痰耐药结核分枝杆菌embB基因的快速检测及乙胺丁醇耐药机制研究 被引量：5

1

作者 杨松 张耀亭 《临床肺科杂志》 2009年第2期145-147,共3页

目的快速检测痰耐药结核分枝杆菌embB基因及了解乙胺丁醇(EMB)耐药的分子机制。方法用PCR方法直接从耐药肺结核患者痰及临床分离菌株扩增embB基因片段,对扩增获得的embB基因片段进行序列测定,比较分析全耐、对EMB敏感的耐多药、对EMB耐... 目的快速检测痰耐药结核分枝杆菌embB基因及了解乙胺丁醇(EMB)耐药的分子机制。方法用PCR方法直接从耐药肺结核患者痰及临床分离菌株扩增embB基因片段,对扩增获得的embB基因片段进行序列测定,比较分析全耐、对EMB敏感的耐多药、对EMB耐药的耐多药、全敏感或标准结核分枝杆菌株之间的基因序列差异。结果于6小时内从耐药肺结核痰中快速检测到embB基因。从所有临床分离菌株均扩增获得847bp片段,序列测定比较发现,全耐菌和对EMB耐药的耐多药菌株均检测有embB基因点突变,突变位点均为第306位密码子ATG突变为ACG,而全敏感株、对EMB敏感的耐多药菌株和标准菌株均未检测到基因突变。结论PCR及序列分析方法可快速、准确检测结核分枝杆菌embB基因及其突变,结核分枝杆菌对EMB的耐药性与embB基因点突变有关。 展开更多

关键词 耐药结核分枝杆菌 乙胺丁醇 embb基因 聚合酶链式反应

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膜反向斑点杂交技术检测结核分枝杆菌耐乙胺丁醇基因型 被引量：3

2

作者 陆阳 吴雪琼 +1 位作者 张俊仙 梁建琴 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期658-661,共4页

目的应用膜反向斑点杂交技术快速检测结核分枝杆菌对乙胺丁醇(EMB)耐药性。方法设计与合成用于检测结核分枝杆菌耐EMB基因embB的寡核苷酸探针,点于硝酸纤维素膜上,与结核分枝杆菌临床分离株生物素标记的聚合酶链反应(PCR)产物进行反向... 目的应用膜反向斑点杂交技术快速检测结核分枝杆菌对乙胺丁醇(EMB)耐药性。方法设计与合成用于检测结核分枝杆菌耐EMB基因embB的寡核苷酸探针,点于硝酸纤维素膜上,与结核分枝杆菌临床分离株生物素标记的聚合酶链反应(PCR)产物进行反向斑点杂交,并与PCR-直接测序(PCR-DS)结果比较。结果27株结核分枝杆菌临床分离株中,14株敏感株膜反向斑点杂交结果与标准株完全相同;13株耐乙胺丁醇临床分离株检测到embB基因突变,均为306位密码子ATG→GTG、ATG→CTG、ATG→ATA、ATG→ATT和ATG→ATC突变,该突变与直接测序结果完全一致。结论膜反向斑点杂交技术可能成为检测部分结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药基因型简便、快速的方法。 展开更多

关键词 膜反向斑点杂交 乙胺丁醇 embb基因 耐药性 结核分枝杆菌

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武汉地区结核分枝杆菌临床分离株乙胺丁醇耐药分子特征研究 被引量：4

3

作者 丁冰冰 马峻 +6 位作者 陈高瞻 刘志国 李睿 胡申才 郭利 余晓丽 张舒林 《武汉工业学院学报》 CAS 2013年第3期13-17,共5页

探讨武汉地区结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药基因embB的分子特征,为深入研究结核分枝杆菌乙胺丁醇(EMB)耐药分子机制、快速检测技术的建立和个体化临床用药奠定基础;同时探索武汉地区"北京基因型"菌株的传播类型,为结核防控提供参... 探讨武汉地区结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药基因embB的分子特征,为深入研究结核分枝杆菌乙胺丁醇(EMB)耐药分子机制、快速检测技术的建立和个体化临床用药奠定基础;同时探索武汉地区"北京基因型"菌株的传播类型,为结核防控提供参考。收集85株临床分离株,采用PCR直接测序法分析embB基因的突变特征;采用RD105基因缺失检测法鉴定85株分离株中"北京基因型"菌株。结果显示22例EMB耐药株中,15(68.2%)例在embB基因检测到突变,其中14例为306位点突变,突变类型为M306V ATG→GTG和M306I ATG→ATA,1例为319位点突变,突变类型为Y319C TAT→TGT;同时,在63例EMB敏感株中也检测到了5株(7.9%)发生了embB基因突变,其中4例在306位点,1例在319位点。85例临床分离株中78株为"北京基因型"菌株,占全部菌株的91.8%,非"北京基因型"菌株有7株,占8.2%。研究表明embB306位点突变不仅在乙胺丁醇耐药菌株中,而且在乙胺丁醇敏感菌株中也能检测到。由于乙胺丁醇耐药菌株同时还耐其他药物,故不能排除其他药物与embB306位点突变的关系,因此embB306位点突变与结核分枝杆菌耐药的相关性有待深入探讨。本研究发现武汉地区结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药株中embB基因突变类型并不存在地域差异,而在敏感株中却存在明显的地域差异性。本研究同时表明,"北京基因型"菌株在武汉地区呈主要流行趋势,应该引起我们的重视。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 乙胺丁醇(EMB) 耐药 embb基因 北京基因型

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宁波地区耐多药结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药embB基因突变研究 被引量：3

4

作者 车洋 杨天池 +1 位作者 平国华 林律 《中国预防医学杂志》 CAS CSCD 2018年第7期505-508,共4页

目的分析宁波地区耐多药结核分枝杆菌(multiple drug-resistant tuberculosis,MDR-TB)临床分离株的embB基因突变特征,探讨MDR-TB对乙胺丁醇(ethambutol,EMB)耐药的产生与embB基因突变的关系。方法采用比例法对MDR-TB临床分离株进行EMB... 目的分析宁波地区耐多药结核分枝杆菌(multiple drug-resistant tuberculosis,MDR-TB)临床分离株的embB基因突变特征,探讨MDR-TB对乙胺丁醇(ethambutol,EMB)耐药的产生与embB基因突变的关系。方法采用比例法对MDR-TB临床分离株进行EMB敏感性检测,应用DNA直接测序法检测MDR-TB的embB基因突变情况。结果 106株MDR-TB临床分离株中有49株(46.23%)对EMB耐药,57株(53.77%)对EMB敏感,59株(55.66%)发生了embB基因突变。在49株EMB耐药菌株中,embB基因突变的菌株为34株(69.39%),在57株EMB敏感菌株中,embB基因突变的菌株为25株(43.86%),EMB耐药菌株中的embB基因突变率高于敏感菌株(χ2=6.958,P<0.05)。embB基因突变类型有embB306,embB354,embB406,以embB306突变最多。embB306在EMB耐药菌株中的突变率高于EMB敏感菌株(χ2=6.275,P<0.05)。embB基因和embB306位点检测EMB耐药的敏感度、特异度和准确度分别为69.39%、56.14%、62.26%和61.22%、63.16%、62.26%。结论宁波地区MDR-TB对EMB耐药形势较为严峻,embB基因突变与MDR-TB对EMB耐药相关。 展开更多

关键词 耐多药结核分枝杆菌 乙胺丁醇 耐药 突变 embb基因

原文传递

embB基因突变与乙胺丁醇药敏表型及耐多药关系的研究 被引量：3

5

作者 刘厚明 曾敏 +7 位作者 李全 赵艳敏 邹婧 林牧 赵丹 肖颜玉 邓群益 单万水 《分子诊断与治疗杂志》 2017年第1期16-22,32,共8页

目的研究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)emb B306位点及其他突变位点与乙胺丁醇(ethambutol,EMB)的耐药表型及耐多药(multidrug resistant,MDR)的关系;分析emb B基因突变与EMB药敏表型及MDR的关系。方法对临床分离的MTB... 目的研究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)emb B306位点及其他突变位点与乙胺丁醇(ethambutol,EMB)的耐药表型及耐多药(multidrug resistant,MDR)的关系;分析emb B基因突变与EMB药敏表型及MDR的关系。方法对临床分离的MTB采用BD MGIT 960 SIRE试剂比例法进行药敏试验,取48株EMB耐药、46株EMB敏感但耐其他药及7株四药均敏感MTB提取核酸并扩增emb B基因全序列,对扩增产物进行测序分析emb B基因序列,与H37Rv标准株序列比对,分析emb B基因各突变位点、形式及频率。结果 101株MTB发现emb B基因序列上有17个不同位点突变形式。53株MTB在emb B基因序列上发生突变,其中46株为EMB耐药,7株为EMB敏感;emb B基因野生型的MTB有48株,其中2株为EMB耐药,46株为EMB敏感;emb B突变型与emb B野生型的MTB之间EMB耐药率有显著性差异(c2=68.95,P<0.01)。101株MTB中MDR有51株,其中有42株发生emb B突变,9株为emb B基因野生型,emb B基因突变率在MDR和非MDR之间有显著性差异(c2=36.9,P<0.01)。结论 emb B306位点与EMB耐药及MDR中度相关,emb B基因突变与EMB耐药及耐多药结核菌(multidrug resistant-Mycobacterium tuberculosis,MDR-TB)高度相关,emb B基因突变可作为MDR-TB的检测分子标记物,指导临床用药。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 embb基因 突变 乙胺丁醇 耐多药

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用DNA芯片检测结核分枝杆菌耐乙胺丁醇基因突变的研究 被引量：2

6

作者 张俊仙 吴雪琼 +8 位作者 张琼 梁建琴 张洪恩 鲁红利 李洪敏 陆阳 杨华卫 阳幼荣 王全立 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期225-228,共4页

目的利用DNA芯片快速检测结核分枝杆菌耐乙胺丁醇embB基因突变。方法根据结核分枝杆菌embB基因序列设计探针并制作DNA芯片,根据结核从分枝杆菌embB基因突变的热点片段设计引物,该片段用TAMRA荧光标记PCR扩增增后与DNA芯片杂交,同时以PCR... 目的利用DNA芯片快速检测结核分枝杆菌耐乙胺丁醇embB基因突变。方法根据结核分枝杆菌embB基因序列设计探针并制作DNA芯片,根据结核从分枝杆菌embB基因突变的热点片段设计引物,该片段用TAMRA荧光标记PCR扩增增后与DNA芯片杂交,同时以PCR—SSCP和DNA测序法为对照。结果120株结核分枝杆菌临床分离株中,35株敏感株DNA芯片杂交结果与标准株完全相同；85株耐乙胺丁醇临床分离株中有50株检测到embB基因突变[58．8％(50／85)],均为306位密码子突变,该突变与PCR-SSCP和测序结果完全一致；85株耐药株中后有35株未检测到突变,占41．2％(35／85)。结论用DNA芯片可快速、特异地检测出大多数结核分枝杆菌耐乙胺丁醇分离株的embB基因突变,可协助临床医生制定合理的治疗方案,特别是复治患者,可帮助选择有效药物。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 乙胺丁醇 embb基因 DNA芯片

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2005年和2015年结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药水平的变化 被引量：2

7

作者 文舒安 张婷婷 +7 位作者 霍凤敏 尚媛媛 梁倩 薛毅 李云絮 王芬 逄宇 黄海荣 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期1117-1121,共5页

目的探讨2005年和2015年结核分枝杆菌对乙胺丁醇(ethambutol,EMB)耐药水平和突变位点的变化情况以及不同突变类型与EMB耐药水平的关系。方法选取63株2005年、76株2015年的临床分离的耐多药结核分枝杆菌(MDR-TB)为研究对象,采用微孔板阿... 目的探讨2005年和2015年结核分枝杆菌对乙胺丁醇(ethambutol,EMB)耐药水平和突变位点的变化情况以及不同突变类型与EMB耐药水平的关系。方法选取63株2005年、76株2015年的临床分离的耐多药结核分枝杆菌(MDR-TB)为研究对象,采用微孔板阿尔玛蓝显色法(micro plate alamar blue assay,MABA)检测菌株对乙胺丁醇的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)。然后提取核酸并扩增embB基因全序列,对扩增产物进行测序并分析其突变位点。结果2005年和2015年MDR对EMB的耐药率无统计学差异(χ2=0.105,P=0.745),embB突变类型变化也无明显差别(χ2=9.410,P=0.124)。2005年选取的菌株中,对EMB耐药的有57株,耐药率为90.48%。2015年选取的菌株中对EMB耐药的有71株,耐药率为93.42%。139株MDR中发现embB基因序列上有9个不同位点突变形式,embB突变型合计99株,占所有MDR的71.22%,野生型40株,占所有MDR的28.78%。突变型对EMB的耐药率为99%,野生型对EMB耐药率为75%。结论embB基因和embB306基因对检测EMB耐药有一定的参考价值。 展开更多

关键词 耐多药结核分枝杆菌 乙胺丁醇 embb基因 突变

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TDI-FP技术检测耐乙胺丁醇结核分支杆菌embB306点突变 被引量：1

8

作者 王琰 张文红 +2 位作者 赵锦荣 白玉杰 阎小君 《中国实验诊断学》 2004年第5期455-458,共4页

目的　应用TDI FP技术分析结核分支杆菌embB 30 6点突变与乙胺丁醇耐药性的关系 ,并建立一种准确、快速的诊断结核分支杆菌乙胺丁醇耐药的新方法。方法　对临床 82例耐多药结核病患者所感染的结核分支杆菌菌株进行常规培养和药敏实验 ;... 目的　应用TDI FP技术分析结核分支杆菌embB 30 6点突变与乙胺丁醇耐药性的关系 ,并建立一种准确、快速的诊断结核分支杆菌乙胺丁醇耐药的新方法。方法　对临床 82例耐多药结核病患者所感染的结核分支杆菌菌株进行常规培养和药敏实验 ;提取结核分支杆菌DNA ,并PCR扩增 2 0 5bp的embB基因片段 ,消化降解掉PCR产物中残余的dNTPs和引物 ,进行模板指导的荧光标记终止碱基掺入反应 ;应用Victor2测定反应产物的荧光偏振值 ,分析所有样品的embB基因 30 6位点的基因型 ;对分析结果进行测序验证。结果　 5例乙胺丁醇高度耐药患者中有 3例所感染的结核分支杆菌发生embB 30 6的ATG→GTG突变 ;4 7例乙胺丁醇低度耐药患者中有 15例为embB 30 6突变和未突变的混合感染 ;30例乙胺丁醇敏感患者的结核分支杆菌未发现embB 30 6突变。测序结果与实验相符合。结论　embB 30 6突变与结核分支杆菌对乙胺丁醇产生耐药性密切有关 ;应用TDI FP技术可以准确、快速简便检测embB 30 6突变 ,在结核分支杆菌耐乙胺丁醇的临床诊断中具有潜在的应用前景。 展开更多

关键词 结核分支杆菌 embb基因 突变 TDI-FP技术

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河南省耐药结核分枝杆菌embB 306密码子突变特征研究 被引量：1

9

作者 邢进 赵玉玲 《中国卫生检验杂志》 北大核心 2014年第15期2260-2262,共3页

目的了解河南省耐药结核分枝杆菌临床分离株乙胺丁醇(EMB)耐药相关基因embB 306的突变情况及不同耐药谱菌株的embB 306基因的突变特征。方法选择2007年-2010年河南省临床分离结核分枝杆菌,经比例法药敏试验,筛选出155株耐药菌株,13株敏... 目的了解河南省耐药结核分枝杆菌临床分离株乙胺丁醇(EMB)耐药相关基因embB 306的突变情况及不同耐药谱菌株的embB 306基因的突变特征。方法选择2007年-2010年河南省临床分离结核分枝杆菌,经比例法药敏试验,筛选出155株耐药菌株,13株敏感菌株,PCR扩增embB 306基因片段,并进行测序分析,对MDR株、XDR株、一线药物全耐株、对EMB耐药的耐药株、EMB敏感耐药株、全敏感株等不同耐药谱的结核分枝杆菌的embB 306基因突变的差异进行分析。结果扩增均获得202 bp片段,经序列测定比较,全耐药株和对EMB耐药的耐多药菌株中均检测到embB 306密码子的点突变,由ATG突变为ACG;对EMB敏感的耐多药菌株中,有2株检测到embB 306的突变;而在全敏感株中,未检测到基因突变。结论结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药相关基因embB 306突变与耐多药(MDR)特别是广泛耐药(XDR)有相关性,但embB 306突变不一定导致EMB耐药。 展开更多

关键词 耐药 结核分枝杆菌 乙胺丁醇 embb 306 基因突变

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套式PCR在检测结核分枝杆菌embB基因突变中的应用价值 被引量：1

10

作者 刘珍琼 熊国亮 +2 位作者 辛茶香 涂荣跃 涂少华 《江西医学院学报》 2006年第6期51-52,共2页

目的采用套式PCR(二次扩增)替代传统PCR(一次扩增)扩增痰中结核分枝杆菌embB基因,探讨其在检测结核分枝杆菌embB基因突变中的应用价值。方法选取本院已确诊的活动性肺结核住院病人68例和非结核肺部感染病人16例,嘱其留取晨痰,分别进行套... 目的采用套式PCR(二次扩增)替代传统PCR(一次扩增)扩增痰中结核分枝杆菌embB基因,探讨其在检测结核分枝杆菌embB基因突变中的应用价值。方法选取本院已确诊的活动性肺结核住院病人68例和非结核肺部感染病人16例,嘱其留取晨痰,分别进行套式PCR扩增和传统PCR扩增,再行产物分析。结果68例活动性肺结核病人传统PCR扩增embB基因阳性结果为29例,阳性率为42.6%,套式PCR扩增embB基因阳性结果为47例,阳性率为69.1%,两者比较差异有显著性(χ2=9.66,P<0.05);16例非结核病人传统PCR和套式PCR和检测结果均为阴性,两者特异度均为100%。结论检测结核分枝杆菌embB基因突变,套式PCR灵敏度高于传统PCR,两者特异度相同,套式PCR能快速、敏感、特异地扩增结核分枝杆菌embB基因片段。 展开更多

关键词 结核 分枝杆菌 embb基因 套式PCR 传统PCR

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结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药与embB基因突变的相关性研究 被引量：1

11

作者 李薇 薛欣 +3 位作者 楚雍烈 邱奕 宋娟 郑建武 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期506-508,共3页

目的分析西安地区耐乙胺丁醇(EMB)结核杆菌临床分离株embB基因突变的特点,建立快速检测结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药性的方法。方法应用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测104... 目的分析西安地区耐乙胺丁醇(EMB)结核杆菌临床分离株embB基因突变的特点,建立快速检测结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药性的方法。方法应用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测104株结核分枝杆菌临床分离株的embB基因。结果以H37Rv标准株为对照,35株药物敏感株的SSCP和RFLP分析结果均与标准株一致,不存在突变;69株耐乙胺丁醇分离株中,39株(56.52%)SSCP泳动与标准株不一致,存在基因异常;19株(27.54%)RFLP分析存在基因异常。结论西安地区结核杆菌临床分离株对乙胺丁醇耐药与embB基因(尤其是306位密码子)突变有关,PCR-SSCP和PCR-RFLP技术可快速、准确地检测结核分枝杆菌对EMB的耐药性。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 耐药 基因突变 embb基因

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重庆市结核患者耐药结核杆菌embB306分子突变特征研究 被引量：1

12

作者 林辉 刘洁 +7 位作者 陈林 靖宽和 沈静 詹建 李亚斐 许汝福 熊鸿燕 曹佳 《中华预防医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期223-226,共4页

目的了解重庆结核杆菌的embB306突变特征，评价其作为诊断乙胺丁醇（ethambutol，EMB）耐药结核杆菌分子标记物的临床应用价值。方法采用DNA测序方法分析重庆市结核患者痰中分离的51株EMB耐药结核杆菌和50株EMB敏感株的embB基因突变特... 目的了解重庆结核杆菌的embB306突变特征，评价其作为诊断乙胺丁醇（ethambutol，EMB）耐药结核杆菌分子标记物的临床应用价值。方法采用DNA测序方法分析重庆市结核患者痰中分离的51株EMB耐药结核杆菌和50株EMB敏感株的embB基因突变特征，与传统药敏实验进行诊断学试验评价embB306突变作为EMB耐药株分子标记物的临床应用价值。结果embB306突变率在51株EMB耐药和50株敏感结核杆菌中分别为75．5％、6％；其中来自复治病例的EMB耐药菌株的embB306突变率是87．5％，高于来自初治病例的48．1％；embB306突变率随菌株耐药数量增加而升高，embB306在EMB耐药的耐多药菌株（Multidrug—Resistant Tuberculosis，MDR．TB）中的突变率高于EMB耐药的非MDR—TB和EMB敏感的MDR—TB的突变率；以embB306突变诊断EMB耐药菌株的诊断学试验评价主要指标为：灵敏度为66．7％；特异度为94．0％；准确度为80．2％；Youden指数为60．7％。结论embB306突变是重庆地区结核杆菌产生EMB耐药性的主要分子机制，且与耐药数量和治疗时间有关，其作为EMB耐药菌株诊断的分子标记物具有一定临床应用价值。 展开更多

关键词 分支杆菌 结核 乙胺丁醇 基因 embb 抗药性

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脓肿分支枝杆菌embB基因耐乙胺丁醇的分析 被引量：1

13

作者 吴正吉 杨致邦 +3 位作者 于拽拽 熊玉霞 张渝成 邓西川 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2012年第4期307-310,共4页

目的分析脓肿分支枝杆菌的embB基因,以探讨其耐乙胺丁醇的分子机制。方法用16S rRNA基因序列分析法鉴定5株脓肿分枝杆菌临床株,测定乙胺丁醇对临床株及标准株(ATCC 19977)的最低抑菌浓度(MIC)。PCR扩增embB基因的全序列,将所测序列进行... 目的分析脓肿分支枝杆菌的embB基因,以探讨其耐乙胺丁醇的分子机制。方法用16S rRNA基因序列分析法鉴定5株脓肿分枝杆菌临床株,测定乙胺丁醇对临床株及标准株(ATCC 19977)的最低抑菌浓度(MIC)。PCR扩增embB基因的全序列,将所测序列进行生物信息学分析。结果乙胺丁醇对5株脓肿分支杆菌标准株和临床株的MIC均为128μg/mL,属高度耐药。从脓肿分支枝杆菌的标准株和临床株均扩增出约3 200 bp片段,与GenBank中脓肿分支枝杆菌标准株的embB基因大小一致。5株临床株与标准株比较,其核苷酸序列存在9个点突变,在突变位点所编码的氨基酸序列中,仅第18位、87位、770位密码子编码与标准株不同的氨基酸。6株脓肿分支枝杆菌的embB基因与对EMB敏感的结核分支杆菌标准株(H37RV)的相应基因序列比较,第303-305位密码子的核苷酸序列存在差异,但仅第303、304位核苷酸编码的氨基酸序列不同,第306位密码子的核苷酸序列无差异。结论脓肿分支杆菌对乙胺丁醇的耐药并非embB基因的突变所致,为embB基因天然存在结构的不同,属于天然耐药。结构的差异与第306位密码子无关,可能与第303、304密码子有关。 展开更多

关键词 脓肿分支杆菌 乙胺丁醇 耐药性 embb基因

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2005年和2015年结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药水平的变化

14

作者 文舒安 张婷婷 +7 位作者 霍凤敏 尚媛媛 梁倩 薛毅 李云絮 王芬 逄宇 黄海荣 《结核病与胸部肿瘤》 2020年第2期120-124,共5页

目的探讨2005年和2015年结核分枝杆菌对乙胺丁醇(ethambutol,EMB)耐药水平和突变位点的变化情况以及不同突变类型与EMB耐药水平的关系。方法选取63株2005年、76株2015年的临床分离的耐多药结核分枝杆菌(MDR-TB)为研究对象,采用微孔板阿... 目的探讨2005年和2015年结核分枝杆菌对乙胺丁醇(ethambutol,EMB)耐药水平和突变位点的变化情况以及不同突变类型与EMB耐药水平的关系。方法选取63株2005年、76株2015年的临床分离的耐多药结核分枝杆菌(MDR-TB)为研究对象,采用微孔板阿尔玛蓝显色法(micro plate alamar blue assay,MABA)检测菌株对乙胺丁醇的最小抑菌浓度(mininmum inhibitory concentration,MIC)。然后提取核酸并扩增embB基因全序列,对扩增产物进行测序并分析其突变位点。结果2005年和2015年MDR对EMB的耐药率无统计学差异(x^2=0.105,P=0.745),embB突变类型变化也无明显差别(x^2=9.410,P=0.124)。2005年选取的菌株中,对EMB耐药的有57株,耐药率为90.48%。2015年选取的菌株中对EMB耐药的有71株,耐药率为93.42%。139株MDR中发现embB基因序列上有9个不同位点突变形式,embB突变型合计99株,占所有MDR的71.22%,野生型40株,占所有MDR的28.78%。突变型对EMB的耐药率为9%,野生型对EMB耐药率为75%。结论embB基因和embB306基因对检测EMB耐药有一定的参考价值。 展开更多

关键词 耐多药结核分枝杆菌 乙胺丁醇 embb基因 突变.

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结核分枝杆菌耐乙胺丁醇分离株emb B基因突变研究 被引量：4

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作者 顾德林 石彩芳 +2 位作者 陈俊林 施军卫 施慧慧 《临床肺科杂志》 2010年第11期1556-1558,共3页

目的探讨结核分枝杆菌对乙胺丁醇(EMB)产生耐药的分子机制,建立直接快速检测结核分枝杆菌EMB药物敏感性的实验方法。方法采用聚合酶链反应(PCR)扩增技术对临床耐乙胺丁醇结核分枝杆菌进行PCR扩增,扩增产物经纯化后,直接进行DNA测序分析... 目的探讨结核分枝杆菌对乙胺丁醇(EMB)产生耐药的分子机制,建立直接快速检测结核分枝杆菌EMB药物敏感性的实验方法。方法采用聚合酶链反应(PCR)扩增技术对临床耐乙胺丁醇结核分枝杆菌进行PCR扩增,扩增产物经纯化后,直接进行DNA测序分析。结果 54例临床分离株中,19例为EMB敏感株,35例为EMB耐药株。35例耐药株中13例(37.1%)发生基因突变。13例基因突变皆为错义突变,且有1例同时发生310位和313位突变。结论 embB306位氨基酸Met被置换是结核分枝杆菌对乙胺丁醇产生耐药性的重要机制,测序分析可以确认耐药基因的突变位点,是快速检测耐乙胺丁醇结核分枝杆菌的快速、有效的方法。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 乙胺丁醇 药物耐受 embb基因 DNA序列分析

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乙胺丁醇耐药基因embB突变的杂交荧光显微观测 被引量：2

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作者 陈庆海 黄君富 +3 位作者 府伟灵 张雪 匡红 王珂 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1509-1512,共4页

目的针对耐乙胺丁醇(EMB)的结核分枝杆菌embB303密码子位点,设计扩增引物及特异性发夹DNA探针其相应的单侧延长臂发夹DNA探针,建立发夹DNA探针芯片技术,并运用荧光显微镜观测发夹DNA探针与扩增产物的杂交荧光信号。方法运用Beacon desig... 目的针对耐乙胺丁醇(EMB)的结核分枝杆菌embB303密码子位点,设计扩增引物及特异性发夹DNA探针其相应的单侧延长臂发夹DNA探针,建立发夹DNA探针芯片技术,并运用荧光显微镜观测发夹DNA探针与扩增产物的杂交荧光信号。方法运用Beacon designer软件,设计embB基因包含303密码子的发夹DNA探针,荧光显微镜检测embB303密码子扩增片段与发夹DNA探针杂交后荧光信号,扩增产物测序结果作比较。结果通过荧光显微镜观测到结核标准株及embB303密码子突变株PCR产物与探针杂交后荧光信号存在显著差异;33株耐EMB组与10株H37RV标准株对照组荧光信号强度比较,耐EMB组embB303密码子突变检出率为7%,测序法突变检出率为6%。结论应用荧光显微镜可以高灵敏观测发夹DNA探针与靶序列的杂交荧光信号,从而有效检测单碱基突变;embB303密码子点突变不是结核分枝杆菌耐EMB的主要原因。 展开更多

关键词 耐EMB embb基因 发夹DNA探针 303密码子 荧光显微镜

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运用于embB 285 codon点突变的分子探针设计及检测研究 被引量：2

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作者 陈庆海 匡红 +3 位作者 府伟灵 张波 华兴 钟敏 《四川医学》 CAS 2008年第12期1597-1599,共3页

目的探讨单碱基靶点分子探针设计模型,并应用设计的分子信标探针检测结核杆菌耐乙胺丁醇embB285 codon点突变,并与测序结果比较以验证。方法运用软件Beacon designer设计embB基因包含285 codon的分子信标,应用荧光分光光度计检测embB 28... 目的探讨单碱基靶点分子探针设计模型,并应用设计的分子信标探针检测结核杆菌耐乙胺丁醇embB285 codon点突变,并与测序结果比较以验证。方法运用软件Beacon designer设计embB基因包含285 codon的分子信标,应用荧光分光光度计检测embB 285 codon扩增片段与探针杂交后荧光信号,同时对扩增产物测序并作比较。结果通过荧光分光光度计观测到结核标准株及耐乙胺丁醇embB 285 codon PCR产物与分子信标杂交后荧光信号差异存在统计学意义;33株耐乙胺丁醇组与10株H37RV标准株对照组荧光信号强度比较,耐乙胺丁醇组embB 285 codon突变检出率为15%,测序法突变检出率为15%。结论分子信标技术对单碱基靶点突变具有较高的检出率;应用荧光分光光度计直接检测液相杂交荧光具灵敏、简单、准确等优点。 展开更多

关键词 耐乙胺丁醇embb基因 285密码子点突变 分子信标 荧光分光光度计

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结核分枝杆菌Emb330codon分子信标杂交及荧光显微观测 被引量：1

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作者 陈庆海 刘星 +3 位作者 黄君富 罗阳 匡红 府伟灵 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第14期1908-1910,共3页

目的设计结核分枝杆菌耐乙胺丁醇embB330codon位点分子信标,运用荧光显微镜观测分子DNA探针与embB330codon扩增产物杂交后的荧光信号,比较该位点突变株与标准株。方法运用软件Beacondesigner设计embB基因包含330codon的分子信标,应用荧... 目的设计结核分枝杆菌耐乙胺丁醇embB330codon位点分子信标,运用荧光显微镜观测分子DNA探针与embB330codon扩增产物杂交后的荧光信号,比较该位点突变株与标准株。方法运用软件Beacondesigner设计embB基因包含330codon的分子信标,应用荧光显微镜检测embB330codon扩增片段与探针杂交后荧光信号,比较扩增产物测序结果。结果通过荧光显微镜观测到结核标准株及embB330codon突变株PCR产物与探针杂交后荧光信号差异有统计学意义;33株耐乙胺丁醇组与10株H37RV标准株对照组荧光信号强度比较,耐乙胺丁醇组embB330codon突变检出率为3%,测序法突变检出率为3%。结论分子信标技术可以有效检测embB330codon单碱基靶点突变;应用荧光显微镜观测荧光杂交信号非常灵敏。 展开更多

关键词 耐乙胺丁醇embb基因 330密码子点突变 分子信标 荧光显微镜

原文传递

发夹DNA探针检测乙胺丁醇耐药结核杆菌embB基因306密码子突变研究 被引量：1

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作者 陈庆海 府伟灵 +3 位作者 薛强 张雪 华兴 匡红 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期135-138,共4页

目的:针对结核杆菌耐乙胺丁醇embB306codon位点,设计发夹DNA探针及其相应的单侧延长臂发夹DNA探针,建立发夹DNA探针芯片技术,并初步运用荧光显微镜观测探针与扩增产物杂交的荧光信号。方法:运用Beacondesigner软件,设计embB基因包含306c... 目的:针对结核杆菌耐乙胺丁醇embB306codon位点,设计发夹DNA探针及其相应的单侧延长臂发夹DNA探针,建立发夹DNA探针芯片技术,并初步运用荧光显微镜观测探针与扩增产物杂交的荧光信号。方法:运用Beacondesigner软件,设计embB基因包含306codon的发夹DNA探针及其相应的单侧延长臂发夹DNA探针,荧光显微镜检测embB306codon扩增片段与探针杂交后荧光信号,比较扩增产物测序结果。结果:通过荧光显微镜观测到结核标准株及embB306codon突变株PCR产物与探针杂交后荧光信号存在显著差异;33株耐乙胺丁醇组与10株H37RV标准株对照组荧光信号强度比较,耐乙胺丁醇组embB306codon突变检出率为66%,测序法突变检出率为69%。结论:embB306codon点突变是结核杆菌耐乙胺丁醇的主要原因;发夹DNA探针芯片技术可以有效检测单碱基靶点突变;应用荧光显微镜可以高灵敏地观测荧光芯片杂交靶点。 展开更多

关键词 耐乙胺丁醇embb基因 306密码子点突变 发夹DNA探针 荧光显微镜

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EmbB303codon突变检测的液相荧光观测研究 被引量：1

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作者 陈庆海 匡红 +3 位作者 府伟灵 黄君富 华兴 汪广杰 《西部医学》 2009年第3期366-369,共4页

目的设计针对结核杆菌耐乙胺丁醇embB303codon的分子信标,尝试运用荧光分光光度计直接观测液相中分子信标与embB303codon扩增产物杂交后的荧光信号,从而检出该位点突变。方法运用软件Beacon designer设计embB基因包含303codon的分子信标... 目的设计针对结核杆菌耐乙胺丁醇embB303codon的分子信标,尝试运用荧光分光光度计直接观测液相中分子信标与embB303codon扩增产物杂交后的荧光信号,从而检出该位点突变。方法运用软件Beacon designer设计embB基因包含303codon的分子信标,应用荧光分光光度计检测embB303codon扩增片段与探针杂交后荧光信号,同时对扩增产物测序并作比较。结果通过荧光分光光度计观测到结核标准株及耐乙胺丁醇embB303codonPCR产物与分子信标杂交后荧光信号存在显著差异;33株耐乙胺丁醇组与10株H37RV标准株对照组荧光信号强度比较,耐乙胺丁醇组embB303codon突变检出率为6%,测序法突变检出率为6%。结论embB303codon点突变不是结核杆菌耐乙胺丁醇的主要原因;应用荧光分光光度计直接检测液相杂交荧光具有简单、灵敏等优点;分子信标技术可以有效检测单碱基靶点突变。 展开更多

关键词 耐乙胺丁醇embb基因 303密码子点突变 分子信标 荧光分光光度计

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