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以四氢嘧啶为主要相容性溶质的中度嗜盐菌I15的分离和特性研究 被引量：21
1
作者 何健 汪婷 +2 位作者 孙纪全 顾立锋 李顺鹏 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期900-904,共5页
从草地土壤中分离到一株中度嗜盐菌I15,经过16SrDNA(GenBank登录号为DQ010162)序列分析、形态学和生理生化特征分析,该菌株初步鉴定为Virgibacillusmarismortui。I15能在0%～25%NaCl的培养基中生长,最适生长NaCl浓度为10%,最适生长温度... 从草地土壤中分离到一株中度嗜盐菌I15,经过16SrDNA(GenBank登录号为DQ010162)序列分析、形态学和生理生化特征分析,该菌株初步鉴定为Virgibacillusmarismortui。I15能在0%～25%NaCl的培养基中生长,最适生长NaCl浓度为10%,最适生长温度为30℃,最适pH为7.5～8.0。在高盐条件下,I15细胞内主要的相容性溶质为四氢嘧啶,在15%NaCl培养基中其含量达到1.608mmol(g·cdw),占到相容性溶质总摩尔含量的89.6%。渗透冲击试验表明I15细胞内四氢嘧啶在低渗冲击时能够快速分泌到细胞外,在高渗冲击冲剂时能够较快地重新合成。 展开更多
关键词 中度嗜盐菌 相容性溶质 四氢嘧啶 细菌泌乳工艺
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高效液相色谱检测青海湖嗜盐菌胞内积聚的相溶物质四氢嘧啶 被引量：15
2
作者 李耀东 龙启福 +4 位作者 李文军 芮豪辰 刘建 杨芳 朱德锐 《环境化学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期1687-1692,共6页
从20份青海湖水样中,分离获得了35株中度嗜盐菌株.耐盐梯度实验表明:水体中以中度嗜盐菌为主,约占65.7%;弱嗜盐菌次之,约占25.7%;非嗜盐菌与耐盐菌相对较少,约占8.5%.采用80%乙醇法抽提中度嗜盐菌胞内的Ectoine,利用TLC和HPLC分析,结果... 从20份青海湖水样中,分离获得了35株中度嗜盐菌株.耐盐梯度实验表明:水体中以中度嗜盐菌为主,约占65.7%;弱嗜盐菌次之,约占25.7%;非嗜盐菌与耐盐菌相对较少,约占8.5%.采用80%乙醇法抽提中度嗜盐菌胞内的Ectoine,利用TLC和HPLC分析,结果表明:青海湖中度嗜盐菌中,大多数胞内积聚相溶物质Ectoine;在最适生长盐度下,中度嗜盐菌QHL1、QHL5、QHL10、QHL26和QHL28的胞内Ectoine含量分别为258.6μg·mL-1、325.47μg·mL-1、208.8μg·mL-1、292.31μg·mL-1和295.13μg·mL-1,以此初步获得5株具有Ectoine高产潜力的野生菌株. 展开更多
关键词 青海湖 中度嗜盐菌 相溶物质 ectoine HPLC法
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中度嗜盐菌DTY1的鉴定及其耐盐机制的初步分析 被引量：14
3
作者 张薇 胡跃高 +1 位作者 张力群 高洪文 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期956-960,共5页
菌株DTY1分离自山西省五寨县柠条种植区盐碱土壤，可在0-1．2mol／L NaCl的浓度培养基上生长，最适生长温度32℃，最适pH7-10。通过形态观察，生理生化测定与16S rDNA序列分析，将该菌株鉴定为嗜碱芽孢杆菌（Bacillus alcalophilus）。... 菌株DTY1分离自山西省五寨县柠条种植区盐碱土壤，可在0-1．2mol／L NaCl的浓度培养基上生长，最适生长温度32℃，最适pH7-10。通过形态观察，生理生化测定与16S rDNA序列分析，将该菌株鉴定为嗜碱芽孢杆菌（Bacillus alcalophilus）。高压液相色谱分析，DTY1菌株在常规LB培养液中能够产生1．40mg／g四氢嘧啶，且在最适盐浓度条件下，盐浓度越高单位干重菌体所产生的四氢嘧啶含量越高。通过PCR介导的方法从DTY1的基因组文库中克隆到四氢嘧啶合成基因ectB。该基因长度为1284bp，编码427个氨基酸的肽链。此肽链与B．halodurans C-125 （BABO4638）中二氨基丁酸氨基转移酶同源性达81％。ectB基因可能存在典型的σ^70启动子，而且在启动子间有一段明显的23bp的回文序列。 展开更多
关键词 BACILLUS alcalophilus 16S RDNA 四氢嘧啶 中度嗜盐菌
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一株中度嗜盐菌Halomonas sp.NY-011的耐盐特性及机理 被引量：16
4
作者 王魁荣 张树军 +2 位作者 李少贺 桑小雪 白林含 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期256-260,共5页
对本实验室分离到的一株中度嗜盐菌Halomonas sp.NY-011的耐盐特性和耐盐机理进行了初步研究.NY-011在LB培养基中最大能耐受260g/LNaCl浓度,在M63培养基中能耐受大于150g/LNaCl浓度.Cl-的缺少对NY-011的耐盐生长有明显抑制,K+较Li+和Mg2... 对本实验室分离到的一株中度嗜盐菌Halomonas sp.NY-011的耐盐特性和耐盐机理进行了初步研究.NY-011在LB培养基中最大能耐受260g/LNaCl浓度,在M63培养基中能耐受大于150g/LNaCl浓度.Cl-的缺少对NY-011的耐盐生长有明显抑制,K+较Li+和Mg2+更适合于为NY-011提供内部渗透压力.NY-011通过在胞内积累K+、游离氨基酸及其他相容性溶质对抗胞外渗透压力.NY-011胞内相容性溶质组成随培养基NaCl浓度变化而变化,四氢嘧啶是最主要的组成成分,含量随培养基NaCl浓度增加而增加,120g/LNaCl时浓度可达到71.5mg/g干重.NY-011还可吸收胞外的四氢嘧啶和甜菜碱以平衡外界高渗透压.随着培养基中NaCl浓度的提高,NY-011菌体蛋白的合成受到明显抑制. 展开更多
关键词 盐单胞菌属 中度嗜盐菌 耐盐特性 耐盐机理 相容性溶质 四氢嘧啶
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Ectoine高产菌株Halomonas sp.XH26的鉴定及紫外诱变选育 被引量：13
5
作者 田磊 张芳 +3 位作者 沈国平 高翔 龙启福 朱德锐 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期31-35,共5页
通过紫外线诱变小柴旦盐湖盐单胞菌菌株Halomonas sp.XH26,以获得高产Ectoine的突变株,为工程生产Ectoine提供优良的发酵菌源。采用形态学观察、生理生化试验及16S rRNA基因测序分析明确菌株的分类地位。紫外诱变筛选Ectoine产量超过原... 通过紫外线诱变小柴旦盐湖盐单胞菌菌株Halomonas sp.XH26,以获得高产Ectoine的突变株,为工程生产Ectoine提供优良的发酵菌源。采用形态学观察、生理生化试验及16S rRNA基因测序分析明确菌株的分类地位。紫外诱变筛选Ectoine产量超过原始菌株2倍以上的正向突变菌株,HPLC测定胞内Ectoine产量,并对突变株进行连续培养,研究Ectoine的产量稳定性。实验结果显示:原始菌株XH26(Ectoine优化产量456.82 mg/L±15.72 mg/L,CDW 0.71 g/g±0.04 g/g),经9轮紫外循环诱变处理后(50 s为最佳诱变时间),获得7株高产Ectoine突变菌,Ectoine产量均大幅提高(约200%)。其中,积聚量最大的菌株HU09-32,产量可达1351.09 mg/L±17.69 mg/L(增幅290%),将7株突变菌连续培养40 d(接种2 d/次),胞内Ectoine产量稳定,生长特性、增殖速度与积聚量明显优于原始菌株XH26,具有很好的发酵生产和工业应用潜力。 展开更多
关键词 盐单胞菌 ectoine 紫外诱变 积聚量 突变育种
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一株产脂肪酶嗜盐菌的鉴定及耐盐机理 被引量：13
6
作者 张晓梅 窦文芳 +1 位作者 许泓瑜 许正宏 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期100-103,共4页
从采自内蒙古锡林浩特地区盐湖的样品中筛选到产脂肪酶嗜盐菌JNPH-3,该菌株可在含有1.5～5mol/L NaCl的培养基上生长,最适生长温度45℃,最适pH7～9.5.经形态学分析、生理生化实验及16SrDNA鉴定,JNPH-3菌株为Halorubrum aidingense,属于... 从采自内蒙古锡林浩特地区盐湖的样品中筛选到产脂肪酶嗜盐菌JNPH-3,该菌株可在含有1.5～5mol/L NaCl的培养基上生长,最适生长温度45℃,最适pH7～9.5.经形态学分析、生理生化实验及16SrDNA鉴定,JNPH-3菌株为Halorubrum aidingense,属于极端嗜盐菌.JNPH-3菌株在生长过程中专一性依赖Na+,对Cl-依赖性较小,K+浓度变化对菌体生长无明显影响.高效液相色谱分析表明,JNPH-3菌株在液体复合培养基中能够产生四氢嘧啶,且与环境中盐浓度呈负相关,说明JNPH-3体内除存在产生四氢嘧啶的机制来维持渗透平衡,还有其它机制来维持细胞正常生长. 展开更多
关键词 菌种鉴定 Halorubrum aidingense 脂肪酶 极端嗜盐菌 四氢嘧啶
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天然产物Ectoine与Hydroxyectoine的生物工程及医学应用研究进展 被引量：12
7
作者 张欣 刘静 朱德锐 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期882-887,共6页
四氢嘧啶及衍生物(Ectoines,Ects)是嗜盐或耐盐细菌胞内合成的一类能够抵抗外界高盐胁迫的有机相容溶质(Compatible solute),主要包括四氢嘧啶(Ectoine)与羟基化四氢嘧啶(5-hydroxyectoine,5-HE)。在高温、干旱、高pH值、高压和高盐等... 四氢嘧啶及衍生物(Ectoines,Ects)是嗜盐或耐盐细菌胞内合成的一类能够抵抗外界高盐胁迫的有机相容溶质(Compatible solute),主要包括四氢嘧啶(Ectoine)与羟基化四氢嘧啶(5-hydroxyectoine,5-HE)。在高温、干旱、高pH值、高压和高盐等极端环境条件下,Ects不仅能够平衡细胞的渗透压,而且对蛋白质、DNA、细胞膜以及整个细胞提供抗逆协助作用。本文综述了Ects对生物大分子和细胞的保护与稳定作用,以及在临床疾病治疗应用方面的辅助作用,并讨论与展望了Ects在生物医药制剂和生物保健开发等方面的应用前景。 展开更多
关键词 ectoine 羟基化四氢嘧啶 有机相容溶质 生物工程 医学应用
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青海湖嗜盐菌的分离与优势菌株QHL5的特性 被引量：11
8
作者 朱德锐 刘建 +4 位作者 刘静静 沈国平 龙启福 高翔 刘德立 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期797-803,共7页
采用高盐选择性培养基从20份青海湖水样中筛选分离获得35株青海湖嗜盐微生物.耐盐梯度实验分析表明:水体中以中度嗜盐菌为主,约占65.7%;弱嗜盐菌次之,约占25.7%;非嗜盐菌与耐盐菌相对较少,约占8.5%.其中优势菌QHL5的生长盐度耐受范围为0... 采用高盐选择性培养基从20份青海湖水样中筛选分离获得35株青海湖嗜盐微生物.耐盐梯度实验分析表明:水体中以中度嗜盐菌为主,约占65.7%;弱嗜盐菌次之,约占25.7%;非嗜盐菌与耐盐菌相对较少,约占8.5%.其中优势菌QHL5的生长盐度耐受范围为0.04～3.0 mol/L,最适生长范围为0.3～0.9 mol/L,隶属于中度嗜盐菌.菌体形态和生长特性分析表明:QHL5菌落大小为4～6 mm,圆形或椭圆形,边缘整齐厚实,乳白色,中间微隆起,不透明,革兰氏染色阴性.显微形态呈杆状,最适生长pH为8.5～9.5,最适生长温度为35℃.生理生化、16S rRNA的全序列Blast和系统发育分析表明:QHL5菌株分类定位于γ变形菌纲海洋螺菌目盐单胞菌属樊氏盐单胞菌(Halomonas ventosae).通过80%乙醇法抽提胞内相溶物质,采用TLC法检测出该菌积聚四氢嘧啶. 展开更多
关键词 青海湖 中度嗜盐菌 分子鉴定 樊氏盐单胞菌 TLC法 四氢嘧啶
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一株中度嗜盐菌SL21合成Ectoine的研究 被引量：7
9
作者 周月慧 张苓花 +2 位作者 王飞 永田进一 王运吉 《河南工业大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2006年第2期81-85,共5页
从大连市普兰店盐场盐池淤泥中筛选出一株中度嗜盐细菌SL 21,对其进行形态和分子生物学鉴定.运用16 S rDNA技术建立SL 21系统发育树.该菌株为革兰氏阴性细菌,短杆状,最适生长NaCl浓度是10%.以其16S rDNA序列相似性为基础构建了包括7种... 从大连市普兰店盐场盐池淤泥中筛选出一株中度嗜盐细菌SL 21,对其进行形态和分子生物学鉴定.运用16 S rDNA技术建立SL 21系统发育树.该菌株为革兰氏阴性细菌,短杆状,最适生长NaCl浓度是10%.以其16S rDNA序列相似性为基础构建了包括7种相关种属在内的系统发育树.结果表明,SL 21与Halomonas venusta的同源性达到99%以上,应归属于盐单胞菌属.研究了中度嗜盐菌SL21的渗透压补偿溶质(Ectoine)的生成及生成条件.用含2 mol.L-1NaCl的肉汤培养基,在30℃条件下,培养48 h,诱导生成Ectoine为285.1 mg.L-1,其Ectoine生成的最适诱导温度是30℃,最适NaCl浓度是2 mol.L-1. 展开更多
关键词 中度嗜盐菌 ectoine 16S RDNA 系统发育树
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一株耐盐苯酚降解菌的分离、鉴定及特性研究 被引量：10
10
作者 曲媛媛 周豪 +2 位作者 王平 汲广欣 周集体 《大连理工大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第1期25-30,共6页
从污水处理厂活性污泥中筛选到一株高效的耐盐苯酚降解菌,经形态观察及26SrRNA序列分析鉴定为假丝酵母菌Candida sp.,命名为W3.该菌株可以在1%～10%NaCl环境中生长,并可以利用苯酚为唯一碳源和能源.苯酚降解的最优条件为pH=7.0,温度30℃... 从污水处理厂活性污泥中筛选到一株高效的耐盐苯酚降解菌,经形态观察及26SrRNA序列分析鉴定为假丝酵母菌Candida sp.,命名为W3.该菌株可以在1%～10%NaCl环境中生长,并可以利用苯酚为唯一碳源和能源.苯酚降解的最优条件为pH=7.0,温度30℃,NaCl质量分数5%.在NaCl质量分数为5%、苯酚浓度为1 500mg/L时,12d苯酚的降解率可达到99.8%.菌株可以在高盐条件下降解苯胺、水杨酸等多种芳香化合物,且对混合酚具有一定的降解能力.对菌株的耐盐机理进行了初步研究,发现细胞内四氢嘧啶和甜菜碱的含量随着盐浓度的增大而增加,表明W3在高盐条件下以四氢嘧啶和甜菜碱作为主要的渗透调节物质. 展开更多
关键词 苯酚 耐盐酵母菌 四氢嘧啶 甜菜碱
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渗透压冲击下中度嗜盐菌Halomonas sp. Y四氢嘧啶类相容性溶质的合成与释放 被引量：9
11
作者 王慧敏 姚倩倩 +3 位作者 李月月 蔡溯林 孙明珠 顾向阳 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期744-752,共9页
【背景】四氢嘧啶类物质在高温、冷冻和干燥等逆境条件下,对酶、蛋白质、核酸及整个细胞具有良好的保护作用,已经应用于酶制剂、生物医药及护肤品等相关领域。目前此类物质只能依赖中度嗜盐菌采用细菌泌乳工艺进行商业化生产,因此四氢... 【背景】四氢嘧啶类物质在高温、冷冻和干燥等逆境条件下,对酶、蛋白质、核酸及整个细胞具有良好的保护作用,已经应用于酶制剂、生物医药及护肤品等相关领域。目前此类物质只能依赖中度嗜盐菌采用细菌泌乳工艺进行商业化生产,因此四氢嘧啶类高产菌株及其发酵技术的研究日益受到国内外研究者关注。【目的】分离获得高产合成四氢嘧啶类相容性溶质的中度嗜盐细菌,研究渗透压冲击对其胞内四氢嘧啶合成与释放的影响,探索细菌泌乳法制备四氢嘧啶的可行性。【方法】采用涂布平板法分离中度嗜盐菌,对分离菌株进行形态、生理生化和16S rRNA基因序列分析,鉴定其种属;采用高效液相色谱法(HPLC)和质谱法(MS)分析四氢嘧啶类物质,细菌泌乳法制备四氢嘧啶类物质。【结果】从盐池土样中分离到一株以四氢嘧啶类物质为主要相容性溶质的中度嗜盐菌Y,鉴定为盐单胞菌(Halomonas sp.)Y。盐单胞菌Y能在NaCl质量浓度为10-250 g/L的培养基中生长,最适生长的NaCl浓度为100 g/L;HPLC-MS测试结果证明盐单胞菌Y可同时合成四氢嘧啶和羟基四氢嘧啶2种相容性溶质,在最适生长的盐浓度下其合成量分别达175.5 mg/g和47.9 mg/g;在NaCl质量浓度为0-30 g/L的低渗溶液中胞内四氢嘧啶类物质经5 min即可达到最大释放率,而细菌泌乳工艺中最适合诱导四氢嘧啶释放的低渗溶液为质量浓度为10 g/L的NaCl溶液;采用细菌泌乳工艺制备四氢嘧啶,经连续11轮的高渗/低渗冲击,四氢嘧啶总合成量为6.0 g/L,总释放量为5.7 g/L,平均释放率为64.5%,底物转化率为128.9 mg/g。【结论】盐单胞菌Y是一株较高产合成四氢嘧啶类的中度嗜盐菌,能够耐受反复的渗透压冲击,采用细菌泌乳工艺显著提高了四氢嘧啶的制备效率。 展开更多
关键词 中度嗜盐菌 四氢嘧啶 羟基四氢嘧啶 细菌泌乳 高渗-低渗冲击
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四氢嘧啶对人冰冻红细胞质量影响的初步研究 被引量：9
12
作者 周洋 张学俊 +5 位作者 王红 钟锐 贺曾 韩玎玎 厉保秋 刘嘉馨 《中国输血杂志》 北大核心 2017年第3期271-275,共5页
目的通过在红细胞深低温冰冻的冻存液中添加渗透压调节物-四氢嘧啶(ectoine),检测红细胞冰冻前后的质量,探讨ectoine用于深低温冰冻红细胞的可能性,为ectoine可用于红细胞深低温冰冻的研究提供实验依据。方法取悬浮红细胞样品8袋,每袋... 目的通过在红细胞深低温冰冻的冻存液中添加渗透压调节物-四氢嘧啶(ectoine),检测红细胞冰冻前后的质量,探讨ectoine用于深低温冰冻红细胞的可能性,为ectoine可用于红细胞深低温冰冻的研究提供实验依据。方法取悬浮红细胞样品8袋,每袋分为对照组(复方甘油组、甘油组)和实验组(1.5%ectoine甘油组、3%ectoine甘油组和4.5%ectoine甘油组)共5组。实验组:ectoine起始浓度为1.5%、3%与4.5%(W/V)(加红细胞后终浓度为1.05%、2.10%与3.15%)。将5组(2组对照组与3组实验组)冻存液分别加入红细胞,红细胞冰冻后解冻并洗涤。测定冰冻前(未加冻存液)及解冻洗涤后红细胞数、血红蛋白量、红细胞变形性、渗透脆性,并用电镜扫描,观察红细胞显微形态。结果与2组对照组相比,3%ectoine甘油组红细胞回收率最高(89.26±2.60)%(P<0.05);3%ectoine甘油组解冻洗涤的红细胞与冰冻前红细胞,在50^(-1)、100^(-1)、200^(-1)和1 000^(-1)的剪切率值上相比P>0.05,差异无统计学意义;1.5%ectoine甘油组解冻洗涤的红细胞,50%溶血率时氯化钠浓度为(4.57±0.08)g/L,3%ectoine甘油组(4.80±0.17)g/L,2组分别与复方甘油组(4.98±0.26)g/L相比P<0.05,差异具有统计学意义;电镜扫描显示3组实验组红细胞与复方甘油组红细胞解冻洗涤后,均无棘状和球形红细胞,甘油组可见破膜、皱缩的红细胞。结论3%Ectoine作为渗透压调节物用于冰冻红细胞,可用于高浓度甘油冰冻红细胞时作为渗透压调节物,相对于3%乳酸钠的复方甘油(商品化复方甘油),可提高解冻洗涤的红细胞回收率,改善解冻洗涤的红细胞质量,具有在深低温冰冻红细胞的潜力。 展开更多
关键词 四氢嘧啶 红细胞 回收率 渗透脆性 变形性
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相容溶质四氢嘧啶的微生物合成研究进展 被引量：9
13
作者 张鑫 舒志万 +4 位作者 李永臻 邢江娃 王嵘 沈国平 朱德锐 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期868-881,共14页
四氢嘧啶(ectoine)作为一种氨基酸的衍生物,是嗜盐微生物胞内重要的天然次级代谢物,具有保护细胞和稳定生物大分子的功能,可广泛应用于药物制备佐剂、器官移植与保存、皮肤创伤修复与新型化妆品研发等生物医学领域。由于四氢嘧啶的医用... 四氢嘧啶(ectoine)作为一种氨基酸的衍生物,是嗜盐微生物胞内重要的天然次级代谢物,具有保护细胞和稳定生物大分子的功能,可广泛应用于药物制备佐剂、器官移植与保存、皮肤创伤修复与新型化妆品研发等生物医学领域。由于四氢嘧啶的医用价值和商业市场需求,文中从野生菌株的筛选与诱变育种、构建基因工程菌株与系统代谢整合工程菌株、四氢嘧啶的优化发酵与生产工艺以及抽提纯化工艺等方面,系统论述了四氢嘧啶高效积聚和过量化生产研究策略,并展望多组学、计算生物学及“细胞工厂”等技术在后续四氢嘧啶高效生产上的应用前景。 展开更多
关键词 四氢嘧啶 紫外诱变 基因工程 系统代谢 分批发酵
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青海湖盐单胞菌Ectoine合成基因簇ectABC的重组共表达 被引量：5
14
作者 朱德锐 韩睿 +4 位作者 沈国平 龙启福 李丹丹 刘建 刘德立 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期358-367,共10页
盐单胞菌属(Halomonas)通过胞内积聚有机相容溶质(Compatible solutes)来抵抗胞外的高盐渗透压。为了探究相容溶质Ectoine合成代谢相关基因的结构特征和异源共表达的可能性,以青海湖盐单胞菌Halomonas sp.QHL1为材料,通过高效液相色谱(H... 盐单胞菌属(Halomonas)通过胞内积聚有机相容溶质(Compatible solutes)来抵抗胞外的高盐渗透压。为了探究相容溶质Ectoine合成代谢相关基因的结构特征和异源共表达的可能性,以青海湖盐单胞菌Halomonas sp.QHL1为材料,通过高效液相色谱(HPLC)分析不同盐梯度下QHL1胞内Ectoine的积聚量,并借助于染色体步移技术(Genome walking)捕获QHL1菌株的Ectoine生物合成基因簇ect ABC,利用分子克隆技术分析ect ABC基因簇的异源重组表达(E.coli BL21)。研究结果表明:胞内Ectoine的积聚量随着培养基中Na+浓度的增加而增加,最大积聚量为167.1 mg/g细胞干重(1.0 mol/L Na+),但菌体生长却受到高浓度Na+的强烈抑制作用。QHL1的ect ABC操纵子全长序列为3580 bp,结构基因ect A(579 bp)、ect B(1269 bp)与ect C(390 bp)串联排列。基于生物信息学预测分析,两个启动子(δ70与δ38因子控制)和若干未知功能的保守模序(Motifs)存在于QHL1的ect操纵子上游。构建重组表达载体p ET-28-ect ABC,并在E.coli BL21中异源表达ect ABC基因簇(2438 bp)。SDS-PAGE结果显示Ect A、Ect B和Ect C分别为27.2、52.5和20.8 k D,与预测结果一致,表明ect A、ect B和ect C基因能在E.coli BL21中实现异源共表达,为构建Ectoine合成代谢基因整合的系统代谢工程,并实现低盐发酵控制和过量化生产提供了重要的理论基础。 展开更多
关键词 盐单胞菌属 ectoine ECT ABC基因簇 结构基因 共表达
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Halomonas venusta DSM4743渗透压冲击下四氢嘧啶合成与释放 被引量：7
15
作者 郑昕 马虹 +1 位作者 阎喜文 张苓花 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期1090-1096,共7页
选择耐受较高NaCl浓度,而且四氢嘧啶胞内浓度阈值较高的菌株,研究其四氢嘧啶发酵条件和工艺,对于提高四氢嘧啶的制备效率具有实际意义。考察了碳源、NaCl浓度、酵母膏添加量对Halomonas venustaDSM4743四氢嘧啶合成的影响,考察了优化条... 选择耐受较高NaCl浓度,而且四氢嘧啶胞内浓度阈值较高的菌株,研究其四氢嘧啶发酵条件和工艺,对于提高四氢嘧啶的制备效率具有实际意义。考察了碳源、NaCl浓度、酵母膏添加量对Halomonas venustaDSM4743四氢嘧啶合成的影响,考察了优化条件下的四氢嘧啶分批发酵进程,并利用"细菌挤奶"工艺制备四氢嘧啶。结果表明:谷氨酸单钠为唯一碳氮源、NaCl浓度为1.5mol/L、酵母膏添加量为0.5%的条件有利于四氢嘧啶合成。在优化条件下10L发酵罐分批发酵,四氢嘧啶最大合成量为3.2g/L,合成效率为2.7g/(L.d)。通过"细菌挤奶"工艺制备四氢嘧啶,6个渗透压冲击循环后,四氢嘧啶总合成量为14.7g/L,总释放量为14.3g/L,平均释放率为97%,合成效率2.1g/(L.d)。中度嗜盐菌Halomonas venusta DSM4743耐受较高浓度的NaCl,而且四氢嘧啶胞内浓度阈值较高,优化的发酵条件及"细菌挤奶"工艺,获得了较高的四氢嘧啶制备效率。 展开更多
关键词 中度嗜盐菌 HALOMONAS venusta DSM4743 四氢嘧啶 细菌挤奶 渗透压冲击
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Ectoine提高啤酒麦芽中酶的热稳定性的研究 被引量：5
16
作者 郑昕 张苓花 《酿酒科技》 2009年第5期36-38,共3页
研究了Ectoine对啤酒麦芽中淀粉酶、β-葡聚糖酶和纤维素酶热稳定性的影响。在不同浓度的Ectoine存在下,考察比较热处理后的上述3种酶的残余酶活性。结果表明,经80℃和90℃热处理10min后,与未添加Ec-toine的相比,添加5.0mmol Eectoine,... 研究了Ectoine对啤酒麦芽中淀粉酶、β-葡聚糖酶和纤维素酶热稳定性的影响。在不同浓度的Ectoine存在下,考察比较热处理后的上述3种酶的残余酶活性。结果表明,经80℃和90℃热处理10min后,与未添加Ec-toine的相比,添加5.0mmol Eectoine,淀粉酶残余酶活力分别提高了17.6%和26.8%;添加3.0mmol的Ectoine,β-葡聚糖酶残余酶活力分别提高了25.7%和34.6%;添加3.0mmol的Ectoine,纤维素酶残余酶活力分别提高57.6%和50.8%。 展开更多
关键词 啤酒生产 ectoine 麦芽 淀粉酶 Β-葡聚糖酶 纤维素酶 热稳定性
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相容溶质四氢嘧啶与羟基四氢嘧啶的代谢调控研究进展 被引量：5
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作者 张芳 沈国平 +1 位作者 李永臻 朱德锐 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期1548-1562,共15页
四氢嘧啶(Ectoine)及其衍生物羟基四氢嘧啶(5-hydroxyectoine,5-HE)是嗜盐微生物胞内合成的一类能够抵抗外界高盐胁迫的相容溶质,具有细胞、细胞膜、蛋白质和核酸的保护作用,可抵抗高盐、高温、冷冻和干燥等极端环境因素的刺激,从而倍... 四氢嘧啶(Ectoine)及其衍生物羟基四氢嘧啶(5-hydroxyectoine,5-HE)是嗜盐微生物胞内合成的一类能够抵抗外界高盐胁迫的相容溶质,具有细胞、细胞膜、蛋白质和核酸的保护作用,可抵抗高盐、高温、冷冻和干燥等极端环境因素的刺激,从而倍受关注。本文对不同类型微生物Ectoine/5-HE(Ects)生物合成代谢、分解代谢以及吸收/转运系统涉及的调控机制进行综述,以期为Ects合成产量的提升与高效积聚策略的优化,提供一定的理论参考依据。 展开更多
关键词 ectoine 5-hydroxyectoine 调节因子 转录调控 分解代谢 转运调节
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中度嗜盐菌四氢嘧啶合成基因的克隆与功能分析 被引量：7
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作者 张薇 魏海雷 +1 位作者 高洪文 黄国和 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期395-400,共6页
中度嗜盐菌Bacillusalc alophilus DTY1分离自晋西北黄土高原盐碱土壤,能够产生耐盐相关的相容性溶质四氢嘧啶。为了研究四氢嘧啶的功能,克隆了DTY1菌株四氢嘧啶合成基因簇ectABC。ectA、ectB和ectC分别编码169、428和132个氨基酸的肽链... 中度嗜盐菌Bacillusalc alophilus DTY1分离自晋西北黄土高原盐碱土壤,能够产生耐盐相关的相容性溶质四氢嘧啶。为了研究四氢嘧啶的功能,克隆了DTY1菌株四氢嘧啶合成基因簇ectABC。ectA、ectB和ectC分别编码169、428和132个氨基酸的肽链,分别与B.halodurans C-125中的二氨基丁酸乙酰基转移酶(EctA)、二氨基丁酸氨基转移酶(EctB)、四氢嘧啶合成酶(EctC)同源性达59%、81%和81%。将携带该基因簇的4.0kb片段转入蜡质芽孢杆菌B.cereus Z后,芽孢杆菌的耐盐度显著提高。HPLC检测发现,在1.0%NaCl浓度下,转化菌B.cereusZ-E菌株生成70.1mg/g四氢嘧啶,而在5.0%的NaCl浓度下四氢嘧啶的产量高达118.6mg/g,显著高于B.alcalophilus DTY1的四氢嘧啶产量。而且随着盐浓度的提高,四氢嘧啶的合成量也随之提高。由此证明四氢嘧啶参与中度嗜盐菌重要的渗透调节,ectABC的表达受盐诱导。 展开更多
关键词 四氢嘧啶 BACILLUS alcalophilus 中度嗜盐菌
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南极深海底泥中产Ectoine中度嗜盐菌NJS-2的分离筛选及其性质研究 被引量：3
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作者 傅英楠 陈志亮 +1 位作者 姜蔚宇 陈荣忠 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期402-407,共6页
从南极深海底泥中分离到一株中度嗜盐菌NJS-2,经过16S rDNA(已提交GenBank,其登录号为DQ789389)序列分析、形态学和生理生化特征分析,该菌株初步鉴定为色盐杆菌属(Chromohalobacter).以其16S rDNA序列相似性为基础构建了包括8种相关种... 从南极深海底泥中分离到一株中度嗜盐菌NJS-2,经过16S rDNA(已提交GenBank,其登录号为DQ789389)序列分析、形态学和生理生化特征分析,该菌株初步鉴定为色盐杆菌属(Chromohalobacter).以其16S rDNA序列相似性为基础构建了包括8种相关种属在内的系统发育树.同源性分析表明,NJS-2与Chromohalobacter salexigens的16S rDNA相似性达到99%以上,应归属于色盐杆菌属,命名该菌株为Chromohalobactersp.NJS-2.研究了菌株NJS-2的相容性溶质四氢嘧啶(Ectoine)的累积及累积条件.研究发现,30℃条件下,在含2 mol/L NaCl的培养基中培养48 h,可最大诱导生成Ectoine 300 mg/L.反复渗透性休克试验表明:NJS-2在低渗条件下能够快速将细胞内的Ectoine分泌到细胞外,而在高渗环境中能够较快地重新合成. 展开更多
关键词 中度嗜盐菌 相容性溶质 ectoine 16S RDNA “细菌挤奶”工艺
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四氢嘧啶吸收缺陷突变株高效制备四氢嘧啶 被引量：6
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作者 徐蕊 张苓花 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期661-667,共7页
【目的】为进一步提高四氢嘧啶(1,4,5,6-四氢-2-甲基-4-嘧啶羧酸;1,4,5,6-tetrahydro-2-methyl-4-pyrimidinecarboxylic acid;ectoine)合成效率,【方法】利用步移PCR方法克隆了Halomonas salina DSM 5928T四氢嘧啶特异性转运蛋白(ectoin... 【目的】为进一步提高四氢嘧啶(1,4,5,6-四氢-2-甲基-4-嘧啶羧酸;1,4,5,6-tetrahydro-2-methyl-4-pyrimidinecarboxylic acid;ectoine)合成效率,【方法】利用步移PCR方法克隆了Halomonas salina DSM 5928T四氢嘧啶特异性转运蛋白(ectoine-specific transporter;TeaABC)编码基因teaABC,Red重组技术构建了四氢嘧啶吸收缺陷突变株H.salina DSM 5928T(teaABC-)。【结果】H.salina DSM 5928T(teaABC-)10 L发酵罐的四氢嘧啶发酵,四氢嘧啶总浓度9.10(±0.08)g/L,合成效率为9.93(±0.09)g/L.d。【结论】四氢嘧啶吸收缺陷突变株H.salina DSM 5928T(teaABC-),解除了四氢嘧啶吸收对其合成的负反馈调节,从而显著提高了四氢嘧啶合成效率。 展开更多
关键词 H.salina DSM 5928T 四氢嘧啶 teaABC RED重组 吸收缺陷突变株
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