyspepsia,FD)模型大鼠十二指肠肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)和前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)-环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)通路的影响。方法18只SD雄性大鼠采用数字表法随机分为正常组、模型组及中药治疗组(每组6只),以夹尾应激法建立功能性消化不良动物模型,正常组及模型组大鼠均给予0.9%(质量分数)氯化钠注射液灌胃,中药治疗组给予健脾理气方水煎剂灌胃。取大鼠十二指肠组织进行HE染色,观察组织形态,同时应用定量聚合酶链式反应(quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测MLCK和PGE2受体EP1、EP4 mRNA含量,酶联免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法测定PGE2和cAMP的表达。结果模型组大鼠十二指肠MLCK表达升高,PGE2、EP4、cAMP表达下降,EP1未见明显异常,健脾理气方治疗后可明显抑制MLCK表达,升高PGE2、EP4和cAMP表达。结论健脾理气方可以抑制MLCK mRNA表达,同时上调PGE2-EP4-cAMP信号通路表达,这可能是健脾理气方治疗FD的机制之一。 展开更多

关键词 健脾理气方 功能性消化不良 十二指肠 肌球蛋白轻链激酶 前列腺素 E2

下载PDF 职称材料

鳜肌球蛋白轻链2基因cDNA的克隆及其发育表达分析 被引量：13

2

作者 周瑞雪 蒙涛 +4 位作者 褚武英 成嘉 李志英 宾石玉 张建社 《湖南师范大学自然科学学报》 CAS 北大核心 2009年第3期78-83,共6页

通过构建肌肉组织cDNA文库分离到鳜肌球蛋白轻链2基因(MLC2),基因登录号为FJ428249.MLC2基因cDNA序列全长1206bp,编码区长度为579bp.MLC2基因开放阅读框编码170个氨基酸,具有EF-手相家族蛋白全部4个EF-手相结构.与已报道的其他动物MLC2... 通过构建肌肉组织cDNA文库分离到鳜肌球蛋白轻链2基因(MLC2),基因登录号为FJ428249.MLC2基因cDNA序列全长1206bp,编码区长度为579bp.MLC2基因开放阅读框编码170个氨基酸,具有EF-手相家族蛋白全部4个EF-手相结构.与已报道的其他动物MLC2相比较,所推导氨基酸序列同源性在66.3%～97.6%,其中与Ca2+结合区域非常保守,7种鱼氨基酸序列同源性为100%.采用实时荧光定量PCR方法对鳜MLC2发育表达分析表明,MLC2在原肠期开始有低量表达,与原肠期相比,尾芽期、肌肉效应期和仔鱼阶段MLC2表达量随发育阶段渐进而升高. 展开更多

关键词 鳜 肌球蛋白轻链2 CDNA克隆 发育表达

下载PDF 职称材料

血管内皮损伤因子与职业性手臂振动病的关联性 被引量：9

3

作者 阎蓉 陈青松 +3 位作者 严茂胜 郎丽 肖斌 林瀚生 《中国职业医学》 CAS 北大核心 2018年第2期138-143,共6页

目的研究血管内皮损伤因子与职业性手臂振动病(HAVD)的关联性。方法采用判断抽样方法,以23例男性HAVD患者为HAVD组,以61名男性手传振动作业工人为振动接触组,以64名男性非手传振动作业工人为对照组。采用酶联免疫吸附法检测3组人群血浆... 目的研究血管内皮损伤因子与职业性手臂振动病(HAVD)的关联性。方法采用判断抽样方法,以23例男性HAVD患者为HAVD组,以61名男性手传振动作业工人为振动接触组,以64名男性非手传振动作业工人为对照组。采用酶联免疫吸附法检测3组人群血浆中肌球蛋白轻链2(MLC2)、内皮素-1(ET-1)和黏着斑蛋白(VCL)水平。采用Logistic回归分析筛选HAVD的关联指标,以之构建新的多变量模型指标Y,通过受试者工作特征(ROC)曲线筛查判断HAVD的指标。结果 3组人群血浆中MLC2水平由高到低依次为HAVD组>振动接触组>对照组(P<0.05)。HAVD组人群血浆中ET-1水平低于对照组(P<0.05),但与振动接触组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。3组人群血浆中VCL水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。经Logistic回归分析排除年龄、工龄、吸烟、饮酒和自觉症状等混杂因素后,MLC2水平越高者,发生HAVD的风险越高(P<0.05);ET-1水平越低者,发生HAVD的风险越高(P<0.05)。采用MLC2、ET-1判断HAVD的ROC曲线下面积(A_Z)分别为0.820和0.524,采用以MLC2和ET-1构建的Y判断HAVD的A_Z为0.799;A_Z由高到低依次为MLC2>Y>ET-1(P<0.01)。结论HAVD患者血浆中MLC2与ET-1水平均与HAVD有关联;MLC2作为生物标志物筛查HAVD的效果优于ET-1。未发现VCL与HAVD有关联。 展开更多

关键词 手传振动 手臂振动病 血管内皮损伤 肌球蛋白轻链2 内皮素-1 黏着斑蛋白 ROC曲线

原文传递

宰后肌肉中肌球蛋白磷酸化调控肌动球蛋白解离作用机制 被引量：7

4

作者 高星 李欣 +4 位作者 李铮 杜曼婷 张彩霞 张德权 丁武 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第16期3199-3207,共9页

【目的】研究宰后肌肉中肌球蛋白磷酸化与肌动球蛋白解离之间的关系,分析其磷酸化水平的变化对肌动球蛋白解离的影响,探究肌球蛋白磷酸化对宰后肌肉肌节长度与嫩度的作用。【方法】取宰后30 min内的羊背最长肌,在4℃条件下分别成熟6、24... 【目的】研究宰后肌肉中肌球蛋白磷酸化与肌动球蛋白解离之间的关系,分析其磷酸化水平的变化对肌动球蛋白解离的影响,探究肌球蛋白磷酸化对宰后肌肉肌节长度与嫩度的作用。【方法】取宰后30 min内的羊背最长肌,在4℃条件下分别成熟6、24、48和72 h,通过SDS-PAGE电泳、Pro-Q染色和蛋白质免疫印迹测定肌球蛋白的磷酸化水平和肌动球蛋白解离程度随宰后时间的变化;测定肌动球蛋白ATP酶的活性,分析宰后不同时间点肌球蛋白与肌动蛋白结合作用力的强弱;采用透射电镜分析宰后肌节长度随时间的变化。【结果】研究发现宰后肌肉中肌球蛋白轻链2的磷酸化水平在0.5—48 h快速降低(P<0.05),并在48 h达到最低点,在48—72 h有所升高(P<0.05),但其最终磷酸化水平明显低于初始值。肌动球蛋白的解离程度在宰后初期(0.5—6 h)显著降低(P<0.05),在6—48 h显著升高(P<0.05),并于48—72 h维持稳定,其最终解离程度显著高于宰后0.5 h的初始值。肌动球蛋白ATPase活性在宰后初期(0.5—6 h)略有升高,6—24 h快速上升(P<0.05),并在24 h达到最高点,24—72 h逐渐降低;而肌节长度的变化则与之相反,呈先下降后上升的趋势,并在24 h达到肌节最短点。【结论】羊宰后肌肉中的肌球蛋白轻链2磷酸化水平的变化对肌球蛋白与肌动蛋白的相互作用有较大的影响,且肌节收缩(肌球蛋白与肌动蛋白的相互作用力)与肌动球蛋白的解离(肌球蛋白与肌动蛋白的相互作用量)并不是一个同步的进程。肌球蛋白轻链2的磷酸化修饰负向调控肌动球蛋白解离和肌动球蛋白ATPase活性,导致肌节的收缩与舒张,进而调控肉品最终的嫩度。 展开更多

关键词 磷酸化 肌球蛋白重链 肌球蛋白轻链2 肌动球蛋白 解离 羊背最长肌

下载PDF 职称材料

MYL2基因在肌肉生长过程中的研究 被引量：6

5

作者 刘瑞莉 吴磊 +1 位作者 袁玮 董雅娟 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第3期10-14,252,共6页

为了探究快肌肌球蛋白轻链2(myosin light chain 2,MLC2或MYL2)基因在布莱凯特黑牛背最长肌中表达量的变化规律,为探讨其与肌肉生长发育关系奠定基础,试验以布莱凯特黑牛为研究对象,利用实时荧光定量PCR检测其背最长肌、心脏、肺脏、肝... 为了探究快肌肌球蛋白轻链2(myosin light chain 2,MLC2或MYL2)基因在布莱凯特黑牛背最长肌中表达量的变化规律,为探讨其与肌肉生长发育关系奠定基础,试验以布莱凯特黑牛为研究对象,利用实时荧光定量PCR检测其背最长肌、心脏、肺脏、肝脏、脾脏等10个组织器官中MYL2基因的表达情况,检测布莱凯特黑牛2,6,10,12月龄4个不同时期背最长肌中MYL2基因的表达量变化规律,应用免疫组化方法定位MYL2基因在背最长肌中表达的位置。结果表明:MYL2基因在心脏中表达量最高,其次是背最长肌,其他器官几乎不表达。背最长肌中MYL2基因在2,6,10,12月龄均高表达,但随着月龄的增加其表达量逐渐降低,2月龄的表达量最高,极显著高于其他3个时期(P<0.01);12月龄表达量最低,显著低于6月龄(P<0.05),与10月龄差异不显著(P>0.05)。免疫组化结果显示MYL2基因在背最长肌中,主要在骨骼肌肌原纤维的粗肌丝中表达。说明背最长肌中MYL2基因可能对骨骼肌生长和发育起调节作用,可为研究肉牛骨骼肌生长发育机理和阐明肌肉生长的分子机制提供参考。 展开更多

关键词 布莱凯特黑牛 肌球蛋白轻链2 背最长肌 实时荧光定量PCR 免疫组化 骨骼肌

原文传递

MLC_2-糜酶融合基因克隆及转基因小鼠的产生 被引量：5

6

作者 何泉 陈兰英 +2 位作者 戴蕴平 陈永福 刘力生 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1998年第2期144-150,共7页

为研究糜酶基因在体内的结构与功能以及与心肌肥厚的关系，并提高糜酶基因在小鼠心脏中的表达，构建肌球蛋白轻链－２启动子（ｍｙｏｓｉｎｌｉｇｈｔｃｈａｉｎ－２ｐｒｏｍｏｔｅｒ，ＭＬＣ２）－糜酶融合基因并产生转基因小鼠．通过... 为研究糜酶基因在体内的结构与功能以及与心肌肥厚的关系，并提高糜酶基因在小鼠心脏中的表达，构建肌球蛋白轻链－２启动子（ｍｙｏｓｉｎｌｉｇｈｔｃｈａｉｎ－２ｐｒｏｍｏｔｅｒ，ＭＬＣ２）－糜酶融合基因并产生转基因小鼠．通过删除糜酶基因启动子序列，构建结构基因克隆，然后与大鼠心脏肌球蛋白轻链－２启动子序列相拼接，构建ＭＬＣ２－糜酶融合基因克隆，回收并纯化融合基因片段，显微注射入小鼠受精卵产生转基因小鼠，经ＰＣＲ扩增、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交和ＰＣＲ扩增产物的测序，筛选和确定转基因鼠．在新出生的４６只小鼠中有２只为转基因阳性鼠，且外源基因能稳定遗传给后代，从而获得了可用于研究糜酶基因在体内的结构与功能以及与心肌肥厚的关系的转基因小鼠模型． 展开更多

关键词 糜酶 肌球蛋白轻链 转基因

下载PDF 职称材料

桔小实蝇肌球蛋白轻链2基因的克隆及表达分析 被引量：4

7

作者 申建梅 胡黎明 +1 位作者 宾淑英 林进添 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期508-514,共7页

肌球蛋白轻链在生物的运动过程中具有重要作用,本研究利用RT-PCR和RACE技术获得了桔小实蝇Bactrocera dorsalis(Hendel)肌球蛋白轻链2(myosin light chain 2,MLC2)的cDNA全长序列,命名为BdorMLC2。测序结果表明,BdorMLC2开放阅读框全长6... 肌球蛋白轻链在生物的运动过程中具有重要作用,本研究利用RT-PCR和RACE技术获得了桔小实蝇Bactrocera dorsalis(Hendel)肌球蛋白轻链2(myosin light chain 2,MLC2)的cDNA全长序列,命名为BdorMLC2。测序结果表明,BdorMLC2开放阅读框全长669 bp,编码222个氨基酸残基。在线软件SMART分析显示,BdorMLC2具有2个Ca2+结合基序(EFh)结构域,可以结合Ca2+,属于肌钙蛋白C超家族成员。氨基酸序列比对表明,BdorMLC2与其他昆虫的肌球蛋白具有较高的序列一致性,其中与黑腹果蝇Drosophila melanogasterMLC2的序列一致性高达93.2%。BdorMLC2在不同组织和时期的荧光定量PCR分析表明,BdorMLC2在桔小实蝇雄虫胸部的含量最高,在前足、中足、后足和翅中也有较高的表达;BdorMLC2几乎在桔小实蝇发育的各个时期都有表达,刚羽化成虫的表达量显著高于其他发育阶段。结果提示,BdorMLC2可能与桔小实蝇的肌肉收缩运动密切相关。本研究为深入研究桔小实蝇肌球蛋白的功能提供了理论依据。 展开更多

关键词 桔小实蝇 肌球蛋白轻链2 基因克隆 表达谱分析 荧光定量PCR

下载PDF 职称材料

抑制肌球蛋白轻链激酶减轻大鼠压力超负荷诱导的心脏肥大 被引量：2

8

作者 朱丽 周敬群 +2 位作者 吴钢 王顺 毛帅 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期1603-1611,共9页

目的:通过抑制肌球蛋白轻链激酶(MLCK)和磷酸化肌球蛋白轻链2(p-MLC2),探究其对心脏肥大的影响。方法:原代乳鼠心肌细胞(NRCMs)经血管紧张素II(Ang II)诱导发生心肌细胞肥大,同时给予MLCK抑制剂ML-7处理,分为PBS组、Ang II组和Ang Ⅱ+M... 目的:通过抑制肌球蛋白轻链激酶(MLCK)和磷酸化肌球蛋白轻链2(p-MLC2),探究其对心脏肥大的影响。方法:原代乳鼠心肌细胞(NRCMs)经血管紧张素II(Ang II)诱导发生心肌细胞肥大,同时给予MLCK抑制剂ML-7处理,分为PBS组、Ang II组和Ang Ⅱ+ML-7组。用RT-qPCR和免疫荧光法检测心肌细胞肥大标志物和心肌细胞表面积。此外,将大鼠随机分为6组:(1)腹主动脉缩窄(AB)0周组;(2)AB 2周组;(3)AB 4周组;(4)假手术组;(5)AB组;(6)AB+ML-7组。前3组分别在手术后0、2和4周取材,后3组在手术4周后通过超声心动图、组织病理学和RT-qPCR检测大鼠心脏结构、心功能、心肌细胞横截面积、心肌纤维化及心脏肥大标志物表达。Western blot用于检测心肌细胞和大鼠心脏组织中MLCK、p-MLC2和MLC2的表达水平。结果:Ang Ⅱ处理可显著上调心肌细胞肥大标志物心房钠尿肽(ANP)、脑钠肽(BNP)与β-肌球蛋白重链(β-MHC)的表达,增加心肌细胞表面积,上调MLCK表达,增加p-MLC2水平,而抑制MLCK可明显减轻上述改变。MLCK和p-MLC2在大鼠AB术2周后增加,4周后减少。AB术4周后大鼠心功能降低,心重指数、心肌细胞横截面积、心肌纤维化和心脏肥大标志物表达增加,而抑制MLCK可明显减轻上述改变。抑制MLCK可在心肌细胞和心脏组织中降低p-MLC2水平而不影响MLCK的表达。结论:抑制MLCK和p-MLC2可减轻Ang Ⅱ诱导的心肌细胞肥大和压力超负荷诱导的心脏肥大。 展开更多

关键词 心脏肥大 肌球蛋白轻链激酶 肌球蛋白轻链2 血管紧张素Ⅱ

下载PDF 职称材料

中国少棘蜈蚣与家蚕和野桑蚕肌球蛋白轻链2的结构功能分析比较 被引量：3

9

作者 华卫建 任玫 吴晓菁 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期663-669,共7页

从中国少棘蜈蚣(Scolopendra subspinipes mutilans)毒腺cDNA文库中克隆的肌球蛋白轻链2(MLC2)基因的cDNA,其开放阅读框为606 bp(GenBank登陆号为FJ262953),编码201个氨基酸,与家蚕(Bombyx mori)和野桑蚕(Bombyxmandarina)的MLC2等长,... 从中国少棘蜈蚣(Scolopendra subspinipes mutilans)毒腺cDNA文库中克隆的肌球蛋白轻链2(MLC2)基因的cDNA,其开放阅读框为606 bp(GenBank登陆号为FJ262953),编码201个氨基酸,与家蚕(Bombyx mori)和野桑蚕(Bombyxmandarina)的MLC2等长,序列一致性达52%。3种MLC2都包含:1个同位且完整的EF-H功能域和Ca2+结合位,1个N端poly-lys基序及相同的丝氨酸磷酸化修饰位点。三级结构预测显示中国少棘蜈蚣MLC2的三维结构相似于乌贼(Loligo pealei)的同源模型,而家蚕和野桑蚕的则与淡色库蚊(Culexpipiens pallens)的MLC2一样类似于扇贝(Aequipecten irradians)的同源结构。分析结果有助于进一步研究家蚕和野桑蚕MLC2的结构功能及其功能应用。 展开更多

关键词 少棘蜈蚣 家蚕 野桑蚕 肌球蛋白轻链2 结构功能

下载PDF 职称材料

松墨天牛肌球蛋白轻链2基因的鉴定及表达模式 被引量：2

10

作者 吴华俊 蔡紫玲 +1 位作者 罗淋淋 林同 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2015年第3期25-30,共6页

为阐明松墨天牛肌肉收缩机理和相关基因表达模式,用构建c DNA文库方法,从松墨天牛c DNA中克隆到松墨天牛肌球蛋白轻链2基因,命名为Ma MLC-2（Gen Bank：KM371003）。该基因c DNA为882 bp,其中开放阅读框（ORF）为618 bp,编码205个氨基酸... 为阐明松墨天牛肌肉收缩机理和相关基因表达模式,用构建c DNA文库方法,从松墨天牛c DNA中克隆到松墨天牛肌球蛋白轻链2基因,命名为Ma MLC-2（Gen Bank：KM371003）。该基因c DNA为882 bp,其中开放阅读框（ORF）为618 bp,编码205个氨基酸,推测的蛋白等电点为4.66,分子量为22.26 k Da。Ma MLC-2的氨基酸序列与赤拟谷盗同源性最高,为96%,与东方蝼蛄等8种昆虫同源性为85%-88%。松墨天牛与赤拟谷盗处在系统发育树的同一分支上。Ma MLC-2属于亲水性氨基酸,存在2个EF-hand结构域,长度均为29个氨基酸,其中第1个EF-hand结构域含有Ca2＋结合位点。SWISS-MODEL预测结果显示,Ma MLC-2有2个螺旋-环-螺旋结构。用RT-q PCR分析了Ma MLC-2基因的相对表达量,结果显示：蛹和幼虫的表达量高于成虫;成虫中足表达量最高,腹部表达量最低,各部位均有表达,且有显著差异（P〈0.05）。 展开更多

关键词 松墨天牛 肌球蛋白轻链2 基因表达模式 RT-q PCR

下载PDF 职称材料

绵羊肌球蛋白轻链2基因的分子克隆与表达分析 被引量：2

11

作者 张春兰 王建民 王桂芝 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1347-1353,共7页

肌球蛋白轻链2蛋白是哺乳动物肌球蛋白的重要成员之一。获得其基因序列,并对其特征和表达进行分析,可为进一步研究功能奠定基础。本研究以小尾寒羊背最长肌为试验材料,采用RACE等方法对绵羊肌球蛋白轻链2基因的c DNA序列进行克隆和测序... 肌球蛋白轻链2蛋白是哺乳动物肌球蛋白的重要成员之一。获得其基因序列,并对其特征和表达进行分析,可为进一步研究功能奠定基础。本研究以小尾寒羊背最长肌为试验材料,采用RACE等方法对绵羊肌球蛋白轻链2基因的c DNA序列进行克隆和测序、利用相关生物学软件对所得c DNA序列进行生物信息学预测、并利用qRT-PCR和Western印迹法对其在绵羊各种组织中的表达进行分析。结果获得该基因c DNA序列全长为776 bp,提交至Gen Bank中获得相应的登录号为KJ710702;该序列中的498 bp的开放读码框编码含有166个氨基酸残基的蛋白质。预测发现该蛋白质无信号肽和二硫键,但存在N-糖基化和磷酸化位点;二级结构中以α-螺旋为主;蛋白质序列比较发现绵羊MYL2与小鼠、人、大鼠、猪、牛等哺乳动物的同源性均在95%以上。mRNA和蛋白质表达谱均显示该基因在绵羊心肌中表达量最高,其次为背最长肌。 展开更多

关键词 绵羊 肌球蛋白轻链2 克隆 特征 表达谱

下载PDF 职称材料

运脾开胃方含药血清对HGSMCs中MLC磷酸化水平的调节机制研究 被引量：2

12

作者 白宇 赵智强 《南京中医药大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期152-156,共5页

目的观察运脾开胃方含药血清对人胃窦平滑肌细胞(HGSMCs)内Ca^(2+)、MLC、p-MLC的干预作用以及与Ghrelin受体(GHSR)的关系,研究运脾开胃方治疗厌食症的机制。方法培养HGSMCs,制备低、中、高浓度的运脾开胃方含药血清;采用激光共聚焦、We... 目的观察运脾开胃方含药血清对人胃窦平滑肌细胞(HGSMCs)内Ca^(2+)、MLC、p-MLC的干预作用以及与Ghrelin受体(GHSR)的关系,研究运脾开胃方治疗厌食症的机制。方法培养HGSMCs,制备低、中、高浓度的运脾开胃方含药血清;采用激光共聚焦、Western blot法检测运脾开胃方含药血清对HGSMCs内Ca^(2+)、MLC、p-MLC的影响;阻断HGSMCs表面GHSR并干扰细胞内外Ca^(2+)的正常调控,研究运脾开胃方含药血清对HGSMCs内p-MLC的干预机制。结果低、中、高剂量组运脾开胃方含药血清能在一定时间范围内上调HGSMCs内Ca^(2+)的相对荧光强度(P<0.05~0.01);低、中、高剂量组运脾开胃方含药血清能在10min时显著上调HGSMCs内p-MLC水平(P<0.05~0.01);(D-Lys3)-GHRP-6、Thapsigargin、DHBSS液能显著抑制高剂量运脾开胃方含药血清在10min时对p-MLC的上调作用(P<0.01)。结论运脾开胃方含药血清可能通过激活GHSR提高细胞内Ca^(2+)水平来促进MLC磷酸化。 展开更多

关键词 运脾开胃方 肌球蛋白轻链 钙离子 GHRELIN GHSR

下载PDF 职称材料

MLCK、Cav1.2在高甘油三酯血症相关性急性胰腺炎大鼠中的表达及其关系研究 被引量：2

13

作者 符洪宗 唐国都 +5 位作者 覃蒙斌 梁志海 何家萍 罗期 林沙丹 韦宇乐 《广西医科大学学报》 CAS 2017年第5期671-676,共6页

目的:探讨高甘油三酯血症相关性急性胰腺炎(HTGP)大鼠胰腺组织中肌球蛋白轻链激酶(MLCK)与钙通道蛋白1.2(Cav1.2)的表达及其相互关系。方法:48只雄性SD大鼠随机分为正常饲料组和高脂饲料组,喂养4周后,测定血清甘油三酯(TG)含量。正常饲... 目的:探讨高甘油三酯血症相关性急性胰腺炎(HTGP)大鼠胰腺组织中肌球蛋白轻链激酶(MLCK)与钙通道蛋白1.2(Cav1.2)的表达及其相互关系。方法:48只雄性SD大鼠随机分为正常饲料组和高脂饲料组,喂养4周后,测定血清甘油三酯(TG)含量。正常饲料组随机分为3个亚组:空白对照组、急性胰腺炎(AP)组、AP+MLCK抑制率ML-7干预组;高脂饲料组随机分为3个亚组:高甘油三酯血症(HTG)组、HTGP组、HTGP+ML-7干预组。腹腔注射雨蛙肽(50μg/kg)建立AP模型,造模后24h处死大鼠,测定血清淀粉酶(AMY)含量;光镜下观察胰腺病理变化;透射电镜下观察胰腺细胞超微结构与细胞间紧密连接(TJ)改变;免疫组织化学法检测胰腺组织MLCK、Cav1.2的表达及定位。结果:正常饲料组和高脂饲料组的TG水平分别为(1.16±0.33)mmol/L、(3.30±1.07)mmol/L,高脂饲料组的TG水平较正常饲料组显著升高(P<0.01)。诱导AP后血清AMY含量及胰腺病理评分升高,并且HTGP组血清AMY含量、胰腺病理评分较AP组显著升高(均P<0.05);ML-7干预后血清AMY含量降低及胰腺病理损伤减轻。HTGP组、AP组大鼠胰腺中MLCK、Cav1.2表达均较HTG组显著增加(均P<0.05),其中HTGP组MLCK、Cav1.2的表达较AP组显著增加(均P<0.05);ML-7能够有效抑制MLCK、Cav1.2的表达。HTGP组MLCK、Cav1.2的表达分别与胰腺病理评分呈正相关关系(r1=0.853,r2=0.779,均P<0.05)。透射电镜下可见AP组、HTGP组胰腺细胞超微结构损伤及TJ增宽,其中以HTGP组增宽更为明显;ML-7干预后TJ增宽减小。结论:HTGP大鼠胰腺组织MLCK、Cav1.2表达上调,其与疾病严重程度相关,且MLCK可能通过改变细胞间TJ及调控Cav1.2的表达参与HGTP的发病机制。 展开更多

关键词 肌球蛋白轻链激酶 钙通道蛋白1.2 高甘油三酯血症 急性胰腺炎 细胞间紧密连接

下载PDF 职称材料

斑鳜肌球蛋白轻链2基因cDNA的克隆及其纵向表达分析 被引量：1

14

作者 赵发兰 陈敦学 +5 位作者 农小献 宾石玉 成嘉 蒙涛 张建社 褚武英 《生命科学研究》 CAS CSCD 2011年第1期13-18,共6页

从斑鳜(Siniperca scherzeri)背部白色肌肉组织中提取总RNA,利用RT-PCR法克隆到斑鳜肌球蛋白轻链2基因(MLC2)(GenBank:GQ283000).斑鳜MLC2基因cDNA序列的开放阅读框的长度为513 bp,编码170个氨基酸,理论相对分子质量为19 105.61 Da,等... 从斑鳜(Siniperca scherzeri)背部白色肌肉组织中提取总RNA,利用RT-PCR法克隆到斑鳜肌球蛋白轻链2基因(MLC2)(GenBank:GQ283000).斑鳜MLC2基因cDNA序列的开放阅读框的长度为513 bp,编码170个氨基酸,理论相对分子质量为19 105.61 Da,等电点为4.73.该开放阅读框具有4个EF-手相结构.斑鳜MLC2推导的氨基酸序列与已报道的其它6种鱼类MLC2氨基酸序列同源性在89%以上,其中与Ca2+结合的区域非常保守,氨基酸序列同源性为100%.用实时荧光定量PCR对斑鳜MLC2纵向表达分析显示,MLC2在斑鳜背肌的前部、中部和后部都有表达,但无显著差异. 展开更多

关键词 斑鳜 肌球蛋白轻链2 CDNA克隆 纵向表达

下载PDF 职称材料

心肌肌球特定基因-肌球蛋白轻链基因可在人脐带间充质干细胞诱导分化为心肌样细胞表达 被引量：1

15

作者 辛毅 李娜 +6 位作者 许秀芳 崔巍 刘飒 王超 黄益民 张颖 周玉杰 《心肺血管病杂志》 2016年第8期653-658,共6页

目的:探讨人心肌肌球蛋白轻链(2v)基因启动子(p MLC2v)驱动的绿色荧光蛋白(GFP)和荧光素酶(Luc)报告基因慢病毒载体在人脐带间充质干细胞(h UCMSC)向心肌样细胞分化中的表达。方法:酶消化法原代分离培养h UCMSC,采用流式细胞仪鉴定分析... 目的:探讨人心肌肌球蛋白轻链(2v)基因启动子(p MLC2v)驱动的绿色荧光蛋白(GFP)和荧光素酶(Luc)报告基因慢病毒载体在人脐带间充质干细胞(h UCMSC)向心肌样细胞分化中的表达。方法:酶消化法原代分离培养h UCMSC,采用流式细胞仪鉴定分析其细胞表面标记物及检测体外向成骨细胞、成脂细胞、内皮细胞诱导分化潜能;经5-氮杂胞苷(5-Aza)诱导h UCMSC定向分化成心肌样细胞;诱导细胞并同时转染p MLC2v-GFP,于d3,d7,d10,d14,d17及d21时间点在荧光显微镜下观察及流式细胞仪检测其阳性率;用生物发光检测仪检测相同时间点的萤光素酶(p MLC2v-Luc)报告基因慢病毒载体转染分化细胞发光特征;在激光共聚焦显微镜下观察p MLC2v-GFP及红色荧光蛋白(RFP)共转染诱导21d后分化细胞蛋白的表达分布状况;与鼠心肌细胞作为对照,脉冲电流激发细胞收缩和细胞内及细胞间的钙离子流,以检测诱导分化细胞"兴奋-收缩"偶联功能;Western blot法检测诱导分化细胞p MLC2v蛋白的表达。结果:原代培养的P3 h UCMSC,经FCM检测CD90、CD105及CD73阳性率均为99%以上为高表达;获得的细胞分别经体外诱导能够向成骨细胞、成脂细胞、成内皮细胞分化;经5-氮杂胞苷(5-Aza)诱导h UCMSC同时并转染p MLC2v GFP,在荧光显微镜下观察并用流式仪检测GFP表达阳性细胞数随诱导时间的延长而增加(P<0.05);生物发光检测仪检测诱导细胞p MLC2v-Luc表达同样呈阳性递增;p MLC2v GFP及RFPC共转染诱导21d后分化的细胞,细胞浆内形成较清晰的与细胞长轴平行的肌束样结构;诱导后的细胞用共聚焦显微镜检测无细胞内及细胞间的钙离子流动;随诱导时间的延长p MLC2v蛋白表达明显增加(P<0.05)。结论:在h UCMSC体外诱导形成心肌样细胞过程中,p MLC2v基因随诱导时间的延长而表达增加,为监测干细胞的移植在心肌疾病治疗中提供了实验依据。 展开更多

关键词 人脐带胶样组织间充质干细胞 心肌样细胞 肌球蛋白轻链 荧光素酶 绿色荧光蛋白

下载PDF 职称材料

γ射线辐照对BEP2D细胞蛋白质组的影响

16

作者 薛振伟 周小林 崔梅萍 《癌变．畸变．突变》 CAS CSCD 2011年第6期425-428,433,共5页

目的:利用蛋白质组学方法,研究与人永生化支气管上皮细胞(BEP2D细胞)辐照相关的差异蛋白质,寻找辐射致肺癌早期诊断和治疗的新指标。方法:分别培养并收集了0、1.5和3.0 Gyγ射线辐照24 h后的BEP2D细胞样品,用双向凝胶电泳技术分离照射... 目的:利用蛋白质组学方法,研究与人永生化支气管上皮细胞(BEP2D细胞)辐照相关的差异蛋白质,寻找辐射致肺癌早期诊断和治疗的新指标。方法:分别培养并收集了0、1.5和3.0 Gyγ射线辐照24 h后的BEP2D细胞样品,用双向凝胶电泳技术分离照射组与对照组细胞样品中的总蛋白质,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)得到相应的肽质量指纹图,并最终鉴定差异蛋白质。结果:质谱鉴定获得10张肽质量指纹图,经数据库搜索后8个蛋白点被初步鉴定(2个蛋白点无结果),其中1个蛋白点重复。用Mascot软件查询NCBInr数据库初步鉴定出7种差异表达的蛋白质,即亲环素A、肌球蛋白轻链2、细胞角蛋白9、α-烯醇酶、磷酸丙糖异构酶1、Makorin环指蛋白1、c-myc启动子结合蛋白1。结论:所鉴定的7种蛋白与辐射诱导肺癌的发生、发展过程密切相关,为寻找辐射致肺癌早期诊断和治疗的新靶点提供了理论依据。 展开更多

关键词 蛋白质组 BEP2D细胞 γ射线 亲环素A 肌球蛋白轻链2

下载PDF 职称材料

心肌特异性启动子引导的rNIS基因的摄碘动力学研究

17

作者 刘影 于涛 +1 位作者 林伟 邬恒夫 《医学研究杂志》 2014年第5期82-86,共5页

目的构建肌凝蛋白轻链蛋白-2(myosin light chain-2,MLC-2p)启动子调控的钠/碘转运体(sodium/iodide symporter,NIS)的腺相关病毒载体,探讨外源基因在心肌细胞中特异性表达的可行性。方法构建rAAV9-rMLC-2p-rNIS及rAAV9-CMV-rNIS重组腺... 目的构建肌凝蛋白轻链蛋白-2(myosin light chain-2,MLC-2p)启动子调控的钠/碘转运体(sodium/iodide symporter,NIS)的腺相关病毒载体,探讨外源基因在心肌细胞中特异性表达的可行性。方法构建rAAV9-rMLC-2p-rNIS及rAAV9-CMV-rNIS重组腺相关病毒,经酶切鉴定及效价测定。rAAV9-rMLC-2p-rNIS及rAAV9-CMV-rNIS体外感染心肌细胞和非心肌细胞,行动态摄碘及NaClO4抑制实验观察NIS蛋白的功能和特性。结果成功构建rAAV9-rMLC-2p-rNIS及rAAV9-CMV-rNIS,测得效价为rAAV9-rMLC-2p-rNIS 2.46×1012μg/ml,rAAV9-CMV-rNIS 4.21×1012μg/ml。动态摄碘实验表明感染rAAV9-rMLC-2p-rNIS的心肌细胞的Na125I摄取明显高于非心肌细胞,且能被NaClO4特异性抑制,证实了rMLC-2p启动子的心肌特异性及转染细胞表达的rNIS蛋白有功能。结论成功构建了MLC-2p启动子调控NIS的腺相关病毒载体,证实了外源基因在心肌细胞中的特异性表达,为进一步以该报告基因系统的体内动物实验打下基础。 展开更多

关键词 肌凝蛋白轻链蛋白-2 腺相关病毒 钠 碘转运体 碘放射性核素

下载PDF 职称材料

癌蛋白PRC17与人肌球蛋白调节轻链相互作用的初步鉴定

18

作者 何泽 陈洋 +4 位作者 张永臣 万青 赵虎子 赵蕾 沈传陆 《东南大学学报（医学版）》 CAS 2014年第1期12-17,共6页

目的:分析前列腺癌基因17(PRC17)与人肌球蛋白调节轻链(MLC2)之间的相互作用,并鉴定PRC17蛋白序列上与MLC2相互作用的功能区域。方法:经大肠杆菌表达并用Glutathione Sepharose 4B纯化GST及融合蛋白GST-MLC2,用SMMC-7721细胞表达带HA标... 目的:分析前列腺癌基因17(PRC17)与人肌球蛋白调节轻链(MLC2)之间的相互作用,并鉴定PRC17蛋白序列上与MLC2相互作用的功能区域。方法:经大肠杆菌表达并用Glutathione Sepharose 4B纯化GST及融合蛋白GST-MLC2,用SMMC-7721细胞表达带HA标签的PRC17及其截短突变体HA-PRC17(353)、HA-PRC17(251)、HA-PRC17(164)和HA-PRC17(Δ164),GST沉淀实验分析GST-MLC2与PRC17及其截短体的相互作用。结果:经诱导表达并纯化的GST和GST-MLC2分子质量符合预期,分别约为28.4 kD和46.6 kD,纯度均95%以上;GST沉淀实验结果显示,PRC17结合MLC2,不结合阴性对照GST;PRC17(353)和PRC17(251)也能有效结合MLC2,但PRC17(164)和PRC17(Δ164)都不能与MLC2结合。结论:PRC17能特异性结合MLC2,其蛋白序列上与MLC2结合的部位位于其氨基端251位氨基酸之内,可能在164位氨基酸附近。 展开更多

关键词 肌球蛋白轻链 前列腺癌基因17 融合蛋白 相互作用

下载PDF 职称材料

肌球蛋白轻链激酶非激酶活性调节磷酸化肌球蛋白ATP酶活性及肌丝运动 被引量：15

19

作者 梁明丽 崔颖 +1 位作者 吕广艳 高颖 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第1期91-96,共6页

肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)具有激酶和非激酶活性,在平滑肌收缩过程中起着关键酶调控的作用.为进一步阐明MLCK非激酶活性在平滑肌收缩过程中的调节作用,利用已删除部分激酶区域的MLCK重组体(pGEX-F6.5)在大肠杆... 肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)具有激酶和非激酶活性,在平滑肌收缩过程中起着关键酶调控的作用.为进一步阐明MLCK非激酶活性在平滑肌收缩过程中的调节作用,利用已删除部分激酶区域的MLCK重组体(pGEX-F6.5)在大肠杆菌中进行表达,采用亲和层析技术纯化表达的MLCK片段,应用EnzChek磷分析试剂盒检测MLCK片段对磷酸化肌球蛋白、水解重酶解肌球蛋白(heavy meromyosin,HMM)及肌球蛋白亚片段1(subfragment1,S1)ATP酶活性的影响,体外检测MLCK片段对肌动蛋白肌丝运动的调节.研究结果显示,pGEX-F6.5重组表达载体在大肠杆菌中以可溶性GST融合蛋白的形式表达.该融合蛋白经Glutathione-Sepharose4B纯化、SDS-PAGE鉴定得到较纯的单一表达条带.纯化的MLCK片段对磷酸化肌球蛋白、HMM和S1的ATP酶活性均有明显激活作用.MLCK片段激活磷酸化肌球蛋白ATP酶活性为:Vmax=(19.426±1.669)倍;Km=(0.486±0.106)μmol/L,MLCK片段对磷酸化HMM和S1的ATP酶活性也有相似的刺激作用.体外肌丝运动研究表明,随着MLCK片段浓度的增加,磷酸化肌球蛋白与肌动蛋白结合的数量不断增加,肌丝运动的速度也随之增加.上述结果表明,MLCK的C端非激酶活性具有调节磷酸化的肌球蛋白ATP酶活性及肌丝运动的作用. 展开更多

关键词 平滑肌收缩 肌球蛋白 肌球蛋白轻链激酶(MLCK) 肌球蛋白Mg2+-ATP酶活性 体外肌丝运动

下载PDF 职称材料

高血压大鼠不同血管平滑肌肌球蛋白磷酸化和脱磷酸化酶的变化 被引量：15

20

作者 孙伟 文允镒 吴光玉 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期82-86,共5页

本文比较了正常和高血压大鼠不同动脉血管肌球蛋白轻链激酶（MICK和依赖Ca2+的钙调素磷酸酶（Ca2+／CaM－PP）活性的变化。结果表明：在自发性高血压大鼠（SHR）不同血管MLCK的活性不同，依次为主动脉（A）＞尾动脉（CA）＞肠系膜动脉... 本文比较了正常和高血压大鼠不同动脉血管肌球蛋白轻链激酶（MICK和依赖Ca2+的钙调素磷酸酶（Ca2+／CaM－PP）活性的变化。结果表明：在自发性高血压大鼠（SHR）不同血管MLCK的活性不同，依次为主动脉（A）＞尾动脉（CA）＞肠系膜动脉（MA）；而在WKY大鼠，该酶在不同血管的活性依次为A＜＜CA＜＜MA。在WKY大鼠，MACa+／CaM-PP活性明显高于SHR．在肾性高血压大鼠（RHR）的不同血管Ca2+／CaM－PP活性与Wistar大鼠比较，无明显差异。上述结果表明：MLCK活性升高或／和Ca2+／CaM－PP活性（或水平）降低可能与血管收缩及高血压发病有关。 展开更多

关键词 脱磷酸化酶 高血压 肌球蛋白 轻链激酶

下载PDF 职称材料