[目的]探究微小RNA(microRNA,miR)-216a靶向调控酪氨酸蛋白激酶2/信号转导和转录激活因子3(Janus protein tyrosine protein kinase 2/signal transducer and activator of transcription 3,JAK2/STAT3)信号通路对鼻咽癌细胞增殖、侵袭...[目的]探究微小RNA(microRNA,miR)-216a靶向调控酪氨酸蛋白激酶2/信号转导和转录激活因子3(Janus protein tyrosine protein kinase 2/signal transducer and activator of transcription 3,JAK2/STAT3)信号通路对鼻咽癌细胞增殖、侵袭、自噬及血管生成的影响。[方法]Target Scan Human预测miR-216a与JAK2的结合位点,双荧光素酶实验验证miR-216a与JAK2是否结合;免疫组化染色检测正常鼻咽黏膜组织、鼻咽癌组织标本p-JAK2、p-STAT3的表达水平,并分析p-JAK2、p-STAT3表达水平与患者临床病理参数的关系。采用LipofectamineTM3000将miR-216a模拟物双链小RNA、阴性对照双链小RNA转染至CNE-2细胞构建过表达miR-216a细胞系,细胞分为对照组、miR-NC组、miR-216a组。将抑制剂双链小RNA,抑制剂对照双链小RNA转染至CNE-2细胞构建低表达miR-216a细胞系,细胞分为对照组、抑制miR-NC组、抑制miR-216a组。采用qRT-PCR检测细胞JAK2、STAT3 mRNA表达水平;MTT法、Transwell小室、皮下种植瘤模型、小管形成实验、吖啶橙染色分别检测细胞增殖、侵袭、移植瘤生长、血管形成和自噬泡形成的能力;Western blot检测JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3、微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(microtubule-associated protein light chain 3-Ⅱ,CL3-Ⅱ)、酵母自噬相关基因6的哺乳动物同源体(autophagy related protein ATG6,Beclin1)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达水平。[结果]双荧光素酶实验验证了miR-216a对JAK2的靶向调控作用。鼻咽癌组织p-JAK2、p-STAT3阳性表达率(75.0%,68.3%)明显高于正常鼻咽黏膜组织(10%,13.3%)(P<0.05)。p-JAK2、p-STAT3表达越高,浸润深度越严重,越容易发生淋巴结和远处转移(P均<0.05)。细胞实验显示:与miR-NC组相比,miR-216a组细胞24、48、72、96 h吸光度值(0.32±0.03 vs 0.15±0.04、0.58±0.07 vs 0.24±0.06、0.86±0.10 vs 0.41±0.06、1.48±0.11 vs 0.75±0.07)、细胞侵袭数目(101.00±11.00 vs 22.67±5.77)、血�展开更多
目的探讨腺癌、鳞癌、黏液性囊腺瘤、慢性胰腺炎和正常胰腺组织中胰腺癌相关基因的表达。方法回顾性收集2012年1月至2017年4月期间于湖北医药学院附属东风医院肝胆胰外科住院行手术治疗的40例胰腺疾病患者的术中标本,其中腺癌、鳞癌、...目的探讨腺癌、鳞癌、黏液性囊腺瘤、慢性胰腺炎和正常胰腺组织中胰腺癌相关基因的表达。方法回顾性收集2012年1月至2017年4月期间于湖北医药学院附属东风医院肝胆胰外科住院行手术治疗的40例胰腺疾病患者的术中标本,其中腺癌、鳞癌、黏液性囊腺瘤、慢性胰腺炎和正常胰腺组织各8例。采用实时荧光定量PCR和基因芯片法检测5组组织中Beclin-1 m RNA和micro RNA(mi R)-216a的表达。对以上组织行原代细胞培养,分为空白对照组和PD98095组(加入PD98095抑制剂),采用Western blot法检测细胞中血管内皮生长因子(VEGR)与磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)的表达。结果与正常对照组比较,腺癌组和鳞癌组组织中Beclin-1 m RNA和mi R-216a的表达水平较低(P<0.05),腺癌组、鳞癌组、黏液性囊腺瘤组和慢性胰腺炎组组织中Beclin-1 m RNA和mi R-216a的表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。与同类组织的空白对照组比较,腺癌组和鳞癌组加入PD98095后,细胞中p-ERK1/2和VEGF蛋白的表达水平下调(P<0.05),但黏液性囊腺瘤组、慢性胰腺炎组和正常对照组加入PD98095前后细胞中p-ERK1/2及VEGF蛋白的表达水平变化不大(P>0.05)。结论 Beclin-1 m RNA、mi R-216a和VEGF蛋白的表达与胰腺癌的发生发展可能有关。展开更多
文摘[目的]探究微小RNA(microRNA,miR)-216a靶向调控酪氨酸蛋白激酶2/信号转导和转录激活因子3(Janus protein tyrosine protein kinase 2/signal transducer and activator of transcription 3,JAK2/STAT3)信号通路对鼻咽癌细胞增殖、侵袭、自噬及血管生成的影响。[方法]Target Scan Human预测miR-216a与JAK2的结合位点,双荧光素酶实验验证miR-216a与JAK2是否结合;免疫组化染色检测正常鼻咽黏膜组织、鼻咽癌组织标本p-JAK2、p-STAT3的表达水平,并分析p-JAK2、p-STAT3表达水平与患者临床病理参数的关系。采用LipofectamineTM3000将miR-216a模拟物双链小RNA、阴性对照双链小RNA转染至CNE-2细胞构建过表达miR-216a细胞系,细胞分为对照组、miR-NC组、miR-216a组。将抑制剂双链小RNA,抑制剂对照双链小RNA转染至CNE-2细胞构建低表达miR-216a细胞系,细胞分为对照组、抑制miR-NC组、抑制miR-216a组。采用qRT-PCR检测细胞JAK2、STAT3 mRNA表达水平;MTT法、Transwell小室、皮下种植瘤模型、小管形成实验、吖啶橙染色分别检测细胞增殖、侵袭、移植瘤生长、血管形成和自噬泡形成的能力;Western blot检测JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3、微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(microtubule-associated protein light chain 3-Ⅱ,CL3-Ⅱ)、酵母自噬相关基因6的哺乳动物同源体(autophagy related protein ATG6,Beclin1)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达水平。[结果]双荧光素酶实验验证了miR-216a对JAK2的靶向调控作用。鼻咽癌组织p-JAK2、p-STAT3阳性表达率(75.0%,68.3%)明显高于正常鼻咽黏膜组织(10%,13.3%)(P<0.05)。p-JAK2、p-STAT3表达越高,浸润深度越严重,越容易发生淋巴结和远处转移(P均<0.05)。细胞实验显示:与miR-NC组相比,miR-216a组细胞24、48、72、96 h吸光度值(0.32±0.03 vs 0.15±0.04、0.58±0.07 vs 0.24±0.06、0.86±0.10 vs 0.41±0.06、1.48±0.11 vs 0.75±0.07)、细胞侵袭数目(101.00±11.00 vs 22.67±5.77)、血�
文摘目的探讨腺癌、鳞癌、黏液性囊腺瘤、慢性胰腺炎和正常胰腺组织中胰腺癌相关基因的表达。方法回顾性收集2012年1月至2017年4月期间于湖北医药学院附属东风医院肝胆胰外科住院行手术治疗的40例胰腺疾病患者的术中标本,其中腺癌、鳞癌、黏液性囊腺瘤、慢性胰腺炎和正常胰腺组织各8例。采用实时荧光定量PCR和基因芯片法检测5组组织中Beclin-1 m RNA和micro RNA(mi R)-216a的表达。对以上组织行原代细胞培养,分为空白对照组和PD98095组(加入PD98095抑制剂),采用Western blot法检测细胞中血管内皮生长因子(VEGR)与磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)的表达。结果与正常对照组比较,腺癌组和鳞癌组组织中Beclin-1 m RNA和mi R-216a的表达水平较低(P<0.05),腺癌组、鳞癌组、黏液性囊腺瘤组和慢性胰腺炎组组织中Beclin-1 m RNA和mi R-216a的表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。与同类组织的空白对照组比较,腺癌组和鳞癌组加入PD98095后,细胞中p-ERK1/2和VEGF蛋白的表达水平下调(P<0.05),但黏液性囊腺瘤组、慢性胰腺炎组和正常对照组加入PD98095前后细胞中p-ERK1/2及VEGF蛋白的表达水平变化不大(P>0.05)。结论 Beclin-1 m RNA、mi R-216a和VEGF蛋白的表达与胰腺癌的发生发展可能有关。
