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CIK细胞体内外抗肝癌细胞作用 被引量：47
1
作者 杜清友 刘明旭 +4 位作者 王福生 雷周云 孙文兵 陈菊梅 吴祖泽 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2001年第4期325-327,330,共4页
目的 :研究肝癌患者CIK(cytokine inducedkiller)细胞的体外杀伤自体肝癌原代细胞的细胞毒活性以及正常人CIK细胞在裸鼠体内的抗肿瘤作用。方法 :分别分离获得肝癌患者和正常人的外周血单个核细胞 (PBMC) ,加入细胞因子 ,体外诱导成CIK... 目的 :研究肝癌患者CIK(cytokine inducedkiller)细胞的体外杀伤自体肝癌原代细胞的细胞毒活性以及正常人CIK细胞在裸鼠体内的抗肿瘤作用。方法 :分别分离获得肝癌患者和正常人的外周血单个核细胞 (PBMC) ,加入细胞因子 ,体外诱导成CIK细胞 ,用流式细胞仪对细胞作动态表型分析 ,并与正常人的CIK细胞作对比。用51Cr释放法 ,测定肝癌患者的CIK细胞体外杀伤自体肿瘤细胞的细胞毒活性。在Balb/c裸鼠皮下接种肝癌细胞BEL 740 2 ,观察CIK细胞对荷瘤鼠的抑瘤作用 ,并与LAK、PBMC细胞相对比。结果 :肝癌患者的CIK细胞体外增殖力强 ,至培养 2 8天时达到最大增殖倍数 30 0多 ,表型分析结果表明 ,CD3+ CD5 6 + 双阳性细胞得到了大量的扩增 ,其含量由原来的 0 2 3%上升到第 2 1天的 17 8%。体外实验表明 ,肝癌患者的CIK细胞杀伤自体原代肝癌细胞的细胞毒活性明显高于自体的PBMC细胞。裸鼠体内实验表明 ,CIK细胞能够显著抑制肿瘤的生长 ,其抑瘤率可达84 7% ,高于LAK细胞的 5 2 8%及PBMC的 37 1% (P <0 0 5和P <0 0 1)。结论 :CIK细胞具有较强的体内外抗肝癌细胞活性 ,有可能应用于临床上肝癌的过继性免疫治疗。 展开更多
关键词 CIK细胞 肝癌细胞 免疫活性 抗肿瘤作用
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薏苡仁提取物对人肝癌细胞增殖、凋亡及p53表达的影响 被引量：31
2
作者 韦长元 李挺 +3 位作者 唐宗平 埃高莫.比佐 刘剑仑 杨南武 《广西医科大学学报》 CAS 2001年第6期793-795,共3页
目的 :探讨薏苡仁提取物 (康莱特注射液 ,KL T)抗肝癌的作用机制。方法 :利用 MTT法、免疫组化法及电镜观察34例肝癌患者的癌细胞在体外培养和经 KL T处理后的变化 ,并与对照组比较。结果 :1KL T对肝癌细胞增殖有抑制作用 ,可达 30 %以... 目的 :探讨薏苡仁提取物 (康莱特注射液 ,KL T)抗肝癌的作用机制。方法 :利用 MTT法、免疫组化法及电镜观察34例肝癌患者的癌细胞在体外培养和经 KL T处理后的变化 ,并与对照组比较。结果 :1KL T对肝癌细胞增殖有抑制作用 ,可达 30 %以上。 2经 KL T处理后的肝癌细胞有明显的凋亡现象和 p5 3增高 ,与对照组比较有显著性差异 (P <0 .0 5 )。 3电镜下观察 :肝癌细胞形态改变 ,出现细胞膜小泡和凋亡小体形成等凋亡细胞的特征性变化。结论 :KL T抗肝癌的作用是通过诱发细胞凋亡或上调 p5 3基因表达 ,引起细胞坏死而达到治疗目的的。 展开更多
关键词 薏苡仁 提取物 肝癌 细胞 增殖 凋亡 P53
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白术多糖对肝癌细胞增殖及侵袭的抑制作用及其机制 被引量：39
3
作者 朱云 李成 +2 位作者 林鑫盛 孙晶晶 程旸 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1180-1185,共6页
目的探讨白术多糖(PAM)对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响及其机制。方法体外培养肝癌细胞HepG2分别给予不同浓度的PAM处理,通过CCK-8和Transwell实验检测肝癌细胞的增殖、侵袭能力。采用免疫荧光技术检测肝癌细胞中β-catenin蛋白表达水... 目的探讨白术多糖(PAM)对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响及其机制。方法体外培养肝癌细胞HepG2分别给予不同浓度的PAM处理,通过CCK-8和Transwell实验检测肝癌细胞的增殖、侵袭能力。采用免疫荧光技术检测肝癌细胞中β-catenin蛋白表达水平,采用RT-PCR技术和免疫印迹法检测AKT、GSK-3β的基因和蛋白表达水平及其磷酸化表达,检测MMP-2的基因和蛋白表达水平。HepG2细胞给予LiCl/PAM/LiCl联合PAM处理,检测细胞增殖、侵袭能力改变,检测GSK-3β磷酸化和MMP2的蛋白水平。结果与空白对照组相比,PAM处理后肝癌细胞体外增殖能力下降、侵袭能力下降(P<0.05);PAM处理可以下调β-catenin蛋白表达、下调MMP-2基因与蛋白表达水平,同时抑制AKT与GSK-3β的磷酸化(P<0.05)。PAM对肝癌细胞体外增殖、侵袭及AKT/GSK-3β/β-catenin通路的影响呈浓度依赖性:PAM的浓度越高,对肝癌细胞体外增殖、侵袭的抑制作用越强;对AKT与GSK-3β的磷酸化的抑制作用越强,对β-catenin表达的抑制作用也越强。LiCl可以逆转PAM对肝癌细胞增殖、侵袭的抑制作用,同时可以逆转PAM对GSK-3β磷酸化和MMP2的蛋白表达的抑制。结论PAM对肝癌细胞的体外增殖和侵袭能力具有抑制作用,PAM可能通过影响Wnt/β-catenin信号通路发挥作用。 展开更多
关键词 白术多糖 肝癌细胞 增殖 侵袭 WNT/Β-CATENIN信号通路
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金花茶对二乙基亚硝胺致大鼠肝癌前病变及肝癌细胞株作用的影响 被引量：34
4
作者 李翠云 段小娴 +7 位作者 苏建家 汪云 欧超 李瑗 曹骥 杨春 岳惠芬 付镜远 《广西医科大学学报》 CAS 北大核心 2007年第5期660-663,共4页
目的:观察不同浓度的金花茶对二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠肝癌前病变及对肝癌细胞株BEL-7404及正常人肝细胞株7702的作用。方法:实验动物按随机分组法分为7组,每组13只,分别连续给含有不同受试物的饲料及腹腔注射1剂DEN(150mg/kg.体重)处... 目的:观察不同浓度的金花茶对二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠肝癌前病变及对肝癌细胞株BEL-7404及正常人肝细胞株7702的作用。方法:实验动物按随机分组法分为7组,每组13只,分别连续给含有不同受试物的饲料及腹腔注射1剂DEN(150mg/kg.体重)处理,观察各组动物肝组织内γ-GT灶的数量(个/cm2)和大小(mm2/cm2);用RPMI1640培养基体外培养BEL-7404人肝癌细胞株和正常人肝细胞株7702,采用噻唑蓝(MTT)法半数抑制率测定(IC50),观察金花茶浓缩液及茶花浸泡液对肝癌细胞和正常人肝细胞有无抑制作用。结果:除茶叶渣组外,其它各实验组(包括茶花组,不同浓度浓缩液组)的γ-GT阳性灶的总面积、阳性灶的个数均少于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。MTT法半数抑制率实验显示金花茶茶花、茶叶浸泡液及金花茶浓缩液对肝癌细胞株BEL-7404的细胞具有一定的抑制作用,对正常人肝细胞则无抑制作用。结论:金花茶对DEN诱发大鼠肝癌前病变有抑制作用,呈一定的剂量—效应反应趋势;金花茶对体外培养的BEL-7404人肝癌细胞株的生长繁殖具有抑制作用,可作为肝癌的预防剂。 展开更多
关键词 金花茶 肝癌前病变 肝癌细胞株
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CIK细胞对裸鼠肝癌移植瘤生长的抑制作用 被引量：22
5
作者 施明 雷周云 +3 位作者 王福生 张冰 黎文亮 刘敬超 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2002年第3期179-182,共4页
目的 :观察外周血单个核细胞 (PBMC)体外经IFN γ ,rIL 2和anti CD3McAb诱导后细胞表型的变化及CIK细胞对裸鼠肝癌移植瘤的抑制作用。方法 :采用成份血采血机采集 6例健康自愿者PBMC ,经多因子诱导后 ,计数活细胞数 ,流式细胞仪检测细... 目的 :观察外周血单个核细胞 (PBMC)体外经IFN γ ,rIL 2和anti CD3McAb诱导后细胞表型的变化及CIK细胞对裸鼠肝癌移植瘤的抑制作用。方法 :采用成份血采血机采集 6例健康自愿者PBMC ,经多因子诱导后 ,计数活细胞数 ,流式细胞仪检测细胞表型 ;裸鼠肩胛下接种肝癌细胞 ,次日起连续 6d给予不同数量的CIK细胞 ,观察对肝癌生长的抑制作用。结果 :诱导培养后 13d ,效应细胞增殖 7.1倍 ,CD3 +CD5 6+双阳性细胞增殖约 6倍。动物实验结果表明 ,CIK细胞可明显抑制肝癌移植瘤的生长 ,且肿瘤抑制率与CIK细胞的数量呈剂量效应关系。结论 :PBMC细胞体外经多因子诱导成CIK细胞 ,其数量及抗肿瘤活性显著增加 。 展开更多
关键词 CIK细胞 细胞表型 肝细胞癌 生长抑制
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反义survivin-脂质体复合物对肝癌细胞生长凋亡和细胞周期的影响 被引量：17
6
作者 戴德坚 吴丹 +1 位作者 孟化 陆才德 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期581-585,共5页
目的探讨反义survivin-脂质体复合物(survivin-ASODN)对肝癌细胞系HepG2的生长抑制作用及其机制,为肝癌及survivin阳性肿瘤的治疗提供理论依据。方法用脂质体介导survivin-ASODN转染肝癌细胞系HepG2细胞;通过RT-PCR和Westernblot检测sur... 目的探讨反义survivin-脂质体复合物(survivin-ASODN)对肝癌细胞系HepG2的生长抑制作用及其机制,为肝癌及survivin阳性肿瘤的治疗提供理论依据。方法用脂质体介导survivin-ASODN转染肝癌细胞系HepG2细胞;通过RT-PCR和Westernblot检测survivin表达水平;以MTT法测量细胞生长情况;以流式细胞术测定caspase-3活性及凋亡率,电镜观察细胞形态学变化,并应用流式细胞仪同步分析survivin-ASODN对肝癌细胞系HepG2增殖周期的影响。结果surviving-ASODN可有效下调survivin表达水平,并呈剂量依赖关系,其IC50值为250nmol/L,最大效应浓度为600nmol/L;可抑制细胞生长,激活caspase-3活性,诱导细胞凋亡,使其出现凋亡形态学变化,如胞浆空泡变性、核浓缩和核碎裂。细胞周期的同步分析显示,surviving-ASODN对HepG2细胞增殖周期有明显影响,HepG2先出现细胞周期阻滞,紧接着出现细胞凋亡;低浓度处理后,可将细胞先后阻滞在S期和G2/M期;高浓度时,S期阻滞被加强,可快速诱导细胞凋亡,并且,细胞凋亡率随着药物浓度的增加和作用时间的延长明显上升。结论surviving-ASODN对肝癌细胞有强的生长抑制效应,其机制是与阻断细胞周期及诱导细胞凋亡有关。 展开更多
关键词 反义survivin-脂质体复合物 肝肿瘤 细胞凋亡
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特异性小干扰性RNA降低骨桥蛋白基因表达对肝癌细胞侵袭性的影响 被引量：12
7
作者 朱晓群 叶青海 +2 位作者 雷科峰 陈洁 钦伦秀 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期404-407,共4页
目的应用RNA干扰技术降低细胞内骨桥蛋白的表达水平,研究骨桥蛋白对人肝癌细胞侵袭性的影响。方法体外化学合成骨桥蛋白序列特异性双链RNA,转染高转移肝癌细胞株HCC-LM3,用实时定量PCR和Western blot检测骨桥蛋白的表达。通过生长曲线... 目的应用RNA干扰技术降低细胞内骨桥蛋白的表达水平,研究骨桥蛋白对人肝癌细胞侵袭性的影响。方法体外化学合成骨桥蛋白序列特异性双链RNA,转染高转移肝癌细胞株HCC-LM3,用实时定量PCR和Western blot检测骨桥蛋白的表达。通过生长曲线、克隆形成和Matrigel侵袭实验,观察肝癌细胞恶性生物学行为的改变。结果骨桥蛋白特异性小干扰性RNA (siRNA)转染组的HCC-LM3细胞,骨桥蛋白mRNA水平下降79%,蛋白水平下降81%。体外实验表明,与空白对照组及非特异性siRNA转染组相比,骨桥蛋白特异性siRNA转染组HCC-LM3细胞克隆形成数目下降,穿过人工基底膜的细胞数减少(P＜0．05)。结论降低骨桥蛋白的表达可显著抑制肝癌细胞的侵袭转移能力。 展开更多
关键词 骨桥蛋白 SIRNA 肝细胞癌 基因表达 侵袭
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羽扇豆醇对人肝癌细胞HepG2和SK-HEP-1侵袭、转移的影响及机制研究 被引量：19
8
作者 刘博佳 宁青 +4 位作者 钟荣玲 夏智 姜子瑜 宋捷 韦英杰 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第24期6028-6035,共8页
上皮-间质转化(EMT)广泛存在于胚胎发育中,与细胞的迁移、侵袭密切相关。肿瘤中EMT水平升高表现为上皮型钙黏附素(E-cadherin)被神经型钙黏附素(N-cadherin)取代,间质标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(vimentin)表达上调等。... 上皮-间质转化(EMT)广泛存在于胚胎发育中,与细胞的迁移、侵袭密切相关。肿瘤中EMT水平升高表现为上皮型钙黏附素(E-cadherin)被神经型钙黏附素(N-cadherin)取代,间质标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(vimentin)表达上调等。据报道,羽扇豆醇可降低基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和N-cadherin蛋白表达抑制人肉骨瘤细胞转移,调控MMP-9 mRNA表达抑制Huh-7细胞侵袭。但羽扇豆醇在肝癌方面的研究较少,因此该文探讨羽扇豆醇对肝癌细胞体内外侵袭转移的作用及其可能机制。采用MTT法和Annexin V/PI双染法检测羽扇豆醇对HepG2细胞和SK-HEP-1细胞活力、凋亡的影响。Transwell法检测羽扇豆醇对细胞侵袭能力的影响。Western blot法检测迁移相关蛋白E-cadherin,N-cadherin,α-SMA,vimentin和MMP-9的表达水平。建立裸鼠皮下移植瘤模型以及H22肝癌细胞肺部转移模型,HE染色结合免疫组化法观察羽扇豆醇体内抗肿瘤生长和抑制肺转移的疗效。结果显示,羽扇豆醇(50,100μmol·L^(-1))显著抑制细胞活性,诱导细胞凋亡;羽扇豆醇(5,10,20μmol·L^(-1))可剂量依赖性地抑制HepG2细胞和SK-HEP-1细胞侵袭,同时诱导上皮-间质转化(EMT)标志蛋白E-cadherin表达,降低N-cadherin,α-SMA,vimentin和MMP-9蛋白表达。体内实验显示,羽扇豆醇抑制异种移植HepG2细胞荷瘤小鼠肿瘤的生长,上调肿瘤组织中E-cadherin蛋白表达,降低N-cadherin蛋白表达;同时减少肝癌H22细胞在小鼠肺部转移灶的形成。以上结果表明,羽扇豆醇抑制肝癌细胞侵袭转移的机制可能与其调控EMT过程相关。 展开更多
关键词 肝癌细胞 羽扇豆醇 侵袭 转移 上皮-间质转化(EMT) HEPG2细胞 SK-HEP-1细胞
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华蟾素增强细胞因子诱导的杀伤细胞对肝癌细胞的杀伤活性 被引量：16
9
作者 蒋淑莲 文剑 杜建霞 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 2007年第3期164-166,共3页
目的观察华蟾素对细胞因子诱导的杀伤细胞(CIKC)的表型变化及其对肝癌的细胞毒作用。方法采集健康供者的外周血单个核细胞(MNC)培养,收集非贴壁细胞并加入白细胞介素2(IL-2)诱导培养CIKC,将华蟾素加入CIKC,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测C... 目的观察华蟾素对细胞因子诱导的杀伤细胞(CIKC)的表型变化及其对肝癌的细胞毒作用。方法采集健康供者的外周血单个核细胞(MNC)培养,收集非贴壁细胞并加入白细胞介素2(IL-2)诱导培养CIKC,将华蟾素加入CIKC,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测CIKC杀伤BEL7402肝癌细胞株的活性。结果CIKC经华蟾素加入培养后,CIKC细胞群的CD3+CD8+,CD3+CD56+细胞比例和杀伤活性较单纯的CIKC更高。结论华蟾素有助于CIKC的细胞毒活性。 展开更多
关键词 华蟾素 细胞因子诱导的杀伤细胞 肝癌细胞
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双氢青蒿素抑制肝癌细胞侵袭和转移的初步研究 被引量：16
10
作者 冯宝民 韩鑫龙 +3 位作者 李雨桐 袁立霞 孙颖超 唐玲 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期683-688,共6页
有关文献报道称,双氢青蒿素能够使磷酸化黏附激酶与基质金属蛋白酶-2的表达减少,抑制卵巢癌细胞的生长、迁移和侵袭;双氢青蒿素能够通过TGF-β/Smad信号通路,促进Treg细胞的生成,起到免疫抑制作用;双氢青蒿素还能够通过抑制VEGF受体KDR... 有关文献报道称,双氢青蒿素能够使磷酸化黏附激酶与基质金属蛋白酶-2的表达减少,抑制卵巢癌细胞的生长、迁移和侵袭;双氢青蒿素能够通过TGF-β/Smad信号通路,促进Treg细胞的生成,起到免疫抑制作用;双氢青蒿素还能够通过抑制VEGF受体KDR的表达,进而抑制肺癌细胞的生长。但双氢青蒿素在肝癌细胞方面的研究较少,为了初步探究双氢青蒿素对于肝癌细胞侵袭和转移的影响,选择肝癌细胞7402和高转移肝癌细胞MHCC97H,使用CCK-8法和结晶紫染色法检测双氢青蒿素对肝癌细胞7402和高转移肝癌细胞MHCC97H生长情况的影响。通过细胞划痕实验和Transwell小室间接反映双氢青蒿素对肝癌细胞7402和高转移肝癌细胞MHCC97H侵袭和转移的影响。Western blot法检测双氢青蒿素作用于细胞48 h,EGFR及其下游信号通路的蛋白表达水平。结果显示,双氢青蒿素在25μmol·L^-1时能够抑制肝癌细胞7402和高转移肝癌细胞MHCC97H的生长。与对照组相比,细胞克隆形成数量明显减少,细胞迁移和侵袭能力减弱。Western blot结果显示,与对照组相比,双氢青蒿素组可下调EGFR及其下游信号通路p-AKT,p-ERK,N-cadherin,Snail,Slug蛋白表达水平,上调E-cadherin蛋白表达水平,从而影响肝癌细胞7402和高转移肝癌细胞MHCC97H的迁移、侵袭和转移。 展开更多
关键词 双氢青蒿素(DHA) 肝癌细胞 EGFR EMT
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KAI1基因对MHCC97-H肝癌细胞粘附力的影响 被引量：14
11
作者 彭志红 唐波 +4 位作者 杨建民 司遂海 陈文生 房殿春 罗元辉 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第23期2311-2313,共3页
目的探讨KAI1基因对MHCC97-H肝癌细胞粘附力的影响,从而推测KAI1基因影响MHCC97-H肝癌细胞侵袭转移的机制。方法采用微管吸吮技术研究我们前已转染人类KAI1全长正、反义结构基因的人肝癌MHCC97-H细胞粘附力。结果在纤维连接蛋白(fibrone... 目的探讨KAI1基因对MHCC97-H肝癌细胞粘附力的影响,从而推测KAI1基因影响MHCC97-H肝癌细胞侵袭转移的机制。方法采用微管吸吮技术研究我们前已转染人类KAI1全长正、反义结构基因的人肝癌MHCC97-H细胞粘附力。结果在纤维连接蛋白(fibronectin,FN)裱衬表面,利用微管吸吮系统测得的各组肝癌细胞的粘附力分别为MHCC97-H-S组(678·4±101·8),MHCC97-H-AS组(1083·6±113·8),MHCC97-H-pCI组(853·0±105·4)及MHCC97-H亲本细胞组(834·6±130·5)(单位为10-10N,细胞数为25)。与MHCC97-H亲本细胞组比较,MHCC97-H-S组细胞对FN的粘附力显著下降(P<0·01),MHCC97-H-AS组细胞对FN的粘附力显著增加(P<0·01),而MHCC97-H-pCI组细胞对FN的粘附力无明显变化(P>0·05)。结论KAI1基因可能降低肝癌细胞对细胞外基质FN的粘附力,从而抑制转移的初始步骤,进而抑制MHCC97-H肝癌细胞的侵袭和转移。 展开更多
关键词 肝癌细胞 侵袭转移 粘附力 KAIL基因 MHCC97-H
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阿魏酸钠对人EBL-7404肝癌细胞的抑制作用 被引量：13
12
作者 朱秀琴 张学军 《肝脏》 2001年第1期19-20,共2页
目的　观察阿魏酸钠 (sodiumferulate ,SF)对离体肝癌细胞生长的抑制作用。方法　将人EBL 740 4肝癌细胞以 1× 10 8/l浓度接种于 2 5cm2 细胞培养瓶中 ,接近单层时 ,分为SF组和对照组。SF组用含SF(终浓度为 1mg/l)和小牛血清 (5 0m... 目的　观察阿魏酸钠 (sodiumferulate ,SF)对离体肝癌细胞生长的抑制作用。方法　将人EBL 740 4肝癌细胞以 1× 10 8/l浓度接种于 2 5cm2 细胞培养瓶中 ,接近单层时 ,分为SF组和对照组。SF组用含SF(终浓度为 1mg/l)和小牛血清 (5 0ml/l)的 16 40培养液培养细胞 ,对照组用含小牛血清 (5 0ml/l)的 16 40培养液培养细胞 ,48h后 ,收集细胞 ,碘化丙啶 (propidiumiodide ,PI)染色后 ,用流式细胞仪检测每一细胞周期的DNA含量 ,并根据DNA的含量分类细胞。 结果　 (1)SF组细胞凋亡为 10 .5 % ,对照组为 5 .9% ,凋亡被上调。 (2 )SF组DNA百分比在S期明显降低 (SF组为 33 .12 % ,对照组为 47.83 % ) ,在G2 /M期明显增加 (SF组为 2 7.87% ,对照组为 15 .0 4% )。结论　SF诱导了人EBL 740 4肝癌细胞凋亡 ,抑制了人EBL 740 4肝癌细胞的增殖 ,SF能是一种有效抑制肝癌生长的中药。 展开更多
关键词 阿魏酸钠 肝癌细胞 细胞凋亡 细胞增殖 EBL-7404
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肝癌细胞外泌体的分离与鉴定 被引量：15
13
作者 陈加贵 邓敬桓 何敏 《世界华人消化杂志》 CAS 2016年第5期737-743,共7页
目的:针对目前尚缺理想的肿瘤细胞提取方案,探寻分离纯化肝癌细胞培养液中外泌体的新方法.方法:连续适应无血清培养肝癌SMMC-7721细胞,收集细胞上清液,采用改良超速离心法分离、纯化培养上清液中肝癌细胞外泌体;透射电镜观察其形态,Nano... 目的:针对目前尚缺理想的肿瘤细胞提取方案,探寻分离纯化肝癌细胞培养液中外泌体的新方法.方法:连续适应无血清培养肝癌SMMC-7721细胞,收集细胞上清液,采用改良超速离心法分离、纯化培养上清液中肝癌细胞外泌体;透射电镜观察其形态,Nanosight技术分析粒径;Western blot分析其特异蛋白Alix、CD63、CD9的表达并利用SDS-PAGE电泳分析肝癌细胞和外泌体的蛋白谱.结果:透射电镜观察到的肝癌细胞外泌体,外形呈圆形或椭圆形;Nanosight技术分析颗粒直径峰值为122 nm,直径30-150 nm之间颗粒占72.16%;Western blot证实在细胞培养上清液和外泌体提取液中均能检测到Alix、CD63、CD9的蛋白表达;SDS-PAGE电泳清晰显示外泌体中高丰度大分子结构蛋白明显少于肝癌细胞.结论:利用连续适应无血清细胞培养结合改良超速离心法能提取高纯度的外泌体,为肝癌细胞外泌体标志物研究奠定基础. 展开更多
关键词 肝癌细胞 外泌体 分离 鉴定
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槐耳清膏体外诱导人肝癌细胞MHCC97H凋亡 被引量：15
14
作者 张光军 郑起 +2 位作者 袁周 王志刚 黄新余 《肿瘤学杂志》 CAS 2010年第4期281-284,共4页
[目的]研究槐耳清膏对人肝癌细胞MHCC97H凋亡的作用及其机制。[方法]不同浓度槐耳清膏及5-Fu分别与人肝癌细胞MHCC97H共同培养,采用CCK-8法、FCM及荧光显微镜检测细胞增殖与凋亡变化,细胞免疫组化检测Bax、Bcl-2及p53基因的表达。[结果... [目的]研究槐耳清膏对人肝癌细胞MHCC97H凋亡的作用及其机制。[方法]不同浓度槐耳清膏及5-Fu分别与人肝癌细胞MHCC97H共同培养,采用CCK-8法、FCM及荧光显微镜检测细胞增殖与凋亡变化,细胞免疫组化检测Bax、Bcl-2及p53基因的表达。[结果]槐耳清膏在体外可抑制MHCC97H细胞的增殖,诱导MHCC97H细胞产生早期凋亡,且作用具有剂量和时间依赖性。荧光显微镜下细胞呈典型的早期凋亡形态学改变。细胞免疫组化可见Bax及p53蛋白表达增强,而Bcl-2蛋白表达减少。[结论]槐耳清膏能明显诱导人肝癌细胞MHCC97H凋亡,其机制可能与改变凋亡相关基因Bax、Bcl-2、p53的表达有关。 展开更多
关键词 槐耳清膏 诱导 肝癌细胞 凋亡
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大蒜素抑制人肝癌细胞中VEGF mRNA表达的研究 被引量：11
15
作者 高艳景 袁孟彪 +2 位作者 辛华 王茜 邵洪莲 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期531-533,共3页
目的　研究大蒜素对人肝癌细胞中VEGFmRNA表达的影响。方法　应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)方法。以HPRT (hypoxanthinephosphoribosyltransferase)为内标。结果　大蒜素有明显抑制人肝癌细胞VEGFmRNA表达的作用 ,与对照组相比 ,其VE... 目的　研究大蒜素对人肝癌细胞中VEGFmRNA表达的影响。方法　应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)方法。以HPRT (hypoxanthinephosphoribosyltransferase)为内标。结果　大蒜素有明显抑制人肝癌细胞VEGFmRNA表达的作用 ,与对照组相比 ,其VEGFmRNA表达水平降低了约 66 3 6% (P <0 0 5 )。结论　大蒜素是人肝癌细胞表达VEGF基因的调节剂 ,能抑制人肝癌细胞VEGF基因的表达。 展开更多
关键词 大蒜素 表皮生长因子 表皮生长因子受体 肝细胞癌 MRNA
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索拉菲尼对肝癌HepG2细胞凋亡、耐药及PTEN蛋白表达的影响 被引量：15
16
作者 祝珊珊 秦飞 +4 位作者 陈仲巍 毕丽伟 陈丹 许莉 郑晓辉 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期1532-1536,共5页
目的探讨索拉菲尼(Sorafenib,So)对肝细胞癌HepG2的毒性作用及其机制。方法不同浓度索拉菲尼作用HepG2细胞,CCK-8法测定细胞活性,结晶紫染色观察;流式细胞术检测细胞凋亡;细胞内蛋白表达采用Western blot检测。结果So剂量依赖地降低HepG... 目的探讨索拉菲尼(Sorafenib,So)对肝细胞癌HepG2的毒性作用及其机制。方法不同浓度索拉菲尼作用HepG2细胞,CCK-8法测定细胞活性,结晶紫染色观察;流式细胞术检测细胞凋亡;细胞内蛋白表达采用Western blot检测。结果So剂量依赖地降低HepG2细胞活性并诱导细胞凋亡;Western blot显示So可上调PTEN、Bax蛋白表达,抑制磷酸化AKT、Bcl-2的蛋白以及耐药基因ABCC2和ABCG2蛋白的表达。结论So抑制HepG2细胞存活并诱导凋亡;机制可能与So促进肝癌细胞PTEN以及Bax蛋白表达;抑制Bcl-2以及p-AKT和耐药基因ABCC2、ABCG2的表达有关。 展开更多
关键词 肝癌细胞 索拉菲尼 细胞增殖 PTEN 细胞凋亡 耐药基因
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胡萝卜苷对人肝癌细胞株HepG2增殖、凋亡的影响及其机制探讨 被引量：13
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作者 曾俊权 林晔 +2 位作者 刘婷婷 柯波 肖游章 《山东医药》 CAS 2018年第23期5-8,共4页
目的观察胡萝卜苷对人肝癌细胞株HepG2增殖、凋亡的影响,并探讨其机制。方法体外培养HepG2细胞,取对数生长期细胞,分为胡萝卜苷组和对照组。将HepG2细胞按5×10~5/mL接种于96孔板中,胡萝卜苷组分别加入25、50、100、150、200μg/mL... 目的观察胡萝卜苷对人肝癌细胞株HepG2增殖、凋亡的影响,并探讨其机制。方法体外培养HepG2细胞,取对数生长期细胞,分为胡萝卜苷组和对照组。将HepG2细胞按5×10~5/mL接种于96孔板中,胡萝卜苷组分别加入25、50、100、150、200μg/mL的胡萝卜苷,对照组不加入药物,继续培养48 h后采用CCK-8法测算细胞增殖抑制率。将HepG2细胞按5×105/mL接种于6孔板中,胡萝卜苷组分别加入50、100μg/mL的胡萝卜苷,对照组不加入药物,继续培养48 h后采用流式细胞仪观察细胞凋亡情况,采用Western blotting法检测细胞中的凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白WNT3A、β-catenin。结果胡萝卜苷各亚组细胞增殖抑制率均高于对照组,且胡萝卜苷组中25、50、100、150、200μg/mL亚组细胞增殖抑制率依次增高(P均<0.05)。胡萝卜苷组50μg/mL亚组、100μg/mL亚组细胞凋亡率均高于对照组,且100μg/mL亚组细胞凋亡率高于50μg/mL亚组(P均<0.05)。对照组及胡萝卜苷组的50μg/mL亚组、100μg/mL亚组细胞中Bax蛋白相对表达量依次增高,Bcl-2、WNT3A、β-catenin蛋白相对表达量依次降低(P均<0.05)。结论胡萝卜苷可抑制HepG2细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路、调节凋亡相关蛋白表达有关。 展开更多
关键词 胡萝卜苷 肝癌细胞 HEPG2细胞 细胞增殖 细胞凋亡 WNT/Β-CATENIN信号通路
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大黄素对化疗药诱导肝癌细胞凋亡的增强作用 被引量：5
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作者 张利红 官阳 杨木兰 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期310-313,共4页
目的观察大黄素对化疗药5-氟尿嘧啶(5-Fu)诱导肝癌细胞HepG2凋亡的影响。方法不同浓度大黄素单用或与5-Fu联合作用HepG2细胞,以流式细胞仪(FCM)及末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡;免疫组织化学(SP)法... 目的观察大黄素对化疗药5-氟尿嘧啶(5-Fu)诱导肝癌细胞HepG2凋亡的影响。方法不同浓度大黄素单用或与5-Fu联合作用HepG2细胞,以流式细胞仪(FCM)及末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡;免疫组织化学(SP)法检测Bax、Bcl-2、凋亡诱导因子(AIF)蛋白表达的改变。结果2、4μg/ml大黄素分别与5-Fu联用,作用细胞16、24、48h后,时间依赖性地诱导HepG2细胞凋亡,且随大黄素浓度的增加细胞凋亡率有增加的趋势。联用组细胞凋亡率及Bax、Bcl-2、AIF蛋白表达与5-Fu单用组相比差异均有极显著性意义(均P<0.01)。各组细胞凋亡率与Bax蛋白表达呈正相关(r=0.881,P<0.05),与Bcl-2蛋白表达呈负相关(r=-0.942,P<0.01),与AIF蛋白表达呈正相关(r=0.900,P<0.05)。结论大黄素可显著增强5-Fu诱导HepG2细胞凋亡的作用,可能与调控Bax、Bcl-2、AIF蛋白表达有关。 展开更多
关键词 大黄素 5-氟尿嘧啶 肝癌细胞 细胞凋亡
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肝癌细胞外泌体诱导肝癌细胞炎症因子的表达 被引量：9
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作者 赵枭卿 周虎 冷静 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期410-415,共6页
目的探讨肝癌细胞HepG2和SMMC-7721外泌体对同源细胞HepG2和SMMC-7721的TLR8信号通路及细胞因子的调节作用。方法利用SBI试剂盒收集肝癌细胞株HepG2和SMMC-7721外泌体,利用透射电镜和Western blot检测鉴定外泌体的形态和标志蛋白的表达... 目的探讨肝癌细胞HepG2和SMMC-7721外泌体对同源细胞HepG2和SMMC-7721的TLR8信号通路及细胞因子的调节作用。方法利用SBI试剂盒收集肝癌细胞株HepG2和SMMC-7721外泌体,利用透射电镜和Western blot检测鉴定外泌体的形态和标志蛋白的表达。利用CCK-8法检测外泌体对细胞增殖活性的影响。利用荧光定量PCR和Western blot检测TLR8、MyD88、NF-κB的表达。利用ELISA法测定培养液上清中细胞因子TNF-α、IL-12、IL-6、IFN-γ质量浓度的变化。结果与空白对照组相比,肝癌细胞HepG2和SMMC-7721外泌体对细胞的增殖活性没有引起显著性变化(P>0.05)。荧光定量PCR和Western blot结果显示外泌体作用后,TLR8、MyD88、NF-κB的m RNA表达量和蛋白质量浓度明显增多(P<0.05)。ELISA结果显示外泌体作用后细胞因子TNF-α、IL-12、IL-6和IFN-γ的分泌也有显著性增加(P<0.05)。结论肝癌细胞来源的外泌体可调节肝癌细胞的炎症反应。 展开更多
关键词 肝癌细胞 外泌体 TLR8信号通路 炎症因子
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槐耳浸膏对人肝癌高转移细胞系转移的抑制作用研究 被引量：6
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作者 李立新 叶胜龙 +5 位作者 王艳红 孙瑞霞 薛琼 陈洁 高东梅 汤钊猷 《中国肿瘤》 CAS 2006年第4期265-268,共4页
[目的]探索槐耳浸膏抑制肝癌细胞转移的机制,为槐耳浸膏在临床上治疗肝肿瘤提供理论依据。[方法]将高转移潜能人肝癌细胞系(MHCC97H)分别与槐耳浸膏(1.0mg/ml,3.0mg/ml,5.0mg/ml,10.0mg/ml)及DMEM(含10%胎牛血清)作用24h,测定其肿瘤细... [目的]探索槐耳浸膏抑制肝癌细胞转移的机制,为槐耳浸膏在临床上治疗肝肿瘤提供理论依据。[方法]将高转移潜能人肝癌细胞系(MHCC97H)分别与槐耳浸膏(1.0mg/ml,3.0mg/ml,5.0mg/ml,10.0mg/ml)及DMEM(含10%胎牛血清)作用24h,测定其肿瘤细胞黏附率、运动抑制率及侵袭抑制率。[结果]各组MHCC97H细胞经槐耳浸膏作用24h后,其细胞黏附率明显下降,而运动抑制率及侵袭抑制率明显上升,与对照组相比差别均有统计学意义,且槐耳浸膏浓度与肿瘤细胞黏附率、运动抑制率及侵袭抑制率均有相关性。[结论]槐耳浸膏能明显抑制肝癌细胞的黏附、运动及侵袭能力,故可以阻抑肝癌细胞的转移。 展开更多
关键词 槐耳浸膏 肝癌细胞系 转移 抑制
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