鹅肝细胞的高纯分离及培养 被引量：13

1

作者 洪胜辉 张军 +4 位作者 邵丹 张宜辉 张蕊 王来娣 龚道清 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1378-1380,1385,共4页

采用简单的"胶原酶直接消化法"分离鹅胚胎肝细胞,得到的肝细胞纯度高,活性好;HE染色显示大量双核或多核细胞,细胞具有旺盛增殖分裂能力;肝脏特异性基因白蛋白基因检测显示所分离细胞为成熟肝脏细胞。该法操作简单、高效,是获... 采用简单的"胶原酶直接消化法"分离鹅胚胎肝细胞,得到的肝细胞纯度高,活性好;HE染色显示大量双核或多核细胞,细胞具有旺盛增殖分裂能力;肝脏特异性基因白蛋白基因检测显示所分离细胞为成熟肝脏细胞。该法操作简单、高效,是获得鹅原代肝细胞的一种较好的方法,有利于以鹅原代肝细胞为模型的体外研究工作的开展。 展开更多

关键词 鹅胚胎 鹅原代肝细胞 白蛋白

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板蓝根多糖抗小鹅瘟病毒的作用 被引量：6

2

作者 许小琴 李青 +2 位作者 郜平光 范燕月 王志刚 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1340-1343,共4页

在鹅胚内用板蓝根多糖(IRPS)作直接杀毒和阻断感染试验,对鹅胚尿囊液中小鹅瘟病毒(GPV)含量、鹅胚存活时间、存活率、病变和免疫组化进行测定。结果显示,40μg/胚IRPS阻断感染组,GPV接种后72h ELISA检测为阳性的尿囊液最高稀释倍数23;... 在鹅胚内用板蓝根多糖(IRPS)作直接杀毒和阻断感染试验,对鹅胚尿囊液中小鹅瘟病毒(GPV)含量、鹅胚存活时间、存活率、病变和免疫组化进行测定。结果显示,40μg/胚IRPS阻断感染组,GPV接种后72h ELISA检测为阳性的尿囊液最高稀释倍数23;鹅胚平均存活时间192h;存活率6/6;胚体肉眼观察未见病变;切片镜检可见肝、肾轻度淤血和细胞变性,心、脑轻度淤血和水肿;免疫组化显示肝、肾内GPV表达抗原为弱阳性,心、脑内为阴性。而攻毒对照组尿囊液GPV阳性的最高稀释倍数28;鹅胚存活时间138h;存活率0/6;胚体严重萎缩、出血、水肿,各组织细胞碎裂、坏死,组织内GPV表达抗原全为强阳性。两者比较,各指标具有极显著差异。这表明在鹅胚内IR-PS具有极强的阻断GPV感染、增殖和保护胚体组织器官免受其损伤的作用。 展开更多

关键词 板蓝根多糖 小鹅瘟病毒 鹅胚

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鹅胚胎体外培养的研究 被引量：4

3

作者 刘凤军 庄益芬 张文昌 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2004年第1期15-17,共3页

以蛋重为 (12 4 .90± 0 .91) g(A组 )、(130 .30± 0 .99)g(B组 )、(134.5 6± 1.0 1) g(C组 )的豁鹅蛋壳作为代用蛋壳 ,将第 1次换壳后的鹅胚转移至其中进行孵化 ,记录孵化第 3～ 4 .5天和第 6 ,15 ,31天的活胚数 ,同时... 以蛋重为 (12 4 .90± 0 .91) g(A组 )、(130 .30± 0 .99)g(B组 )、(134.5 6± 1.0 1) g(C组 )的豁鹅蛋壳作为代用蛋壳 ,将第 1次换壳后的鹅胚转移至其中进行孵化 ,记录孵化第 3～ 4 .5天和第 6 ,15 ,31天的活胚数 ,同时分析代用蛋壳大小对孵化效果的影响。结果表明 :在整个孵化过程中 ,C组代用蛋壳优于B组和A组 ,尤其在孵化中期 (第 6～ 15天 ) ,A组与C组对照差异显著 (P <0 .0 5 )。结果表明 ,在鹅胚体外操作中 ,第 2次换壳所用的代用蛋壳的大小以大于或等于(134.5 6± 1.0 1) g为宜。 展开更多

关键词 鹅 胚胎培养 体外培养 代用蛋壳 孵化

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鹅胚脾淋巴细胞选择机制研究 被引量：3

4

作者 王燕 周学军 +5 位作者 蔡亚非 陈杰 杨帆 李平 刘再群 邓立翠 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期107-112,共6页

取发育到第14天的鹅胚胎(E14)到1日龄雏鹅的脾脏用免疫荧光双标法研究CD4和CD8抗原表达,用Hoeschst33342的荧光染色方法分析细胞凋亡率,探索鹅胚脾淋巴细胞选择机制。结果显示:E14脾初具轮廓,E19脾出现红髓和白髓,1日龄时脾被膜增厚,脾... 取发育到第14天的鹅胚胎(E14)到1日龄雏鹅的脾脏用免疫荧光双标法研究CD4和CD8抗原表达,用Hoeschst33342的荧光染色方法分析细胞凋亡率,探索鹅胚脾淋巴细胞选择机制。结果显示:E14脾初具轮廓,E19脾出现红髓和白髓,1日龄时脾被膜增厚,脾小结数目增多,脾结构完整。CD4和CD8共表达于脾的红髓和被膜上,白髓中表达量较少。鹅胚脾的CD4+CD8+表达量为1%～30%;1日龄雏鹅的双阳性面积百分比与胚胎鹅E14、E19、E24、E27差异极显著(P<0.01);1日龄雏鹅的凋亡率与胚胎鹅E14、E24差异极显著(P<0.01)。表明鹅胚脾的CD4+CD8+表达与细胞凋亡存在协同关系。 展开更多

关键词 鹅胚 脾 CD4+CD8+ 外周淋巴细胞

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鹅小肠上皮细胞的分离培养研究 被引量：3

5

作者 李融 韩庆广 赵国琦 《中国家禽》 北大核心 2009年第16期22-25,共4页

取29～30胚龄的鹅胚为试验材料,通过组织块种植法和酶消化法进行原代鹅小肠上皮的体外培养,采用刮除法、相差消化及相差贴壁法对上皮细胞进行纯化,用0.05%Trypsin-EDTA进行消化传代,通过形态学观察及免疫细胞化学法进行鉴定。结果表明:... 取29～30胚龄的鹅胚为试验材料,通过组织块种植法和酶消化法进行原代鹅小肠上皮的体外培养,采用刮除法、相差消化及相差贴壁法对上皮细胞进行纯化,用0.05%Trypsin-EDTA进行消化传代,通过形态学观察及免疫细胞化学法进行鉴定。结果表明:组织块种植法得到的鹅小肠上皮细胞生长状况良好,细胞活性较强,经过纯化,得到了纯度较高的鹅小肠上皮细胞。而联合使用浓度为300U/mL的胶原酶(Ⅺ型)和0.1mg/mL的中性蛋白酶(Ⅰ型)、多次(短时间)消化收获细胞法虽然可获得大量的健全肠绒毛隐窝单位,但传代后其增殖能力明显下降;形态学观察及免疫细胞化学法鉴定为阳性,证明分离出的细胞为小肠上皮细胞,从而为小肠上皮细胞的进一步研究奠定了基础。 展开更多

关键词 鹅胚 小肠上皮细胞 体外培养 鉴定

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不同日龄鹅胚成纤维细胞的分离培养及活力研究 被引量：2

6

作者 李婉雁 相雪莲 +6 位作者 钱隆 王怡菲 陈非玥 曹楠 田允波 黄运茂 许丹宁 《仲恺农业工程学院学报》 CAS 2020年第2期28-31,37,共5页

选择发育良好的9、11、13和15胚龄的马岗鹅鹅胚各3枚,分离鹅胚成纤维细胞并培养,于24、48、72、96、120和144 h分别进行细胞计数绘制不同胚龄成纤维细胞的生长曲线、检测细胞活力及细胞增殖率.结果显示,9、11日龄鹅胚成纤维细胞状态更好... 选择发育良好的9、11、13和15胚龄的马岗鹅鹅胚各3枚,分离鹅胚成纤维细胞并培养,于24、48、72、96、120和144 h分别进行细胞计数绘制不同胚龄成纤维细胞的生长曲线、检测细胞活力及细胞增殖率.结果显示,9、11日龄鹅胚成纤维细胞状态更好,死细胞和杂细胞较少;11日龄鹅胚成纤维细胞的细胞生长曲线最理想,活细胞比例为4个日龄中最高;9、11和13日龄鹅胚成纤维细胞的增殖率均保持在较高的水平.11日龄鹅胚更适合用于分离培养成纤维细胞. 展开更多

关键词 成纤维细胞 鹅胚 生长曲线 细胞活力 细胞增殖率

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曲霉菌污染对鹅胚孵化的影响及防治

7

作者 袁生 袁圣丹 黄海良 《畜牧兽医科学（电子版）》 2020年第17期115-116,共2页

2016年初至2020年5月,广东多个地区的种鹅场发生由于曲霉菌感染种鹅胚引起鹅胚发育不良、胚体死亡及出雏率下降的病例,给养殖户造成巨大的经济损失,经采取消毒和卫生清洁等相关措施,有效控制曲霉菌污染对鹅胚孵化的影响。

关键词 曲霉菌 污染 鹅胚

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茶多酚对过氧化氢诱导鹅小肠上皮细胞氧化损伤的保护作用 被引量：17

8

作者 付晶 林桐 +2 位作者 陈艾玲 邓珊 刘春朋 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期61-69,共9页

试验旨在探讨茶多酚(TP)对过氧化氢(H2O2)引起鹅小肠上皮细胞的损伤作用。选取25~26胚龄马岗鹅胚为试验材料,通过酶消化法作原代鹅小肠上皮细胞分离与体外培养;采用不同浓度H2O2诱导细胞建立氧化应激损伤细胞模型,茶多酚预处理细胞氧化... 试验旨在探讨茶多酚(TP)对过氧化氢(H2O2)引起鹅小肠上皮细胞的损伤作用。选取25~26胚龄马岗鹅胚为试验材料,通过酶消化法作原代鹅小肠上皮细胞分离与体外培养;采用不同浓度H2O2诱导细胞建立氧化应激损伤细胞模型,茶多酚预处理细胞氧化应激损伤干预;采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞存活率,比色法检测细胞中丙二醛(MDA)含量、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。结果表明,成功获得鹅小肠上皮细胞;与对照组相比,400μmol·L^-1H2O2作用鹅小肠上皮细胞2 h,细胞出现明显损伤,细胞存活率显著降低(P<0.05),而不同浓度茶多酚显著提高细胞存活率(P<0.05);其中100μg·mL^-1茶多酚提前干预10 h明显改善H2O2导致的鹅小肠上皮细胞存活率下降(P<0.05);抑制H2O2诱导的胞内脂质过氧化产物MDA和糖酵解酶LDH产生,且抑制H2O2导致的抗氧化酶系SOD和GSH-Px活性降低(P<0.05)。研究结果表明,在鹅小肠上皮细胞中,茶多酚可能通过降低脂质过氧化和细胞损伤程度及提高抗氧化酶活性,实现对H2O2引起细胞氧化应激损伤保护作用。 展开更多

关键词 茶多酚 过氧化氢 鹅小肠上皮细胞 体外分离培养 抗氧化

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鹅细小病毒鹅胚成纤维细胞适应病毒株的培育及序列分析 被引量：8

9

作者 邱娜 刘明 +3 位作者 白小飞 邵周伍林 赵健 张云 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期898-900,共3页

为培育高滴度的鹅细小病毒(GPV)细胞适应病毒株,本研究将原代鹅胚成纤维细胞(GEF)进行连续传代培养,并传至31代次,传代的GEF具有典型的成纤维细胞形态,培养48 h后形成单层细胞。选取不同代次的GEF接种GPV YN分离株,并在GEF中连续传代至... 为培育高滴度的鹅细小病毒(GPV)细胞适应病毒株,本研究将原代鹅胚成纤维细胞(GEF)进行连续传代培养,并传至31代次,传代的GEF具有典型的成纤维细胞形态,培养48 h后形成单层细胞。选取不同代次的GEF接种GPV YN分离株,并在GEF中连续传代至F20代,病毒滴度由102.5TCID50/0.1 m L达到106.16TCID50/0.1 m L,表明GPV已适应GEF,并在感染GEF后的72 h产生明显细胞病变。对细胞适应毒F20和亲本病毒F0代进行基因序列比对结果显示,F20与F0存在133个核苷酸差异位点,主要集中在5'和3'非编码区。氨基酸序列共出现22个变异位点,主要集中在VP3蛋白中。这些变异与病毒对细胞培养的适应过程有关,其机理有待进一步研究。 展开更多

关键词 鹅细小病毒 鹅胚成纤维细胞系 病毒/细胞适应

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鹅星状病毒感染抗体依赖性增强作用 被引量：2

10

作者 赵光伟 邵骜骏 +10 位作者 曹瑞兵 曹蓝云 冯昊南 曹礼静 谭昌藩 杨晓伟 魏思远 张天奇 李军 崔晓焓 张立武 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1181-1186,共6页

为了探究鹅星状病毒感染是否存在抗体依赖性增强作用,用中和效价为1∶94、1∶141和1∶282共3种不同抗体滴度(低、中、高效价)的鹅星状病毒卵黄抗体分别进行雏鹅保护试验和鹅胚中和试验,同时设空白对照和攻毒对照。结果显示,雏鹅保护试... 为了探究鹅星状病毒感染是否存在抗体依赖性增强作用,用中和效价为1∶94、1∶141和1∶282共3种不同抗体滴度(低、中、高效价)的鹅星状病毒卵黄抗体分别进行雏鹅保护试验和鹅胚中和试验,同时设空白对照和攻毒对照。结果显示,雏鹅保护试验中抗体效价1∶94组鹅均发病,病死率90%(9/10),1∶141效价组鹅的发病率为30%(3/10),病死率20%(2/10),1∶282效价组鹅无发病及死亡;攻毒对照组鹅100%发病,病死率80%(8/10);1∶94抗体组动物发病时间和死亡时间均早于攻毒对照组;荧光定量PCR检测结果显示1∶94和1∶141抗体效价组Ct值均小于攻毒对照组。鹅胚中和试验结果显示,3个抗体处理组鹅胚病死率分别为100%,20%和0,攻毒和阴性对照组分别为100%和0,1∶94效价组鹅胚死亡时间显著早于攻毒对照组;荧光定量检测结果显示1∶94效价组平均Ct值显著小于1∶141效价组和攻毒对照组。结果说明低中和效价的鹅星状病毒卵黄抗体能增强鹅星状病毒在雏鹅和鹅胚体内的复制能力,发病率和病死率增加,证实鹅星状病毒感染存在抗体依赖性增强作用,其结果可为临床鹅星状病毒病的防控提供理论依据。 展开更多

关键词 鹅星状病毒 雏鹅试验 鹅胚中和试验 抗体依赖性增强作用

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鸭源新型鹅细小病毒的分离鉴定与VP1基因序列分析 被引量：5

11

作者 刘博 祖立闯 +3 位作者 魏中锋 谷英华 毕研丽 王文秀 《中国家禽》 北大核心 2022年第12期34-39,共6页

为确定发病鸭场的致病原,掌握该致病原的遗传进化特征,研究从山东省某鸭场采集到1份短喙与矮小综合征(SBDS)疑似病例病料,采用永生化鹅胚上皮细胞系(GEEC)对病料进行病毒分离培养,观察细胞病变,测定分离毒株的血凝性、病毒滴度(TCID_(5... 为确定发病鸭场的致病原,掌握该致病原的遗传进化特征,研究从山东省某鸭场采集到1份短喙与矮小综合征(SBDS)疑似病例病料,采用永生化鹅胚上皮细胞系(GEEC)对病料进行病毒分离培养,观察细胞病变,测定分离毒株的血凝性、病毒滴度(TCID_(50))、对鸭胚的致病性,并进行VP1基因序列比对及相似性分析。结果显示:临床病料分离培养的病毒可引起GEEC出现细胞明显皱缩、聚集、折光性增强等典型细胞病变,表明分离到一株鸭源NGPV毒株,命名为SDHZ株,该病毒对1%鸡红细胞无凝集性,TCID_(50)高达10^(-6.25)/mL,鸭胚半数致死量(ELD_(50))为10^(-4.5)/mL,接种鸭胚死亡出现全身及肝脏出血、短喙、发育迟缓等典型症状,VP1基因序列与樱桃谷鸭中分离的新型鹅细小病毒(NGPV)相似性为95.3%~98.0%,与GPV经典毒株的相似性为89.3%~94.6%。表明该鸭场本次疫病病原为NGPV,为进一步研究NGPV致病机制及制定综合防控措施提供参考。 展开更多

关键词 新型鹅细小病毒 永生化鹅胚上皮细胞系 分离鉴定 VP1基因 序列分析

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LPS通过ROS/p38/MAPK信号通路对鹅胚肝细胞凋亡的影响 被引量：1

12

作者 钟粤韵 杨舒展 +7 位作者 陈非玥 陆智儿 李冰心 李婉雁 田允波 黄运茂 许丹宁 曹楠 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期2224-2232,共9页

【目的】建立鹅胚肝细胞的分离培养技术,探索脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)影响鹅胚肝细胞凋亡的作用机制,为鹅肝脏功能相关研究提供参考依据。【方法】选取16~18日龄无特定病原鹅胚,无菌条件下取鹅胚肝脏并用2%胶原酶Ⅳ消化,过细胞... 【目的】建立鹅胚肝细胞的分离培养技术,探索脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)影响鹅胚肝细胞凋亡的作用机制,为鹅肝脏功能相关研究提供参考依据。【方法】选取16~18日龄无特定病原鹅胚,无菌条件下取鹅胚肝脏并用2%胶原酶Ⅳ消化,过细胞筛后分离培养鹅胚肝细胞并进行PAS染色鉴定。在鹅胚肝细胞中添加不同浓度(0(对照组)、0.1、1.0、10μg/mL)LPS,分别于12、24、36 h收集细胞,采用试剂盒检测鹅胚肝细胞内活性氧(ROS)水平,流式细胞仪检测细胞凋亡水平,实时荧光定量PCR检测细胞凋亡关键基因(caspase3、caspase9、p38)mRNA表达量。【结果】试验成功从鹅胚中分离出肝细胞并进行培养,鹅胚肝细胞形态完整,贴壁率高,存活率高,能稳定生长。PAS染色结果显示,鹅胚肝细胞质呈深浅不一的紫红色,肝细胞核呈蓝色。添加不同浓度LPS后发现,鹅胚肝细胞有氧化损伤情况,其中1.0μg/mL LPS组鹅胚肝细胞内ROS水平升高。添加LPS后鹅胚肝细胞晚期细胞凋亡受到抑制,除36 h外,细胞凋亡关键基因caspase 3、caspase 9、p 38表达量均显著降低(P<0.05)。【结论】本研究建立了较稳定的鹅胚肝细胞分离培养方法,添加不同浓度LPS后鹅胚肝细胞内ROS水平升高,激活p38/MAPK通路,且细胞凋亡受到一定抑制。 展开更多

关键词 鹅胚肝细胞 脂多糖(LPS) ROS/p38/MAPK信号通路 细胞凋亡

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板蓝根多糖对鹅胚成纤维细胞增殖的影响 被引量：3

13

作者 李青 许小琴 +1 位作者 王志刚 王彬 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期61-63,共3页

将6种不同浓度的板蓝根多糖(IRPS)分别加入经培养24 h形成单层的鹅胚成纤维细胞(GEF)中,加药培养12、24、36、48、60和72 h后,分别用四唑盐法研究IRPS对GEF增殖的影响。结果表明:IRPS含量为100~1 000μg.mL-1能够显著促进GEF增殖,且呈... 将6种不同浓度的板蓝根多糖(IRPS)分别加入经培养24 h形成单层的鹅胚成纤维细胞(GEF)中,加药培养12、24、36、48、60和72 h后,分别用四唑盐法研究IRPS对GEF增殖的影响。结果表明:IRPS含量为100~1 000μg.mL-1能够显著促进GEF增殖,且呈一定的量效和时效关系。 展开更多

关键词 板蓝根多糖 鹅胚成纤维细胞 细胞增殖

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