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3种ELISA法定量检测转cry1Ac基因水稻Cry1Ac蛋白的比较研究 被引量：9
1
作者 秦崇涛 陈在杰 +1 位作者 苏军 王锋 《福建农业学报》 CAS 2003年第4期258-263,共6页
用从细菌中分离的纯品CryIAe蛋白作为抗原成功制备出了效价较高的CryIAe蛋白的兔多抗,对制备的抗体的免疫学分析表明,其与CryIAc有极显著的免疫交叉反应.并在对转cryIAc基因水稻的检测中具有良好的特异性。用戊二醛一步法对纯化的IgG进... 用从细菌中分离的纯品CryIAe蛋白作为抗原成功制备出了效价较高的CryIAe蛋白的兔多抗,对制备的抗体的免疫学分析表明,其与CryIAc有极显著的免疫交叉反应.并在对转cryIAc基因水稻的检测中具有良好的特异性。用戊二醛一步法对纯化的IgG进行了碱性磷酸酶标记。应用制备的抗体进行了直接法、间接法和双抗夹心法等ELISA方法检测转cryIAc基因水稻中Bt的含量,结果表明直接法和间接法ELISA只能定性而不能定量测定转cryIAc基因水稻,而双抗夹心法是一种比较理想的定量检测水稻中Bt含量的方法。同时确定了双抗夹心法的各项具体条件。 展开更多
关键词 转基因 水稻 细菌 CryIAe蛋白 抗原 抗体 免疫交叉反应 cryIAc基因 BT蛋白 直接法 间接法 双抗夹心法 elisa
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双抗体夹心ELISA法检测海产蟹血卵涡鞭虫方法的初步建立 被引量：2
2
作者 査智辉 施慧 +2 位作者 谢建军 许文军 孙忠 《浙江海洋学院学报（自然科学版）》 CAS 2011年第1期46-50,共5页
以针对血卵涡鞭虫的特异性单克隆抗体为捕获抗体,纯化的抗血卵涡鞭虫的兔抗血清为检测抗体,初步建立了检测血卵涡鞭虫的双抗体夹心ELISA方法。方阵滴定确定最佳反应条件:包被的单克隆抗体浓度为10μg/mL,多抗兔血清工作浓度为14.3μg/mL... 以针对血卵涡鞭虫的特异性单克隆抗体为捕获抗体,纯化的抗血卵涡鞭虫的兔抗血清为检测抗体,初步建立了检测血卵涡鞭虫的双抗体夹心ELISA方法。方阵滴定确定最佳反应条件:包被的单克隆抗体浓度为10μg/mL,多抗兔血清工作浓度为14.3μg/mL,待检样品稀释度为1:800;HRP-羊抗鼠IgG按1∶20 000稀释。用建立的ELISA方法对86份已知背景样品进行检测,阳性检出为97.6%,血卵涡鞭虫抗原检测的灵敏度为100 pg/mL;与蟹血淋巴细胞、假丝酵母菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌等样本均无交叉反应。结果表明,建立的双抗体夹心ELISA方法灵敏度高、特异性强,可用于诊断梭子蟹乳化病血卵涡鞭虫病的检测。 展开更多
关键词 血卵涡鞭虫 三疣梭子蟹 单克隆抗体 双抗体夹心elisa法
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基于电融合方法的牛妊娠相关糖蛋白单克隆抗体制备及其应用
3
作者 尹茉莉 聂元旺 +5 位作者 周婉婷 张爽 刘磊 冀慧敏 刘方圆 王会岩 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2022年第12期25-30,共6页
为了制备抗牛妊娠相关糖蛋白(bPAG)单克隆抗体,本试验提纯妊娠母牛子叶bPAG,免疫小鼠后进行细胞电融合,通过ELISA、Western blot方法对抗bPAG单克隆抗体进行筛选。结果显示:获得5株bPAG特异性强、灵敏度高的单克隆抗体,抗体最高效价为1... 为了制备抗牛妊娠相关糖蛋白(bPAG)单克隆抗体,本试验提纯妊娠母牛子叶bPAG,免疫小鼠后进行细胞电融合,通过ELISA、Western blot方法对抗bPAG单克隆抗体进行筛选。结果显示:获得5株bPAG特异性强、灵敏度高的单克隆抗体,抗体最高效价为1∶256000,亲和力最高可达到3.75×10^(7) L/mol,5株单克隆抗体均能识别天然bPAG蛋白。采用高碘酸钠法对单抗标记辣根过氧化物酶(HRP),将最佳配对抗体用于建立双抗夹心ELISA方法,对64个血清样本进行检测。结果显示:以10H2作为捕获抗体与HRP-5G1配对建立的双抗夹心ELISA方法检测bPAG阳性和阴性血清样本,与爱德士牛早孕检测试剂盒比较符合率达95.2%。结果表明,本试验运用细胞电融合法制备的抗bPAG单克隆抗体可应用于建立双抗夹心ELISA体系,为下一步bPAG检测试剂盒的研制提供技术支持。 展开更多
关键词 牛妊娠相关糖蛋白 电融合 单克隆抗体 双抗夹心elisa
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用ELISA微板法检测乙型肝炎病毒核心抗原 被引量：5
4
作者 胡蔡香 何祥旺 +4 位作者 石平华 陶文 陈鄂 李莉 王国珍 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 1994年第3期262-265,共4页
以双抗体包被的抗体夹心法，用微板ＥＬＩＳＡ检测血清乙型肝炎病毒核心抗原（ＨＢＣＡｇ），确定双包被工作浓度ＭＣ－抗－ＨＢｃ（效价１０００）为０．０４μｌ／孔，ＭＣ－抗－ＨＢｓ（１ｍｇ／ｍｌ）为３～４μｌ／孔；最佳裂解剂... 以双抗体包被的抗体夹心法，用微板ＥＬＩＳＡ检测血清乙型肝炎病毒核心抗原（ＨＢＣＡｇ），确定双包被工作浓度ＭＣ－抗－ＨＢｃ（效价１０００）为０．０４μｌ／孔，ＭＣ－抗－ＨＢｓ（１ｍｇ／ｍｌ）为３～４μｌ／孔；最佳裂解剂及其工作浓度为７％ＮＰ－４０巯基乙醇溶液。分别用不同的酶标记抗体检测，均证明双包被具有特异性。加入抗－ＨＢｃ进行阻断试验，其阻断率为７９．３％。对８４４例ＨＢｓＡｇ阴性的血清及１１４例ＨＢＶ－ＤＮＡ探针阴性血清用本法进行ＨＢｃＡｇ检测，均为阴性。在临床应用上，本法的阳性率明显高于试管法的，与ＨＢＶ－ＤＮＡ探针的阳性符合率为９１．４％，并且特异性与ＨＢＶ－ＤＮＡ探针的一致。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 核心抗原 elisa
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双抗夹心酶联免疫吸附法检测沙门氏菌 被引量：35
5
作者 伍燕华 牛瑞江 +4 位作者 赖卫华 山珊 刘道峰 倪小琴 冯荣华 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期62-65,共4页
沙门氏菌是自然界中普遍存在的一种食源性致病菌,在中国的食物中毒中沙门氏菌引起的病例占第一位。本研究以福尔马林灭活的鼠伤寒沙门氏菌免疫雌性日本大耳兔,制备抗沙门氏菌多克隆抗体。以抗沙门氏菌多克隆抗体作为捕获抗体,以抗沙门... 沙门氏菌是自然界中普遍存在的一种食源性致病菌,在中国的食物中毒中沙门氏菌引起的病例占第一位。本研究以福尔马林灭活的鼠伤寒沙门氏菌免疫雌性日本大耳兔,制备抗沙门氏菌多克隆抗体。以抗沙门氏菌多克隆抗体作为捕获抗体,以抗沙门氏菌单克隆抗体C1359作为检测抗体,建立快速检测沙门氏菌双抗夹心ELISA方法。结果表明:该方法可以检测A、B、C、D、E等五种典型的沙门氏菌,对沙门氏菌纯培养液的最低检测量为1×104CFU/mL,与其他杂菌不存在交叉反应,具有较好的灵敏性和特异性。 展开更多
关键词 沙门氏菌 多克隆抗体 双抗夹心酶联免疫吸附法
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牛病毒性腹泻病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立 被引量：30
6
作者 高存福 秦建华 +2 位作者 赵月兰 包永占 张宁 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2005年第8期620-622,共3页
将牛病毒性腹泻病毒超免疫血清以常规方法提取IgG,采用过碘酸钠法标记辣根过氧化物酶(HRP),建立了从粪样中检测牛病毒性腹泻病毒抗原的双抗体夹心ELISA。结果,抗体的最佳包被量为150μg/mL,酶标抗体最适工作浓度为1∶200;封闭液为50mL/... 将牛病毒性腹泻病毒超免疫血清以常规方法提取IgG,采用过碘酸钠法标记辣根过氧化物酶(HRP),建立了从粪样中检测牛病毒性腹泻病毒抗原的双抗体夹心ELISA。结果,抗体的最佳包被量为150μg/mL,酶标抗体最适工作浓度为1∶200;封闭液为50mL/L的兔血清;待检粪样及酶标抗体的感作时间为37℃120min;底物显色时间为室温15min。应用建立的检测方法对河北省8个大中型奶牛场298份乳牛腹泻粪样进行了检测,结果,阳性检出率为42.6%。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 双抗体夹心elisa 乳牛 检测
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红光照射对创伤愈合的影响 被引量：32
7
作者 贾丹兵 朱宇 +5 位作者 刘珊 李乃民 唐立明 张永丰 王正雷 孙旗立 《第四军医大学学报》 北大核心 2008年第13期1195-1197,共3页
目的:建立双抗体夹心ABC-ELISA法,研究红光照射对创伤愈合的作用机制.方法:40名受使者随机分为4组,每组10人,A组:20mW/cm2;B组:30 mW/cm2;C组:40mW/cm2;D组:对照组.红光照射45min/次,1次/d,连续10d,采用双抗体夹心ABC-ELISA法测定受试者... 目的:建立双抗体夹心ABC-ELISA法,研究红光照射对创伤愈合的作用机制.方法:40名受使者随机分为4组,每组10人,A组:20mW/cm2;B组:30 mW/cm2;C组:40mW/cm2;D组:对照组.红光照射45min/次,1次/d,连续10d,采用双抗体夹心ABC-ELISA法测定受试者VEGF,PDGF,TGF-β1,bFGF含量变化情况.结果:双抗体夹心ABC-ELISA法检测VEGF,PDGF,TGF-β1,bFGF具有很好的特异性,红光照射组VEGF,PDGF,TGF-β1,bFGF含量高于对照组(P<0.05),在30mW/cm2红光照射时,bFGF含量最高.结论:红光照射加快创伤愈合与促进VEGF,PDGF,TGF-β1,bFGF分泌有关,有利于临床推广应用. 展开更多
关键词 红光 创伤愈合 双抗体夹心法 酶联免疫吸附实验
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检测伪狂犬病病毒双抗体夹心间接ELISA方法的建立与应用 被引量：21
8
作者 汪招雄 何启盖 +3 位作者 刘丽娜 刘正飞 黄红亮 陈焕春 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期220-225,共6页
以猪伪狂犬病病毒(PrV)Ea株特异性单克隆抗体576株为捕获抗体,纯化的抗PrVIgG为检测抗体,建立了检测PrV抗原的双抗体夹心ELISA方法。最佳反应条件为,单克隆抗体576株的包被浓度为12.2μg/mL,IgG的工作浓度为16.0μg/mL,对PrV的检测灵敏... 以猪伪狂犬病病毒(PrV)Ea株特异性单克隆抗体576株为捕获抗体,纯化的抗PrVIgG为检测抗体,建立了检测PrV抗原的双抗体夹心ELISA方法。最佳反应条件为,单克隆抗体576株的包被浓度为12.2μg/mL,IgG的工作浓度为16.0μg/mL,对PrV的检测灵敏度达15.6ng(0.156μg/mL),与乙型脑炎病毒(JEV)、猪瘟病毒(HCV)、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)和猪流感病毒(SIV)等无交叉反应。批间和批内变异系数较小,分别为6.39%和4.1%。应用本方法对人工感染PrV的40日龄仔猪组织进行检测,肺和脑PrV抗原检出率最高,其次是脾、心、肝和肌肉。应用该方法和PrV对159份临床样本进行平行检测,发现二者的符合率可达到77.4%,比PCR敏感。实验结果表明:双抗体夹心间接ELISA方法具有敏感性高、特异性强和重复性好的特点,可广泛应用于动物组织中PrV的检测。 展开更多
关键词 双抗体夹心间接elisa 单克隆抗体 猪伪狂犬病毒Ea株
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双抗体夹心ELISA检测牛肠道病毒抗原方法的建立及流行病学调查 被引量：24
9
作者 邢泽黎 王新平 +4 位作者 朱利塞 鲁海冰 郭昌明 盖小春 王明月 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期567-571,共5页
应用大肠杆菌表达纯化的E种肠道病毒HY12 VP1和VP2重组蛋白制备的抗体,建立了检测牛肠道病毒病原的双抗体夹心ELISA方法,并对吉林省不同地区的牛群感染BEV进行了病原流行病学调查。结果,应用方阵法确定的抗VP1鼠源Ig G作为捕获抗体的最... 应用大肠杆菌表达纯化的E种肠道病毒HY12 VP1和VP2重组蛋白制备的抗体,建立了检测牛肠道病毒病原的双抗体夹心ELISA方法,并对吉林省不同地区的牛群感染BEV进行了病原流行病学调查。结果,应用方阵法确定的抗VP1鼠源Ig G作为捕获抗体的最佳包被量为0.75 g/100 L,酶标抗体的最佳稀释度为1∶3 600。对大量阴性粪便样品进行了检测及其统计学处理,确定了双抗体夹心ELISA检测BEV的判定标准,样品D_（490）值≥0.143判定为阳性。特异性、敏感性等试验结果表明,所建立的检测BEV抗原方法具有特异、敏感和快速等特点。与RT-PCR方法相比,该方法操作简单快速,易在基层推广应用。对吉林省不同地区牛群粪便样品进行了检测,发现不同地区牛群的BEV感染率为8.16%~58.7%。本研究首次建立了检测BEV的双抗体夹心ELISA方法,为BEV感染的诊断、流行病学调查及本病防治提供了方法和理论依据。 展开更多
关键词 牛肠道病毒 BEV HY12 VP1 VP2 双抗体夹心elisa 流行病学调查
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现场应用粪抗原检测法诊断犬细粒棘球绦虫感染的效果评价 被引量：23
10
作者 焦伟 柴君杰 +4 位作者 伊斯拉音 付承 张松 徐世东 安赛尔 《中国寄生虫病防治杂志》 CSCD 2003年第3期170-171,共2页
目的　评价粪抗原检测法在包虫病流行病学监测中的实际应用价值。　方法　家犬在采集粪便后 ,进行槟榔碱导泻 ,应用粪抗原检测法检测粪样中的细粒棘球绦虫抗原 ,并与槟榔碱导泻法的驱虫结果比较 ,同时分析犬肠道中寄生的其它蠕虫对粪抗... 目的　评价粪抗原检测法在包虫病流行病学监测中的实际应用价值。　方法　家犬在采集粪便后 ,进行槟榔碱导泻 ,应用粪抗原检测法检测粪样中的细粒棘球绦虫抗原 ,并与槟榔碱导泻法的驱虫结果比较 ,同时分析犬肠道中寄生的其它蠕虫对粪抗原检测结果的影响。　结果　在 2 94只槟榔碱导泻成功的家犬中 ,4 5只检出细粒棘球绦虫 ,粪抗原阳性犬共 4 6只。二者的符合率为 97.8%。在 2 4 9只未检出细粒棘球绦虫的家犬中 ,粪抗原阳性者 1只。　结论　粪抗原检测法诊断犬细粒棘球绦虫感染具有较高的敏感性和特异性。可作为包虫病常规监测方法推广应用。 展开更多
关键词 粪抗原 检测 诊断 犬 细粒棘球绦虫感染 包虫病
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双抗夹心ELISA方法检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌 被引量：17
11
作者 段霞 黄欣 +2 位作者 黄岭芳 魏华 赖卫华 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第24期272-276,共5页
采用0.5%福尔马林灭活的单核细胞增生李斯特氏菌作为免疫原免疫日本大耳兔,获得抗单核细胞增生李斯特氏菌多克隆抗体,并以此多克隆抗体作为捕获抗体,以抗单核细胞增生李斯特氏菌InternalinA(InlA)单克隆抗体作为检测抗体,建立快速、特... 采用0.5%福尔马林灭活的单核细胞增生李斯特氏菌作为免疫原免疫日本大耳兔,获得抗单核细胞增生李斯特氏菌多克隆抗体,并以此多克隆抗体作为捕获抗体,以抗单核细胞增生李斯特氏菌InternalinA(InlA)单克隆抗体作为检测抗体,建立快速、特异的检测该菌的双抗夹心ELISA方法。结果表明:该方法对单核细胞增生李斯特氏菌纯培养液的最低检测量为1.7×105CFU/mL。在检测食品样品的实验中,食品样本对本方法干扰较小,运用选择性增菌液进行前增菌可提高该方法的准确性。 展开更多
关键词 单核细胞增生李斯特氏菌 多克隆抗体 单克隆抗体 双抗夹心elisa方法
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EV71抗原ELISA定量检测方法的建立 被引量：18
12
作者 贾卉 蔡芳 +2 位作者 高强 张建三 井申荣 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2010年第1期87-90,共4页
目的建立EV71抗原双抗体夹心ELISA定量检测方法,用于EV71灭活疫苗生产过程中抗原含量的检测。方法采用EV71全病毒免疫,制备抗EV71单克隆抗体及多克隆抗体,以抗EV71多克隆抗体作为包被抗体,经HRP标记的抗EV71单克隆抗体作为酶标抗体,建... 目的建立EV71抗原双抗体夹心ELISA定量检测方法,用于EV71灭活疫苗生产过程中抗原含量的检测。方法采用EV71全病毒免疫,制备抗EV71单克隆抗体及多克隆抗体,以抗EV71多克隆抗体作为包被抗体,经HRP标记的抗EV71单克隆抗体作为酶标抗体,建立双抗体夹心ELISA法,检测样品中EV71抗原含量,并对该方法进行验证及应用。结果所建立的方法线性范围为5～80U/ml,R2=0.994,线性关系良好,定量限度为5U/ml;检测不同浓度的EV71抗原内部参考品,回收率为88%～119.0%;变异系数均小于15%;与甲肝病毒收获液、乙脑病毒灭活液、H5N1流感病毒裂解疫苗原液、小牛血清、人白蛋白、Vero细胞、MEM培养基及CoxA16收获液均无交叉反应;检测EV71灭活疫苗原液纯化过程样品的抗原含量,能有效反映抗原纯化趋势;检测铝吸附疫苗成品解离后抗原含量,准确性较高。结论已建立了EV71抗原双抗体夹心ELISA定量检测方法,该方法线性好,特异性强,灵敏度高,准确性及重复性良好,可用于EV71疫苗生产过程中及终产品的抗原定量检测。 展开更多
关键词 EV71抗原 双抗体夹心elisa 验证
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检测食品中志贺氏菌的双抗夹心ELISA方法的研究 被引量：14
13
作者 钟青萍 葛萃萃 +1 位作者 张世伟 张旺 《食品科技》 CAS 北大核心 2007年第10期199-202,共4页
研究获得纯化抗志贺氏菌IgY,经检测10mg/mL纯化抗志贺氏菌IgY的效价为1∶320;以志贺氏菌免疫新西兰大耳白兔,获得抗志贺氏菌的兔抗体,效价可达1∶12800。以此两种抗体建立双抗夹心ELISA,正交试验分析表明,兔抗体包被条件为4℃过夜,采用... 研究获得纯化抗志贺氏菌IgY,经检测10mg/mL纯化抗志贺氏菌IgY的效价为1∶320;以志贺氏菌免疫新西兰大耳白兔,获得抗志贺氏菌的兔抗体,效价可达1∶12800。以此两种抗体建立双抗夹心ELISA,正交试验分析表明,兔抗体包被条件为4℃过夜,采用不封闭,抗原与包被抗体结合条件为37℃、1h;加入检测抗体(IgY)的浓度为0.25mg/mL,其结合条件为37℃、1h。该方法对纯培养菌液检出限为105cfu/mL,具有良好的敏感性;10株其他菌株的检测结果表明,该方法只与志贺氏菌发生特异性反应,不与其他菌株的抗原发生交叉反应。染菌的食品样品经选择性增菌后进行双抗夹心ELISA检测,含0.1～1cfu/mL志贺氏菌的样品在增菌13h后可检出阳性反应,含1～10cfu/mL志贺氏菌的样品在增菌11h后可检出阳性反应。 展开更多
关键词 志贺氏菌 双抗夹心elisa 食品 检测
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双抗体夹心生物素-亲和素ELISA法检测相思子毒素 被引量：15
14
作者 穆晞惠 童朝阳 +3 位作者 郝兰群 许秀玲 刘冰 田艳慧 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期571-574,共4页
目的建立相思子毒素(abrin)的酶联免疫检测方法,为abrin临床诊断、中毒治疗、法医学鉴定等应用领域提供技术基础和参考依据。方法采用双抗体夹心生物素-亲和素ELISA法来检测微量abrin。结果该法检测abrin线性范围为0.125～31.25μg/L,... 目的建立相思子毒素(abrin)的酶联免疫检测方法,为abrin临床诊断、中毒治疗、法医学鉴定等应用领域提供技术基础和参考依据。方法采用双抗体夹心生物素-亲和素ELISA法来检测微量abrin。结果该法检测abrin线性范围为0.125～31.25μg/L,线性回归方程为Y=0.52369X+0.51632(r=0.9816,P<0.0001,n=9),检测限为0.125μg/L。不同浓度蓖麻毒素(ricin)、葡萄球菌肠毒素(SEB)对检测结果基本无干扰,表明该法检测abrin具有很好的特异性。该法能用于abrin毒素污染水样、土样、食品、血液等模拟样品的分析,相对标准差为2.35%～4.14%,具有较好的重现性。结论成功建立了夹心BA-ELISA法检测abrin,巧妙地将多克隆抗体的强富集能力、单克隆抗体的特异性以及生物素-亲和素系统的放大作用结合起来,达到了提高检测的灵敏度和特异性的目的,可适用于各种微量abrin样品的分析。 展开更多
关键词 相思子毒素 双抗体夹心法 生物素-亲和素 酶联免疫吸附试验
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牛轮状病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立 被引量：15
15
作者 侯美如 侯喜林 +3 位作者 高俊峰 刘振格 王杰 杨明发 《黑龙江八一农垦大学学报》 2011年第3期19-23,共5页
用差速离心法纯化的牛轮状病毒(BRV)分别免疫鼠和兔,制备了鼠抗BRV和兔抗BRV超免疫血清,并用层析方法进行了纯化,建立了检测BRV的双抗体夹心ELISA方法。该双抗体夹心ELISA的最佳反应条件为:兔抗BRV IgG包被浓度为10μg.mL-1,鼠抗BRV Ig... 用差速离心法纯化的牛轮状病毒(BRV)分别免疫鼠和兔,制备了鼠抗BRV和兔抗BRV超免疫血清,并用层析方法进行了纯化,建立了检测BRV的双抗体夹心ELISA方法。该双抗体夹心ELISA的最佳反应条件为:兔抗BRV IgG包被浓度为10μg.mL-1,鼠抗BRV IgG工作浓度为5μg.mL-1,样品反应时间60 min,酶标抗体工作浓度为1∶5 000,以OD450 nm≥0.432作为阳性判定标准。该方法的板间、板内重复性变异系数小于10%,最低检测浓度为1.41μg.mL-1,并与牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)、牛冠状病毒(BCV)和牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)等病原无交叉反应。用建立的ELISA方法与BRV RT-PCR方法同时检测40份临床粪便样品,符合率达到95%。结果表明,建立的双抗体夹心ELISA方法具有较好的特异性和较高的敏感性,可用于BRV的快速检测。 展开更多
关键词 牛轮状病毒 双抗体夹心酶联免疫吸附试验 检测
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双抗体夹心ELISA检测羊肠道病毒抗原方法的建立及病原流行病学调查 被引量：14
16
作者 鲁海冰 胡俊英 +5 位作者 张群 王浴光 郭昌明 朱利塞 涂长春 王新平 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期653-657,共5页
应用本实验室分离的国内首株羊肠道病毒(CEV)-JL14VP1重组蛋白制备的兔源多克隆抗体和抗CEV-JL14病毒的单克隆抗体,建立了检测CEV抗原的双抗体夹心ELISA方法,并对吉林省和内蒙古地区羊群感染CEV进行了病原流行病学调查。方阵试验确定了C... 应用本实验室分离的国内首株羊肠道病毒(CEV)-JL14VP1重组蛋白制备的兔源多克隆抗体和抗CEV-JL14病毒的单克隆抗体,建立了检测CEV抗原的双抗体夹心ELISA方法,并对吉林省和内蒙古地区羊群感染CEV进行了病原流行病学调查。方阵试验确定了CEV VP1鼠源IgG捕获抗体的最佳包被量为0.2μg/孔,酶标抗体的最佳稀释倍数为1∶1 000。对大量CEV阴性粪便样品进行检测与统计学处理,确定了双抗体夹心ELISA检测CEV的判定标准为样品D490值≥0.216判定为阳性。特异性、敏感性和重复性试验结果表明,所建立的检测CEV抗原方法具有特异、敏感、快速和重复性好等特点。以建立的双抗体夹心ELISA方法,对吉林省和内蒙古不同地区的羊群粪便样品进行了检测,发现不同地区的羊群都存在着严重的CEV感染,感染率高达12%~100%。本研究为今后CEV感染的诊断、检疫及防制提供了有效的手段和流行病学理论依据。 展开更多
关键词 羊肠道病毒 CEV-JL14 VP1 双抗体夹心 elisa
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猪轮状病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立 被引量：14
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作者 黄小波 徐璐 +3 位作者 曹三杰 文心田 曾燕 余慧 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期723-727,共5页
用差速离心法纯化的猪轮状病毒(RV)分别免疫仔猪和兔,制备了猪抗RV和兔抗RV超免疫血清,并用层析方法进行了纯化,建立了检测RV的双抗体夹心ELISA方法。结果表明,该双抗体夹心ELISA的最佳反应条件为:猪抗RV IgG包被浓度为4μg/mL,兔抗RV ... 用差速离心法纯化的猪轮状病毒(RV)分别免疫仔猪和兔,制备了猪抗RV和兔抗RV超免疫血清,并用层析方法进行了纯化,建立了检测RV的双抗体夹心ELISA方法。结果表明,该双抗体夹心ELISA的最佳反应条件为:猪抗RV IgG包被浓度为4μg/mL,兔抗RV IgG最佳工作浓度为3.5μg/mL,样品反应时间为90 min,酶标抗体工作浓度为1∶8 000,以D450 nm≥0.161作为阳性判定标准。该ELISA的重复性变异系数小于10%,最低检测限为1.25μg/mL,并与猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪大肠杆菌和沙门菌等病原无交叉反应,该ELISA试剂在室温和4℃条件下至少可保存4个月。用该ELISA方法和RV金标检测卡检测70份临床粪便样品,结果显示,ELISA的阳性检出率为22.9%,而金标检测卡的阳性检出率为20.0%。表明,建立的双抗体夹心ELISA方法具有特异性好、灵敏性高和重复性好等优点,可用于RV的快速检测。 展开更多
关键词 猪轮状病毒 双抗体夹心酶联免疫吸附试验 检测 建立
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癫痫发作间期血清中IL-1β和IL-6水平分析研究 被引量：12
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作者 井晓荣 靳俊功 +6 位作者 李焕发 董珊 武昊 王晓庆 马伟 孟强 张华 《立体定向和功能性神经外科杂志》 2014年第2期73-78,共6页
目的癫痫发作间期外周血清中白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)的含量分析及意义。方法 ELISA法分别测定53例癫痫患者发作间期及30例正常人外周血清中IL-1β和IL-6含量,对癫痫组和正常组之间,同时对癫痫患者组内进行性别、年... 目的癫痫发作间期外周血清中白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)的含量分析及意义。方法 ELISA法分别测定53例癫痫患者发作间期及30例正常人外周血清中IL-1β和IL-6含量,对癫痫组和正常组之间,同时对癫痫患者组内进行性别、年龄、病程、发作频度、间期脑电的正异常、起源区域局限性(局限和广泛)进行比较,实验数据(含量)结果用x±s表示,两样本采用秩和检验。结果癫痫组与正常组之间IL-1β和IL-6外周血液血清中含量的差异均有统计学意义;癫痫组不同发作频度之间IL-6血清中含量的差异有统计学意义,不同发作频度对于IL-1β含量无统计学意义;癫痫组不同性别、年龄、病程、间期脑电(正常和异常)、起源区域(局限和广泛)血清中IL-1β和IL-6含量的差异均无统计学意义。结论发作间期IL-1β和IL-6在外周血清中的含量因癫痫而发生变化,癫痫患者的免疫系统处于活化状态,证明两种细胞因子参与癫痫活动,血清中IL-6含量与发作频度有关。 展开更多
关键词 癫痫 白细胞介素1 白细胞介素6 EusA法
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双抗夹心ELISA检测肠出血性大肠杆菌O157方法的建立 被引量：10
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作者 吴大成 孙洋 +6 位作者 袁洁 康桦华 郭学军 祝令伟 陈志虹 向蓉 冯书章 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1745-1748,共4页
以前期建立并纯化的肠出血性大肠杆菌O157:H7单克隆抗体3D6,建立一种适宜食品样品检测的双抗夹心ELISA检测方法。该方法只对O157菌株有特异性反应,对非O157型肠出血性大肠杆菌及其他菌株无交叉反应。敏感性试验结果表明,对大肠杆菌O157... 以前期建立并纯化的肠出血性大肠杆菌O157:H7单克隆抗体3D6,建立一种适宜食品样品检测的双抗夹心ELISA检测方法。该方法只对O157菌株有特异性反应,对非O157型肠出血性大肠杆菌及其他菌株无交叉反应。敏感性试验结果表明,对大肠杆菌O157纯培养菌液检出限为1.2×105 CFU/mL。选择性增菌培养后,对牛肉、猪肉和鸡肉与模拟样品中的大肠杆菌O157的检出限为0.4～4CFU/g。 展开更多
关键词 肠出血性大肠杆菌O157 双抗夹心elisa方法 单克隆抗体
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双抗夹心ELISA法定量检测食品中大肠杆菌O157:H7初探 被引量：9
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作者 宋宏新 马冬 +1 位作者 薛海燕 李红心 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第10期528-530,共3页
以鸡抗O157:H7特异性脂多糖(LPS)抗体(IgY)为捕获抗体,酶标抗体(HRP-IgY)为检测抗体建立双抗夹心ELISA法检测食品中大肠杆菌O157:H7的方法,确定了抗原浓度对数与OD450值的高度线性相关性,根据检测OD450值可从拟合回归曲线确定样品中的... 以鸡抗O157:H7特异性脂多糖(LPS)抗体(IgY)为捕获抗体,酶标抗体(HRP-IgY)为检测抗体建立双抗夹心ELISA法检测食品中大肠杆菌O157:H7的方法,确定了抗原浓度对数与OD450值的高度线性相关性,根据检测OD450值可从拟合回归曲线确定样品中的含菌量,含菌量≥104CFU/ml的食品样品可直接用双抗夹心法进行检测,含菌量≤104CFU/ml的食品样品可增菌14h后检测。 展开更多
关键词 大肠杆菌O157:H7 食源性病原菌定量检测 双抗夹心elisa
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