2型糖尿病合并肥胖患者脂联素水平与胰岛素抵抗的相关性 被引量：28

1

作者 汪学军 姜志胜 黄佳克 《中国动脉硬化杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期535-538,共4页

目的研究2型糖尿病合并肥胖患者脂联素水平和胰岛素抵抗之间的相关性,探讨脂联素在2型糖尿病合并肥胖患者发生胰岛素抵抗中的作用。方法选择30例2型糖尿病合并肥胖患者、25例2型糖尿病患者及25例非糖尿病对照人员(其中13例为肥胖者),检... 目的研究2型糖尿病合并肥胖患者脂联素水平和胰岛素抵抗之间的相关性,探讨脂联素在2型糖尿病合并肥胖患者发生胰岛素抵抗中的作用。方法选择30例2型糖尿病合并肥胖患者、25例2型糖尿病患者及25例非糖尿病对照人员(其中13例为肥胖者),检测体质指数、腰/臀比值、空腹血糖、糖化血红蛋白、血清空腹胰岛素、血脂、脂联素水平,计算胰岛素抵抗指数和胰岛素敏感指数。分析血清脂联素与胰岛素抵抗的相关性。结果⑴糖尿病肥胖组的检测体质指数、糖化血红蛋白、空腹血糖、胰岛素抵抗指数、血清空腹胰岛素、腰/臀比值均高于对照肥胖组,脂联素、胰岛素敏感指数低于对照肥胖组(P<0.05)。⑵糖尿病非肥胖组甘油三酯、糖化血红蛋白、空腹血糖、胰岛素抵抗指数、血清空腹胰岛素均高于对照非肥胖组,胰岛素敏感指数、脂联素低于对照非肥胖组(P<0.05)。(3)糖尿病肥胖组甘油三酯、胆固醇、体质指数、糖化血红蛋白、空腹血糖、胰岛素抵抗指数、血清空腹胰岛素、腰/臀比值均高于糖尿病非肥胖组,胰岛素敏感指数、脂联素低于糖尿病非肥胖组(P<0.05)。结论脂联素与2型糖尿病肥胖患者的胰岛素抵抗发生有关,脂联素降低易导致胰岛素抵抗,脂联素水平可作为2型糖尿病合并肥胖患者发生胰岛素抵抗的监测标准。 展开更多

关键词 血清脂联素的测定 酶联免疫吸附法 2型糖尿病 脂联素 胰岛素抵抗

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血液病毒核酸检测单独阳性标本研究 被引量：15

2

作者 田耘博 黄霞 +5 位作者 秦伟斐 李维 毛伟 廖红文 段恒英 何涛 《实验与检验医学》 CAS 2015年第6期704-707,716,共5页

目的对酶联免疫吸附检测(ELISA)阴性而核酸检测(NAT)阳性的NAT单独阳性献血标本进行研究分析,评价不同NAT方法检测结果的差异。方法对献血标本进行ELISA的同时,采用转录介导扩增技术(TMA)进行NAT。对NAT单独阳性标本分别进行NAT(TMA)鉴... 目的对酶联免疫吸附检测(ELISA)阴性而核酸检测(NAT)阳性的NAT单独阳性献血标本进行研究分析,评价不同NAT方法检测结果的差异。方法对献血标本进行ELISA的同时,采用转录介导扩增技术(TMA)进行NAT。对NAT单独阳性标本分别进行NAT(TMA)鉴别检测,乙肝血清学标志物检测,HBs Ag确证实验和基于聚合酶链式反应(PCR)的NAT。结果在47004例献血标本中,NAT(TMA)联检(HBV、HIV、HCV)出ELISA阴性的NAT阳性标本108例,其中40例鉴别检测为HBV,68例为鉴别阴性,未发现HIV和HCV,HBV的NAT的单阳性率为0.85‰。选取13例NAT(TMA)鉴别为HBV的标本中有9例NAT(PCR)也为HBV;选取30例NAT(TMA)鉴别阴性标本中有2例NAT(PCR)为HBV。选取鉴别阳性13例,阴性30例共计43例NAT(TMA)联检单阳性标本进行乙肝血清学标志物检测,其乙肝血清学标志物中HBc Ab阳性率最高,HBs Ag确证检测结果均为不确定。结论由于NAT单独阳性标本中大多为隐匿性HBV感染(OBI),可能给不同NAT方法的检测结果带来一定的差异。 展开更多

关键词 核酸检测(NAT) 酶联免疫吸附检测(elisa) elisa阴性且NAT阳性 HBV/HIV/HCV

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水牛乳和羊乳中掺伪牛乳高特异性酶联免疫检测方法 被引量：12

3

作者 张世伟 王士峰 +3 位作者 赖心田 冯龙虎 唐栋 杨国武 《食品工业》 北大核心 2015年第5期191-194,共4页

建立可检测水牛乳和羊乳中掺伪牛乳的双抗夹心酶联免疫检测方法。分别以牛Ig G和牛Ig G的Fc片段为抗原,制备抗牛Ig G的多克隆和高特异性单克隆抗体,并将以此蛋白作为包被抗体,构建双抗夹心ELISA方法。该方法标准曲线的IC50为4.3μg/m L... 建立可检测水牛乳和羊乳中掺伪牛乳的双抗夹心酶联免疫检测方法。分别以牛Ig G和牛Ig G的Fc片段为抗原,制备抗牛Ig G的多克隆和高特异性单克隆抗体,并将以此蛋白作为包被抗体,构建双抗夹心ELISA方法。该方法标准曲线的IC50为4.3μg/m L,方法的灵敏度为0.1μg/m L。添加回收率在95%~105%之间,相对标准偏差小于12%。该方法无需复杂的前处理,检测时间为60 min,能准确检测水牛乳和羊乳中掺伪牛乳,避免了传统免疫方法在乳制品掺伪检测上的假阳性。 展开更多

关键词 羊乳 水牛乳 掺伪 酶联免疫分析(elisa)

原文传递

重组铜绿假单胞菌外毒素A的原核表达和多克隆抗体制备及免疫保护功能分析 被引量：5

4

作者 刘祥 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期33-38,共6页

为探索铜绿假单胞菌ETA蛋白的免疫保护功能,采用分子克隆方法获得铜绿假单胞菌ETA表达菌株;利用切胶纯化获得ETA蛋白并免疫小鼠,制备ETA蛋白多克隆抗体;用ELISA方法,检测出ETA抗血清滴度达1∶8 000;蛋白质印迹分析结果表明,抗血清具有... 为探索铜绿假单胞菌ETA蛋白的免疫保护功能,采用分子克隆方法获得铜绿假单胞菌ETA表达菌株;利用切胶纯化获得ETA蛋白并免疫小鼠,制备ETA蛋白多克隆抗体;用ELISA方法,检测出ETA抗血清滴度达1∶8 000;蛋白质印迹分析结果表明,抗血清具有很好的特异性;小鼠免疫保护试验结果表明,ETA对铜绿假单胞菌感染的保护率达50%,显著高于对照组的免疫保护率。用DNAman软件对ETA序列同源性进行分析,发现革兰氏阴性菌的同源性高于革兰氏阳性菌,铜绿假单胞菌种间的同源性高于其他种类细菌的同源性;用MEGA软件对ETA的进化分析结果表明,不同血清型铜绿假单胞菌的亲缘关系高于其他细菌,据此可推测ETA免疫动物产生的特异性抗体可能为不同种类铜绿假单胞菌的感染提供交叉免疫保护。 展开更多

关键词 铜绿假单胞菌 外毒素A 原核表达 多克隆抗体 酶联免疫法 免疫保护

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TRPV1及TGF-β2的ELISA及免疫组化方法检测对上气道咳嗽综合征的诊断价值 被引量：4

5

作者 石晓岚 《川北医学院学报》 CAS 2016年第5期637-640,共4页

目的:探讨瞬时受体电位香草酸受体1(transient receptor potential vanniloid 1,TRPV1)及转化生长因子β2(transforming growth factor-β2,TGF-β2)的免疫酶联吸附试验(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)及免疫组化方法检测... 目的:探讨瞬时受体电位香草酸受体1(transient receptor potential vanniloid 1,TRPV1)及转化生长因子β2(transforming growth factor-β2,TGF-β2)的免疫酶联吸附试验(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)及免疫组化方法检测对儿科上气道咳嗽综合征(upper airway cough syndrome,UACS)的诊断价值。方法:94例UACS患儿作为试验组,另选择同一时期的92例腺体样肥大,但无UACS的患儿作为对照组。采集两组患儿血清进行TRPV1及TGF-β2的ELISA测定,采集患儿腺样体组织进行TRPV1及TGF-β2的免疫组化检测,对检测结果进行对照分析。结果:UACS组患儿ELISA检测的TRPV1和TGF-β2值均显著高于对照组,差异具有统计学意义(均P<0.001);UACS组患儿免疫组化检测的TRPV1、TGF-β2阳性率均显著高于对照组,差异具有统计学意义(P=0.018,0.001);TRPV1和TGF-β2的免疫组化检测方法的敏感度均显著干预ELASA,差异具有统计学意义(均P<0.001),TRPV1和TGF-β2的ELASA检测的特异度均显著高于免疫组化检测,差异具有统计学意义(均P<0.05)。结论:TRPV1及TGF-β2的升高与UACS的发病可能有关,TRPV1和TGF-β2的免疫组化检测对UACS诊断的敏感性较高,而TRPV1和TGF-β2的ELASA检测对UACS诊断的特异性较高,联合应用ELISA及免疫组化检测UACS可疑病例,有助于提高UACS患者诊断的准确性,降低漏诊、误诊率。 展开更多

关键词 瞬时受体电位香草酸受体1 转化生长因子Β2 免疫酶联吸附试验 免疫组化 上气道咳嗽综合征

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白癜风患者血清及皮损疱液中白细胞介素-22水平测定 被引量：3

6

作者 臧运书 李洋 纪晓丽 《中国美容整形外科杂志》 CAS 2011年第6期365-367,共3页

目的检测白癜风患者血清及皮损疱液中白细胞介素-22（interleukin-22，IL-22）水平，分析处于不同病期及经治疗后不同疗效的白癜风患者血清IL-22水平变化情况，探讨该因子在白癜风发病过程中的可能作用。方法采用酶联免疫吸附测定法对5... 目的检测白癜风患者血清及皮损疱液中白细胞介素-22（interleukin-22，IL-22）水平，分析处于不同病期及经治疗后不同疗效的白癜风患者血清IL-22水平变化情况，探讨该因子在白癜风发病过程中的可能作用。方法采用酶联免疫吸附测定法对56例患者、20例健康志愿者血清及15例接受表皮移植患者皮损疱液中IL-22因子水平进行测定，对接受治疗的18例患者血清中该因子水平进行监测，采用SPSS13．0软件进行数据分析。结果进展期、稳定期、对照组血清中IL-22水平依次降低，且两两组问差异均有统计学意义（P〈0．01），接受表皮移植患者皮损区疱液中IL-22含量显著高于供皮区水平，差异有统计学意义（P〈0．05）。18例疗效较好患者血清中IL-22水平与治疗前比较下降明显，差异有统计学意义（P〈0．05）。疗效较差患者血清中IL-22水平差异无统计学意义（P〉0．05）。结论IL．22可能在白癜风发病及加重过程中起重要作用，IL-22水平变化可能成为预测白癜风患者病情进展及评价疗效的指标之一。 展开更多

关键词 白癜风 白细胞介素-22 酶联免疫吸附测定

原文传递

罗丹明B酶联免疫分析方法的建立与应用 被引量：2

7

作者 王琳 王雪 田静秒 《中国测试》 CAS 北大核心 2016年第6期60-64,共5页

建立一种用于检测罗丹明B的间接竞争酶联免疫分析方法。该方法的IC50为1.3ng/m L,检测限为0.786ng/g。该方法检测豆瓣酱,加标浓度5 ng/g,平均回收率为83%,加标浓度10 ng/g,平均回收率为89%;检测辣椒酱,加标浓度5 ng/g,均回收率为88%,加... 建立一种用于检测罗丹明B的间接竞争酶联免疫分析方法。该方法的IC50为1.3ng/m L,检测限为0.786ng/g。该方法检测豆瓣酱,加标浓度5 ng/g,平均回收率为83%,加标浓度10 ng/g,平均回收率为89%;检测辣椒酱,加标浓度5 ng/g,均回收率为88%,加标浓度10 ng/g,平均回收率为104%;检测辣椒油,加标浓度5 ng/g,平均回收率为94%,加标浓度10 ng/g,平均回收率为101%;检测辣椒粉,添加浓度5 ng/g,平均回收率为82%,加标浓度10 ng/g,平均回收率为90%。该方法的平均批内差为9.0%,批间差为10.5%,与其他常见染料未见交叉反应。该方法操作简便,结果准确,适用于罗丹明B的现场大量样品快速检测。 展开更多

关键词 酶联免疫分析法 罗丹明B 豆瓣酱 辣椒酱 辣椒油 辣椒粉

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酶联免疫吸附法检测除草剂异丙甲草胺 被引量：2

8

作者 张炽坚 王强 +4 位作者 唐秋实 刘英菊 孙远明 唐允健 雷红涛 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第10期126-129,共4页

将异丙甲草胺与3-巯基丙酸反应合成出带羧基的异丙甲草胺半抗原MMPA;用活泼酯法将半抗原与载体牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)分别偶联,制备免疫抗原MMPA-BSA和包被抗原MMPA-OVA,紫外光谱鉴定后用MMPA-BSA免疫新西兰大白兔,成功制... 将异丙甲草胺与3-巯基丙酸反应合成出带羧基的异丙甲草胺半抗原MMPA;用活泼酯法将半抗原与载体牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)分别偶联,制备免疫抗原MMPA-BSA和包被抗原MMPA-OVA,紫外光谱鉴定后用MMPA-BSA免疫新西兰大白兔,成功制备出抗异丙甲草胺多克隆抗体,并建立异丙甲草胺的间接竞争酶联免疫吸附分析(icELISA)法。该方法半抑制浓度(IC50)为34.3ng/mL,检测限(IC10)为6.3ng/mL,检测范围(IC20～IC80)为12.3～99.2ng/mL。该抗体对其他结构类似物无明显交叉反应。将该方法应用于环境水样中异丙甲草胺检测,回收率在89.5%～107.9%之间,相对标准偏差9.2%～14.5%。所建立的异丙甲草胺免疫分析方法特异性强、准确度高、灵敏度高,可用于环境水样中异丙甲草胺的快速检测。 展开更多

关键词 异丙甲草胺 酶联免疫吸附分析 抗体

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人巨细胞病毒包膜糖蛋白B主要中和表位单克隆抗体的制备 被引量：1

9

作者 何赛 廖旻晶 +8 位作者 靳晓瑞 邱义兰 李晓丹 郑姣 唐娜 罗焕 梁湘辉 郭向荣 刘如石 《生命科学研究》 CAS CSCD 2017年第1期16-22,共7页

人巨细胞病毒(Human Cytomegalovirus,HCMV)分布广泛,能够引发多种疾病,人群感染率极高,严重威胁到人类健康。现根据标准毒AD169基因序列,人工合成包膜糖蛋白B(glycoprotein B,g B)AD13区段的主要中和抗原表位AD-1、AD-2、AD-3,并将其... 人巨细胞病毒(Human Cytomegalovirus,HCMV)分布广泛,能够引发多种疾病,人群感染率极高,严重威胁到人类健康。现根据标准毒AD169基因序列,人工合成包膜糖蛋白B(glycoprotein B,g B)AD13区段的主要中和抗原表位AD-1、AD-2、AD-3,并将其与表达载体pET-32a连接,构建重组表达质粒;用IPTG诱导表达重组蛋白,采用Western-blot进行特异性鉴定;将纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞和SP2/0细胞融合,然后筛选制备AD13单克隆抗体(monoclonal antibody,m Ab)。12%SDS-PAGE电泳鉴定表明重组蛋白表达成功,其相对分子质量约为35 kD;Western-blot和间接ELISA结果说明,重组AD13蛋白作为抗原具有良好的免疫反应性;克隆化后筛选到5个AD13单克隆抗体细胞株,经间接ELISA鉴定,与AD13抗原有良好的特异性反应。上述研究为研发HCMV快速诊断试剂盒提供了原料,也为研究HCMV亚单位疫苗提供了相关的基础。 展开更多

关键词 人巨细胞病毒(HCMV) 包膜糖蛋白B(g B) 中和表位 单克隆抗体(m Ab) 酶联免疫吸附反应(elisa) 免疫反应性

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大豆蛋白饮料中大豆蛋白定量方法研究 被引量：1

10

作者 张世伟 赖心田 +3 位作者 王士峰 冯龙虎 唐栋 杨国武 《安徽农业科学》 CAS 2015年第21期245-248,共4页

[目的]建立基于竞争酶联免疫分析（ELISA）的大豆蛋白饮料中大豆蛋白定量方法。[方法]以变性的大豆球蛋白和β-伴球蛋白为抗原,分别制备抗这2种蛋白的多克隆抗体,构建竞争ELISA方法。分析了9个品系的大豆球蛋白、β-伴球蛋白、可溶蛋白... [目的]建立基于竞争酶联免疫分析（ELISA）的大豆蛋白饮料中大豆蛋白定量方法。[方法]以变性的大豆球蛋白和β-伴球蛋白为抗原,分别制备抗这2种蛋白的多克隆抗体,构建竞争ELISA方法。分析了9个品系的大豆球蛋白、β-伴球蛋白、可溶蛋白的含量。基于大豆球蛋白与伴球蛋白含量之和与可溶蛋白的比例关系,得出了植物蛋白饮料中大豆蛋白含量的计算方法。[结果]该方法的线性范围均为2.0-80μg/ml（R^2=0.99）,样品前处理使用含有0.1%二硫苏糖醇（DTT）的7 mol/L尿素作为提取液。大豆球蛋白与伴球蛋白含量之和除以系数0.682可换算得到蛋白饮料中大豆蛋白含量,方法的相对标准偏差〈12%。[结论]研究可为其他热加工食品的蛋白特异性定量提供参考。 展开更多

关键词 大豆 大豆蛋白 elisa 定量

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ELISA法分析棘阿米角膜炎兔模型血清抗体的滴度 被引量：1

11

作者 王月华 李正花 +3 位作者 陈琳 韩嵩 杨易 刘国祥 《中国卫生检验杂志》 北大核心 2014年第22期3224-3225,共2页

目的探讨酶联免疫吸附法(ELISA)检测棘阿米巴角膜炎血清抗体的可行性,从而为棘阿米巴角膜炎的免疫学诊断提供实验依据。方法离心收集对数期生长的棘阿米巴原虫,超声破碎虫体。4℃下10 000 r/min离心10 min去除虫体碎片,取上清。采用BCA... 目的探讨酶联免疫吸附法(ELISA)检测棘阿米巴角膜炎血清抗体的可行性,从而为棘阿米巴角膜炎的免疫学诊断提供实验依据。方法离心收集对数期生长的棘阿米巴原虫,超声破碎虫体。4℃下10 000 r/min离心10 min去除虫体碎片,取上清。采用BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。此提取物即为虫体抗原,通过ELISA法检测不同时期实验兔血清抗体滴度。结果棘阿米巴角膜炎模型的血清抗体滴度水平随着感染时间的延长而不断升高,于感染后第28 d达峰值,此后抗体滴度水平逐渐下降,直到处死仍高于正常。健康对照组血清抗体没有明显变化。结论 ELISA法检测棘阿米巴角膜炎兔血清抗体滴度呈现一定的动态变化,这将为棘阿米巴角膜炎的血清学诊断奠定基础。 展开更多

关键词 棘阿米巴角膜炎 血清抗体 酶联免疫吸附法

原文传递

主客体结构微球的流式免疫荧光检测的方法

12

作者 吴志民 徐宏 古宏晨 《上海交通大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第11期1361-1366,共6页

采用纳米氧化硅客体子球和聚苯乙烯磁性主体母球设计并制备了一种新型的主客体组装结构复合微球,将抗人绒毛膜促性腺激素(hCG)抗体化学固载于组装微球表面,在流式免疫荧光检测平台中研究其免疫检测性能,并与传统的酶联免疫(ELISA)检测... 采用纳米氧化硅客体子球和聚苯乙烯磁性主体母球设计并制备了一种新型的主客体组装结构复合微球,将抗人绒毛膜促性腺激素(hCG)抗体化学固载于组装微球表面,在流式免疫荧光检测平台中研究其免疫检测性能,并与传统的酶联免疫(ELISA)检测方法进行了比较.结果表明,主客体组装结构微球在流式免疫荧光检测中具有优异的检测性能,在微球用量极低的情况下仍然具有非常好的检测线性和检测重复性,并且空白限较传统的ELISA方法降低了6/7. 展开更多

关键词 主客体组装结构微球 生物载体 流式免疫荧光检测 酶联免疫检测

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利用十二肽库筛选心肌型脂肪酸结合蛋白特异性的亲和配体

13

作者 张淑华 王立成 +2 位作者 王丽萍 于源华 李惟 《吉林大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期140-143,共4页

采用噬菌体表面展示十二肽库对心肌型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)特异性亲和配体进行筛选,经3轮筛选及序列比对后得到一个酶联免疫测定分析(ELISA)检测阳性特征序列:W-P-N-H-H-M-L-H-K-R-W-P.对此序列进行肽合成,并标记上荧光标记物芘,经高... 采用噬菌体表面展示十二肽库对心肌型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)特异性亲和配体进行筛选,经3轮筛选及序列比对后得到一个酶联免疫测定分析(ELISA)检测阳性特征序列:W-P-N-H-H-M-L-H-K-R-W-P.对此序列进行肽合成,并标记上荧光标记物芘,经高效液相纯化、冻干及质谱确定其分子量后制成荧光肽探针检测急性心肌梗塞病人血样,结果均呈阳性.结果表明,所获得的肽探针具有较好的临床应用效果. 展开更多

关键词 心肌型脂肪酸结合蛋白 噬菌体表面展示十二肽库 亲和配体 酶联免疫测定分析

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肺癌患者血清VEGF-D、VEGFR-2水平及临床意义 被引量：1

14

作者 李永丽 蔡曦光 《中国现代医药杂志》 2012年第11期11-13,共3页

目的探讨血管内皮生长因子D(VEGF-D)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)在肺癌患者血清中的水平及其临床意义。方法血清中VEGF-D和VEGFR-2浓度的测定均采用ELISA法。结果①小细胞肺癌组、非小细胞肺癌组及健康对照组血清VEGF-D及VEGFR-2... 目的探讨血管内皮生长因子D(VEGF-D)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)在肺癌患者血清中的水平及其临床意义。方法血清中VEGF-D和VEGFR-2浓度的测定均采用ELISA法。结果①小细胞肺癌组、非小细胞肺癌组及健康对照组血清VEGF-D及VEGFR-2浓度差异有统计学意义,由秩和检验得出P<0.05。②肺癌患者按照肿瘤分化程度、临床分期、TNM分期及胸膜侵犯分组后血清中VEGF-D及VEGFR-2浓度比较差异有统计学意义,P<0.05。结论检测血清VEGF-D及VEGFR-2水平对研究肺癌的早期诊断、临床分期、预后判断有一定的参考价值。 展开更多

关键词 血管内皮生长因子D 血管内皮生长因子受体2 肺癌 酶联免疫吸附测定法

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抗鸡传染性支气管炎病毒单链抗体间接ELISA筛选方法的建立

15

作者 赵蕾 林源 +1 位作者 李本强 朱建国 《上海交通大学学报（农业科学版）》 2011年第2期64-68,82,共6页

建立一种筛选特异性单链抗体的间接ELISA优化方法。用鸡传染性支气管炎病毒IBV-M41株接种SPF鸡胚,纯化后作为抗原包被96孔板进行间接ELISA,从本实验室构建的原核表达质粒pOPE101-XP-scFv/JM109(DE3)中筛选出针对IBV-M41株的scFv,并对各... 建立一种筛选特异性单链抗体的间接ELISA优化方法。用鸡传染性支气管炎病毒IBV-M41株接种SPF鸡胚,纯化后作为抗原包被96孔板进行间接ELISA,从本实验室构建的原核表达质粒pOPE101-XP-scFv/JM109(DE3)中筛选出针对IBV-M41株的scFv,并对各反应参数进行探索,优化筛选方法。通过敏感性实验、交叉性实验、重复性实验评估优化后的筛选方法。优化的反应条件为,包被抗原1:20稀释(61.36μg/mL),4℃包被过夜;2%脱脂奶粉37℃封闭1 h;含可溶性scFv的待测样品1:100稀释(142.7μg/mL),37℃作用2 h;MYC鼠单抗1:2 000稀释,37℃作用2 h;羊抗鼠抗抗体1:4 000稀释,37℃作用1 h。敏感性实验显示样品中的scFv浓度的最低检出量为17.83μg/mL;特异性实验显示筛选出的scFv只与IBV-M41株特异性结合;重复性实验的板间、板内变异系数分别为2.78%、2.56%。建立的筛选scFv的间接ELISA方法有较好的敏感性、特异性、稳定性,为scFv的深入研究奠定基础。 展开更多

关键词 单链抗体 传染性支气管炎 间接elisa 筛选

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大鼠心脏型脂肪酸结合蛋白在早期心肌缺血时的含量变化 被引量：16

16

作者 明媚 孟祥志 《中国法医学杂志》 CSCD 2004年第2期68-71,共4页

目的 观察心肌缺血后不同时间段心肌细胞胞浆内和血浆中的心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)含量变化。方法 按Selye法结扎大鼠左冠状动脉前降支复制心肌缺血模型,用免疫组织化学和酶联免疫吸附实验(ELISA)的方法,观察心肌缺血后不同时间H-F... 目的 观察心肌缺血后不同时间段心肌细胞胞浆内和血浆中的心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)含量变化。方法 按Selye法结扎大鼠左冠状动脉前降支复制心肌缺血模型,用免疫组织化学和酶联免疫吸附实验(ELISA)的方法,观察心肌缺血后不同时间H-FABP在心肌细胞和血浆中含量的变化规律。结果 心肌缺血15min时,缺血区心肌即可出现H-FABP缺失,随着缺血时间的延长,缺失的范围扩大,程度加重,与对照组相比差异有显著性;心肌缺血15min时,血浆H-FABP含量在心肌缺血15min时即明显升高,与对照组相比有显著性差异。随着缺血时间的延长,血浆含量逐渐上升,4h时达到高峰,以后逐渐下降。结论 心肌缺血后不同时间段心肌细胞胞浆内和血浆中的H-FABP含量变化呈现一定规律性,可望成为诊断早期心肌缺血所致的心源性猝死的敏感指标。 展开更多

关键词 大鼠 心脏型脂肪酸结合蛋白 心肌缺血 Selyre法 心源性猝死

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硫代磷酸二乙酯类农药半抗原设计及抗体识别特性 被引量：15

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作者 谢桂勉 孙远明 +4 位作者 徐振林 李永祥 雷红涛 王弘 沈玉栋 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2009年第11期2193-2198,共6页

通过分析硫代磷酸二乙酯类农药的结构特点,设计并合成了系列半抗原;采用活泼酯法将半抗原分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联制备了系列免疫原和包被原;通过免疫新西兰大白兔获得了相应抗硫代磷酸二乙酯类农药的类特异性抗体.建... 通过分析硫代磷酸二乙酯类农药的结构特点,设计并合成了系列半抗原;采用活泼酯法将半抗原分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联制备了系列免疫原和包被原;通过免疫新西兰大白兔获得了相应抗硫代磷酸二乙酯类农药的类特异性抗体.建立检测硫代磷酸二乙酯类农药的间接竞争酶联免疫分析(ELISA)方法,分析探讨了免疫半抗原结构对抗体特性的影响,并阐述了包被半抗原结构对ELISA灵敏度的影响规律.结果表明,手臂取代位置在苯环对位且手臂较短的免疫原具有较好的免疫效果,同时异源包被可以显著提高ELISA方法的灵敏度.由抗体PAb-H1和包被原H6-OVA建立的间接竞争ELISA方法可以同时检测7个广泛使用的有机磷农药,其半抑制浓度(IC50)分别为蝇毒磷(0.013 mg/L)、对硫磷(0.348 mg/L)、喹硫磷(0.022 mg/L)、三唑磷(0.035 mg/L)、甲拌磷(0.751 mg/L)、除线磷(0.850 mg/L)及辛硫磷(1.301mg/L),最低检测限符合国内外相关有机磷药物最大允许残留限量标准(MRLS)的检测要求. 展开更多

关键词 有机磷农药 类特异性抗体 异源包被 酶联免疫分析

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人胎盘型谷胱甘肽S-转移酶的ELISA及用于肝癌的诊断 被引量：5

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作者 林峰 陈惠黎 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1990年第5期371-374,共4页

从人体胎盘提纯GST-π,制备兔抗GST-π血清,纯化其IgG,并降解成Fab’片断,通过SMCC与HRP交联成Fab’-HRP,用于夹心ELISA以测定GST-π,灵敏度可达11pg,超过国外的放射免疫法。用此法测定正常人血清GST-π为1.06±0.94ng/ml,原发性肝... 从人体胎盘提纯GST-π,制备兔抗GST-π血清,纯化其IgG,并降解成Fab’片断,通过SMCC与HRP交联成Fab’-HRP,用于夹心ELISA以测定GST-π,灵敏度可达11pg,超过国外的放射免疫法。用此法测定正常人血清GST-π为1.06±0.94ng/ml,原发性肝癌血清较正常高20倍以上。阳性率达90％左右。 展开更多

关键词 GST elisa 肝肿瘤

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中成药中黄曲霉毒素B_1含量测定方法的探讨 被引量：4

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作者 钱维清 潘维芳 《中国药品标准》 CAS 2000年第4期59-61,共3页

目的:考察中成药中污染黄曲霉毒素B_1(AFB_1)的情况,为制定标准和检测方法提供依据。方法:应用酶联免疫吸附分析法(ELISA)、薄层色谱法(TLC)对27个品种共44批霉菌检验不合格的中成药进行AFB。测定。结果:ELISA法检出率为100％,TLC法检... 目的:考察中成药中污染黄曲霉毒素B_1(AFB_1)的情况,为制定标准和检测方法提供依据。方法:应用酶联免疫吸附分析法(ELISA)、薄层色谱法(TLC)对27个品种共44批霉菌检验不合格的中成药进行AFB。测定。结果:ELISA法检出率为100％,TLC法检出率为36％。结论:证明两种方法检出率有较大差异。结论:(ELISA)法灵敏,准确,适合中成药中污染AFB_1的定量分析用。 展开更多

关键词 中成药 黄曲霉毒素B1 含量 测定

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毒死蜱残留检测间接竞争ELISA试剂盒的研制 被引量：4

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作者 魏松红 刘冰 +2 位作者 纪明山 谷祖敏 王英姿 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第4期246-249,共4页

在多克隆抗体的基础上研制一种适用于检测样品中毒死蜱残留的间接竞争酶联免疫吸附分析(ELISA)试剂盒,并对试剂盒的灵敏度、特异性、精密度、准确度和有效期进行测定。结果表明,研制的试剂盒最低检测限为0.5μg/L,线性检测范围为1.8～1... 在多克隆抗体的基础上研制一种适用于检测样品中毒死蜱残留的间接竞争酶联免疫吸附分析(ELISA)试剂盒,并对试剂盒的灵敏度、特异性、精密度、准确度和有效期进行测定。结果表明,研制的试剂盒最低检测限为0.5μg/L,线性检测范围为1.8～1000μg/L,供试样品检测结果的批内、批间变异系数均低于8%,回收率均高于85%。试剂盒在4℃或-20℃条件下至少可保存6个月。 展开更多

关键词 毒死蜱 残留 酶联免疫吸附分析 试剂盒

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