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新生大鼠心肌细胞原代培养方法的改良 被引量：16
1
作者 张琳 李东野 +5 位作者 王志荣 夏勇 朱红 潘德峰 张卓琦 杨煜 《徐州医学院学报》 CAS 2008年第5期303-306,共4页
目的探讨更为简单、有效的新生大鼠心肌细胞分离、培养方法。方法取出生24 h内大鼠左心室,剪碎,0.125%胰蛋白酶、0.08%胶原酶Ⅰ分离,离心收集心肌细胞,差速贴壁法和化学试剂抑制非心肌细胞生长,纯化后培养于DMEM培养基。免疫荧光鉴定纯... 目的探讨更为简单、有效的新生大鼠心肌细胞分离、培养方法。方法取出生24 h内大鼠左心室,剪碎,0.125%胰蛋白酶、0.08%胶原酶Ⅰ分离,离心收集心肌细胞,差速贴壁法和化学试剂抑制非心肌细胞生长,纯化后培养于DMEM培养基。免疫荧光鉴定纯度,0.4%台盼蓝染色检查心肌细胞成活率。结果心肌细胞纯度为95%,平均成活率96%,并出现同簇细胞的同步跳动。结论本研究应用改良的新生大鼠心肌细胞培养方法,心肌细胞存活率高,纯度高,且操作简便,重复性好,是一种较为理想的心肌细胞原代培养方法,可满足实验要求。 展开更多
关键词 心肌细胞 原代培养 胶原酶ⅰ
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胶原酶Ⅰ消化法体外分离培养奶牛乳腺上皮细胞 被引量：5
2
作者 徐丹丹 孙志鹏 +7 位作者 张旭 刘东宇 许小楠 王乐 陈嘉 王建发 杨彬 武瑞 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2016年第9期1060-1065,共6页
为获得纯净的奶牛乳腺上皮细胞,该研究采用胶原酶I消化法,在不添加外源激素及生长因子的条件下培养奶牛乳腺上皮细胞。采用差时消化与差速贴壁方法,对奶牛乳腺上皮细胞进行纯化。采用Western blot方法检测细胞中β-酪蛋白(β-casein,CN... 为获得纯净的奶牛乳腺上皮细胞,该研究采用胶原酶I消化法,在不添加外源激素及生长因子的条件下培养奶牛乳腺上皮细胞。采用差时消化与差速贴壁方法,对奶牛乳腺上皮细胞进行纯化。采用Western blot方法检测细胞中β-酪蛋白(β-casein,CNS2)的水平。通过免疫荧光技术对细胞进行鉴定。结果显示,纯化后的细胞呈现典型的"铺路石"或"鹅卵石"样。细胞角蛋白-18(cytokeratin-18,CK-18)反应呈阳性,波形蛋白反应呈阴性。细胞传至15代冻存并复苏后生长状态依然良好。这提示,胶原酶I消化法在不添加外源激素及生长因子的条件下可以获得奶牛乳腺上皮细胞,以用于后续实验。 展开更多
关键词 胶原酶ⅰ 奶牛乳腺上皮细胞 原代培养 免疫荧光
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两种方法分离子宫内膜干细胞的比较 被引量：3
3
作者 马颖 何援利 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第6期1089-1093,共5页
背景:目前国内外尚无统一方法分离培养子宫内膜干细胞,实验重复性较差。目的:寻找一种方便、高效、科学的体外分离子宫内膜干细胞的方法。方法:采用混合法(机械和酶消化相结合)及胶原酶Ⅰ法分离子宫内膜干细胞,比较两种方法分离所得活... 背景:目前国内外尚无统一方法分离培养子宫内膜干细胞,实验重复性较差。目的:寻找一种方便、高效、科学的体外分离子宫内膜干细胞的方法。方法:采用混合法(机械和酶消化相结合)及胶原酶Ⅰ法分离子宫内膜干细胞,比较两种方法分离所得活细胞数及细胞生长周期的差异;并采用免疫细胞化学法和RT-PCR法检测CD90和CD117的表达情况。结果与结论:经过15d的原代培养后,子宫内膜干细胞形态呈圆梭形,细胞贴壁平铺生长,具有成纤维细胞形态,细胞排列无极性;细胞化学染色及RT-PCR法均检测到干细胞标志物CD90和CD117表达,证明培养的细胞具有干细胞特性。混合法获得的活细胞数多于胶原酶Ⅰ法,其差异有显著性意义(P<0.01),两种方法分离所得的细胞具有相同的生长周期。结果说明混合法是一种方便、高效、科学的体外分离子宫内膜干细胞的方法。 展开更多
关键词 干细胞 干细胞培养与分化 子宫内膜干细胞 分离 胶原酶 混合 机械 酶消化 CD90 CD117 省级基金 干细胞图片文章
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Ⅰ型胶原酶消化组织块法体外培养人牙髓细胞 被引量：2
4
作者 王凤明 胡涛 周学东 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期877-879,共3页
目的建立利用Ⅰ型胶原酶消化组织块体外培养人牙髓细胞方法.方法通过组织块Ⅰ型胶原酶消化法进行人牙髓细胞体外培养,免疫细胞化学法鉴定细胞组织来源,进行细胞传代,酶组织化学法对体外复层生长的人牙髓细胞爬片进行碱性磷酸酶组织化学... 目的建立利用Ⅰ型胶原酶消化组织块体外培养人牙髓细胞方法.方法通过组织块Ⅰ型胶原酶消化法进行人牙髓细胞体外培养,免疫细胞化学法鉴定细胞组织来源,进行细胞传代,酶组织化学法对体外复层生长的人牙髓细胞爬片进行碱性磷酸酶组织化学染色,并检测其矿化能力.结果采用Ⅰ型胶原酶消化组织块法体外培养的原代牙髓细胞,在第15～20 d出现汇合,第4～6代牙髓细胞在连续培养后具有复层生长特性,并具有显著的碱性磷酸酶活性,阳性染色强弱部位呈区域性分布,连续培养的牙髓细胞可形成矿化结节.结论Ⅰ型胶原酶消化组织块法可以很好地进行人牙髓细胞体外培养,可以用酶组织化学法研究牙髓细胞的生物学特性. 展开更多
关键词 牙髓细胞 细胞培养 ⅰ型胶原酶 碱性磷酸酶
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小鼠原代胸腺上皮细胞分离方法的比较与优化
5
作者 夏洁云 袁姝姝 +3 位作者 付瑞雪 王军杰 徐开林 赵恺 《徐州医科大学学报》 CAS 2017年第5期298-303,共6页
目的比较几种小鼠原代胸腺上皮细胞（TEC）分离方法的效果，筛选简单、高效、实用的分离方法。方法将小鼠胸腺组织根据所用的消化分离方法分为以下几组：胶原酶Ⅰ组 （Collagenase Ⅰ, Col IE组, 1 mg/ml）、DispaseⅡ组 （DisⅡ组, 3 m... 目的比较几种小鼠原代胸腺上皮细胞（TEC）分离方法的效果，筛选简单、高效、实用的分离方法。方法将小鼠胸腺组织根据所用的消化分离方法分为以下几组：胶原酶Ⅰ组 （Collagenase Ⅰ, Col IE组, 1 mg/ml）、DispaseⅡ组 （DisⅡ组, 3 mg/ml）、Col IE＋低浓度DisⅡ组 （Col IE/Dis Ⅱ-L组, 0.75 mg/ml）、Col IE＋中浓度DisⅡ组 （Col IE/Dis Ⅱ-M组, 1.5 mg/ml）、Col IE＋高浓度DisⅡ组（Col IE/DisⅡ-H组, 3 mg/ml）。优选出最适消化方法后，将所得单细胞悬液分成Percoll实验组以及Percoll对照组。采用血细胞计数板进行总细胞数计数，台盼蓝染色法观察细胞的活性；使用流式细胞术检测胸腺基质细胞（TSC）以及TEC的比例。结果与单独使用DisⅡ与Col IE相比，Col IE与不同浓度Dis Ⅱ联合使用均能加快胸腺组织消化（P〈0.01），获取单个胸腺的总细胞数较多，尤以中、高浓度DisⅡ与Col IE联合消化效果更佳（P〈0.05或P〈0.01）。与单独使用酶消化组相比，Col IE与中、高浓度DisI联合消化均可不同程度地增加获取TSC和TEC的比例（P〈0.01）。与Percoll对照组相比，Percoll密度梯度离心进一步提高获取TSC和TEC的比例（P〈0.05）。此外，各种消化分离方法均可获得高活细胞率的细胞。结论Col IE与DisⅡ联合消化，结合Percoll密度梯度离心可获取数量多、活性高的小鼠原代TEC。 展开更多
关键词 胸腺上皮细胞 单细胞分离 胶原酶 中性蛋白酶 密度梯度离心法
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Ⅰ型胶原酶对人牙周膜胶原蛋白构象影响的拉曼光谱研究 被引量：1
6
作者 刘懋 唐苗宁 +4 位作者 管佳妮 谢理哲 吴斌 顾敏芬 严斌 《口腔医学》 CAS 2021年第6期481-485,共5页
目的通过激光共聚焦拉曼光谱仪进行人牙周膜结构测定,探讨Ⅰ型胶原酶处理后牙周膜胶原纤维中胶原蛋白二级结构的变化。方法将人前磨牙牙根自颈部至根尖切分为3片2 mm薄片,选择根中部牙周膜样本进行实验。将牙周膜样本分为酶处理组和对照... 目的通过激光共聚焦拉曼光谱仪进行人牙周膜结构测定,探讨Ⅰ型胶原酶处理后牙周膜胶原纤维中胶原蛋白二级结构的变化。方法将人前磨牙牙根自颈部至根尖切分为3片2 mm薄片,选择根中部牙周膜样本进行实验。将牙周膜样本分为酶处理组和对照组,酶处理组样本在室温下进行10 mg/mLⅠ型胶原酶溶液浸泡2 h。两组样本依次进行拉曼光谱仪测定,获得拉曼光谱并进行峰值分析。结果获得正常和胶原酶处理后人牙周膜样本的拉曼光谱图以及胶原蛋白二级结构谱图。人牙周膜拉曼光谱在酰胺Ⅰ带、酰胺Ⅲ带、CH2、酪氨酸和苯丙氨酸都出现特征峰。胶原蛋白的二级结构的主链构象主要由酰胺Ⅰ带(1 600~1 700 cm-1)和酰胺Ⅲ带(1 200~1 350 cm-1)表征,特征峰位在胶原酶处理后出现偏移。对照组牙周膜酰胺Ⅲ带的高斯拟合胶原蛋白各二级结构相对含量百分比分别为:无规卷曲29%,α-螺旋61%,β-回折2%,β-折叠8%。胶原酶处理后酰胺Ⅲ带中α-螺旋的含量下降,无规卷曲、β-回折和β-折叠的含量上升。结论Ⅰ型胶原酶使牙周膜胶原蛋白降解,改变了蛋白的二级结构,可能与牙周膜生物力学性能下降有关。 展开更多
关键词 胶原蛋白 牙周膜 ⅰ型胶原酶 拉曼光谱
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原代人宫颈癌细胞的培养方法
7
作者 程静新 马秀萍 +3 位作者 周萍 袁敏 黄坤 张怡 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第15期2769-2775,共7页
背景:在体外分离、培养宫颈癌上皮细胞,从细胞水平及分子水平研究肿瘤病因及治疗的基础,是宫颈癌组织工程研究的最基本环节。目的:探讨适用于组织工程宫颈癌研究的人宫颈癌原代细胞培养方法以及传代后细胞形态变化、增殖的特性。方法:0.... 背景:在体外分离、培养宫颈癌上皮细胞,从细胞水平及分子水平研究肿瘤病因及治疗的基础,是宫颈癌组织工程研究的最基本环节。目的:探讨适用于组织工程宫颈癌研究的人宫颈癌原代细胞培养方法以及传代后细胞形态变化、增殖的特性。方法:0.25%胰蛋白酶和2%Ⅰ型胶原酶联合消化法体外培养宫颈癌原代细胞,荧光倒置显微镜下观察肿瘤细胞形态、体外生长情况,免疫组化法检测体外培养宫颈癌细胞表面标记物CK17和肿瘤细胞增殖抗原Ki67表达。结果与结论:采用胰蛋白酶与Ⅰ型胶原酶联合消化法体外分离培养人宫颈癌细胞,该法相对简单且重复性较好,所得到的原代细胞纯度较高。经体外传代培养的宫颈癌细胞仍可保持稳定的细胞表型。宫颈癌细胞表面标记物CK17阳性表达,证实细胞为上皮源性,肿瘤细胞增殖抗原Ki67表达阳性提示所培养细胞具有肿瘤细胞恶性增殖的特性。 展开更多
关键词 组织构建 组织构建细胞学实验 细胞培养 宫颈 上皮细胞 培养基 胰蛋白酶 ⅰ型胶原酶 原代细胞 体外培养 生长特点 肿瘤标记物 CK17 KI67 省级基金
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大熊猫皮肤组织酶解分离效果研究
8
作者 张明 郑鸿培 +6 位作者 侯蓉 朱庆 张志和 刘玉良 刘磊 鲜红 李骏 《四川农业大学学报》 CSCD 2004年第1期75-78,共4页
大熊猫皮肤组织块在 2 0 0IU/mL胶原蛋白酶Ⅰ和 0 2 5 %胰蛋白酶中 ,分别在 37℃、4℃下进行酶解的 4个方案中 ,以在 2 0 0IU/mL胶原蛋白酶Ⅰ ,在 4℃下酶解 4 8～ 72h的酶解效果最好 ,活细胞的得率达到 4 6 0 4× 10 6/g 。
关键词 大熊猫 成纤维细胞 胶原蛋白酶ⅰ 胰蛋白酶 细胞培养 酶解分离
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红花对肝星状细胞间质胶原酶及Ⅰ型胶原基因表达的影响
9
作者 王爱民 阴赪宏 +3 位作者 马志杰 马红 李洵 王宝恩 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期67-68,共2页
目的观察红花对HSC－T6细胞间质胶原酶及Ⅰ型胶原基因表达的影响。方法以不同浓度的红花（1．0、0．5g／L）作用于培养的肝星状细胞株HSC．T6细胞48h，收集细胞，提取总RNA；用逆转录定量聚合酶链反应（RT－PCR）方法测定间质胶原酶（MM... 目的观察红花对HSC－T6细胞间质胶原酶及Ⅰ型胶原基因表达的影响。方法以不同浓度的红花（1．0、0．5g／L）作用于培养的肝星状细胞株HSC．T6细胞48h，收集细胞，提取总RNA；用逆转录定量聚合酶链反应（RT－PCR）方法测定间质胶原酶（MMP13）及Ⅰ型胶原的基因表达水平。结果MMP13基因表达水平在红花（1．0、0．5g／L）两组分别为0．63±0．10、0．40±0．07，而空白对照组为0．26±0．04。Ⅰ型胶原基因表达水平在红花（1．0、0．5g／L）两组分别为1．30±0．20、1．97±0．36，而空白对照组为3．12±0．46。结论红花可明显促进HSC-T6细胞间质胶原酶的基因表达，并明显抑制Ⅰ型胶原的基因表达；且这些作用与剂量有关。 展开更多
关键词 红花 肝星状细胞 间质胶原酶 ⅰ型胶原 基因表达
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