慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞受体谱系分析及互补决定区3序列测定 被引量：22

1

作者 张光文 姚新生 +3 位作者 马世武 杨创国 于乐成 侯金林 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期23-28,共6页

目的从新的角度探讨慢性乙型肝炎(CHB)炎症活动期外周血T淋巴细胞克隆性增生情况,了解T淋巴细胞免疫应答在CHB发病机制中的状态及作用。方法利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR) 扩增T淋巴细胞受体(TCR)β链V区基因各家族(BV),并采用免疫指... 目的从新的角度探讨慢性乙型肝炎(CHB)炎症活动期外周血T淋巴细胞克隆性增生情况,了解T淋巴细胞免疫应答在CHB发病机制中的状态及作用。方法利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR) 扩增T淋巴细胞受体(TCR)β链V区基因各家族(BV),并采用免疫指纹技术(immunoscope)对4名健康献血员及8例处于炎症活动期CHB患者外周血TCR BV家族基因的优势利用情况及克隆性增生T淋巴细胞β链互补决定区3(CDR3)序列进行分析。结果 4名健康献血员外周血T淋巴细胞TCR BV家族CDR3谱型均呈正态分布,而8例CHB患者均出现一个或多个TCR BV家族单克隆或寡克隆性增生。对克隆性增生T淋巴细胞β链CDR3区序列测定证实存在不同的CDR3序列。结论 CHB活动期外周血T淋巴细胞存在明显克隆性增生,进一步提示T淋巴细胞免疫应答可能参与CHB的发病过程,且可能有多个病毒抗原表位参与了细胞免疫应答。 展开更多

关键词 肝炎 乙型 慢性 受体 抗原 T细胞 免疫指纹技术 互补决定区3

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正常人外周血αβ T细胞TCR β链CDR3多态性和长度分析 被引量：16

2

作者 胡云良 杨介钻 +1 位作者 倪莉 姚新生 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期492-498,共7页

采用免疫扫描谱型分析技术,分析正常人外周血T细胞TCRβ链CDR3的多态性和长度分布.提取6例正常人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell-PBMC)的总RNA,逆转录成cDNA,以24个TCR BV基因家族为上游引物,共同的TCR BC基因为... 采用免疫扫描谱型分析技术,分析正常人外周血T细胞TCRβ链CDR3的多态性和长度分布.提取6例正常人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell-PBMC)的总RNA,逆转录成cDNA,以24个TCR BV基因家族为上游引物,共同的TCR BC基因为下游引物(荧光标记),6例样品PCR产物的基因扫描分析表明,24个TCRBV家族的CDR3谱型分析在1.5%琼脂糖凝胶电泳图上显示1个模糊条带.序列测定结果显示,各TCR BV家族的CDR3谱型均超过8个条带.GeneScan分析证明,正常人外周血T细胞的24个TCR BV家族的CDR3谱型为标准的高斯分布,各家族的CDR3表达频率相近,呈现不同的CDR3多态性和不同的CDR3长度.多数TCR BV家族产物为框架内重排(相邻2个PCR产物相差3个碱基),少数TCR BV家族表现为两个峰群的重排.该研究对正常人TCRβ链CDR3谱系的详细分析将为T细胞应答、TCR重组等研究提供基础.利用免疫谱型分析技术能监测到TCR CDR3谱型分布特征和表达频率的变化. 展开更多

关键词 T淋巴细胞受体 互补决定区3 免疫扫描谱型分析 基因扫描

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“荧光定量PCR溶解曲线法”监测人TCRβ链CDR3谱系漂移技术的建立 被引量：9

3

作者 马锐 罗荣 +1 位作者 孙万邦 姚新生 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期446-451,共6页

目的建立"荧光定量PCR溶解曲线分析技术"监测人外周血T细胞TCRβ链CDR3谱系漂移(单/寡/多克隆增生)。方法提取4例正常人、9例大肠癌患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell-PBMC)中的总RNA,逆转录成cDNA,以2... 目的建立"荧光定量PCR溶解曲线分析技术"监测人外周血T细胞TCRβ链CDR3谱系漂移(单/寡/多克隆增生)。方法提取4例正常人、9例大肠癌患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell-PBMC)中的总RNA,逆转录成cDNA,以26个人TRBV基因家族设计上游引物,共同的TRBC基因设计下游引物,荧光定量PCR(FQ-PCR)扩增26个TRBV基因各家族CDR3谱系,溶解曲线法分析各家族CDR3谱系的单/寡/多克隆增生。结果正常人外周血T细胞TCRβ链26个家族CDR3表达频率不一致,各家族PCR产物的"溶解曲线谱型图"(melting curve spectratyping)呈现溶点不同的CDR3多态性,为多克隆增生的高斯分布;9例大肠癌患者的外周血TCRβ链CDR3谱系的26个家族CDR3表达频率不一致,有的患者部分家族呈缺失状态,患者各家族PCR产物的"溶解曲线谱型图"上,多数家族为多克隆增生的高斯分布,但每个患者均出现数量不等的单克隆和寡克隆增生家族。结论"荧光定量PCR溶解曲线分析TCR CDR3谱系漂移技术",方法稳定简便,能较好的监测正常人和临床样本外周血T细胞TCRβ链CDR3谱系漂移(单/寡/多克隆增生)。 展开更多

关键词 T淋巴细胞受体 互补决定区3 荧光定量PCR 溶解曲线

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基因扫描分析CML病人外周血的T细胞克隆性 被引量：9

4

作者 李扬秋 SiegertW SchmideCA 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期23-26,共4页

应用RT-PCR方法扩增12例CML病人外周血单个核细胞的T细胞受体(CR）Vβ24个亚家族基因的互补决定区3（CDR3），了解VβT细胞的分布情况，8例正常人和T细胞株K37作为对照。PCR产物进一步经基因扫描分析确定T细胞克隆性。结果发现12例CML... 应用RT-PCR方法扩增12例CML病人外周血单个核细胞的T细胞受体(CR）Vβ24个亚家族基因的互补决定区3（CDR3），了解VβT细胞的分布情况，8例正常人和T细胞株K37作为对照。PCR产物进一步经基因扫描分析确定T细胞克隆性。结果发现12例CML外周血中分别表达3－21Vβ亚家族T细胞，8例正常人则表达除Vβ20外的全部VβT细胞，K37细胞仅表达Vβ9。基因扫描分析显示12例CML中8例病人的部分Vβ亚家族PCR产物至一主峰图象，提示为克隆性生长的T细胞。推测这是宿主对白血病细胞相关抗原的一种直接反应。该方法有可能作为白血病特异性免疫治疗的临床研究的一种新的分子生物学研究方法。 展开更多

关键词 白血病 CML 外周血 T细胞克隆性 基因扫描

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乙型肝炎患者治疗前后外周血CD4^+CD25^+Tregs TCR CDR3谱系漂移特征分析 被引量：6

5

作者 潘宗琴 吕红 +2 位作者 庄勤建 姚新生 邱隆敏 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期889-894,899,共7页

目的:探讨AHB患者急性期及恢复期、CHB患者恩替卡韦治疗前后外周血PBMC中CD4^+CD25^+Tregs TCR CDR3谱系漂移特征的变化。方法:采集4例正常人、3例AHB患者(急性期和恢复期)及4例CHB患者恩替卡韦治疗前后外周抗凝静脉血,分离外周血PBMC;... 目的:探讨AHB患者急性期及恢复期、CHB患者恩替卡韦治疗前后外周血PBMC中CD4^+CD25^+Tregs TCR CDR3谱系漂移特征的变化。方法:采集4例正常人、3例AHB患者(急性期和恢复期)及4例CHB患者恩替卡韦治疗前后外周抗凝静脉血,分离外周血PBMC;磁珠分选法分选CD4^+CD25^+Tregs,提取总RNA,逆转录合成c DNA;根据TCRβ链24个可变区基因(TRBV)家族设计相应的上游引物,并在β链恒定区(BC)设计一条共用的FAM荧光标记下游引物及对照引物。PCR扩增出24个包含完整CDR3区的TRBV家族的PCR产物,电泳鉴定目的片段;PCR产物送上海基康用毛细管电泳法进行基因扫描;用Peak Scanner Software v1.0软件分析研究对象TRBV家族CDR3谱系特征;采用配对t检验(paired-sample t test)检测AHB患者急性期及恢复期、CHB患者恩替卡韦治疗前后TRBV家族谱系漂移率差异。结果:3例AHB患者急性期呈现普遍谱系漂移的TRBV4、10、14、16、19家族在恢复期多转变为正态的多峰谱型,AHB患者恢复期外周血CD4^+CD25^+Tregs TRBV家族CDR3谱型漂移率显著低于急性期(t=9.456,P=0.011);TRBV8、11、13.2、15、16、18、20在3例CHB患者抗HBV治疗前出现克隆增生,TRBV1、5.2、6、12、14、24在3例CHB患者抗HBV治疗后出现克隆增生。CHB患者抗病毒治疗后TRBV家族CDR3谱型漂移率高于治疗前(t=-0.666,P=0.553)。结论:AHB患者急性期呈现谱系漂移的TRBV4、10、14、16、19家族在恢复期多转变为正态的多峰谱型,推测这种转变可能与HBsAg、HBeAg转阴相关。CHB患者在治疗前TRBV8、11、13.2、15、16、18、20家族克隆增生的Tregs可能通过下调机体的细胞免疫应答,阻碍病毒清除;随着药物导致病毒载量的显著下降,TRBV1、5.2、6、12、14、24家族克隆增生的Tregs可能更有助于诱导机体出现免疫耐受,导致HBV不能彻底清除。 展开更多

关键词 慢性乙型肝炎 急性乙型肝炎 T淋巴细胞受体 互补决定区3 调节性T细胞 恩替卡韦

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免疫组库测序分析新生儿脓毒症患者外周血T细胞受体β链CDR3的多样性 被引量：3

6

作者 黄循斌 叶淑珍 +4 位作者 邬吉伟 符青松 刘碧华 丘惠娴 程国强 《中国当代儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1154-1160,共7页

目的采用免疫组库测序的方法分析新生儿脓毒症患者外周血T细胞受体(T cell receptor,TCR)β链互补决定区3 (complementarity determining region 3,CDR3)的多样性,探讨新生儿脓毒症的可能发病机制。方法 12例新生儿脓毒症确诊患儿为病例... 目的采用免疫组库测序的方法分析新生儿脓毒症患者外周血T细胞受体(T cell receptor,TCR)β链互补决定区3 (complementarity determining region 3,CDR3)的多样性,探讨新生儿脓毒症的可能发病机制。方法 12例新生儿脓毒症确诊患儿为病例组,9例胎龄、出生体重及日龄相匹配的健康足月儿为对照组。采用Omega公司核酸纯化试剂盒(SQ Blood DNA Kit Ⅱ)从外周血样品中提取DNA,对TCRβ链CDR3进行多重PCR扩增,然后对产物进行高通量测序,分析其TCRβ链CDR3多样性及表达的差异。结果病例组和对照组的TCRβ链CDR3长度和类型相似,且均呈高斯分布。采用D50和香农-威纳指数作为多样性的评价指标,显示病例组TCRβ链CDR3多样性低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。针对TCRβ链V片段48个基因的使用频率进行比较,其中TRBV10-3、TRBV2和TRBV20-1的使用频率病例组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);对TCRβ链J片段13个基因的使用频率进行比较,其中TRBJ2-3、TRBJ2-5和TRBJ2-7的使用频率病例组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论新生儿脓毒症患者外周血TCRβ链CDR3多样性发生了明显改变,提示这可能与新生儿脓毒症的免疫发病机制有关。 展开更多

关键词 脓毒症 高通量测序 免疫组库 T细胞受体 互补决定区3 多样性 新生儿

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系统性红斑狼疮T细胞受体BV亚家族基因克隆谱型分析 被引量：2

7

作者 符粤文 吴德沛 +1 位作者 赵晓武 朱平 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期325-327,共3页

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血中T细胞受体β链可变区(TCRBV)亚家族互补决定区3(CDR3)基因表达谱型及对增殖的T细胞克隆进行序列分析,了解克隆扩增的T细胞与自身免疫病的相关性。方法应用RT-PCR的方法扩增8例SLE患者外周血的TC... 目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血中T细胞受体β链可变区(TCRBV)亚家族互补决定区3(CDR3)基因表达谱型及对增殖的T细胞克隆进行序列分析,了解克隆扩增的T细胞与自身免疫病的相关性。方法应用RT-PCR的方法扩增8例SLE患者外周血的TCRBV24个家族的基因序列,分析TCRBVCDR3基因表达情况。对增生的T细胞克隆的TCRBV进行序列分析,通过生物信息学分析,了解TCRBV基因与自身免疫病的相关性。结果8例SLE患者TCRBVCDR3谱型图均出现异常,表现为CDR3多态性降低,BV家族寡克隆增生。在TCRBV13.1基因家族有4例患者均出现寡克隆增生;在BV8、BV9、BV18家族中有3例出现寡克隆增生。未发现SLE的TCRBV的CDR3区有共同的氨基酸基序,但与基因库中的其他自身免疫病的T细胞克隆有较高的一致性。结论SLE患者T细胞出现寡克隆增生,CDR3多态性降低,可能与自身免疫病发病有关。 展开更多

关键词 系统性红斑狼疮 T细胞受体 互补决定区3

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慢性乙型肝炎患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T淋巴细胞受体CDR3谱系的特征分析 被引量：3

8

作者 庄勤建 吕红 +4 位作者 潘宗琴 陈宇 马龙 姚新生 邱隆敏 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期628-630,共3页

本研究采用T淋巴细胞受体β链V区基因各家族（BV）互补决定区3（complementarity determiningregion3，CDR3）长度分析的方法（免疫谱系分析技术）监测慢性乙型肝炎（CHB）患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T淋巴细胞（Tregs）TCRp链CDR3... 本研究采用T淋巴细胞受体β链V区基因各家族（BV）互补决定区3（complementarity determiningregion3，CDR3）长度分析的方法（免疫谱系分析技术）监测慢性乙型肝炎（CHB）患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T淋巴细胞（Tregs）TCRp链CDR3谱系漂移情况，并对特征性的谱系漂移家族进行基因测序鉴定其分子特征，探讨T细胞免疫在抗病毒应答中发挥的作用，以期为HBV感染后特异性T细胞免疫应答变化提供新的研究方法。 展开更多

关键词 肝炎 乙型 慢性 受体 T淋巴细胞 T淋巴细胞 调节性 互补决定区3

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一例弥漫性大B淋巴细胞瘤组织样本T细胞TCR α/β CDR3谱序的初步分析 被引量：3

9

作者 孙永苹 汤贤英 +2 位作者 朱红倩 杨雪峰 姚新生 《遵义医学院学报》 2012年第2期98-103,共6页

目的 FQ-PCR溶解曲线法初步分析1例弥漫性大B淋巴细胞瘤患者组织标本中T细胞TRAV和TRBV基因各家族CDR3谱序。方法提取4例淋巴结增生组织和1例弥漫性大B淋巴细胞瘤患者的mRNA,逆转录成cDNA,FQ-PCR扩增32个TRAV基因和24个TRBV基因的CDR3区... 目的 FQ-PCR溶解曲线法初步分析1例弥漫性大B淋巴细胞瘤患者组织标本中T细胞TRAV和TRBV基因各家族CDR3谱序。方法提取4例淋巴结增生组织和1例弥漫性大B淋巴细胞瘤患者的mRNA,逆转录成cDNA,FQ-PCR扩增32个TRAV基因和24个TRBV基因的CDR3区,利用FQ-PCR技术了解其克隆性,溶解曲线单峰家族基因测序分析CDR3区基因和氨基酸序列。结果该例淋巴瘤患者淋巴结组织T细胞FQ-PCR溶解曲线分别在TRAV10、TRAV18和TRBV6、TRBV24家族中出现单峰表现,其CDR3区氨基酸序列为CAGANFGNEKLTFGTGTCR、CAPSFSGYSTLTFGKGTM、CASSERGQPQHFGDGTCR、CATTPAGEYYGYTFGSGT-CR,4例增生淋巴结组织FQ-PCR溶解曲线均为寡峰和多峰。结论该例淋巴瘤组织中FQ-PCR溶解曲线单峰家族的T细胞可能为高应答T细胞,本实验为进一步研究淋巴溜的免疫应答机制和个体化治疗提供了研究基础。 展开更多

关键词 弥漫性大B淋巴细胞瘤 TCR CDR3 FQ-PCR溶解曲线分析技术

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FQ-PCR溶解曲线技术分析白血病患者PBMC中T细胞TCRα/βCDR3谱系特征 被引量：3

10

作者 孙永苹 石彬 +3 位作者 朱红倩 汤贤英 马锐 姚新生 《遵义医学院学报》 2014年第1期39-47,共9页

目的采用FQ-PCR溶解曲线技术分析临床白血病患者外周血单个核细胞(PBMC)中T细胞TRAV和TRBV基因各家族的CDR3谱系特征。方法提取4例健康志愿者和15例临床白血病患者PBMC中mRNA,逆转录成cDNA,FQ-PCR扩增32个TRAV基因和24个TRBV基因家族的C... 目的采用FQ-PCR溶解曲线技术分析临床白血病患者外周血单个核细胞(PBMC)中T细胞TRAV和TRBV基因各家族的CDR3谱系特征。方法提取4例健康志愿者和15例临床白血病患者PBMC中mRNA,逆转录成cDNA,FQ-PCR扩增32个TRAV基因和24个TRBV基因家族的CDR3区,FQ-PCR溶解曲线技术分析CDR3谱系特征,并测序分析单克隆家族CDR3区氨基酸序列的组成。结果 4例健康志愿者PBMC中α/βT细胞的CDR3谱系FQ-PCR溶解曲线峰型图,均表现为多峰图;而15例白血病患者PBMC中α/βT细胞CDR3谱系FQ-PCR溶解曲线峰型图,多数患者出现寡或偏峰型图、低或无峰型图、典型的单峰型图;不同白血病患者异常峰的频率不一致;单峰型图TRAV和TRBV PCR产物基因测序,未发现不同患者存在完全相同的CDR3区。结论FQ-PCR溶解曲线技术能很好的分析白血病患者PBMC中TCRα/βCDR3谱系的单、寡、多克隆性增殖;非T细胞白血病患者PBMC中TCRα/βCDR3的单峰(或寡峰)家族T细胞,可能来源于机体对肿瘤应答的T细胞,而在T细胞白血病患者,可能为肿瘤T细胞或机体抗肿瘤T细胞。本实验可为进一步研究白血病的免疫应答机制和个体化治疗提供基础。 展开更多

关键词 白血病 TCR CDR3 FQ-PCR 溶解曲线

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TCRβ链CDR3谱系与乙型肝炎病毒的感染 被引量：2

11

作者 伍绍强 姚新生 +1 位作者 林世德 邱隆敏 《国际流行病学传染病学杂志》 CAS 2009年第1期56-58,共3页

近年来，随着免疫扫描谱型分析技术的建立，T细胞受体互补决定N（TCRCDR）与HBV感染关系的研究取得了较大进展。通过对TCRCDR3谱型分析来研究HBV感染状态下克隆性和寡克隆性增生的T细胞，能进一步了解HBV感染后T细胞的免疫应答，指导疾... 近年来，随着免疫扫描谱型分析技术的建立，T细胞受体互补决定N（TCRCDR）与HBV感染关系的研究取得了较大进展。通过对TCRCDR3谱型分析来研究HBV感染状态下克隆性和寡克隆性增生的T细胞，能进一步了解HBV感染后T细胞的免疫应答，指导疾病的免疫治疗，同时为后期T细胞表位疫苗的研制提供基础。此文就近年来TCRCDR3谱系与HBV感染的关系进行了综述。 展开更多

关键词 肝炎病毒 乙型 CDR3 免疫测定

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葡萄膜炎患者外周血T细胞TCR BV亚家族克隆性的初步研究 被引量：1

12

作者 魏克娜 黄红艳 +3 位作者 张璐 邹红云 余伍忠 焦敏 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2012年第1期51-55,共5页

为探讨葡萄膜炎患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)TCR BV CDR3谱系特点及多态性,为其免疫发病机制研究提供实验基础。采用RT-PCR扩增TCR BV 26个亚家族CDR3的方法,经免疫扫描谱型技术分析对葡萄膜炎患者P... 为探讨葡萄膜炎患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)TCR BV CDR3谱系特点及多态性,为其免疫发病机制研究提供实验基础。采用RT-PCR扩增TCR BV 26个亚家族CDR3的方法,经免疫扫描谱型技术分析对葡萄膜炎患者PBMC中TCR BV CDR3的谱系漂移情况进行研究。结果显示:(1)5例正常健康人PBMC TCR BV CDR3谱型绝大多数呈正态(或高斯)分布,4例葡萄膜炎患者TCR BV CDR3扫描谱型均出现非正态分布的异常峰型,包括寡峰/寡峰趋势,偏峰和不规则异常峰型;(2)在26个TCR BV亚家族中,不同亚家族异常峰型出现的频率不同,非正态异常峰型出现频率较高的亚家族有BV2和BV17(均为3/4),而BV5.2、BV6、BV15和BV18亚家族均未出现异常峰型;(3)TCR BV2和BV17两个亚家族在HLA-B27阴性的3个患者均出现非正态异常峰型,而在HLA-B27阳性(合并强直性脊柱炎)的患者并未出现异常。葡萄膜炎患者PBMC TCRBV部分亚家族的异常表达可能与该病的免疫发病机理有关,为葡萄膜炎发病机制的进一步研究提供依据。 展开更多

关键词 葡萄膜炎 T细胞受体 BV亚家族 互补决定区3 免疫扫描谱型分析 克隆性

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寻常型天疱疮患者外周血T细胞受体β链可变区CDR3基因克隆谱型分析 被引量：1

13

作者 王茜 曾抗 +2 位作者 周浩 孙乐栋 周再高 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期291-294,共4页

目的:探讨寻常型天疱疮(PV)患者外周血T细胞受体(TCR)互补决定区(CDR3)基因谱型变化,了解克隆扩增的T细胞与自身免疫性疾病的相互关系。方法:采用免疫扫描谱型分析技术,分析6例正常人外周血单个核细胞TCRβ链可变区(BV)CDR3谱型分布特... 目的:探讨寻常型天疱疮(PV)患者外周血T细胞受体(TCR)互补决定区(CDR3)基因谱型变化,了解克隆扩增的T细胞与自身免疫性疾病的相互关系。方法:采用免疫扫描谱型分析技术,分析6例正常人外周血单个核细胞TCRβ链可变区(BV)CDR3谱型分布特征以及6例PV患者CDR3谱型变化情况。结果:6例正常人TCRBVCDR3谱型均符合正态分布,6例PV患者TCRBVCDR3谱型均出现多态性降低,BV亚家族单/寡克隆增生。结论:PV患者外周血TCR可变区β链CDR3谱型异常可能与PV发病有关。 展开更多

关键词 寻常型天疱疮 T淋巴细胞受体 互补决定K 3 基因多态性

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1月龄Balb/c小鼠胸腺、脾脏、肝脏、小肠和血液TRBV-TRBJ1-1 CDR3谱型分析 被引量：1

14

作者 贺晓燕 王鹏 +1 位作者 马锐 姚新生 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期842-847,共6页

目的初步分析1月龄Balb/c小鼠胸腺、脾脏、肝脏、小肠和血液中TRBV-TRBJ1-1 CDR3谱型特征。方法提取1月龄Balb/c小鼠胸腺、脾脏、肝脏、小肠和血液样本的总RNA,逆转录成cDNA,以22条TRBV基因家族为上游引物,共同的TRBJ1-1基因为下游引物... 目的初步分析1月龄Balb/c小鼠胸腺、脾脏、肝脏、小肠和血液中TRBV-TRBJ1-1 CDR3谱型特征。方法提取1月龄Balb/c小鼠胸腺、脾脏、肝脏、小肠和血液样本的总RNA,逆转录成cDNA,以22条TRBV基因家族为上游引物,共同的TRBJ1-1基因为下游引物(荧光标记),PCR扩增包含完整CDR3区片断,毛细管电泳激光DNA扫描技术分析CDR3谱型的长度和多态性。结果胸腺样本毛细管电泳激光扫描图呈现标准的中间高两端低的多态性分布;各家族CDR3区最长和最短比较,多数为相差8～15个氨基酸的谱型分布。脾脏、肝脏、小肠、血液样本扫描图显示多数家族呈多态性分布,但均出现数量不等的单峰、寡峰、偏峰、低峰;多数家族表现为相差3～13个氨基酸的谱型分布,部分家族在预测大小位置无对应峰型。结论 1月龄Balb/c小鼠胸腺中基本包含TCR基因随机重排的多种克隆性T细胞;脾脏、肝脏、小肠、血液表现为单、寡、多克隆形式的T细胞分布,部分家族T细胞缺失,本实验结果可为进一步研究Balb/c小鼠的T细胞发育、分布、应答及CDR3谱型与疾病关系提供方法和基础。 展开更多

关键词 T淋巴细胞受体 互补决定区3 免疫扫描谱型分析 基因扫描

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慢性乙型肝炎患者外周血CD8＋T淋巴细胞亚群T淋巴细胞受体β链互补决定区3谱型研究 被引量：1

15

作者 李咏茵 马世武 +5 位作者 张光文 黄璇 胡小雄 杨玲 张克 侯金林 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期184-188,共5页

目的研究慢性乙型肝炎（CHB）患者外周血CD8＋T淋巴细胞亚群T淋巴细胞受体（TCR）p链V区（BV）中互补决定区3（CDR3）谱型特点。方法采集8例CHB患者（ALT〉2倍正常值上限）的抗凝血，分离外周血单个核细胞，磁珠分选CD8＋T淋巴细胞亚群... 目的研究慢性乙型肝炎（CHB）患者外周血CD8＋T淋巴细胞亚群T淋巴细胞受体（TCR）p链V区（BV）中互补决定区3（CDR3）谱型特点。方法采集8例CHB患者（ALT〉2倍正常值上限）的抗凝血，分离外周血单个核细胞，磁珠分选CD8＋T淋巴细胞亚群，提取RNA并应用逆转录聚合酶链反应扩增TCRBV中CDR3基因的24个家族，采用免疫指纹技术进行TCRBV各家族基因扫描和谱型分析。不同细胞亚群间数据比较采用配对t检验。结果8例患者外周血淋巴细胞TCRBV家族CDR3谱型发生明显偏移，表现为单克隆性、寡克隆性及偏峰性克隆增生。8例患者CD8＋T淋巴细胞亚群发生TCRBVCDR3谱型偏移家族总个数高于去除CD8。T淋巴细胞群的外周血单个核细胞[（10．6±4．7）个比（4．1±3．1）个，t=6．619，P〈0．01）]；比较单、寡克隆增生2种形式偏移的家族，CD8＋T淋巴细胞亚群也高于代表CD4＋T淋巴细胞的去除CD8＋T淋巴细胞群的外周血单个核细胞[（8．8±4．5）个比（3．9±2．8）个，t=5．706，P〈0．01]。对其中3例患者磁珠分选前后TCRBV谱型的比较发现，分选后CD8＋T淋巴细胞亚群发生TCRBV谱型偏移家族数均高于分选前。结论通过淋巴细胞亚群分选方式分析TCRBV家族CDR3谱型变化可以减少不同淋巴细胞亚群之间的峰型重叠干扰；应用这一方法分析外周血CD8＋T淋巴细胞亚群克降增牛程度有助于了解CHB患者炎疖的发牛机制． 展开更多

关键词 肝炎 乙型 慢性 T淋巴细胞 互补决定区3

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白血病单倍型骨髓移植后T细胞克隆的T细胞受体分子特征 被引量：1

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作者 符粤文 吴德沛 +3 位作者 冯宇锋 常伟荣 朱子玲 朱平 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第3期236-240,共5页

背景与目的:临床及实验研究结果表明,异基因造血干细胞移植后T细胞免疫恢复延迟,单倍型造血干细胞移植免疫重建与临床经过密切相关。本课题通过T细胞受体谱型分析,研究白血病单倍型骨髓移植后细胞免疫重建特点及与移植物抗宿主病(GVHD)... 背景与目的:临床及实验研究结果表明,异基因造血干细胞移植后T细胞免疫恢复延迟,单倍型造血干细胞移植免疫重建与临床经过密切相关。本课题通过T细胞受体谱型分析,研究白血病单倍型骨髓移植后细胞免疫重建特点及与移植物抗宿主病(GVHD)相关的T细胞克隆的T细胞受体β链可变区互补决定3区(TCRBV CDR3)分子特征。方法:应用RT-PCR扩增9例不同类型白血病单倍型骨髓移植后患者及5名正常供者的外周血的TCRBV24个家族的基因序列,并通过基因扫描的方法判断TCRBV家族的克隆表达情况、CDR3克隆性质及测定BV家族的利用率。对于单克隆表达的与GVHD相关T细胞克隆进行序列测定。结果:在移植后10～19个月,TCRBV家族的利用仍处于不均一状态,检测到部分BV家族缺失,部分家族出现寡克隆、单克隆T细胞增殖。在疾病相对稳定的4例患者中,在9～14个BV家族中有表达,且多克隆家族的表达率在50%以上。另5例为疾病处于活动状态,发生Ⅱ～Ⅲ度GVHD或巨细胞病毒(CMV)感染,对BV家族的利用明显减少,多为单克隆或寡克隆表达,多克隆表达率仅30%,未发现共用的单克隆BV家族。其中2例患者在治疗前后不同时间,随着疾病趋于稳定,BV家族的利用增加,CDR3的多克隆群体增加。得到的一组与GVHD直接相关的TCRBV CDR3分子,通过比较未发现共同使用的氨基酸基序。结论:单倍型骨髓移植后10～19个月,在疾病相对稳定期,9～12个BV家族有表达,以多克隆家族表达为主。在疾病活动状态,BV家族表达减少,以单克隆或寡克隆表达为主。与GVHD相关的克隆性T细胞,未发现共同使用的CDR3氨基酸基序。 展开更多

关键词 白血病 单倍型骨髓移植 T细胞受体BV CDR3

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乳癌患者转移淋巴结中T细胞受体β链互补决定区3谱型分析 被引量：1

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作者 张建波 吕晓东 +6 位作者 宋巍 孙淼淼 于庆凯 冯稳 刘明阁 胡骏 房百俊 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2015年第4期481-484,共4页

目的：：分析乳癌患者转移淋巴结标本中 T 细胞受体（TCR）β链互补决定区3（CDR3）的谱型偏移及氨基酸序列特点。方法：选取5例乳癌患者转移淋巴结和2例乳腺反应性增生患者的淋巴结标本，应用 RT-PCR 扩增 T细胞24个 TCR β链可变区（B... 目的：：分析乳癌患者转移淋巴结标本中 T 细胞受体（TCR）β链互补决定区3（CDR3）的谱型偏移及氨基酸序列特点。方法：选取5例乳癌患者转移淋巴结和2例乳腺反应性增生患者的淋巴结标本，应用 RT-PCR 扩增 T细胞24个 TCR β链可变区（BV）亚家族，经基因扫描确定 T 细胞克隆性，对提示单、寡克隆性增生的 TCR BV 亚家族的 PCR 产物进行测序。结果：乳腺反应性增生患者淋巴结中 T 细胞均为多克隆性增生。乳癌患者转移淋巴结中T 细胞呈单、寡克隆及多克隆性增生，克隆性增生 T 细胞中存在2~5个 BV 亚家族的谱型偏移；CDR3氨基酸序列分析证实单、寡克隆性增生 T 细胞的 CDR3氨基酸序列呈现多样性的特点。结论：乳癌患者 TCR BV 亚家族取用存在谱型偏移，不同 T 细胞克隆的 CDR3氨基酸序列不同。 展开更多

关键词 乳腺肿瘤 T细胞受体 互补决定区3

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单倍型骨髓移植小鼠移植物抗宿主病模型的建立及移植物抗宿主病靶器官T细胞受体克隆检测 被引量：1

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作者 符粤文 吴德沛 +3 位作者 陈峰 冯宇锋 宋永平 朱平 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2009年第6期1171-1175,共5页

目的:建立单倍型骨髓移植小鼠模型,观察单倍型骨髓移植小鼠移植物抗宿主病(GVHD)靶器官的组织病理表现及器官特异性T细胞受体克隆表达。方法:建立单倍型异基因移植小鼠GVHD模型,进行移植前后GVHD靶器官的病理分析,同时应用RT-PCR扩增小... 目的:建立单倍型骨髓移植小鼠模型,观察单倍型骨髓移植小鼠移植物抗宿主病(GVHD)靶器官的组织病理表现及器官特异性T细胞受体克隆表达。方法:建立单倍型异基因移植小鼠GVHD模型,进行移植前后GVHD靶器官的病理分析,同时应用RT-PCR扩增小鼠肝脏、皮肤、结肠、肾脏等组织移植前、后T细胞受体β链可变区(TCRBV)20个家族的基因序列,通过基因扫描判断TCRBV家族的克隆表达和CDR3克隆的性质。结果:单倍型骨髓移植小鼠在移植后14d临床开始出现典型的GVHD表现。移植后24d受鼠肝脏、皮肤、远端回肠等均出现典型的GVHD病理表现,在其T细胞受体谱型图上出现了分属TCRBV家族的单克隆或寡克隆增生的T细胞,而肾脏等非GVHD靶器官中浸润的淋巴细胞为多克隆的T细胞增生。结论:单倍型骨髓移植小鼠在移植后14d出现典型的GVHD表现,GVHD靶器官出现的T细胞单克隆及寡克隆增生可能与GVHD的发生相关。 展开更多

关键词 单倍型骨髓移植 移植物抗宿主病 T细胞受体β链可变区 CDR3 小鼠

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不同HBV感染状态患者外周血CD4^+CD25^+Tregs TCR CDR3谱系漂移特征分析 被引量：1

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作者 吕红 潘宗琴 +3 位作者 陈宇 庄勤建 姚新生 邱隆敏 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期683-690,共8页

目的探讨慢性HBV携带者、慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)及急性乙型肝炎(acute hepatitis B,AHB)这3种不同HBV感染状态下患者外周血中CD4^+ CD25^+调节性T细胞(T regulatory cells,Tregs)T细胞受体(T cell receptor,TCR)β链各... 目的探讨慢性HBV携带者、慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)及急性乙型肝炎(acute hepatitis B,AHB)这3种不同HBV感染状态下患者外周血中CD4^+ CD25^+调节性T细胞(T regulatory cells,Tregs)T细胞受体(T cell receptor,TCR)β链各家族互补决定区3(complementarity-determining region 3,CDR3)谱系漂移特征。方法采集3例正常人、5例慢性HBV携带者、12例CHB及5例AHB患者外周抗凝静脉血,分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC);磁珠分选法分选CD4^+ CD25^+Tregs,提取总RNA,逆转录合成c DNA;根据TCRβ链24个可变区基因(TRBV)家族设计相应的上游引物,并在β链恒定区(BC)设计1条共用的FAM荧光标记下游引物及对照引物。PCR扩增出24个包含完整CDR3区的TRBV家族的PCR产物,电泳鉴定目的片段;PCR产物送上海基康用毛细管电泳法进行基因扫描;用Peak Scanner Software v1.0软件分析TRBV家族CDR3谱系特征。结果不同HBV感染状态下24个TRBV家族CDR3谱系图均呈现一个或者多个形态不一、数量不等的单峰、寡峰、偏峰谱型,其中一些家族表达极低或缺失,在1.5%琼脂糖凝胶电泳图上多数家族于预测范围大小处呈现1条模糊条带,部分家族出现清晰条带或无条带;对不同HBV感染者间各TRBV家族CDR3谱系偏移率进行比较发现:慢性HBV携带者中BV7谱系偏移率明显高于CHB及AHB患者(P均<0.05),CHB患者中BV15谱系偏移率明显高于慢性HBV携带者及AHB患者(P均<0.05),AHB患者中BV23谱系偏移率明显高于CHB及慢性HBV携带者(P均<0.05)。CHB患者外周血CD4^+ CD25^+Tregs TRBV家族CDR3克隆增生总体异常率与HBV DNA载量呈正相关关系(r=0.576 5,P=0.049 8)。结论部分优势利用的TRBV家族可能在感染HBV后免疫耐受以及清除病毒中发挥重要作用。 展开更多

关键词 慢性HBV携带者 慢性乙型肝炎 急性乙型肝炎 T淋巴细胞受体 互补决定区3

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外周造血干细胞移植后及出现GVHD时T细胞β链CDR3谱型分析 被引量：1

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作者 姚新生 周明乾 +4 位作者 马骊 罗微 冯晓勤 温茜 王小宁 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期529-532,536,共5页

目的初步探讨外周造血干细胞(PBSC)移植后以及出现移植物抗宿主疾病(GVHD)时,外周血T细胞!链的CDR3谱型变化和特征。方法采用免疫扫描谱型分析技术,监测1例重型β-地中海贫血移植前、移植后23d、GVHD时(移植后28d)患者外周血单核细胞(PB... 目的初步探讨外周造血干细胞(PBSC)移植后以及出现移植物抗宿主疾病(GVHD)时,外周血T细胞!链的CDR3谱型变化和特征。方法采用免疫扫描谱型分析技术,监测1例重型β-地中海贫血移植前、移植后23d、GVHD时(移植后28d)患者外周血单核细胞(PBMC)及供者PBSC标本T细胞β链的CDR3谱型变化,基因扫描(GeneScan)和测序分析克隆性增生T细胞TCR分子特征。结果患者移植前PBMC的24个TCR BV家族CDR3谱型均呈高斯分布,部分家族在移植后23d、和GVHD时呈现为寡峰和单峰,同时部分家族消失,单克隆增生T细胞TCR beta链的测序结果显示不同的CDR3区组成,设计特异的CDR3引物进一步分析提示其可能来源于干细胞移植后的分化。结论PBSC移植后23d,PBMC中的多数24TCR BV家族CDR3谱型表现为多克隆,GVHD时,部分家族出现明显的单、寡克隆增生,这些特异T细胞可能在GVHD中发挥重要作用。对移植前后TCR CDR3谱型和特异TCR分子特征的分析将有助于PBSC移植后免疫重建的评估和出现排斥反应时的特异性治疗。 展开更多

关键词 T淋巴细胞受体 互补决定区3 免疫扫描谱型分析 移植物抗宿主疾病

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