大鼠Ⅱ型糖尿病心肌细胞凋亡及其调控基因表达的变化 被引量：5

1

作者 胡成俊 张友云 +2 位作者 陈锡昌 董峰 汪长华 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期532-536,共5页

目的:探讨Ⅱ型糖尿病大鼠模型心肌细胞细胞凋亡及其调控基因表达的变化,为进一步研究NIDDM的发病机制提供实验资料。方法:建立NIDDM大鼠模型,TUNEL法观察凋亡的心肌细胞。抽提心肌组织DNA进行琼脂糖凝胶电泳。免疫组织化学方法观察心肌... 目的:探讨Ⅱ型糖尿病大鼠模型心肌细胞细胞凋亡及其调控基因表达的变化,为进一步研究NIDDM的发病机制提供实验资料。方法:建立NIDDM大鼠模型,TUNEL法观察凋亡的心肌细胞。抽提心肌组织DNA进行琼脂糖凝胶电泳。免疫组织化学方法观察心肌细胞内Bax、Bcl-2、c-fos、c-jun蛋白染色强度。结果:TUNEL法染色可见核呈棕色反应的阳性凋亡细胞,NIDDM组与对照组比较,凋亡率有高度显著差异(P<0.01)。琼脂糖凝胶电泳可见DNA梯带。NIDDM组较对照组Bax蛋白阳性平均光密度值(OD值)显著增高(P<0.01);对照组较NIDDM组Bcl-2/Bax光密度比值增高(P<0.05);NIDDM组较对照组c-fos、c-jun表达显著增高(P<0.01)。结论:实验性Ⅱ型糖尿病大鼠部分心肌细胞显示凋亡;细胞凋亡与Bax、c-fos、c-jun表达增强及Bcl-2/Bax比值降低有关。 展开更多

关键词 Ⅱ型糖尿病 心肌细胞凋亡 调控基因 大鼠

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酵母原生质体融合的研究

2

作者 林德球 《华南师范大学学报（自然科学版）》 CAS 1989年第2期36-40,共5页

本文报道了酵母原生质体的制备、再生及融合过程.培养亲株对数生长早期的细胞(浓度为2.5×10~7细胞/ml),在1.5-2%蜗牛酶及0.1%β-巯基乙醇的作用下,45-60分钟后,原生质体的形成率可达99-100%,在35%聚乙二醇(分子量为6000)和10mMCaC... 本文报道了酵母原生质体的制备、再生及融合过程.培养亲株对数生长早期的细胞(浓度为2.5×10~7细胞/ml),在1.5-2%蜗牛酶及0.1%β-巯基乙醇的作用下,45-60分钟后,原生质体的形成率可达99-100%,在35%聚乙二醇(分子量为6000)和10mMCaCl_2溶液的作用下进行融合实验,可得融合率为2.6×10^(-6)-2.1×10^(-7),它是自发回复突变率的100-1000倍. 展开更多

关键词 营养缺陷型 原生质体 再生 融合 回复突变

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在大鼠关节滑膜细胞表达人白细胞介素10的基因转移系统的建立 被引量：1

3

作者 李锦华 唐皓 +2 位作者 廖晓星 余学清 张仕光 《中华风湿病学杂志》 CAS CSCD 1999年第3期155-158,共4页

目的　建立一个在大鼠关节滑膜细胞表达人白细胞介素１０（ｈｕｍａｎ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ １０ ，ｈ Ｉ Ｌ１０） 的重组逆转录病毒载体基因转移系统，为下一步的研究工作做准备。方法　构建表达人白细胞介素１０ 的逆转录病毒... 目的　建立一个在大鼠关节滑膜细胞表达人白细胞介素１０（ｈｕｍａｎ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ １０ ，ｈ Ｉ Ｌ１０） 的重组逆转录病毒载体基因转移系统，为下一步的研究工作做准备。方法　构建表达人白细胞介素１０ 的逆转录病毒重组体ｐ Ｌ Ｘ（ｈ Ｉ Ｌ１０） Ｓ Ｎ，经 Ｐ Ａ３１７ 细胞包装， Ｇ４１８ 筛选， Ｎ Ｉ Ｈ３ Ｔ３ 细胞进行病毒滴度测定，选滴度最高的克隆（６ ×１０８ 集落形成单位／ Ｌ） 作为感染大鼠关节滑膜细胞的感染细胞；用重组逆转录病毒感染大鼠关节滑膜细胞，应用聚合酶链反应（ Ｐ Ｃ Ｒ） ，反转录聚合酶链反应（ Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ） 和 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 检测ｈ Ｉ Ｌ１０ 基因的整合和表达。结果　外源性ｈ Ｉ Ｌ１０ 基因已整合到靶细胞染色体 Ｄ Ｎ Ａ 并有效地表达。 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 检测显示ｈ Ｉ Ｌ１０ 基因在ｐ Ｌ Ｘ（ｈ Ｉ Ｌ１０） Ｓ Ｎ 转染大鼠关节滑膜细胞４８ 小时后开始表达，达７２０ ｎｇ·１０ － ６ｃｅｌｌｓ·２４ｈ － １ ，高峰在第３ 天，为１ ９８２ ｎｇ·１０ － ６ｃｅｌｌｓ·２４ｈ － １ 。第７ 、１４ 、２８天分别为１２ ７６１ 、１ ０５４ 、９４２ ｎｇ·１０ － ６ｃｅｌｌｓ·２４ｈ － １ 。结论　外源性ｈ Ｉ ? 展开更多

关键词 大鼠 关节滑膜细胞 类风湿性关节炎 HIL-10

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大鼠蛛网膜下腔出血后脑组织P^(53)基因表达与细胞损伤

4

作者 潘军 周岱 《中风与神经疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期211-213,共3页

目的　探索防治蛛网膜下腔出血（ Ｓ Ａ Ｈ）引起的脑血管痉挛（ Ｃ Ｖ Ｓ）的新途径。方法　利用大鼠 Ｓ Ａ Ｈ 模型，设立对照组、 Ｓ Ａ Ｈ 组、放线菌素酮治疗组（ Ｃ Ｈ Ｘ 组）。经 Ｄ Ｉ Ｇ Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 对不同时间大... 目的　探索防治蛛网膜下腔出血（ Ｓ Ａ Ｈ）引起的脑血管痉挛（ Ｃ Ｖ Ｓ）的新途径。方法　利用大鼠 Ｓ Ａ Ｈ 模型，设立对照组、 Ｓ Ａ Ｈ 组、放线菌素酮治疗组（ Ｃ Ｈ Ｘ 组）。经 Ｄ Ｉ Ｇ Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 对不同时间大鼠脑组织 Ｐ５３基因进行检测。结果　对照组、 Ｃ Ｈ Ｘ 组 Ｐ５３基因表达相近， Ｓ Ａ Ｈ 组 Ｐ５３基因表达增高。显微镜下见 Ｃ Ｈ Ｘ 组病理形态学变化近似正常， Ｓ Ａ Ｈ 组神经细胞损伤严重。结论　大鼠 Ｓ Ａ Ｈ 后 Ｃ Ｖ Ｓ所致的脑缺血，脑组织 Ｐ５３基因表达明显增高。大鼠 Ｓ Ａ Ｈ 模型 Ｐ５３基因表达与脑神经元细胞损伤明显相关。放线菌素酮通过抑制 Ｐ５３基因表达从而抑制其诱导的损伤。 展开更多

关键词 蛛网膜下腔出血 脑血管痉挛 P^53基因

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人鼻咽癌DNA对Rat-Ⅰ细胞株的转化活性及其基因表达的研究

5

作者 陈小君 焦晓蓉 陈系古 《中山医科大学学报》 CSCD 1990年第4期21-23,82,共3页

为了解EB病毒基因组阳性人鼻咽癌DNA在转染正常细胞后可能发生的生物学作用,作者将人鼻咽癌活检组织的DNA(EB病毒基因组阳性),用磷酸钙方法转染正常Rat-Ⅰ细胞,使其恶转;用软琼脂培养的转化细胞能贴壁生长,并形成克隆;转化细胞易与PHA... 为了解EB病毒基因组阳性人鼻咽癌DNA在转染正常细胞后可能发生的生物学作用,作者将人鼻咽癌活检组织的DNA(EB病毒基因组阳性),用磷酸钙方法转染正常Rat-Ⅰ细胞,使其恶转;用软琼脂培养的转化细胞能贴壁生长,并形成克隆;转化细胞易与PHA发生凝集;克隆接种裸鼠形成纤维肉瘤;转化细胞和裸鼠肿瘤组织用抗C_3补体免疫荧光法检测EBNA呈阳性;染色体原位杂交显示在某些细胞中期染色体上有银粒出现。 展开更多

关键词 鼻咽癌 EB病素 基因 植物凝集素

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脑外伤对骨折愈合中骨形成蛋白2表达的影响 被引量：32

6

作者 郭启 张柳 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1040-1044,共5页

目的通过研究大鼠股骨干骨折合并脑外伤时骨痂组织内骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein2,BMP-2)表达水平的变化,探讨脑外伤对骨折愈合的影响及作用机制。方法取12周雄性SD大鼠32只,体重368±25g。随机分成4组,每组8只:A组为... 目的通过研究大鼠股骨干骨折合并脑外伤时骨痂组织内骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein2,BMP-2)表达水平的变化,探讨脑外伤对骨折愈合的影响及作用机制。方法取12周雄性SD大鼠32只,体重368±25g。随机分成4组,每组8只:A组为骨折合并脑外伤1周组,B组为单纯骨折1周组,C组为骨折合并脑外伤2周组,D组为单纯骨折2周组。A、C组制作脑外伤和股骨干骨折模型,B、D组制作单纯股骨干骨折模型作对照。各组摄X线片后截取骨痂,行HE染色观察骨痂生长情况及其组织形态,免疫组织化学染色测定BMP-2表达,RT-PCR检测BMP-2mRNA水平。结果X线片示A组骨折端有较少量骨痂形成,骨折线较清晰;B组骨折线清晰;C组骨折端有较多骨痂形成,骨折线已模糊;D组仅有少量骨痂形成,骨折线较清晰。HE染色A组可见较多早期软骨细胞、成纤维细胞;B组骨折间隙可见成纤维细胞,仅夹杂有少量的早期软骨细胞;C组骨折端有新生骨小梁长入;D组未见有骨小梁形成。免疫组织化学染色可见成纤维细胞、间充质细胞、血管内皮细胞、早期软骨细胞、成骨细胞胞浆均出现广泛的强阳性反应,A组阳性细胞数量多于B组,并且显色强;C组阳性细胞数量多于D组,并且显色强。分析显示A、C组平均阳性细胞百分数为0.762%±0.052%、0.756%±0.079%,分别高于同一时间点B、D组的0.702%±0.052%、0.672%±0.044%,差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR分析显示:A～D组骨痂BMP-2mRNA含量依次递减,A、C组骨痂BMP-2mRNA含量为1.07±0.13、0.78±0.11,均显著高于同一时间点B、D组的0.91±0.12、0.61±0.08,差异有统计学意义(P<0.05)。结论脑外伤对骨折愈合有促进作用,可能与脑外伤后BMP-2表达水平升高有关。 展开更多

关键词 骨折愈合 脑外伤 骨形成蛋白2 基因表达 大鼠

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大鼠坐骨神经损伤后降钙素基因相关肽与运动终板的关系 被引量：12

7

作者 王树森 黄耀添 +1 位作者 褚晓朝 吕荣 《中华显微外科杂志》 CSCD 北大核心 1997年第4期270-272,共3页

目的：检测大鼠坐骨神经损伤后降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）在运动终板中的变化，同时观察运动终板的变化，以探讨ＣＧＲＰ与运动终板退变的关系。方法：切断大鼠坐骨神经并结扎其近端，建立周围神经损伤模型，分别于损伤后１、２、３... 目的：检测大鼠坐骨神经损伤后降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）在运动终板中的变化，同时观察运动终板的变化，以探讨ＣＧＲＰ与运动终板退变的关系。方法：切断大鼠坐骨神经并结扎其近端，建立周围神经损伤模型，分别于损伤后１、２、３、４、６、８、１０和１２周取胫前肌肌腹标本，分别以免疫组化法检测ＣＧＲＰ，镀银染色法进行运动终板染色。结果：损伤１周后运动终板中ＣＧＲＰ立即完全消失，镀银法显示运动终板１、２周无明显变化，３周开始染色浅淡、不均匀，８周后运动终板完全消失。结论：（１）ＣＧＲＰ与运动终板的退变相关；（２）ＣＧＲＰ检测法能更早显示运动终板的改变，灵敏度高。 展开更多

关键词 周围神经损伤 运动终板 降钙素基因相关肽 大鼠

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胰岛素样生长因子Ⅰ基因在正常及糖尿病鼠眼组织中的表达 被引量：10

8

作者 刘世全 朱秀安 《中华眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 1995年第4期291-295,共5页

用原位杂交技术对正常及糖尿病大鼠眼组织的胰岛素样生长因子Ⅰ基因（ｉｎｓｕｌｉｎ－ｌｉｋｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ－Ⅰ，ＩＧＦ－Ⅰ）进行了研究。ＩＧＦ－Ⅰ基因在眼组织的表达呈区域性，视网膜内核层及神经节细胞表达最强；脉... 用原位杂交技术对正常及糖尿病大鼠眼组织的胰岛素样生长因子Ⅰ基因（ｉｎｓｕｌｉｎ－ｌｉｋｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ－Ⅰ，ＩＧＦ－Ⅰ）进行了研究。ＩＧＦ－Ⅰ基因在眼组织的表达呈区域性，视网膜内核层及神经节细胞表达最强；脉络膜、视网膜色素上皮细胞及外核层次之；巩膜最弱，角膜未见表达信号。糖尿病眼组织ＩＧＦ－Ⅰ基因表达显著增强（Ｐ＜０．０５或Ｐ≤０．０１）。结果表明：整个眼球组织形成了一个ＩＧＦ－Ⅰ旁分泌、自分泌作用系统；糖尿病眼组织ＩＧＦ－Ⅰ基因高表达预示ＩＧＦ－Ⅰ可诱发并加速糖尿病视网膜病变的发生发展。 展开更多

关键词 胰岛素样生长因子Ⅰ 基因 糖尿病性视网膜病 鼠

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用逆转录-多聚酶链反应检测局灶脑缺血及再灌注后c-fos和c-jun基因表达 被引量：9

9

作者 刘亢丁 苏志强 +1 位作者 饶明俐 张淑琴 《中风与神经疾病杂志》 CSCD 北大核心 1997年第3期130-132,共3页

本研究应用逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测大鼠局灶脑缺血模型中即早基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｊｕｎ的表达。结果发现缺血１５ｍｉｎ时可见到ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｊｕｎｍＲＮＡ表达缺血３０ｍｉｎ时引起轻微左侧局灶脑缺血改... 本研究应用逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测大鼠局灶脑缺血模型中即早基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｊｕｎ的表达。结果发现缺血１５ｍｉｎ时可见到ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｊｕｎｍＲＮＡ表达缺血３０ｍｉｎ时引起轻微左侧局灶脑缺血改变，可诱导左侧局灶脑缺血区ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｊｕｎｍＲＮＡ广泛的表达；缺血９０ｍｉｎ后，导致大面积局灶脑缺血改变，诱导上述两种基因在同侧缺血区与同侧非大脑中动脉（ＭＣＡ）供血区的海马中表达。后者有相当轻的缺血症状。再灌流６０ｍｉｎ后诱导两种基因的共同表达立即达高峰。我们采用标准化的大鼠局灶脑缺血及再灌注模型，在分子水平上动态观察缺血／再灌注后基因变化特征，为缺血性脑损害的防治提供实验依据。 展开更多

关键词 RT-PCR 局灶脑缺血 再灌注 基因表达 脑缺血

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蛇葡萄素与苯并芘合用对大鼠肺组织内CYP和GST基因表达的影响 被引量：8

10

作者 杨秀芬 钟正贤 +3 位作者 廖梅春 杨子明 郭菁菁 高倩倩 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期135-136,共2页

蛇葡萄素（ampelopsis），又名二氢杨梅素（dihydromyrice—tin）、双氢杨梅素等，为一多酚羟基黄酮醇化合物，存在于葡萄科、杨梅科、藤黄科等植物中，具有抗炎、抗肿瘤、抗氧化等作用。苯并芘是烟草和其他多种环境致癌物中的可导致肺... 蛇葡萄素（ampelopsis），又名二氢杨梅素（dihydromyrice—tin）、双氢杨梅素等，为一多酚羟基黄酮醇化合物，存在于葡萄科、杨梅科、藤黄科等植物中，具有抗炎、抗肿瘤、抗氧化等作用。苯并芘是烟草和其他多种环境致癌物中的可导致肺癌、乳腺癌、肝癌等肿瘤的主要致癌物质。 展开更多

关键词 蛇葡萄素 苯并芘 细胞色素P450 谷胱甘肽S-转移酶 基因表达 大鼠

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粒细胞集落刺激因子联合携带肝细胞生长因子基因的BMSCs移植对心肌梗死大鼠血管重建的影响 被引量：8

11

作者 郭英华 刘长庭 何建国 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期736-740,共5页

目的研究粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony stimulating factor,G-CSF)联合携带肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)基因的BMSCs移植对心肌梗死大鼠血管重建的影响,初步探讨作用机制。方法取3周龄雄性SD大鼠骨髓分离培... 目的研究粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony stimulating factor,G-CSF)联合携带肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)基因的BMSCs移植对心肌梗死大鼠血管重建的影响,初步探讨作用机制。方法取3周龄雄性SD大鼠骨髓分离培养BMSCs,取第3代BMSCs以携带HGF基因的5型复制缺陷型腺病毒(Ad-HGF)感染。成年雄性SD大鼠44只,体重200～250 g,结扎左冠状动脉建立心肌梗死模型。造模4周后心脏超声检查,以左室短轴缩短率(shorting fraction,FS)<30%作为造模成功标准。取其中12只大鼠,于梗死心肌边缘注射0.1 mL Ad-HGF感染的BMSCs(5×107个/mL),2、7、14 d后用Western blot方法检测大鼠体内HGF蛋白的表达。将其余32只大鼠随机分为4组,每组8只:对照组注射0.1 mL生理盐水;G-CSF组注射0.1 mL生理盐水并于腹腔注射G-CSF 100μg(/kg.d)共5 d;HGF组注射0.1 mL Ad-HGF感染的BMSCs(5×107个/mL);联合治疗组注射0.1 mL Ad-HGF感染的BMSCs(5×107个/mL)并于腹腔注射G-CSF 100μg/(kg.d)共5 d。细胞移植后2周,行心功能和血流动力学检测,然后处死大鼠取心肌组织行免疫荧光双染后激光共聚焦显微镜下评价血管生成情况,Western blot检测VEGF蛋白表达。结果感染Ad-HGF的BMSCs移植2、7 d时在大鼠体内表达HGF蛋白。心功能及血流动力学检测显示,G-CSF组左室收缩压(left ventricular systolic pressure,LVSP)、左室舒张末期压力(left ventricularend-diastolic pressure,LVEDP)、LVSP上升/降低时间(dP/dtmax)、FS与对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05);HGF组和联合治疗组与对照组相比,LVEDP显著降低,LVSP、FS和dP/dtmax显著升高(P<0.05);与HGF组相比,联合治疗组的FS和dP/dtmax升高(P<0.05)。免疫荧光双染显示心肌梗死交界区增生细胞是血管内皮细胞。联合治疗组血管密度明显高于其他3组(P<0.05),VEGF蛋白表达较其他3组明显增加(P<0.05)。结论 在大鼠心肌梗死4周时给予G-CSF联合携带HGF基因的BMSCs移植� 展开更多

关键词 BMSCS 肝细胞生长因子 粒细胞集落刺激因子 血管生成 细胞移植 基因治疗 大鼠

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内皮型一氧化氮合酶基因在大鼠心肌细胞和非心肌细胞中的表达 被引量：5

12

作者 詹昌德 王庭槐 潘敬运 《基础医学与临床》 CSCD 1999年第6期27-31,共5页

根据大鼠内应型一氧化氮合酶（eNOS）和3-磷酸甘油醛脱氨酶（GAPDH）的cDNA序列分别设计特异引物，用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测eNOS基因在大鼠心肌细胞和非心肌细胞中的表达，并以GAPDH为内标，用内参比法作RT-PCR定量。结果... 根据大鼠内应型一氧化氮合酶（eNOS）和3-磷酸甘油醛脱氨酶（GAPDH）的cDNA序列分别设计特异引物，用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测eNOS基因在大鼠心肌细胞和非心肌细胞中的表达，并以GAPDH为内标，用内参比法作RT-PCR定量。结果表明：eNOS基因在新生大鼠心、肾、脑等组织皆有表达，脑中最多、肾脏次之、心脏较少；在培养的新生大鼠心肌细胞和非心肌细胞中，检测到eNOS基因的表达，其中在心肌细胞的表达高于非心肌细胞；培养基中不同的血清浓度对心肌细胞和非心肌细胞的oNOS基因表达无明显影响。 展开更多

关键词 内皮型 一氧化氮合酶 基因表达 心肌细胞 培养

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绿色荧光蛋白和Nel1型蛋白基因共表达腺病毒载体的构建及体外转染大鼠BMSCs的初步实验研究 被引量：6

13

作者 薛静 彭江 +6 位作者 张莉 刘舒云 陈继凤 汪爱媛 袁玫 许文静 卢世璧 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期606-612,共7页

目的构建同时表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)报告基因和人类Nel1型蛋白[homo sapiens NEL-like1,NELL1)]基因的重组腺病毒载体pAdxsi-GFP-NELL1,并转染大鼠BMSCs,观察其表达情况,为进一步研究NELL1蛋白的成骨作用提... 目的构建同时表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)报告基因和人类Nel1型蛋白[homo sapiens NEL-like1,NELL1)]基因的重组腺病毒载体pAdxsi-GFP-NELL1,并转染大鼠BMSCs,观察其表达情况,为进一步研究NELL1蛋白的成骨作用提供理论基础。方法设计特异性引物从NELL1质粒中扩增NELL1,将测序正确的片段用XhoI/BglII酶切处理,定向插入至pShuttle-GFP-CMV(-)TEMP重组穿梭载体,然后将验证正确的重组穿梭质粒中的插入片段转移至pAdxsi载体构建重组腺病毒载体质粒,用PacI限制性内切酶线性化后转染HEK293细胞,扩增纯化重组腺病毒,半数组织培养感染量法测定重组腺病毒滴度。培养大鼠BMSCs,采用流式细胞仪鉴定表面标志物,并行成骨、成脂诱导鉴定。用构建的pAdxsi-GFP-NELL1及空病毒pAdxsi-GFP(作为对照)转染鉴定正确的BMSCs,RT-PCR检测NELL1的表达,免疫荧光检测GFP基因及NELL1的表达情况,细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法检测对细胞增殖的影响。结果成功构建同时表达NELL1和GFP基因的重组腺病毒载体(pAdxsi-GFP-NELL1),纯化后获得滴度达1×1011pfu/mL的重组腺病毒。成功分离获得大鼠BMSCs并传代、纯化,经流式细胞仪鉴定表面标志物及成骨、成脂诱导鉴定为BMSCs。pAdxsi-GFP-NELL1转染BMSCs后,RT-PCR检测示NELL1mRNA阳性表达,荧光显微镜观察示细胞爬片GFP阳性表达,NELL1抗体免疫荧光观察示NELL1蛋白阳性表达。CCK-8法鉴定显示转染后对BMSCs生长无明显影响。结论构建并纯化后的重组腺病毒载体(pAdxsi-GFP-NELL1)可高效转染大鼠BMSCs,并稳定表达NELL1和GFP两种基因,为进一步研究新的成骨基因NELL1的作用,追踪其在体内、体外表达情况提供了新工具。 展开更多

关键词 BMSCS 重组腺病毒载体 人类Nel1型蛋白 绿色荧光蛋白 基因转染 大鼠

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FasL基因转染诱导大鼠肾移植免疫耐受的实验研究 被引量：4

14

作者 徐光勇 张唯力 +2 位作者 张荣贵 于圣杰 龚建平 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期1162-1165,共4页

目的:探讨Fas配体(Fasligand,FasL)在大鼠肾移植免疫耐受中的作用及意义。方法:首先建立大鼠同种肾移植模型。实验组供肾移植前用1ml含重组腺病毒Ad-FasL的肾脏冷保存液经肾动脉灌注;建立同种大鼠肾移植模型。分别观察电镜、免疫组织化... 目的:探讨Fas配体(Fasligand,FasL)在大鼠肾移植免疫耐受中的作用及意义。方法:首先建立大鼠同种肾移植模型。实验组供肾移植前用1ml含重组腺病毒Ad-FasL的肾脏冷保存液经肾动脉灌注;建立同种大鼠肾移植模型。分别观察电镜、免疫组织化学法、肾功能测定、生存期,比较各组间的不同。结果:Ad-FasL治疗组肾移植受体大鼠平均存活天数为31.3d,与对照组的平均9.1d存活时间比较,平均存活天数增加了22d,差异显著。Ad-FasL治疗组的移植肾功能基本保持稳定,对照组在术后5d切除对侧肾脏后血清肌酐浓度迅速上升。结论:腺病毒载体可成功介导FasL基因对大鼠肾脏的转染,并对移植肾起免疫保护作用、延长移植肾的存活时间。 展开更多

关键词 肾移植 基因转染 免疫耐受 大鼠

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重组腺病毒Ad-人基质金属蛋白酶1体外转染大鼠BMSCs研究 被引量：4

15

作者 杜超 蒋明德 +2 位作者 曾维政 郑淑梅 魏晓龙 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期529-534,共6页

目的利用重组腺病毒Ad-人基质金属蛋白酶1(human matrix metalloproteinase 1,hMMP-1)体外转染大鼠BMSCs,为BMSCs联合hMMP-1基因移植治疗肝纤维化奠定实验基础。方法取2～3周龄SD大鼠骨髓采用全骨髓贴壁法分离培养BMSCs,传至第3代并进... 目的利用重组腺病毒Ad-人基质金属蛋白酶1(human matrix metalloproteinase 1,hMMP-1)体外转染大鼠BMSCs,为BMSCs联合hMMP-1基因移植治疗肝纤维化奠定实验基础。方法取2～3周龄SD大鼠骨髓采用全骨髓贴壁法分离培养BMSCs,传至第3代并进行鉴定;用携带增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)标记的重组腺病毒Ad-hMMP-1-EGFP体外转染第3代BMSCs,荧光显微镜下观察转染情况,流式细胞仪检测转染效率并确定最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)。实验分为未转染BMSCs组(A组)、Ad-EGFP转染BMSCs组(B组)及Ad-hMMP-1-EGFP转染BMSCs组(C组),采用MTT法检测转染后细胞增殖情况,RT-PCR及Western blot分别检测转染后各组细胞内hMMP-1基因和蛋白表达情况,ELISA法检测上清中蛋白hMMP-1分泌水平,hMMP-1酶活性荧光定量试剂盒测定其活性。结果重组腺病毒转染BMSCs后24 h可见绿色荧光表达,72 h时荧光强度最高,最佳MOI为200。MTT检测示3组细胞均于培养3 d进入对数生长期,6 d后进入平台期;各时间点3组间细胞吸光度(A)值比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。RT-PCR、Western blot及ELISA检测示,A、B组均无hMMP-1基因和蛋白表达,C组hMMP-1基因和蛋白均高效表达。荧光定量试剂盒测定A、B组均未检测到hMMP-1酶活性,C组hMMP-1酶活性为1.24 nmol/(mg.min)。结论利用重组腺病毒Ad-hMMP-1成功将外源基因导入大鼠BMSCs并高效表达,为BMSCs联合hMMP-1基因移植治疗肝纤维化奠定了实验基础。 展开更多

关键词 BMSCS 重组腺病毒 基质金属蛋白酶1 基因治疗 大鼠

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NF-κB p65介导的前列腺素E2分泌及DNA结合抑制因子2蛋白表达在促进大鼠桡骨骨折早期愈合的作用 被引量：4

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作者 牛增志 王乐禹 +5 位作者 胡晓芳 汪海仪 欧阳钧 黄文华 余磊 邱小忠 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期569-574,共6页

目的骨再生过程包含一系列复杂的分子信号途径,通过探讨NF-κB作为骨折愈合过程中"关键性激活点"的可能性,为基因治疗骨折延迟愈合和骨不连提供实验依据。方法取6～7周龄Wistar雄性大鼠33只,体重180～220 g,随机分为4组。对照... 目的骨再生过程包含一系列复杂的分子信号途径,通过探讨NF-κB作为骨折愈合过程中"关键性激活点"的可能性,为基因治疗骨折延迟愈合和骨不连提供实验依据。方法取6～7周龄Wistar雄性大鼠33只,体重180～220 g,随机分为4组。对照组(A组,n=3)、单纯NF-κB抑制剂Bay 11-7082处理组(B组,n=6):分别在大鼠右前肢桡骨中下段经皮注射0.3 mL生理盐水或含50μmol/L Bay 11-7082的生理盐水,每天1次,持续至处死。单纯骨折组(C组,n=12)、Bay 11-7082干预骨折组(D组,n=12):制备右侧桡骨中下段骨折模型后,C组不作任何处理,D组处理方法同B组。观察大鼠一般情况,A组于注射后7 d,B、C、D组于注射后3、7 d取标本行ALP活性、前列腺素E2(prostaglandins E2,PGE2)含量检测以及Western blot检测NF-κB p65、BMP-7和DNA结合抑制因子2(inhibitor of DNA binding 2,Id2),并取C、D组14、28 d标本行HE染色观察。结果各组大鼠均存活至实验完成。注射后3、7 d B组ALP活性及PGE2含量与A组比较,差异均无统计学意义(P>0.05);C组较A组增高,D组较A组降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。注射后3、7 d,各组骨折端组织中均见NF-κB p65、BMP-7、Id2表达,B组各因子表达水平与A组比较,差异均无统计学意义(P>0.05);C组NF-κB p65和BMP-7蛋白表达水平较A组增高,Id2蛋白表达水平较A组降低,差异均有统计学意义(P<0.01);D组NF-κB p65、BMP-7蛋白表达水平较A组降低,Id2蛋白表达较A组增高,差异均有统计学意义(P<0.01)。组织学观察示,注射后14、28 d C组骨折端组织见大量骨性骨痂,而D组28 d时才见骨性骨痂。结论 NF-κB p65可通过调控PGE2分泌以及BMP-7和Id2蛋白表达促进大鼠桡骨骨折的早期愈合。 展开更多

关键词 骨折愈合 NF-ΚB 前列腺素E2 BMP-7 DAN结合抑制因子2 基因治疗 大鼠

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带有lac　Z基因标志的大鼠粒细胞白血病细胞在微量残留白血病研究中的应用 被引量：3

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作者 苏涛 王敏 +2 位作者 褚建新 赵钧铭 应红光 《中华血液学杂志》 CSCD 北大核心 1995年第5期244-246,共3页

采用带有外源性β－半乳糖苷酶（ｌａｃＺ）基因标志的大鼠粒细胞白血病细胞ＬＴ１２ｎｌ接种ＢＮ大鼠，９天后给予大剂量环磷酰胺治疗，诱导出微小残留白血病状态。通过对骨髓细胞的ｘ－ｇａｌ染色和白血病细胞集落培养，发现化疗早期... 采用带有外源性β－半乳糖苷酶（ｌａｃＺ）基因标志的大鼠粒细胞白血病细胞ＬＴ１２ｎｌ接种ＢＮ大鼠，９天后给予大剂量环磷酰胺治疗，诱导出微小残留白血病状态。通过对骨髓细胞的ｘ－ｇａｌ染色和白血病细胞集落培养，发现化疗早期虽有白血病细胞存在，但无增殖能力，是一种非功能性细胞，其中的绝大多数很快死亡；随病程的发展，白血病细胞的增殖能力逐渐增强。病理形态学动态观察发现白血病的复发由白血病细胞灶起始，其大小和分布不匀。 展开更多

关键词 LACZ基因 外源性基因 白血病 白血病细胞

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Bcl-2基因在一氧化碳暴露大鼠脑中的表达 被引量：3

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作者 刘青乐 黄新苗 +2 位作者 蒋美英 金智锋 刘善荣 《中华航海医学与高气压医学杂志》 CAS CSCD 2003年第3期144-146,共3页

目的　观察一氧化碳 (CO)暴露后大鼠脑中 Bcl- 2基因的分布。方法　用 Wistar大鼠制成CO暴露动物模型 ,随机分组 ,分别在染毒后第 3天、第 2天和当天处死 ,取脑制成切片 ,用地高辛 Bcl- 2探针原位杂交 ,观察 Bcl- 2的信号分布。结果　 B... 目的　观察一氧化碳 (CO)暴露后大鼠脑中 Bcl- 2基因的分布。方法　用 Wistar大鼠制成CO暴露动物模型 ,随机分组 ,分别在染毒后第 3天、第 2天和当天处死 ,取脑制成切片 ,用地高辛 Bcl- 2探针原位杂交 ,观察 Bcl- 2的信号分布。结果　 Bcl- 2 m RNA的表达在海马、大脑皮层和胼胝体比较明显 ,其中海马的表达信号最强 ,大脑皮层次之 ,胼胝体最弱。其他部位呈散在的弱信号。相应区域在各个时间点无明显的差异。对照组未见表达。结论　 CO暴露后 ,Bcl- 2在海马、大脑皮层和胼胝体的表达较为明显 ;Bcl- 2在上述部位的表达可能部分的解释 CO中毒迟发性神经损伤的发生。 展开更多

关键词 BCL-2基因 一氧化碳 大鼠 脑组织 海马 迟发性神经损伤 细胞凋亡

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慢病毒介导大鼠肾脏基因转染的实验研究 被引量：2

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作者 郑德华 石炳毅 +2 位作者 蔡明 Jing Zhao Andrew M.L.Lever 《山东医药》 CAS 北大核心 2004年第14期3-5,共3页

目的　研究活体大鼠肾脏中慢病毒载体介导的基因转染及表达情况。方法　以水泡性口炎病毒包膜蛋白 (VSV- G)为包膜、携带以磷酸甘油酸激酶 (PGK)启动子启动的 L ac Z报告基因的慢病毒载体注射 L ewis大鼠右侧肾脏实质 ,分别于注射后 1、... 目的　研究活体大鼠肾脏中慢病毒载体介导的基因转染及表达情况。方法　以水泡性口炎病毒包膜蛋白 (VSV- G)为包膜、携带以磷酸甘油酸激酶 (PGK)启动子启动的 L ac Z报告基因的慢病毒载体注射 L ewis大鼠右侧肾脏实质 ,分别于注射后 1、2、3、7天处死大鼠 (每个时间点实验组 n=3,对照组 n=2 ) ,通过β-半乳糖苷酶(β- Gal)组织化学染色检测报告基因的表达。结果　实验组大鼠右肾可见 β- Gal染色阳性细胞 ,而对侧肾脏及其他脏器均未见 β- Gal表达 ;β- Gal的表达在肾实质注射 2天后达到峰值 ,到第 7天仍能维持较高水平。β- Gal阳性细胞周围未见明显炎症细胞浸润。病毒载体注射的肾脏外观及组织形态学未见异常。 展开更多

关键词 肾脏 基因转染 实验研究 慢病毒载体 大鼠

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慢病毒介导人肝细胞生长因子基因感染BMSCs的实验研究 被引量：3

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作者 朱金海 陈燕凌 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期972-976,共5页

目的构建携带人肝细胞生长因子(human hepatocyte growth factor,hHGF)基因的慢病毒,感染大鼠BMSCs,建立稳定表达hHGF的BMSCs/hHGF细胞。方法从含hHGF基因的质粒pcDNA-hHGF中,用PCR法获取hHGF全长基因,与慢病毒载体pGC-E1分别进行AgeⅠ... 目的构建携带人肝细胞生长因子(human hepatocyte growth factor,hHGF)基因的慢病毒,感染大鼠BMSCs,建立稳定表达hHGF的BMSCs/hHGF细胞。方法从含hHGF基因的质粒pcDNA-hHGF中,用PCR法获取hHGF全长基因,与慢病毒载体pGC-E1分别进行AgeⅠ酶切,产物定向连接,转化后行PCR鉴定和测序,构建hHGF慢病毒表达质粒。脂质体Lipofectamine2000介导慢病毒载体三质粒pGC-E1-hHGF、pHelper1.0、pHelper2.0共转染293T细胞。收集病毒超滤离心浓缩,实时定量PCR测定滴度。将hHGF慢病毒感染BMSCs,荧光显微镜观察荧光表达,确定最佳感染复数(multiplicities of infection,MOI)值,以最佳MOI值感染细胞,流式细胞仪检测感染效率,ELISA法检测细胞培养上清hHGF分泌水平,RT-PCR检测hHGF基因的表达。结果实验成功构建携带hHGF基因的慢病毒,滴度达1×108TU/mL。hHGF慢病毒高效率感染BMSCs,最佳MOI值为10。流式细胞仪检测感染效率达98%,且在感染后28d BMSCs仍稳定表达强烈的绿色荧光。细胞培养上清可检测到hHGF因子,术后5d达高峰,达40.5ng/mL,这种高水平分泌可持续至感染后28d。RT-PCR检测出hHGF基因的表达。结论通过慢病毒载体将hHGF基因稳定感染至BMSCs细胞,可获得长期稳定的表达,并持续分泌hHGF因子。 展开更多

关键词 BMSCS 人肝细胞生长因子 慢病毒 基因感染 大鼠

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