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毕赤酵母高密度发酵研究进展 被引量:35
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作者 李洪淼 王红宁 许钦坤 《生物技术通讯》 CAS 2005年第2期210-212,共3页
巴斯德毕赤酵母表达系统是近年发展起来的一种优秀的真核表达系统。本文从培养基、温度、pH值、溶氧、甲醇的流加等角度对国内外毕赤酵母高密度发酵的研究进展做了较详细的综述,并提出了目前毕赤酵母高密度发酵过程中存在的问题。
关键词 毕赤酵母 高密度发酵 生物学特性 发酵工艺 外源蛋白 真核表达系统
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重组巴氏毕赤酵母高密度发酵表达rHSA 被引量:14
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作者 郭美锦 庄英萍 +2 位作者 储炬 张嗣良 刘志敏 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期62-68,共7页
对基因工程菌Pichiapastoris的摇瓶发酵条件进行了试验 ,并根据摇瓶发酵的优化结果进行了补料分批高密度发酵。在摇瓶发酵时 ,甲醇诱导基因工程菌P .pastoris表达重组人血清白蛋白的发酵周期为 96h ;甲醇的最佳诱导浓度为 1 0g L ;发酵p... 对基因工程菌Pichiapastoris的摇瓶发酵条件进行了试验 ,并根据摇瓶发酵的优化结果进行了补料分批高密度发酵。在摇瓶发酵时 ,甲醇诱导基因工程菌P .pastoris表达重组人血清白蛋白的发酵周期为 96h ;甲醇的最佳诱导浓度为 1 0g L ;发酵pH范围为 5 72~ 6 5 9;在摇瓶培养时 ,随着接种量的增加 ,虽然目的蛋白表达量缓慢增加 ,但单位细胞光密度的蛋白产率却明显下降 ,符合y =1 2 941x- 0 50 59方程 (线性相关系数r=0 9789) ,其限制性因子很可能为溶氧。在分批发酵 ,接种量为 1 0 %且种子细胞光密度 (OD60 0 )为 2 0左右时 ,细胞生长的延迟期为 2 1 1h左右 ,细胞生长光密度与培养时间的关系模型为 :y =0 7841e0 .2 3 19t(线性相关系数r=0 .993 6 ) ;在补料发酵时细胞干重浓度可达到 1 1 5g L— 1 6 0g L ,在 1 2 0h重组人血清白蛋白表达量最大达到 3 6g L。 展开更多
关键词 重组巴斯德毕赤酵母 高密度发酵 重组人血清白蛋白 rHSA 表达
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毕赤酵母工程菌高密度发酵研究与进展 被引量:20
3
作者 武婕 张晓雪 +5 位作者 余河水 李薇 贾宇平 郭江玉 张丽娟 宋新波 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期108-114,共7页
毕赤酵母表达系统是近年来发展最为迅速的一种新型外源蛋白真核表达系统,被广泛应用于多种不同领域且成功表达了许多基因工程产品。高密度发酵技术已被广泛运用到毕赤酵母工程菌发酵工程当中。主要从毕赤酵母的表达常用菌株、载体及表... 毕赤酵母表达系统是近年来发展最为迅速的一种新型外源蛋白真核表达系统,被广泛应用于多种不同领域且成功表达了许多基因工程产品。高密度发酵技术已被广泛运用到毕赤酵母工程菌发酵工程当中。主要从毕赤酵母的表达常用菌株、载体及表型等方面介绍了其表达系统,从外源基因自身的特性、培养基的组成、温度、p H、溶氧量及补料流加策略方面阐述了对毕赤酵母高密度发酵的过程及蛋白质表达结果的影响,并对毕赤酵母工程菌高密度发酵进行了展望,为其今后的研究及应用提供借鉴。 展开更多
关键词 毕赤酵母 表达系统 工程菌 高密度发酵
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巴斯德毕赤酵母(P.pastoris)高密度发酵研究进展 被引量:18
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作者 闵兆升 郭会明 +1 位作者 颜旭 洪厚胜 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期42-49,共8页
高密度发酵已经成为提高毕赤酵母目的蛋白表达量的关键技术之一,而其中发酵工艺又是高密度发酵的一个重要因素。主要从巴斯德毕赤酵母遗传学特性、表达宿主菌、表达载体、外源蛋白的表达方面进行了阐述,并从毕赤酵母工程菌的选择、培养... 高密度发酵已经成为提高毕赤酵母目的蛋白表达量的关键技术之一,而其中发酵工艺又是高密度发酵的一个重要因素。主要从巴斯德毕赤酵母遗传学特性、表达宿主菌、表达载体、外源蛋白的表达方面进行了阐述,并从毕赤酵母工程菌的选择、培养基的优化设计、发酵过程关键参数调控以及甲醇诱导等方面阐述毕赤酵母的高密度发酵。最后,提出了巴斯德毕赤酵母高密度发酵过程中存在的问题并进行展望。 展开更多
关键词 巴斯德毕赤酵母 表达系统 高密度发酵 过程参数 甲醇
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溶氧对重组毕赤酵母高密度发酵生产腺苷蛋氨酸的影响 被引量:11
5
作者 张建勇 王晓港 +1 位作者 王水莲 路云 《齐鲁药事》 2007年第7期428-430,共3页
目的考察发酵液中不同的溶氧浓度对重组毕赤酵母高密度发酵生产腺苷蛋氨酸的影响。方法通过改变通气量、搅拌转速和辅助通入纯氧的方式将发酵液中溶氧浓度控制到试验设定值。结果当控制发酵液中溶氧浓度在30%时,SAMe产量最高。结论通过... 目的考察发酵液中不同的溶氧浓度对重组毕赤酵母高密度发酵生产腺苷蛋氨酸的影响。方法通过改变通气量、搅拌转速和辅助通入纯氧的方式将发酵液中溶氧浓度控制到试验设定值。结果当控制发酵液中溶氧浓度在30%时,SAMe产量最高。结论通过控制发酵液中溶氧浓度有助于提高重组毕赤酵母高密度发酵高表达腺苷蛋氨酸。 展开更多
关键词 溶氧 重组毕赤酵母 高密度发酵 腺苷蛋氨酸
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植物乳杆菌ZJ316高密度发酵条件优化 被引量:12
6
作者 李娜 杨江华 韦宇拓 《中国酿造》 CAS 北大核心 2021年第5期43-48,共6页
以1株植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZJ316为研究对象,在MRS液体培养基的基础上,以吸光度值(OD600 nm值)为响应值,通过单因素试验及响应面试验对其高密度发酵培养基组分和培养条件进行优化。结果表明,L.plantarum ZJ316高密度发... 以1株植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZJ316为研究对象,在MRS液体培养基的基础上,以吸光度值(OD600 nm值)为响应值,通过单因素试验及响应面试验对其高密度发酵培养基组分和培养条件进行优化。结果表明,L.plantarum ZJ316高密度发酵的最优培养基组成为蔗糖43 g/L、玉米浆干粉60 g/L、Na2HPO4-柠檬酸0.12 mol/L、MgSO_(4)·7H_(2)O 0.20 g/L、MnSO_(4)·H_(2)O 0.10 g/L、吐温801 mL/L;最优发酵条件为接种量4%、发酵温度30℃、初始pH值6.5。在此优化条件下,采用发酵罐静置发酵24 h,植物乳杆菌ZJ316的OD600 nm值为5.13,活菌数可达8.01×10^(9) CFU/mL,较优化前分别提高1.65倍、3.44倍。 展开更多
关键词 植物乳杆菌 响应面优化 高密度发酵 发酵条件
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丁酸梭菌厌氧发酵机制及高密度厌氧发酵方式研究进展 被引量:10
7
作者 吴天福 谢小林 +5 位作者 陈美标 周莲 陈猛 邓名荣 姚青 朱红惠 《食品与机械》 北大核心 2020年第1期222-229,共8页
文章主要从丁酸梭菌厌氧发酵机制、高密度厌氧发酵方式及厌氧生物反应器的应用3个方面进行综述,并展望在今后工业生产中通过提高厌氧发酵工艺或改进发酵设备实现丁酸梭菌的高密度厌氧发酵,大幅度提高活菌数和降低生产成本。
关键词 丁酸梭菌 厌氧发酵机制 生物反应器 高密度发酵
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栓菌漆酶在毕赤酵母中高效表达及重组酶的性质 被引量:9
8
作者 周宏敏 洪宇植 +3 位作者 肖亚中 CUI Teng-Jiao WANG Xiao-Tang 蒲春蕾 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期1055-1059,共5页
栓菌420(Trametes sp.420)漆酶基因lacD以两种方式在巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)进行异源表达,产生两种重组漆酶:rLacDx(具有天然N-末端)和rLacDe(N-末端带有8个额外的氨基酸残基)。摇瓶发酵18d,rLacDx和rLacDe的产量... 栓菌420(Trametes sp.420)漆酶基因lacD以两种方式在巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)进行异源表达,产生两种重组漆酶:rLacDx(具有天然N-末端)和rLacDe(N-末端带有8个额外的氨基酸残基)。摇瓶发酵18d,rLacDx和rLacDe的产量分别为1.21×10^5u/L、7、38×10^4u/L[以2,2'-连氮-3-乙苯-二噻唑-6磺酸(ABTS)为底物]。在高密度发酵条件下,rLacDx的产量增加到2.39×10^5u/L,同时其生产周期降至7.5d。两种重组酶对愈创木酚底物的氧化特性相似,且在50℃和pH3~10的范围内均稳定。然而,rLacDx对底物ABTS的比活力(1761u/mg)高于rLacDe(1122u/mg),其表观Km值(427μmol/L)低于rLacDe(604μmol/L)。 展开更多
关键词 异源表达 高密度发酵 漆酶 毕赤酵母 栓菌420
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毕赤氏酵母工程菌高密度发酵表达恶性疟原虫融合抗原的研究 被引量:5
9
作者 郭美锦 吴康华 +5 位作者 储炬 庄英萍 张嗣良 黄大庆 张青锋 潘卫庆 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期456-459,共4页
The effects of cultural conditions,which were fermentation period when methanol was as sole carbon source,methanol concentration,range of pH,on the expression of the chimeric protein of Plasmodium falciparum in geneti... The effects of cultural conditions,which were fermentation period when methanol was as sole carbon source,methanol concentration,range of pH,on the expression of the chimeric protein of Plasmodium falciparum in genetically engineered methylotrophic Pichia pastoris were investigated by shake flask experiments in this paper.The results showed:(1)fermentation period with methanol inducement is about 96 hours;(2)the optimum methanol concentration as sole carbon source is 10g/L;(3)the range of pH is from 6.0 to 7.0. On the base of above experimental results the cell high-density fermentation had been done on the FMG-5L fermentor with multi-sensors.The results showed that the cell optical density (OD 600) can reached 550 and the ma-ximum expression level of target proteins was 780mg/L which was 4 times higher or more than the shake flask culture’s. 展开更多
关键词 甲醇营养型毕赤酵母 恶性疟原虫融合抗原 发酵条件 优化 高密度发酵 表达
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重组大肠杆菌高密度发酵生产类人胶原蛋白Ⅱ条件优化 被引量:8
10
作者 常海燕 范代娣 +4 位作者 骆艳娥 马晓轩 米钰 朱晨辉 迟雷 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期870-874,共5页
通过考察pH、培养温度、溶解氧浓度和诱导时机对细胞生长和类人胶原蛋白Ⅱ表达的影响,确定这些因素的最佳控制范围,优化发酵条件。结果表明:控制初始pH为6.5,诱导后pH为6.8,培养温度34°C,DO20%及在对数生长后期进行诱导,有利于细... 通过考察pH、培养温度、溶解氧浓度和诱导时机对细胞生长和类人胶原蛋白Ⅱ表达的影响,确定这些因素的最佳控制范围,优化发酵条件。结果表明:控制初始pH为6.5,诱导后pH为6.8,培养温度34°C,DO20%及在对数生长后期进行诱导,有利于细胞生长和外源基因的表达,最终细胞密度为88.4g/L,类人胶原蛋白Ⅱ产量达到14.2g/L。 展开更多
关键词 类人胶原蛋白Ⅱ 高密度发酵 发酵条件 诱导时机
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马克斯克鲁维酵母高密度发酵条件的优化研究 被引量:8
11
作者 王亮 胡曼 +4 位作者 王江月 巩小芬 刘朋龙 詹涛 李阳 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2017年第17期111-118,124,共9页
对影响马克斯克鲁维酵母高密度发酵的培养基营养成分和培养条件展开分析研究。单因素实验发现,YPD作为基础培养基有利于马克斯克鲁维酵母的增殖;培养基成分响应面分析和培养条件正交实验结果表明,当培养基成分为蔗糖67.37 g/L,酵母浸粉2... 对影响马克斯克鲁维酵母高密度发酵的培养基营养成分和培养条件展开分析研究。单因素实验发现,YPD作为基础培养基有利于马克斯克鲁维酵母的增殖;培养基成分响应面分析和培养条件正交实验结果表明,当培养基成分为蔗糖67.37 g/L,酵母浸粉29.7 g/L,玉米浆15.61 g/L,KH_2PO_44.13 g/L,MgSO_40.3 g/L,初始pH为6.0、发酵温度为30℃、搅拌速度为160 r/min时,发酵培养18 h马克斯克鲁维酵母的生物量最大,为(9.34±0.12)g/L。进一步进行乳饮品发酵实验,优化培养的马克斯克鲁维酵母与乳源培养基培养的马克斯克鲁维酵母,在菌种的生物量和乳饮品的口感风味上无明显差异。因此,优化后的高密度发酵培养基配方和工艺条件适宜于马克斯克鲁维酵母菌的高密度发酵。 展开更多
关键词 马克斯克鲁维酵母 高密度发酵 增殖速率 固相微萃取-气相色谱-质谱法
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毕赤酵母工程菌产植酸酶补料分批发酵研究 被引量:6
12
作者 谢子文 王红宁 《中国酿造》 CAS 北大核心 2007年第6期9-13,共5页
对毕赤酵母工程菌PP-MS-NPm-4-16进行了补料分批发酵条件的研究,经摇瓶试验确定了发酵条件,即接种量为4%,生长阶段最适pH值为5.0,诱导阶段最适pH值为5.5,甲醇诱导浓度为30g/L,生长阶段添加豆油浓度为1.3%,诱导阶段豆油浓度为3%。在高密... 对毕赤酵母工程菌PP-MS-NPm-4-16进行了补料分批发酵条件的研究,经摇瓶试验确定了发酵条件,即接种量为4%,生长阶段最适pH值为5.0,诱导阶段最适pH值为5.5,甲醇诱导浓度为30g/L,生长阶段添加豆油浓度为1.3%,诱导阶段豆油浓度为3%。在高密度发酵阶段,恒溶氧流加为最佳甘油补料方式,经过12h甘油补料,菌体密度OD600达145;甲醇诱导96h,酶活可达306.9kU/mL。 展开更多
关键词 毕赤酵母 补料分批发酵 高密度发酵
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毕赤酵母工程菌高密度发酵的研究进展 被引量:7
13
作者 夏姗 武福军 +2 位作者 赵洪亮 薛冲 刘志敏 《生物技术通讯》 CAS 2013年第1期109-112,共4页
近年来毕赤酵母已成为一种优越的异源蛋白表达系统。而提高目的蛋白的表达水平,高密度发酵已成为关键技术环节之一。我们从毕赤酵母工程菌的选择、培养基的优化设计,以及发酵工程过程控制等方面简要阐述毕赤酵母的高密度发酵,并提出了... 近年来毕赤酵母已成为一种优越的异源蛋白表达系统。而提高目的蛋白的表达水平,高密度发酵已成为关键技术环节之一。我们从毕赤酵母工程菌的选择、培养基的优化设计,以及发酵工程过程控制等方面简要阐述毕赤酵母的高密度发酵,并提出了工程菌在高密度发酵过程中存在的问题。 展开更多
关键词 毕赤酵母工程菌 高密度发酵 培养基优化 发酵过程控制
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重组大肠杆菌的高密度发酵放大工艺研究 被引量:4
14
作者 张泉 于可响 +2 位作者 郭晓宇 朱鸿飞 孙怀昌 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期17-20,共4页
在初步筛选获得性价比较好的大肠杆菌高密度发酵培养基的基础上,以表达溶菌酶基因的pcDNKLYZ重组质粒转化的大肠杆菌DH5α为模型,用150 L发酵罐进行工艺放大研究,通过对细菌生长密度(D600 nm值)、质粒产量的比较和分析,探讨用于重组质... 在初步筛选获得性价比较好的大肠杆菌高密度发酵培养基的基础上,以表达溶菌酶基因的pcDNKLYZ重组质粒转化的大肠杆菌DH5α为模型,用150 L发酵罐进行工艺放大研究,通过对细菌生长密度(D600 nm值)、质粒产量的比较和分析,探讨用于重组质粒规模化生产的发酵工艺。结果表明:国产培养基中添加100 mL.L-1甘油、磷酸盐和硫酸盐后,重组菌的生长密度和质粒产量均与进口LB培养基接近或略高;收集的菌体分别于-70和-20℃保存,质粒提取和定量检测结果显示保存6周后质粒产量无明显变化;质粒提取和定量检测结果显示每克湿菌用5 mL溶液悬浮,可获得较高的质粒产量。 展开更多
关键词 大肠杆菌 溶菌酶 高密度发酵 质粒产量
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碱性果胶酶高产菌株的构建和高密度发酵 被引量:7
15
作者 望潇文 向腊 +2 位作者 徐婷 卢争辉 张桂敏 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期2017-2027,共11页
碱性果胶酶可用于苎麻脱胶和棉织物前处理的精练工艺,与传统的高温碱煮相比,具有保护纤维、降低能耗和化学污染的优势,因此获得高表达的碱性果胶酶基因工程菌,低成本生产碱性果胶酶对于纺织工业节能减排具有重要的意义。前期研究工作已... 碱性果胶酶可用于苎麻脱胶和棉织物前处理的精练工艺,与传统的高温碱煮相比,具有保护纤维、降低能耗和化学污染的优势,因此获得高表达的碱性果胶酶基因工程菌,低成本生产碱性果胶酶对于纺织工业节能减排具有重要的意义。前期研究工作已经将来源于枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 168的碱性果胶酶基因pel经过密码子优化后在毕赤酵母Pichia pastoris GS115中成功表达。本研究为了提高其表达量,首先利用启动子和信号肽都优化的载体pHBM905BDM进行表达,摇瓶酶活从68 U/mL增加到100 U/mL,qPCR检测转录水平提高了27%。再利用果胶底物平板筛选水解圈大的转化子进行摇瓶发酵获得菌株GS115-pHBM905BDM-pels4,摇瓶酶活为536 U/mL。随后构建重组质粒pPIC9K-pels,电转化菌株GS115-pHBM905BDM-pels4,利用抗生素G418平板进行筛选,在含4 mg/mL的G418抗性平板上得到菌株GS115-pHBM905BDM-pPIC9K-pels1,摇瓶酶活为770 U/mL,qPCR测定含7个拷贝目的基因。最后将该菌株在5 L的发酵罐中进行高密度发酵,果胶酶酶活提高至2 271 U/mL。该碱性果胶酶酶活已达到目前酵母表达的最高水平,说明其具有很好的应用于纺织工业的潜力。 展开更多
关键词 碱性果胶酶 毕赤酵母 G418抗性标记 组氨醇脱氢酶基因(HIS4)选择标记 高密度发酵
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黑曲霉酸性蛋白酶PrA在毕赤酵母中的高效表达
16
作者 李炳坤 郑毅恒 +2 位作者 王飞 成莉凤 李丁 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期3314-3329,共16页
【目的】本研究致力于获得酸性蛋白酶PrA的高产酵母菌株,以便在食品加工、饲料添加剂等领域进行应用。【方法】构建毕赤酵母表达菌株,在摇瓶水平重组表达PrA并检测其酶学性质。通过信号肽改造、基因剂量优化、共表达分子伴侣等措施逐步... 【目的】本研究致力于获得酸性蛋白酶PrA的高产酵母菌株,以便在食品加工、饲料添加剂等领域进行应用。【方法】构建毕赤酵母表达菌株,在摇瓶水平重组表达PrA并检测其酶学性质。通过信号肽改造、基因剂量优化、共表达分子伴侣等措施逐步提高PrA产量,并利用高密度发酵进一步提高表达水平。【结果】PrA的比酶活为3974.00 U/mg,最适反应pH为3.0,最适反应温度为45℃。初始菌株的PrA产量达到738.03 U/mL。通过使用MF4I信号肽将PrA产量提高至1206.52 U/mL,增加PrA基因拷贝数导致产量提高至2406.47 U/mL。进一步共表达分子伴侣或分子伴侣组合将PrA产量提高至4091.27U/mL。经过高密度发酵,发酵168h酶活达到43088.00 U/mL,与初始产量相比提高58.4倍。【结论】在毕赤酵母中成功实现了酸性蛋白酶PrA的高效表达,为其未来的工业化应用奠定了基础。这些结果为进一步研究和开发该酶在食品加工和饲料添加剂领域的应用提供了重要参考。 展开更多
关键词 毕赤酵母 酸性蛋白酶PrA 信号肽 基因剂量 分子伴侣 高密度发酵
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毕赤酵母表达肽抗生素hPAB-β的纯化 被引量:4
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作者 陈志瑾 丛延广 +3 位作者 周莹冰 侯瑞 胡福泉 饶贤才 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期332-336,共5页
目的在成功构建肽抗生素hPAB-β重组毕赤酵母的基础上,深入探讨酵母表达hPAB-β的规模化纯化方法。方法采用高密度发酵法在3.7L发酵罐中对pPIC9K-hPAB-β/GS115优5重组菌株进行发酵,收集发酵液,依次采用W-UF-Ⅱ过滤系统超滤、反相层析... 目的在成功构建肽抗生素hPAB-β重组毕赤酵母的基础上,深入探讨酵母表达hPAB-β的规模化纯化方法。方法采用高密度发酵法在3.7L发酵罐中对pPIC9K-hPAB-β/GS115优5重组菌株进行发酵,收集发酵液,依次采用W-UF-Ⅱ过滤系统超滤、反相层析、阳离子交换、分子筛层析等纯化技术对目标表达产物逐级进行纯化,目的蛋白用15%的Tricine-SDS-PAGE电泳进行跟踪分析。最终纯化产物的生物学活性用平板琼脂扩散法进行测定。结果在培养至工程菌菌体湿重约200~250g/L时,以甲醇诱导培养基诱导目的蛋白表达,48h后菌体湿重达280g/L,目标产物表达量约75mg/L。发酵液经Mr10000膜超滤,达到去除大部分酵母色素和浓缩样品的目的(体积浓缩约2/3)。再经反相层析、离子交换、分子筛层析纯化,最终目的产物的纯度达98%以上,得率达32.5%。且纯化的目的蛋白具有良好的杀灭金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的活性。结论酵母表达肽抗生素hPAB-β经膜超滤、反相层析、离子交换和分子筛层析四步纯化,实现了去除非目的蛋白、酵母色素及脱盐的目的,为规模化制备hPAB-β创造了前提。 展开更多
关键词 毕赤酵母 肽抗生素 hPAB-β 发酵 纯化
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创建酿酒酵母细胞工厂发酵生产广藿香醇 被引量:2
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作者 郭爽 王冬 +5 位作者 杨婷婷 李文豪 李荣生 张国伟 张学礼 戴住波 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期2316-2324,共9页
广藿香醇是存在于中药广藿香挥发油中的一种重要倍半萜类化合物,被认为是广藿香油药理功效和香味的主要贡献成分,具有抗菌、抗肿瘤和抗氧化等多种生物学活性。目前,全球广藿香醇及其混合精油需求量大,传统植提法存在浪费土地,污染环境... 广藿香醇是存在于中药广藿香挥发油中的一种重要倍半萜类化合物,被认为是广藿香油药理功效和香味的主要贡献成分,具有抗菌、抗肿瘤和抗氧化等多种生物学活性。目前,全球广藿香醇及其混合精油需求量大,传统植提法存在浪费土地,污染环境等诸多问题,因而亟需一种新的方法高效、低成本的生产广藿香醇。为了拓宽广藿香醇的生产方式,实现在酿酒酵母中异源生产广藿香醇,该研究首先将来源于广藿香Pogostemon cablin的广藿香醇合酶(PS)基因进行密码子优化后置于诱导型强启动子GAL1下,转入萜类底盘菌YTT-T5,成功获得可发酵生产(4.0±0.3)mg·L^(-1)广藿香醇的工程菌PS00。为了提高转化率,采用了蛋白质融合手段将丹参来源的SmFPS基因与PS基因进行融合,广藿香醇摇瓶产量提高25倍,达(100.9±7.4)mg·L^(-1)。在此基础上,进一步优化融合基因的拷贝数,广藿香醇的产量提升了90%,达到(191.1±32.7)mg·L^(-1)。最终通过发酵工艺优化,该菌在精确发酵体系中广藿香醇产量能达到2.1 g·L^(-1),为目前报道最高水平。该研究为广藿香醇的绿色生产提供了重要基础。 展开更多
关键词 广藿香醇 酿酒酵母 精确发酵
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重组木聚糖酶的高密度发酵及其定向制备低聚木糖
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作者 赵剑 解静聪 +3 位作者 姜越 杨静 徐浩 张宁 《林产化学与工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期97-104,共8页
为提高酶水解杨木木聚糖定向转化低聚木糖的效率,同时降低酶法制备低聚木糖的成本,围绕重组大肠杆菌(PET-PdoXyn10A-DE3)高密度发酵制备拟杆菌来源木聚糖酶PdoXyn10A的诱导表达条件和酶水解制备低聚木糖的工艺条件开展了研究。考察了在... 为提高酶水解杨木木聚糖定向转化低聚木糖的效率,同时降低酶法制备低聚木糖的成本,围绕重组大肠杆菌(PET-PdoXyn10A-DE3)高密度发酵制备拟杆菌来源木聚糖酶PdoXyn10A的诱导表达条件和酶水解制备低聚木糖的工艺条件开展了研究。考察了在5 L发酵罐水平下诱导剂浓度、诱导光密度(OD_(600))值、诱导温度和诱导pH值等因素对PET-PdoXyn10A-DE3产重组木聚糖酶PdoXyn10A的影响,反应温度、pH值对玉米芯木聚糖酶水解过程中酶活力的影响,以及酶添加量、酶水解时间对杨木乙酸水解液制备低聚木糖的影响。研究结果表明:在诱导剂浓度0.25 mmol/L、诱导OD_(600)值55、诱导温度34℃和诱导pH值7.0的最佳诱导条件下,经高密度发酵重组酶酶活力可达362.67 U/mL,重组大肠杆菌生物量可达28.83 g/L。酶水解制备低聚木糖的最佳条件为酶反应温度40℃、pH值5.2、酶添加量12 U/mL和反应时间6 h,此条件下低聚木糖的量为3.21 g/L,其中木二糖、木三糖、木四糖、木五糖和木六糖的量分别为1.09、 0.97、 0.84、 0.18、 0.13 g/L,木糖为1.82 g/L。 展开更多
关键词 重组木聚糖酶 高密度发酵 乙酸水热反应 低聚木糖 酶水解条件
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毕赤酵母高密度表达重组猪胰岛素前体的研究 被引量:4
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作者 刘玉伟 黄明志 +2 位作者 庄英萍 储炬 张嗣良 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期75-79,共5页
对摇瓶和50L罐上的重组菌毕赤酵母(Pichia pastoris)表达猪胰岛素前体(PIP)的发酵过程进行了研究。摇瓶发酵中,最佳诱导周期为60 h左右,诱导期甲醇的最佳加入量为每日2.0%~2.5%。50L发酵过程分为批发酵、补料和诱导表达3个阶段。生长... 对摇瓶和50L罐上的重组菌毕赤酵母(Pichia pastoris)表达猪胰岛素前体(PIP)的发酵过程进行了研究。摇瓶发酵中,最佳诱导周期为60 h左右,诱导期甲醇的最佳加入量为每日2.0%~2.5%。50L发酵过程分为批发酵、补料和诱导表达3个阶段。生长期(批发酵和补料阶段)细胞干重与培养时间的关系可用模型y= 0.6525e^(0.1909t)来描述。在批发酵阶段和补料阶段,流加的氨水和甘油几乎全部用来合成菌体和维持,没有其他副产物产生。诱导表达阶段流加的氨水和甲醇分别约有80%和70%被菌体利用。将摇瓶与发酵罐的实验结果进行了比较,发现摇瓶发酵的限制因子很可能是溶氧,而罐发酵的限制因子为碳源,因此,将摇瓶实验的结果放大到发酵罐时调整了控制策略,加大了甲醇的补料速率,最终PIP浓度达到1.72g/L。 展开更多
关键词 巴斯德毕赤酵母 高密度 重组猪胰岛素前体
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