细胞凋亡的检测技术与方法 被引量：38

1

作者 王嘉宁 郭宁 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期466-470,共5页

细胞凋亡在保证多细胞生物的健康生存过程中扮演着关键的角色。根据死亡细胞的形态学、生物化学和分子生物学特征,可以将凋亡细胞与坏死细胞区别开来。本文综述了常用的细胞凋亡检测技术与方法的基本原理,如形态学观察、荧光素染色、DN... 细胞凋亡在保证多细胞生物的健康生存过程中扮演着关键的角色。根据死亡细胞的形态学、生物化学和分子生物学特征,可以将凋亡细胞与坏死细胞区别开来。本文综述了常用的细胞凋亡检测技术与方法的基本原理,如形态学观察、荧光素染色、DNA阶梯、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶活性的检测等,并对各种方法的优点及局限性做一简要比较。用透射电镜进行超微结构观察仍是鉴定细胞凋亡的金标准。在选择细胞凋亡检测方法时,要充分了解各种方法的原理和应用范围,进行综合考虑。多种检测方法的联合应用常可获得准确的结果。 展开更多

关键词 细胞凋亡 线粒体膜电位 荧光染料 流式细胞术 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶

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细胞与分子生物学新技术在我国毒理学研究中的应用 被引量：16

2

作者 庄志雄 《卫生毒理学杂志》 CSCD 1999年第4期239-246,共8页

近年来 ,随着一些先进的细胞和分子生物学技术的引进与建立 ,我国毒理学研究整体水平得以大大的提高。现介绍几种我国已开展的细胞和分子生物学新技术的原理及其在毒理学领域中的应用 ,包括 :差异显示技术、单细胞凝胶电泳技术、穿梭质... 近年来 ,随着一些先进的细胞和分子生物学技术的引进与建立 ,我国毒理学研究整体水平得以大大的提高。现介绍几种我国已开展的细胞和分子生物学新技术的原理及其在毒理学领域中的应用 ,包括 :差异显示技术、单细胞凝胶电泳技术、穿梭质粒 p Z189和 p Sp189转染技术、转基因动物和转基因细胞、荧光原位杂交和流式细胞技术。这些技术具有终点明确 ,敏感性高等特点 ,在检测各种不同类型的 DNA损伤和基因突变 。 展开更多

关键词 差异显示 转基因动物 流式细胞技术 毒理学

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基于FDA-PI双荧光复染法的茄病镰刀菌孢子活性检测 被引量：13

3

作者 柴阿丽 韩云 +3 位作者 武军 石延霞 谢学文 李宝聚 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第14期2757-2766,共10页

【目的】茄病镰刀菌(Fusarium solani)孢子活性的检测是病害有效防控的基础。传统的孢子萌发法操作复杂,耗时费力,需要建立一种简便、快速的孢子活性检测方法。研究旨在建立基于荧光素二乙酸酯(fluorescein diacetate,FDA)-碘化丙啶(pro... 【目的】茄病镰刀菌(Fusarium solani)孢子活性的检测是病害有效防控的基础。传统的孢子萌发法操作复杂,耗时费力,需要建立一种简便、快速的孢子活性检测方法。研究旨在建立基于荧光素二乙酸酯(fluorescein diacetate,FDA)-碘化丙啶(propidium iodide,PI)双荧光复染法和流式细胞术(flow cytometry,FCM)的茄病镰刀菌孢子活性检测技术。【方法】通过测定FDA和PI的最佳染色时间和最佳工作浓度,建立茄病镰刀菌孢子活性检测的FDA-PI复染法。为评价该方法的准确性,一方面用FDA-PI法检测已知死孢子比例(0、25%、50%、75%、100%)的茄病镰刀菌样品,分析实测死亡率和理论死亡率的相关性;另一方面,经物理、化学和杀菌剂处理后,比较FDA-PI复染法和孢子萌发法的检测结果。【结果】确定了FDA和PI的最佳染色参数,其中PI的最佳工作浓度为3μg·m L-1,最佳染色时间为4℃处理10 min;FDA的最佳工作浓度为100μg·m L-1,最佳染色时间为25℃处理20 min。用该技术检测已知死孢子比例样品,各样品实测孢子死亡率和理论死亡率之间呈极显著正相关(R2=0.99,P<0.05)。经物理和化学处理后,FDA-PI复染法测得的孢子死亡率与孢子萌发法测得的孢子萌发率之间也呈显著负相关(R2=0.99,P<0.05)。经杀菌剂处理后,随着药剂浓度增高,对茄病镰刀菌杀灭效果增强。其中,氰胺化钙处理后,FDA-PI复染法和孢子萌发法检测孢子死亡率结果一致;而咯菌腈和多菌灵处理后,FDA-PI复染法检测孢子死亡率略低于孢子萌发法检测结果。【结论】建立了基于FDA-PI复染法和流式细胞术的茄病镰刀菌孢子活性检测技术,该技术可以替代传统的孢子萌发方法,大幅度缩减病原菌活性检测时间,提高检测效率,对植物病原真菌活性检测平台的建立具有重要的参考价值,将其应用于杀菌剂的筛选还需要进一步的深入研究。 展开更多

关键词 荧光素二乙酸酯 碘化丙啶 荧光染色 流式细胞术 茄病镰刀菌 活性分析

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三种诊断标准对多发性骨髓瘤诊断的对比研究 被引量：12

4

作者 路瑾 黄晓军 《中华内科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期114-116,共3页

目的 探讨3种多发性骨髓瘤（MM）诊断标准（1975年中国MM诊断标准、2011年中国MM诊治指南和2001年WHO MM诊断标准）对MM诊断的敏感率.方法 回顾性分析220例符合2008年中国MM诊治指南诊断标准患者的临床表现、实验室检查及对其他3种诊断... 目的 探讨3种多发性骨髓瘤（MM）诊断标准（1975年中国MM诊断标准、2011年中国MM诊治指南和2001年WHO MM诊断标准）对MM诊断的敏感率.方法 回顾性分析220例符合2008年中国MM诊治指南诊断标准患者的临床表现、实验室检查及对其他3种诊断标准的符合率.结果 （1） 1975年的诊断标准敏感率仅为79.1％ （174/220）,且存在分型的问题.2001年WHO诊断标准的敏感率为97.3％ （214/220）.2011年中国MM诊治指南的诊断标准有100％的符合率.（2）12.7％（28/220）患者的免疫球蛋白在30 g/L以下,13.6％（30/220）患者的骨髓浆细胞数在10％以下,2.7％（6/220）患者的免疫球蛋白及骨髓中浆细胞数均不能达标.（3）流式细胞术检测显示100％患者CD38阳性、轻链限制性表达,CD19均为阴性,CD138阳性率98.2％ （216/220）.结论 3种诊断标准的对比发现2011年与2008年的中国MM诊治指南诊断标准具有最高的敏感率,综合临床表现与实验室检查有助于MM的早期诊断. 展开更多

关键词 多发性骨髓瘤 诊断标准 原位杂交 荧光 流式细胞术

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镉胁迫对拟南芥的毒害作用及自噬现象的观测 被引量：10

5

作者 高玲 张卫娜 陈文利 《生物物理学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期676-686,共11页

镉离子(Cd2+)具有强植物毒性,可抑制植物生长,甚至导致植物死亡。为了研究重金属镉对拟南芥的毒害作用,采用叶绿素荧光技术、流式细胞技术、激光共聚焦技术及半定量RT-PCR技术,检测光合参数的变化、活性氧(reactive oxygen species,ROS... 镉离子(Cd2+)具有强植物毒性,可抑制植物生长,甚至导致植物死亡。为了研究重金属镉对拟南芥的毒害作用,采用叶绿素荧光技术、流式细胞技术、激光共聚焦技术及半定量RT-PCR技术,检测光合参数的变化、活性氧(reactive oxygen species,ROS)的累积、自噬的发生,以及病原相关蛋白(pathogenesis-related protein,PR)基因表达的变化。实验结果显示,随着50μmol/L CdCl2处理时间的延长,ROS和Cd2+在细胞中大量积累。而在镉胁迫的初期,会观察到自噬的发生及PR基因表达的变化。说明植物受到外界Cd2+作用的初期,会通过自噬及增强PR基因表达来抵抗外界胁迫。但随着处理时间的延长,植物细胞内累积了大量的ROS和Cd2+,当植物不足以通过自噬途径抵抗胁迫时,就会导致生长受阻,最终对光合系统造成损伤。 展开更多

关键词 镉 活性氧 自噬 叶绿素荧光 流式细胞技术

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微流控芯片用于流式细胞术的基础研究 被引量：7

6

作者 杨蕊 牟颖 +2 位作者 邹明强 吴 金钦汉 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2004年第10期1816-1819,共4页

自行设计并加工了玻璃微流控芯片 ,并将其与流式细胞术相结合 ,采用羟丙基甲基纤维素 ( HPMC)的磷酸盐溶液为缓冲体系和鞘液 ,解决了微粒在微芯片中流动的若干问题 ,使其状态可以得到更有效的控制 .采用自行组装的激光诱导荧光装置并结... 自行设计并加工了玻璃微流控芯片 ,并将其与流式细胞术相结合 ,采用羟丙基甲基纤维素 ( HPMC)的磷酸盐溶液为缓冲体系和鞘液 ,解决了微粒在微芯片中流动的若干问题 ,使其状态可以得到更有效的控制 .采用自行组装的激光诱导荧光装置并结合动电聚焦技术 ,实现了对荧光微球的计数 ,并可通过荧光倒置显微镜实时观察到微通道内微球的实际流动情况 .方法简单 ,操作方便 ,并且具有仪器体积小。 展开更多

关键词 微流控芯片 流式细胞术 羟丙基甲基纤维素 动电聚焦技术 荧光微球

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家族性高胆固醇血症患者低密度脂蛋白受体基因新突变位点的鉴定 被引量：4

7

作者 刘燕荣 陶谦民 +7 位作者 陈君柱 陶明 郭晓纲 尚云鹏 朱建华 张芙荣 郑良荣 王兴祥 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期566-572,共7页

家族性高胆固醇血症(hypercholesterolemia familial, FH)是由于低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein receptor, LDLR)基因突变导致的常染色体显性遗传性疾病, 临床上表现为多发黄色瘤、高水平血浆 LDL、早发性冠心病及有阳性家... 家族性高胆固醇血症(hypercholesterolemia familial, FH)是由于低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein receptor, LDLR)基因突变导致的常染色体显性遗传性疾病, 临床上表现为多发黄色瘤、高水平血浆 LDL、早发性冠心病及有阳性家族史。本研究通过临床症状结合血脂测定诊断出一个 FH 家系, 其纯合子 FH 患者的血浆总胆固醇水平高达 19.05 mmol/L, LDL 达17.06 mmol/L, 并有黄色瘤; 而杂合子 FH 患者的血浆总胆固醇水平为 7.96 mmol/L, LDL为5.55 mmol/L, 并有心绞痛症状和黄色瘤。我们对该FH 家系患者LDLR 基因的PCR 扩增DNA片段进行测序, 发现纯合子FH 患者LDLR 基因Exon4 区域内发生了GAG683GCG 突变, 即编码 LDLR 第 683 位的谷氨酸被丙氨酸替换, 而杂合子 FH 患者该位点呈现杂合突变。此基因型与临床诊断遗传谱完全一致。同时, 利用获得Epstein-Barr(EB)病毒转化型人永生淋巴细胞株(EBV-Ls)与荧光探针DiI标记的LDL结合反应, 再通过流式细胞仪检测结果显示, 具有功能性LDLR 的EBV-Ls 细胞比例, 在纯合子FH 患者(7.02%)和杂合子FH 患者(62.64%)均比健康对照者(84.69%)低, 纯合子FH 患者LDLR 活性仅为健康对照者的8.29%、而杂合子FH 患者LDLR 活性约为健康对照者的73.96%, 前者呈现非常显著的降低? 展开更多

关键词 家族性高胆固醇血症 低密度脂蛋白受体 Epstein—Barr~~ 永生化淋巴母细胞 流式细胞仪 突变位点

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五味子甲素通过ATP结合盒转运子B1逆转胶质瘤干/祖细胞耐药性研究 被引量：5

8

作者 魏子龙 狄冲 +1 位作者 楼美清 赵耀东 《中国现代神经疾病杂志》 CAS 2017年第6期439-445,共7页

目的探讨五味子甲素对胶质瘤干/祖细胞耐药性的影响及作用机制。方法自人胶质瘤细胞系SHG-44中分离培养胶质瘤干/祖细胞SHG-44s,予五味子甲素0、12.50、25.00和50.00μmol/L联合长春新碱400、800和1200 nmol/L,细胞活性检测试剂盒CCK-8... 目的探讨五味子甲素对胶质瘤干/祖细胞耐药性的影响及作用机制。方法自人胶质瘤细胞系SHG-44中分离培养胶质瘤干/祖细胞SHG-44s,予五味子甲素0、12.50、25.00和50.00μmol/L联合长春新碱400、800和1200 nmol/L,细胞活性检测试剂盒CCK-8细胞毒性实验检测SHG-44s细胞增殖活性,罗丹明123染色检测SHG-44s细胞泵出药物能力,实时聚合酶链反应(PCR)和Western blotting法检测SHG-44s细胞ATP结合盒转运子B1(ABCB1)基因转录和翻译能力。结果五味子甲素50μmol/L即可抑制SHG-44s细胞增殖活性(P=0.001,0.001,0.039),剔除这一浓度后无论长春新碱浓度为400、800或1200 nmol/L,联合应用五味子甲素均可抑制SHG-44s细胞增殖活性(长春新碱400 nmol/L组:P=0.007,0.001;长春新碱800 nmol/L组:P=0.001,0.000;长春新碱1200 nmol/L组:P=0.000,0.000)。倒置荧光显微镜观察,五味子甲素12.50μmol/L组和25.00μmol/L组SHG-44s细胞可见明显绿色荧光。流式细胞术显示,随着五味子甲素浓度的增加,SHG-44s细胞罗丹明123染色阳性细胞比例分别为10.40%、39.20%和45.20%。实时PCR法显示,五味子甲素12.50μmol/L组和25.00μmol/L组SHG-44s细胞ABCB1基因表达水平较0μmol/L组降低(P=0.027,0.006),尤以25.00μmol/L组显著(P=0.034)。Western blotting法显示,随着五味子甲素浓度的增加,SHG-44s细胞P-糖蛋白表达水平下降。结论五味子甲素通过抑制胶质瘤干/祖细胞表面已存在的ABCB1基因编码的P-糖蛋白泵出药物能力并降低ABCB1基因转录和翻译能力,逆转胶质瘤干/祖细胞耐药性。 展开更多

关键词 五味子素 ATP结合匣式转运子 神经胶质瘤 肿瘤干细胞 药物耐受性 显微镜检查 荧光 流式细胞术 聚合酶链反应 免疫印迹法 肿瘤细胞 培养的

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UF-100型全自动尿液沉渣检测仪测定参考范围调查 被引量：5

9

作者 杜宗孝 张立平 《宁夏医学杂志》 CAS 2004年第7期430-431,共2页

目的　确定UF - 10 0型全自动尿液沉渣检测仪检测健康人尿沉渣检测的参考值范围。方法　用UF - 10 0型全自动尿液沉渣检测仪随机检测 5 2 0例健康人不离心尿液标本 ,对尿液沉渣进行分析。结果　尿液中红细胞 (RBC)、白细胞 (WBC)、上皮... 目的　确定UF - 10 0型全自动尿液沉渣检测仪检测健康人尿沉渣检测的参考值范围。方法　用UF - 10 0型全自动尿液沉渣检测仪随机检测 5 2 0例健康人不离心尿液标本 ,对尿液沉渣进行分析。结果　尿液中红细胞 (RBC)、白细胞 (WBC)、上皮细胞 (EC)、管型 (CAST)各年龄组之间检测值经 F 检验 ,差异无显著意义 (P >0 .0 5 ) ,但男、女性别之间差异有显著意义 (P <0 .0 5 )。结论　尿液RBC、WBC、EC的多少与年龄无关 ,但与性别有关。健康人参考值的确立 。 展开更多

关键词 尿沉渣 参考范围 荧光染色 流式细胞分析法

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X线对舌鳞癌细胞系Tca8113端粒长度影响的动态观察 被引量：4

10

作者 谢谦 黄洪章 +3 位作者 魏菁 毛永林 胡晓文 余东升 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期454-457,共4页

【目的】探讨放射线对人舌鳞癌细胞系Tca8113端粒长度变化的影响。【方法】采用流式原位杂交法(FLOW-FISH)检测Tca8113细胞的端粒相对长度(RTL)。【结果】与未照射细胞相比,经X线处理后,Tca8113细胞RTL值明显下降(P<0.05);在照射后1h... 【目的】探讨放射线对人舌鳞癌细胞系Tca8113端粒长度变化的影响。【方法】采用流式原位杂交法(FLOW-FISH)检测Tca8113细胞的端粒相对长度(RTL)。【结果】与未照射细胞相比,经X线处理后,Tca8113细胞RTL值明显下降(P<0.05);在照射后1h至3h间,不同照射剂量的细胞RTL值均有一定程度上升;5h时,除2Gy组外,其它各照射剂量组的RTL值均下降。【结论】经X线照射后,Tca8113细胞端粒明显缩短。端粒缩短可能是放射损伤的机制之一。 展开更多

关键词 TCA8113细胞 舌鳞癌细胞 X线照射 端粒长度 动态观察 照射剂量 原位杂交法 相对长度 放射线 变化

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五联综合诊断技术对骨髓增生异常综合征诊断价值的临床研究 被引量：5

11

作者 刘灵 杨再林 +1 位作者 陈洁平 张勇 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1208-1212,共5页

目的探讨骨髓涂片、骨髓活检、染色体核型显带分析、荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)及流式细胞术(flow cytometry,FCM)五联综合诊断技术单用和联用对骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)的诊断... 目的探讨骨髓涂片、骨髓活检、染色体核型显带分析、荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)及流式细胞术(flow cytometry,FCM)五联综合诊断技术单用和联用对骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)的诊断价值。方法收集2010年10月至2013年11月在我院经细胞形态学、免疫学、细胞遗传学及分子生物学(morphologie,immunophenotypie,cytogenetic,molecular,MICM)联合检测,并根据WHO造血组织和淋巴系统肿瘤分类的标准确诊为MDS的患者情况,并分析单项(骨髓涂片)、双联(骨髓涂片+活检)、三联(骨髓涂片+活检+染色体)、四联(骨髓涂片+活检+染色体+FISH)和五联(骨髓涂片+活检+染色体+FISH+FCM)诊断符合率及其在分型、预后评估中的作用。结果在248例确诊的MDS患者中,双联诊断符合率为79.44%,三联和四联诊断符合率分别为87.10%、88.71%,五项联合诊断符合率可高达93.15%,均高于骨髓涂片单项诊断符合率(59.27%,P<0.05)。在MDS亚型分型及预后评估方面,五项联合应用辅以骨髓纤维组织的有无及增生程度、染色体核型情况及其复杂程度、抗原异常表达这3个参数均有助于提高MDS诊断及预后评估的准确性。结论应用MICM五联综合诊断技术能有效提高MDS诊断水平,对其亚型分型、预后治疗评估具有重要的临床价值。 展开更多

关键词 骨髓增生异常综合征 骨髓涂片 骨髓活检 染色体分析 荧光原位杂交 流式细胞术

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尼罗红染色聚苯乙烯微塑料新方法开发

12

作者 胥文瑞 周李俊君 +4 位作者 王超 杜春瑛 罗少华 刘立明 贾漫珂 《塑料科技》 CAS 北大核心 2024年第4期49-55,共7页

对微塑料的分析研究需从量化方法开始。目前,针对微塑料常使用的染色方法都存在荧光强度较低和染色分布不均匀的缺点。文章采用了旋转蒸发法(旋蒸法)和尼罗红(NR)染料对聚苯乙烯微塑料(PS)进行染色。采用扫描电镜(SEM)和红外光谱法(FTIR... 对微塑料的分析研究需从量化方法开始。目前,针对微塑料常使用的染色方法都存在荧光强度较低和染色分布不均匀的缺点。文章采用了旋转蒸发法(旋蒸法)和尼罗红(NR)染料对聚苯乙烯微塑料(PS)进行染色。采用扫描电镜(SEM)和红外光谱法(FTIR)对比染色前后PS的微观结构和表面基团的变化,利用流式细胞仪对荧光PS(FPS)的数量进行统计并与荧光法测定结果对照。结果表明:旋蒸法对PS的染色效果符合预期,定量分析小尺寸FPS的相对标准偏差在10%以内,且FPS的荧光信号强,易于检测。在FPS的稳定性测试中发现,该方法的染色效果较稳定,适用于对不同尺寸的PS和在模拟环境中的样品进行染色。 展开更多

关键词 聚苯乙烯微塑料 荧光分析 旋转蒸发 流式细胞仪 定量分析

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不同长径比金纳米双锥对光敏剂荧光和光动力疗法效果的增强 被引量：4

13

作者 王诗淼 王晶 +1 位作者 刘军 李儒新 《中国激光》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第6期274-280,共7页

金属增强荧光(MEF)理论一直是近年来研究的热点。通过研究光谱测量、细胞共聚焦成像和流式细胞术(FCM)等方法来定量分析不同长径比(3.1~6.5)的金纳米双锥对光敏剂铝酞菁(AlPcS)的荧光和光动力疗法(PDT)效果的增强效应。荧光光谱和共聚... 金属增强荧光(MEF)理论一直是近年来研究的热点。通过研究光谱测量、细胞共聚焦成像和流式细胞术(FCM)等方法来定量分析不同长径比(3.1~6.5)的金纳米双锥对光敏剂铝酞菁(AlPcS)的荧光和光动力疗法(PDT)效果的增强效应。荧光光谱和共聚焦成像结果表明,高长径比的金纳米双锥使铝酞菁的荧光强度大大增强,最大增强因子为6;低长径比的金纳米双锥由于其等离子共振带与铝酞菁的荧光带接近,因此使铝酞菁的荧光强度大大降低。Hela细胞(人上皮宫颈癌细胞)的凋亡测定结果显示:金纳米双锥的加入,特别是高长径比的金纳米双锥的加入,使得铝酞菁的载药率和产生单线态氧的能力提高,从而降低了Hela细胞的存活率,增强了铝酞菁的光动力疗法效果。本实验为表面增强荧光的研究提供了一个新的途径,并扩展了金属纳米粒子在生命科学领域的应用。 展开更多

关键词 医用光学 金属增强荧光 光动力疗法 金纳米双锥 等离子体共振 流式细胞术

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红毛五加多糖AHP-Ⅱ的荧光标记及其在小鼠腹腔巨噬细胞上的定位 被引量：3

14

作者 陈永 张青 +5 位作者 孙风祥 李桂芝 孟爱霞 陈志婷 黄传洲 刘志军 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期2113-2119,共7页

目的:对红毛五加多糖AHP-Ⅱ的还原性末端进行选择性荧光标记,并观察AHP-Ⅱ与小鼠腹腔巨噬细胞结合情况。方法:利用胺化还原法对AHP-Ⅱ进行异硫氰酸荧光素(FITC)荧光标记,并通过紫外吸收光谱扫描和荧光分光光度术对偶联标记结果进行确证... 目的:对红毛五加多糖AHP-Ⅱ的还原性末端进行选择性荧光标记,并观察AHP-Ⅱ与小鼠腹腔巨噬细胞结合情况。方法:利用胺化还原法对AHP-Ⅱ进行异硫氰酸荧光素(FITC)荧光标记,并通过紫外吸收光谱扫描和荧光分光光度术对偶联标记结果进行确证。通过测定多糖标记前后对小鼠腹腔巨噬细胞激活情况,检验该标记方法对AHP-Ⅱ生物学活性的影响。采用荧光显微技术和流式细胞术观察AHP-Ⅱ与小鼠腹腔巨噬细胞的结合情况。结果:AHP-Ⅱ荧光标记后的多糖得率和荧光标记效率分别为20.57%和0.809%。生物活性检测发现,AHP-Ⅱ还原性末端荧光标记后,对其激活小鼠腹腔巨噬细胞的能力没有显著影响(P>0.05)。荧光显微观察显示AHP-Ⅱ-FITC定位在小鼠腹腔巨噬细胞表面,流式细胞术检测发现在试验剂量范围内(50~200μg·m L^(-1)),巨噬细胞的荧光强度与AHP-Ⅱ-FITC加入量呈正相关,且荧光标记多糖与未标记多糖间存在竞争关系。结论:该方法可用于AHP-Ⅱ的标记研究,AHP-Ⅱ可与小鼠腹腔巨噬细胞细胞膜结合。 展开更多

关键词 红毛五加 多糖 生物活性检测 异硫氰酸荧光素(FITC) 荧光显微技术 流式细胞检测 巨噬细胞 胺化还原法

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荧光显微镜法检测小鼠胸腺细胞凋亡的染料选择 被引量：3

15

作者 苗苗 郭茜茜 +1 位作者 吴丹丹 于广 《电子显微学报》 CAS CSCD 2015年第3期272-276,共5页

目的:通过荧光显微镜检测对比不同染料的特点,并找出最佳染料组合用于胸腺细胞凋亡检测。方法:PI,7-AAD,Annexin V-Alexa Flour 488(AF488)分别单染胸腺细胞,Annexin V-AF488与PI/7-AAD双染胸腺细胞在荧光显微镜下观察,Annexin V-APC与7... 目的:通过荧光显微镜检测对比不同染料的特点,并找出最佳染料组合用于胸腺细胞凋亡检测。方法:PI,7-AAD,Annexin V-Alexa Flour 488(AF488)分别单染胸腺细胞,Annexin V-AF488与PI/7-AAD双染胸腺细胞在荧光显微镜下观察,Annexin V-APC与7-AAD双染胸腺细胞在流式细胞仪下观察。结果:采用荧光显微镜检测,PI单染后在绿色模块下能够看到阳性信号,而7-AAD单染后在绿色模块下不会出现阳性信号;三种染料中,PI与7-AAD单染细胞涂片后随着时间的延长阳性信号逐渐增多,Annexin V-AF488单染细胞涂片后随着时间的延长阳性信号稍微减弱;7-AAD与Annexin V-AF488双染胸腺细胞在荧光显微镜下检测的结果和7-AAD与Annexin V-APC双染胸腺细胞流式细胞仪检测的结果无差异。结论:采用荧光显微镜法检测胸腺细胞凋亡,7-AAD与Annexin V-AF488结合最佳。 展开更多

关键词 PI 7-AAD ANNEXIN V-AF488 胸腺细胞凋亡 荧光显微镜 流式细胞仪

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伴骨髓纤维化的浆细胞骨髓瘤临床病理学分析 被引量：2

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作者 李慧兰 汝昆 +6 位作者 孙琦 李占琦 张洪菊 马跃 線霖 邱录贵 刘恩彬 《中华病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期327-331,共5页

目的 分析伴骨髓纤维化（marrow fibrosis, MF）的浆细胞骨髓瘤（plasma cell myeloma with bone marrow fibrosis, PCM）的临床及骨髓病理学特征.方法 回顾分析175例初诊PCM患者的临床及病理学资料,所有患者均行骨髓活检、网状纤维染... 目的 分析伴骨髓纤维化（marrow fibrosis, MF）的浆细胞骨髓瘤（plasma cell myeloma with bone marrow fibrosis, PCM）的临床及骨髓病理学特征.方法 回顾分析175例初诊PCM患者的临床及病理学资料,所有患者均行骨髓活检、网状纤维染色、流式细胞学及荧光原位杂交检测,根据网状纤维染色结果,将其分为PCM-MF组和非PCM-MF组.结果 175例PCM患者中,PCM-MF组 63例（36%）,非PCM-MF组 112例（64%）.PCM-MF组与非PCM-MF组比较,患者性别、年龄、血红蛋白水平、血小板计数、免疫球蛋白类型、国际分期系统分期、免疫表型及遗传学的差异均无统计学意义（P〉0.05）.PCM-MF组乳酸脱氢酶升高及肾功能异常发生率均明显高于非PCM-MF组（均P〈0.05）.PCM-MF组骨髓增生程度、浆细胞比例以及浆母细胞型比例均明显高于非PCM-MF组（均P〈0.05）.结论 PCM-MF患者具有较高的乳酸脱氢酶水平及肾功能异常的发生率,较高的骨髓增生程度和浆细胞比例,多见浆母细胞样形态,提示其可能为预后不良的类型. 展开更多

关键词 多发性骨髓瘤 原位杂交 荧光 流式细胞术

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刚地弓形虫绿色荧光蛋白突变株的构建 被引量：2

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作者 吴亮 袁异玮 +6 位作者 姜旭淦 傅行礼 逯兆喜 涂国华 李礼 陈盛霞 周红 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期439-442,共4页

目的构建稳定表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的弓形虫突变株,探讨以其检测宿主细胞感染率的效果。方法在人子宫颈癌(HeLa)细胞中培养弓形虫RH株速殖子,电穿孔法向虫体导入质粒ptubP30-GFP/sag-CAT,氯霉素和极限稀释... 目的构建稳定表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的弓形虫突变株,探讨以其检测宿主细胞感染率的效果。方法在人子宫颈癌(HeLa)细胞中培养弓形虫RH株速殖子,电穿孔法向虫体导入质粒ptubP30-GFP/sag-CAT,氯霉素和极限稀释法筛选稳定表达P30-GFP融合蛋白的突变株,RT-PCR法和荧光显微镜检测GFP蛋白在虫体内的表达。HeLa细胞分别感染1×104～1×107个突变株虫体,24 h后,显微镜计数各孔10个高倍镜视野下具有GFP荧光的HeLa细胞数。流式细胞仪检测"纳虫泡",评估HeLa细胞感染率。结果导入ptubP30-GFP/sag-CAT质粒后,经氯霉素筛选获得阳性克隆。RT-PCR检出虫体GFP基因表达,镜下可见GFP荧光聚集于虫体外膜。HeLa细胞感染率随虫体接种量的增多而增加,接种1×104～1×107个虫体24 h后,具有GFP荧光的HeLa细胞数分别为(14±6)、(133±45)、(332±93)和(443±90)个;流式细胞仪检测HeLa细胞感染率分别为(0.49±0.09)%、(8.76±0.50)%、(21.02±1.49)%和(39.00±3.47)%。结论构建了刚地弓形虫GFP荧光蛋白突变株,为检测虫体在宿主细胞内的增殖提供了新途径。 展开更多

关键词 弓形虫 突变株 绿色荧光蛋白 荧光显微镜 流式细胞仪

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2-BP对中性粒细胞趋化性的抑制作用 被引量：2

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作者 孙锦霞 王瑞 +2 位作者 谭笑 焦琛琛 黄钟 《深圳大学学报（理工版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第6期625-630,共6页

为研究棕榈酰化对中性粒细胞趋化性的调节作用,利用2-溴棕榈酸(2-bromopalmitate,2-BP)或棕榈酸(palmitate)预处理来源于骨髓的中性粒细胞.采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测中性粒细胞的存活率和中性粒细胞内F-肌动蛋白(F-actin... 为研究棕榈酰化对中性粒细胞趋化性的调节作用,利用2-溴棕榈酸(2-bromopalmitate,2-BP)或棕榈酸(palmitate)预处理来源于骨髓的中性粒细胞.采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测中性粒细胞的存活率和中性粒细胞内F-肌动蛋白(F-actin)的生成;通过免疫荧光分析中性粒细胞内F-actin的极化;利用细胞迁移试验检测中性粒细胞的迁移能力;通过免疫印迹的实验方法检测蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)和磷酸化AKT的表达.结果发现,2-BP预处理显著抑制了中性粒细胞内F-actin极化,且抑制了中性粒细胞向趋化肽N-甲酰甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸(N-formylmethionyl-leucyl-phenylalanine,f MLP)迁移的能力,而棕榈酸预处理显著促进了中性粒细胞内F-肌动蛋白极化.两者对F-actin生成和AKT的磷酸化均无影响.研究结果表明,2-BP处理可能通过影响F-actin的极化抑制了中性粒细胞向f MLP的趋化活性. 展开更多

关键词 中性粒细胞 2-溴棕榈酸 F-肌动蛋白极化 趋化性 免疫荧光 流式细胞术 免疫印迹 细胞迁移 磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶B信号通路

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传统与光谱流式细胞仪对自发荧光样本检测的比较 被引量：1

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作者 陈家欢 李丹丹 +4 位作者 孙艳 王艺蕾 王铎 孔杰 刘晓玲 《基础医学与临床》 2023年第5期809-816,共8页

目的比较传统与光谱流式细胞仪检测自发荧光样本的性能。方法以annexin V(AV)/碘化丙啶(PI)染色检测细胞凋亡为模型,制备带有自发荧光的单细胞样本,分别用传统与光谱流式细胞仪采集同一样本荧光信号。结果自发荧光干扰异硫氰酸荧光素(FI... 目的比较传统与光谱流式细胞仪检测自发荧光样本的性能。方法以annexin V(AV)/碘化丙啶(PI)染色检测细胞凋亡为模型,制备带有自发荧光的单细胞样本,分别用传统与光谱流式细胞仪采集同一样本荧光信号。结果自发荧光干扰异硫氰酸荧光素(FITC)通道荧光信号,传统流式细胞仪应避免使用FITC通道的荧光素;而光谱流式细胞仪可以清楚分辨FTIC通道的荧光素和自发荧光。同时优化了样本制备方法和annexin V/PI染色方案。结论光谱流式细胞仪对于自发荧光样本的检测在一定条件下具有相对优良的性能。 展开更多

关键词 自发荧光 流式细胞术 光谱 异硫氰酸荧光素(FITC)

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一个家族性高胆固醇血症家系的低密度脂蛋白受体基因突变检测与功能分析 被引量：2

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作者 程小欢 郑芳 +3 位作者 周新 熊陈岭 丁军发 陈永梅 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期55-58,共4页

目的检测一个家族性高胆固醇血症（familial hypercholesterolemia, FH）患者低密度脂蛋白受体（low density lipoprotein receptor, LDLR） 的基因突变，并对淋巴细胞表面LDLR功能进行检测。方法以一家系中4例临床诊断为FH患者的基因组... 目的检测一个家族性高胆固醇血症（familial hypercholesterolemia, FH）患者低密度脂蛋白受体（low density lipoprotein receptor, LDLR） 的基因突变，并对淋巴细胞表面LDLR功能进行检测。方法以一家系中4例临床诊断为FH患者的基因组DNA为模板，首先检测载脂蛋白B-100 （apolipoorotein B-100,ApoB100）基因R3500Q突变，以排除家族性ApoB100缺陷症（familial defective apolipoprotein B- 100, FDB） .然后用降落PCR方法，扩增LDLR基因的启动子和外显子片段，用单链构象多态性方法进行分析，对可疑外显子的PCR产物进行T／A克隆，测序分析。同时，用人淋巴细胞与荧光探针DiI标记的低密度脂蛋白发生结合反应，再通过流式细胞仪检测，显示具有功能性LDLR的淋巴细胞比例。结果该家系患者LDLR基因第10外显子均出现杂合突变，第462位密码子由TGG突变为TAG，导致在462位提前出现终止密码子（W462X）。具有功能性LDLR的淋巴细胞占总淋巴细胞比例患者为63．7％，健康对照者为77．3％，患者淋巴细胞LDLR活性约为健康对照者的82．4％，出现一定程度的降低。结论提示LDLR基因W462X突变可能是导致本FH家系患者患病的一个主要原因。 展开更多

关键词 家族性高胆固醇血症 低密度脂蛋白受体 流式细胞仪

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