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乳酸乳球菌作为黏膜免疫活载体疫苗传递抗原的研究进展 被引量:21
1
作者 史达 宋岩 李一经 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期680-683,共4页
乳酸菌是人和动物肠道内的常见细菌,被公认为安全级(generally recognized as safe,GRAS)微生物。近年来,对于乳酸菌作为宿主菌表达外源蛋白或抗原的研究取得了一定进展。乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)是乳酸菌的代表菌种,以其生长迅... 乳酸菌是人和动物肠道内的常见细菌,被公认为安全级(generally recognized as safe,GRAS)微生物。近年来,对于乳酸菌作为宿主菌表达外源蛋白或抗原的研究取得了一定进展。乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)是乳酸菌的代表菌种,以其生长迅速、易于操作等优点成为表达外源抗原,作为黏膜免疫活载体疫苗的理想菌株。随着对乳酸乳球菌基因工程的研究逐渐深入,已发展了一系列组成型和诱导型乳酸乳球菌表达系统以及蛋白定位系统。破伤风毒素片段C、布氏杆菌L7/L12蛋白等多种病原微生物抗原已成功在乳酸乳球菌中表达,并已证明部分重组乳酸乳球菌作为黏膜免疫疫苗可以同时刺激局部黏膜免疫应答和系统免疫应答。目前,如何使活载体乳酸乳球菌以最佳方式向黏膜免疫系统提呈抗原继而诱导有效免疫反应是该领域的研究热点,也是巨大挑战。实现外源抗原在乳酸乳球菌中的准确定位及与细胞因子的共表达是未来研究的重要方向之一。乳酸乳球菌作为黏膜免疫活载体疫苗传递外源抗原具有广阔的应用前景。 展开更多
关键词 乳酸乳球菌 外源蛋白 抗原 黏膜免疫 疫苗
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外源蛋白在大肠杆菌中的表达定位策略 被引量:4
2
作者 钟向阳 石歆莹 周宏灏 《生物工程进展》 CSCD 2001年第6期50-53,共4页
外源基因在大肠杆菌中表达是对基因重组技术的成功应用。外源基因在不同的大肠杆菌表达系统中表达产物可能定位于大肠杆菌空间结构的不同位置 :胞质 ,胞质膜 ,胞周质 ,胞外膜和胞外培养基 。
关键词 大肠杆菌 外源蛋白 表达定位
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后基因组时代的丝状真菌基因组学与代谢工程 被引量:8
3
作者 陈献忠 沈微 +1 位作者 樊游 王正祥 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1067-1078,共12页
丝状真菌不仅是传统发酵工业中抗生素、酶制剂和有机酸的主要生产者,而且也是代谢工程育种中异源蛋白表达的重要细胞工厂。丝状真菌的遗传修饰和代谢工程研究是现代工业生物技术领域最具活力的研究方向之一。特别是与细菌和酵母相比,丝... 丝状真菌不仅是传统发酵工业中抗生素、酶制剂和有机酸的主要生产者,而且也是代谢工程育种中异源蛋白表达的重要细胞工厂。丝状真菌的遗传修饰和代谢工程研究是现代工业生物技术领域最具活力的研究方向之一。特别是与细菌和酵母相比,丝状真菌在细胞生长、营养需求、环境适应性、翻译后修饰、蛋白分泌能力和生物安全性等方面具有显著的优势。文章综述了丝状真菌作为异源蛋白表达系统在基因组学技术研究和代谢工程研究方面的最新进展。作者在分析丝状真菌基因组结构、特点的基础上,阐述了比较基因组学、蛋白质组学、转录组学和代谢组学等对丝状真菌的代谢途径重构、新型蛋白挖掘和代谢工程育种中的作用和意义。另一方面,作者分析了丝状真菌在表达外源蛋白时遇到的瓶颈问题,总结了丝状真菌代谢工程育种中的常用策略包括异源基因的融合表达、反义核酸技术、蛋白分泌途径改造、密码子优化和蛋白酶缺陷宿主的选育等技术和手段。最后,对该领域的发展趋势进行了展望。 展开更多
关键词 丝状真菌 基因组学 代谢工程 异源蛋白 细胞工厂
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植物生物反应器优化策略与最新应用 被引量:6
4
作者 邹奇 潘炜松 +2 位作者 邱健 束文圣 吴川 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期71-86,共16页
随着分子生物学和植物基因工程的迅猛发展以及分子医药和现代农业等学科的交叉融合,植物生物反应器已成为分子医药农业的核心内容。利用植物生物反应器生产抗体、疫苗和功能性食品,具有规模化、成本低、安全性高、周期短等优势。2022年2... 随着分子生物学和植物基因工程的迅猛发展以及分子医药和现代农业等学科的交叉融合,植物生物反应器已成为分子医药农业的核心内容。利用植物生物反应器生产抗体、疫苗和功能性食品,具有规模化、成本低、安全性高、周期短等优势。2022年2月,加拿大卫生部批准了新型冠状病毒疫苗Covifenz?,这是世界首款植物源人体疫苗,标志着以植物生物反应器为代表的分子医药农业时代的来临。综述植物叶片和种子等代表性的植物生物反应器类型,分析瞬时表达系统和稳定表达系统的构建原理和应用,探讨通过启动子和密码子优化、糖基化过程“人源化”、基因沉默抑制和蛋白酶作用抑制等优化植物生物反应器的策略,总结国内外抗体、疫苗和功能性食品等植物源产品的开发进展,以期为我国植物生物反应器的研究及其在分子医药领域的应用提供参考。 展开更多
关键词 植物生物反应器 分子医药农业 外源蛋白 瞬时和稳定表达
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源于GAP启动子的毕赤酵母组成型表达系统的研究进展 被引量:6
5
作者 曹东艳 柳倩 +1 位作者 贺晓云 梅晓宏 《食品安全质量检测学报》 CAS 2013年第4期1217-1221,共5页
巴斯德毕赤酵母表达系统是目前应用非常广泛的外源基因真核表达系统。与源于醇氧化酶启动子(pAOX1)的诱导型表达系统相比,源于三磷酸甘油醛脱氢酶启动子(pGAP)的毕赤酵母组成型表达系统在表达外源蛋白时不需使用甲醇,表达时间短,并且在... 巴斯德毕赤酵母表达系统是目前应用非常广泛的外源基因真核表达系统。与源于醇氧化酶启动子(pAOX1)的诱导型表达系统相比,源于三磷酸甘油醛脱氢酶启动子(pGAP)的毕赤酵母组成型表达系统在表达外源蛋白时不需使用甲醇,表达时间短,并且在高密度发酵时采用连续发酵模式,因此成为近年研究的热点。本文分别从pGAP表达载体的构建、碳源、基因拷贝数、信号序列、高密度发酵等方面对该表达系统进行了综述,以期为其在蛋白生产中的深入研究和应用提供参考。 展开更多
关键词 巴斯德毕赤酵母 表达系统 GAP启动子 外源蛋白 组成型表达
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发酵工业中毕赤酵母表达的影响因素 被引量:3
6
作者 樊春媛 王雪 郎晓磊 《河北化工》 2012年第7期50-51,57,共3页
毕赤酵母是目前应用最广泛的外源蛋白表达系统。综合论述了外源基因、启动子、拷贝数、诱导温度、pH值、通气量、甲醇诱导、蛋白酶等对毕赤酵母表达系统的影响,为毕赤酵母在工业生产中的实际应用提供参考。
关键词 毕赤酵母 外源蛋白 发酵工业 影响因素
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葡萄糖诱导型AOX1启动子毕赤酵母突变株B5的筛选
7
作者 柏鹏 蔡孟浩 +1 位作者 周祥山 张元兴 《工业微生物》 CAS CSCD 2013年第2期69-72,共4页
在毕赤酵母表达系统中,AOX1启动子被广泛应用于驱动异源蛋白的表达,但是AOX1启动子的活性严格依赖于甲醇的诱导。本文成功筛选到一株毕赤酵母紫外诱变随机突变株B5,该突变株可以在葡萄糖碳源中表达Aox酶。利用绿色荧光蛋白GFP作为报告蛋... 在毕赤酵母表达系统中,AOX1启动子被广泛应用于驱动异源蛋白的表达,但是AOX1启动子的活性严格依赖于甲醇的诱导。本文成功筛选到一株毕赤酵母紫外诱变随机突变株B5,该突变株可以在葡萄糖碳源中表达Aox酶。利用绿色荧光蛋白GFP作为报告蛋白,B5在葡萄糖中具有AOX1启动子活性,但是在甘油中仍然没有AOX1启动子活性。该突变株提供了一种葡萄糖诱导型的新型AOX1启动子。 展开更多
关键词 毕赤酵母 AOX1启动子 葡萄糖 异源蛋白
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外源基因在巴斯德毕赤酵母中的表达 被引量:6
8
作者 华慧 周思翔 王正荣 《国外医学(生物医学工程分册)》 CAS 2003年第3期112-117,共6页
酵母是单细胞真核生物 ,既具有类似原核生物的生长特性 ,又具有一般真核生物的细胞生物学特性。巴斯德毕赤酵母是新近发展起来的新型表达系统 ,许多有应用价值的外源基因成功地在其中表达 ,使其日益受到关注。本文就毕赤酵母的生物学特性。
关键词 外源基因表达 巴斯德毕赤酵母 真核表达系统 AOXl启动子
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HIV-1TAT蛋白转导肽的研究进展 被引量:12
9
作者 吴永红 张成岗 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期66-73,共8页
TAT蛋白转导肽是人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type1,HIV-1)编码的一段富含碱性氨基酸、带正电荷的多肽,属于蛋白转导域家族的一员。长期研究发现其全长及11个碱性氨基酸富集区的核心肽段(YGRKKRRQRRR)不仅能够在... TAT蛋白转导肽是人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type1,HIV-1)编码的一段富含碱性氨基酸、带正电荷的多肽,属于蛋白转导域家族的一员。长期研究发现其全长及11个碱性氨基酸富集区的核心肽段(YGRKKRRQRRR)不仅能够在包括蛋白质、多肽及核酸等多种外源生物大分子的跨膜转导过程中具有重要作用,而且能够携带这些外源生物大分子通过活体细胞的各种生物膜性结构(如细胞膜和血脑屏障等)并发挥生理功能,但其跨膜转导机制仍不明确。新近研究还发现TAT核心肽段在促进外源蛋白高效表达过程中也具有重要作用,能够显著增加外源蛋白高效、可溶性表达的水平,显示了TAT蛋白转导肽的新功能。以TAT蛋白转导肽跨膜转导作用的长期研究背景为基础,分别从TAT蛋白转导肽的结构特点、其跨膜转导作用的影响因素及其作用机制等方面进行了系统综述,进一步结合TAT蛋白转导肽的最新研究进展分别从药物研发、机制探索及新功能的开发等方面展望了后续研究方向与应用价值,不仅为深入阐述TAT蛋白转导肽的跨膜转导作用的功能意义提供了参考依据,而且为TAT蛋白转导肽在微生物工程及蛋白质工程等领域的潜在应用价值提供了重要参考信息。 展开更多
关键词 TAT 蛋白转导肽 碱性氨基酸 蛋白转导 外源蛋白表达
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典型工业发酵过程环境变化下的细胞自适应行为与系统优化 被引量:4
10
作者 丁健 罗洪镇 史仲平 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1986-2002,共17页
工业发酵过程中,当细胞遭受到极端环境胁迫或剧烈环境变化时,细胞必须要作出必要的举动来适应环境的剧烈变化。细胞的自适应行为有可能不能应对剧烈的环境变化,导致发酵失败;但也有可能产生意想不到的效果,改善发酵性能。文中以毕赤酵母... 工业发酵过程中,当细胞遭受到极端环境胁迫或剧烈环境变化时,细胞必须要作出必要的举动来适应环境的剧烈变化。细胞的自适应行为有可能不能应对剧烈的环境变化,导致发酵失败;但也有可能产生意想不到的效果,改善发酵性能。文中以毕赤酵母Pichia pastoris生产异源蛋白和丁醇发酵过程为例,阐述了环境变化条件下的细胞自适应行为及其基于自适应行为的发酵过程优化方法和策略,为利用基于细胞自适应行为的发酵过程优化提供参考。 展开更多
关键词 细胞自适应行为 环境变化 发酵过程优化 异源蛋白生产 丁醇发酵
原文传递
巴斯德毕赤酵母表达外源蛋白的优化策略 被引量:2
11
作者 樊英 李天保 +2 位作者 杨秀生 王建华 滕达 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期41-45,49,共6页
巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统已成为外源蛋白最理想的表达系统之一,诸多的优点体现了其广泛的研究价值和应用价值。综述了P.pastoris表达外源蛋白时在载体选择与利用、外源基因改造、翻译后修饰及表达稳定性等方面的优化策... 巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统已成为外源蛋白最理想的表达系统之一,诸多的优点体现了其广泛的研究价值和应用价值。综述了P.pastoris表达外源蛋白时在载体选择与利用、外源基因改造、翻译后修饰及表达稳定性等方面的优化策略,以加速其应用。 展开更多
关键词 巴斯德毕赤酵母 外源蛋白 优化表达
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基于文献的毕赤酵母研究趋势分析
12
作者 张建国 傅梦月 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期128-133,共6页
毕赤酵母作为一种表达外源蛋白以及积累代谢中间物的细胞工厂已经得到广泛应用。文献检索是分析毕赤酵母研究的重要手段。该文基于Web of Science数据库分析了毕赤酵母的文献数量变化、来源国家分布等,以阐明我国有关毕赤酵母的研究状... 毕赤酵母作为一种表达外源蛋白以及积累代谢中间物的细胞工厂已经得到广泛应用。文献检索是分析毕赤酵母研究的重要手段。该文基于Web of Science数据库分析了毕赤酵母的文献数量变化、来源国家分布等,以阐明我国有关毕赤酵母的研究状况。同时,展望了毕赤酵母外源基因表达技术、发酵策略、过氧化物酶体吞噬等新研究动向。 展开更多
关键词 毕赤酵母 外源蛋白表达 发酵策略 启动子分析 过氧化物酶体吞噬
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酵母表达系统表达外源基因的研究进展 被引量:9
13
作者 郑敏 张飞雄 刘丽 《首都师范大学学报(自然科学版)》 1999年第4期73-78,共6页
阐述了几种常用的酵母表达系统的研究现状及应用前景,并对酵母分泌的外源蛋白的含量及糖基化程度进行了比较.我们认为:甲醇营养型酵母分泌的外源蛋白量高且无过度糖基化现象。
关键词 酵母表达系统 外源蛋白 糖基化程度 外源基因
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巴斯德毕赤酵母表达系统研究进展 被引量:10
14
作者 王黎明 王琦 梅汝鸿 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2004年第2期42-45,共4页
巴斯德毕赤酵母外源基因表达系统是近年来发展的一种优秀的真核表达系统 ,与传统的大肠杆菌和酿酒酵母表达体系相比 ,其具有的诸多优势使之研究价值及应用价值不断体现。综述了其在生物学特性、表达载体、基因整合、外源蛋白的分泌、诱... 巴斯德毕赤酵母外源基因表达系统是近年来发展的一种优秀的真核表达系统 ,与传统的大肠杆菌和酿酒酵母表达体系相比 ,其具有的诸多优势使之研究价值及应用价值不断体现。综述了其在生物学特性、表达载体、基因整合、外源蛋白的分泌、诱导表达及发酵等方面的基础研究及新近研究进展。 展开更多
关键词 巴斯德毕赤酵母 基因表达系统 外源蛋白 生物学特性 表达载体 基因整合 真核表达系统
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黑曲霉pepB基因缺失菌株的构建及其功能分析 被引量:12
15
作者 孙晶 李景鹏 +2 位作者 王敖全 唐国敏 王华明 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期766-770,共5页
以黑曲霉 (Aspergillusniger)GICC2 773基因组DNA为模板 ,用PCR方法分别扩增pepB基因中的上游约 1 4kb和下游约 1 3kb两段DNA序列 ,将此两段序列按同一方向分别插入质粒pMW1中潮霉素抗性基因 (hph)表达单元的 5′和 3′端 ,构建成重组质... 以黑曲霉 (Aspergillusniger)GICC2 773基因组DNA为模板 ,用PCR方法分别扩增pepB基因中的上游约 1 4kb和下游约 1 3kb两段DNA序列 ,将此两段序列按同一方向分别插入质粒pMW1中潮霉素抗性基因 (hph)表达单元的 5′和 3′端 ,构建成重组质粒pMW1 pepB ,用于通过同源重组靶向破坏基因组中的pepB基因。同源重组则采用原生质体 PEG方法 ,将酶切pMW1 pepB得到的线性片段转化A .nigerGICC2 773菌株 ,通过潮霉素选择平板得到 6 2个Hgy抗性转化子 ,然后采用PCR方法从这些抗性转化子中筛选到 1个由于同源重组产生的pepB基因缺失突变菌株pepB2 9。功能分析显示该突变株的酸性蛋白酶活性有明显下降 。 展开更多
关键词 黑曲霉 pepB基因缺失 同源重组 外源蛋白
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植物生物反应器生产异源蛋白 被引量:5
16
作者 王新国 张国华 肖成祖 《生物技术通讯》 CAS 1999年第3期217-226,共10页
利用植物表达系统生产外源蛋白是一个有吸引力的廉价生产系统 ,它有可能替代外源蛋白的发酵生产系统。本文对分子农业的意义。
关键词 分子农业 基因表达 异源蛋白
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外源性蛋白在大肠杆菌中可溶性表达的策略综述 被引量:8
17
作者 马媛媛 何健民 康永杰 《世界科技研究与发展》 CSCD 2015年第5期627-630,共4页
大肠杆菌表达系统因其自身众多的优点而成为表达外源性蛋白的首选,但是有些情况下,外源性蛋白在大肠杆菌中表达时因不能正确折叠而形成不可溶性的包涵体。因此,学者们为提高重组蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达采用了多种方法,包括应用促... 大肠杆菌表达系统因其自身众多的优点而成为表达外源性蛋白的首选,但是有些情况下,外源性蛋白在大肠杆菌中表达时因不能正确折叠而形成不可溶性的包涵体。因此,学者们为提高重组蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达采用了多种方法,包括应用促溶标签、改变大肠杆菌表达菌株、分子伴侣的共表达和折叠调节器等。本综述对近几年来常用的促进外源性蛋白可溶性表达的策略进行了归纳和总结。 展开更多
关键词 大肠杆菌 包涵体 外源性蛋白 伴侣蛋白
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提高大肠杆菌表达外源蛋白胞外含量的策略 被引量:2
18
作者 曹蕾 唐晓峰 《生物资源》 CAS 2020年第4期375-381,共7页
大肠杆菌的蛋白质表达平台在工业和农业中得到了广泛应用,使目的蛋白质表达后释放至胞外更有利于大规模的生产。目前,已经研究出许多改善外源蛋白胞外含量的方法。本文从蛋白质分泌机制、菌株、信号肽、载体和培养条件的选择和优化改造... 大肠杆菌的蛋白质表达平台在工业和农业中得到了广泛应用,使目的蛋白质表达后释放至胞外更有利于大规模的生产。目前,已经研究出许多改善外源蛋白胞外含量的方法。本文从蛋白质分泌机制、菌株、信号肽、载体和培养条件的选择和优化改造、密码子的优化和蛋白质跨膜转运过程的改善等方面总结了提高大肠杆菌表达外源蛋白的胞外含量的各种策略,指出多因素协同作用才能更全面地提升蛋白质的胞外产量。 展开更多
关键词 大肠杆菌 外源蛋白 胞外含量
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乙醇胁迫抑制毕赤酵母表达外源蛋白的转录组学分析
19
作者 高鹏 丁健 +5 位作者 张许 赵玥 张猛 高敏杰 吴剑荣 詹晓北 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期584-598,共15页
在5 L发酵罐中进行毕赤酵母发酵表达猪?干扰素的实验,发现甘油培养末期乙醇的积累会抑制外源蛋白的表达。从转录组学角度系统分析不同浓度乙醇胁迫条件下,毕赤酵母甘油培养期和甲醇诱导期细胞的生理状态变化。研究结果表明,在甘油培养期... 在5 L发酵罐中进行毕赤酵母发酵表达猪?干扰素的实验,发现甘油培养末期乙醇的积累会抑制外源蛋白的表达。从转录组学角度系统分析不同浓度乙醇胁迫条件下,毕赤酵母甘油培养期和甲醇诱导期细胞的生理状态变化。研究结果表明,在甘油培养期,乙醇胁迫使得毕赤酵母细胞中的545个基因发生了显著差异表达(265个基因表达上调,280个基因表达下调),这些差异表达基因的功能主要涉及蛋白质合成、能量代谢、细胞周期和过氧化物酶代谢。乙醇胁迫增加了蛋白质错误折叠的情况,降低了核糖体和线粒体的结构完整性,使得甘油培养末期无法得到大量具有健全功能的酵母细胞。在甲醇诱导期,与甲醇代谢、蛋白质加工合成、氨基酸代谢等途径相关的294个基因发生了显著差异表达(171个基因表达上调,123个基因表达下调),导致内质网胁迫不能被及时解除,破坏了细胞内的氨基酸正常代谢。 展开更多
关键词 毕赤酵母 外源蛋白 乙醇胁迫 转录组学
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植物生物反应器研究进展 被引量:13
20
作者 凌华 黄惠琴 鲍时翔 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2002年第5期21-26,共6页
利用植物生物反应器生产外源蛋白具有许多优点 ,其吸引力与日俱增。转基因植物生物反应器已逐步成为国内外基因工程领域的研究热点之一。就其概念、特点和研究进展、存在的问题等作一综述。
关键词 植物生物反应器 研究进展 基因工程 外源蛋白
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