10个甲型血友病家系FⅧ基因突变分析 被引量：7

1

作者 李汶 胡晓 +5 位作者 高伯笛 李麓芸 廖怡 唐雪梅 汤卫琳 卢光琇 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期127-132,共6页

目的 分析10个家系中甲型血友病（hemophilia A,HA）患者及女性疑似携带者FⅧ基因突变,并指导产前诊断.方法 应用聚合酶链反应（polymerase chin reaction,PCR）、变性高效液相色谱技术（denaturing high performance liquid chromatogr... 目的 分析10个家系中甲型血友病（hemophilia A,HA）患者及女性疑似携带者FⅧ基因突变,并指导产前诊断.方法 应用聚合酶链反应（polymerase chin reaction,PCR）、变性高效液相色谱技术（denaturing high performance liquid chromatogramphy,DHPLC）和DNA测序技术对10个家系中8例HA患者、12名女性疑似携带者的FⅧ基因进行突变检测,并应用St14（DXS 52）、13（CA）n、EX18/BclⅠ3个遗传标记位点对HA家系进行连锁分析.产前诊断检测已知突变位点.针对未见报道的新突变,用限制性内切酶进行分析,同时与100名表型正常的无关个体进行比较,排除多态性.结果 （1）在10个家系中发现5例错义突变、3例移码突变、2例无义突变和2个单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）位点.错义突变c.878A＞G、c.1015A＞G和c.6870G＞T,移码突变c.1282delA、c3072_3073insT和c.4880_4881insA以及SNP位点c.5000 G＞A均为国际血友病网站和人类突变数据库未记载的突变或多态.在100名正常人中未检测到错义突变c.878A＞G、c.1015A＞G和c.6870G＞T.（2）在12名女性疑似携带者中,基困水平确诊9例为HA携带者,3名为正常人.（3）遗传连锁分析为4个家系提供了X风险染色体的有效信息.（4）产前诊断结果显示2例胎儿正常、1例HA携带者和1例HA患者.结论 发现c.878 A＞G、c.1015A＞G、c.6870G＞T、c.1282delA、c.3072 3073insT及c.4880_4881insA共6种能引起甲型血友病的新突变;PCR、DHPLC和DNA测序技术可有效检测甲型血友病患者基因突变,而联合限制性内切酶分析和遗传连锁分析能快速筛查HA携带者,进行有效的产前诊断. 展开更多

关键词 甲型血友病 凝血因子ⅷ 基因诊断 连锁

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两种容量冷沉淀的质量对比分析 被引量：2

2

作者 周竞 达倩倩 +2 位作者 戴书明 李梦婵 阎兵 《中国输血杂志》 CAS 2021年第12期1379-1381,共3页

目的研究25 mL和45 mL冷沉淀中凝血因子Ⅷ(FⅧ)和纤维蛋白原(Fg)浓度、含量及得率的对比分析。方法选取40份200 mL新鲜全血样本分为A组和B组,每组各20份样本,在6 h(抗凝剂ACD)内按照成分制备标准操作规程制备出新鲜冰冻血浆(FFP),1周后... 目的研究25 mL和45 mL冷沉淀中凝血因子Ⅷ(FⅧ)和纤维蛋白原(Fg)浓度、含量及得率的对比分析。方法选取40份200 mL新鲜全血样本分为A组和B组,每组各20份样本,在6 h(抗凝剂ACD)内按照成分制备标准操作规程制备出新鲜冰冻血浆(FFP),1周后将制备的FFP用虹吸法原理制备成25±5 mL和45±5 mL冷沉淀,冰冻1周后在37℃水浴箱融化后检测FⅧ和Fg浓度并计算含量和得率。结果 A组和B组的FVIII浓度分别为(2.990±0.988)和(2.744±0.940)IU/mL,含量分别为(74.75±24.71)和(113.75±30.06)IU,得率分别为(70.1±16.6)和(85.0±7.6)%;Fg的浓度分别为(6.013±1.679)和(5.844±0.683)g/L,含量分别为(150.33±41.99)和(252.23±26.90)mg,得率分别为(41.7±8.6)和(49.1±9.6)%,经统计学分析,两组的FⅧ含量和得率有统计学差异(P<0.05),Fg的含量和得率有统计学差异(P<0.05),FⅧ和Fg的浓度无统计学差异(P>0.05)。结论低容量冷沉淀FⅧ和Fg的含量和得率较低,浓度略高,两种容量产品都能达到全血及成分血质量要求,从临床病人液体输注量方面考虑,建议200 mL全血制备冷沉淀时,适当降低产品容量。 展开更多

关键词 冷沉淀 容量 凝血因子ⅷ 纤维蛋白原

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WT-CII全自动冷沉淀制备仪与过夜融化离心法制备冷沉淀凝血因子的质量对比 被引量：2

3

作者 叶青梅 《齐齐哈尔医学院学报》 2022年第9期870-873,共4页

目的 探讨用沃塘的WT-CⅡ全自动冷沉淀制备仪(简称:全自动制备法,下同)与在2-6℃血液冷藏保存箱过夜融化离心法(简称:手工制备法,下同),不同制备方法对冷沉淀的质量影响,进行对比分析。方法 随机抽出2019年6月—2020年6月制备的200 ml... 目的 探讨用沃塘的WT-CⅡ全自动冷沉淀制备仪(简称:全自动制备法,下同)与在2-6℃血液冷藏保存箱过夜融化离心法(简称:手工制备法,下同),不同制备方法对冷沉淀的质量影响,进行对比分析。方法 随机抽出2019年6月—2020年6月制备的200 ml合格新鲜冰冻血浆49袋,用手工制备法制备的冷沉淀,作为A组;随机抽出2020年7月—2021年7月制备的200 ml合格新鲜冰冻血浆49袋,用全自动制备法制备冷沉淀,作为B组;对A、B两组制备得到的冷沉淀凝血因子中的FⅧ含量和Fib含量进行检测,计算合格率,观察比较全自动制备法和手工制备法对冷沉淀中的FⅧ含量、Fib含量、合格率的影响。结果 两种不同制备方法制备的冷沉淀凝血因子质量都符合国家质量管理标准;采用全自动制备法制备的冷沉淀凝血因子中的FⅧ的含量、Fib的含量均高于采用手工制备法制备的冷沉淀凝血因子中的FⅧ的含量和Fib的含量,其中FⅧ含量差异有统计学意义(P<0.05),Fib含量差异、合格率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 使用沃塘制备仪用全自动制备的方法制备的冷沉淀比传统手工制备法质量更高,制备效率更快。 展开更多

关键词 冷沉淀凝血因子 WT-CⅡ全自动冷沉淀制备仪 凝血因子ⅷ含量 纤维蛋白原含量

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我国人凝血因子Ⅷ制品中血管性血友病因子效力分析 被引量：2

4

作者 杜晞 马莉 +7 位作者 王宗奎 叶生亮 刘凤娟 张容 苏娜 林方昭 曹海军 李长清 《中国输血杂志》 CAS 2021年第6期574-578,共5页

目的获得国内人凝血因子Ⅷ(FⅧ)制品中血管性血友病因子(vWF)的效力信息。方法获得国内7家及国外1家血液制品厂生产的FⅧ制品,检测其中FⅧ和vWF各项指标。结果国内7家FⅧ制品中有2个厂家FⅧ制品中vWF活性损失超过25%;国内不同厂家FⅧ制... 目的获得国内人凝血因子Ⅷ(FⅧ)制品中血管性血友病因子(vWF)的效力信息。方法获得国内7家及国外1家血液制品厂生产的FⅧ制品,检测其中FⅧ和vWF各项指标。结果国内7家FⅧ制品中有2个厂家FⅧ制品中vWF活性损失超过25%;国内不同厂家FⅧ制品中vWF活性与FⅧ活性比值差异较大,P<0.05。C、D、F厂家制品中vWF活性与FⅧ活性比值>1,与国外批准用于治疗vWD的FⅧ制品wilate@相似。而E厂家制品中此比值>0.7且<1,A、B、G厂家制品中此比值<0.5;另外,国内不同厂家FⅧ制品中FⅧ、vWF比活差异较大,P<0.05,且其中FⅧ、vWF比活远低于wilate@。结论国内FⅧ制品中vWF质量与wilate@的差距主要是vWF含量的差距。从各项指标综合考虑国内C、D厂家制品有用于治疗vWD的可能。 展开更多

关键词 血管性血友病因子 人凝血因子ⅷ制品 血管性血友病 vWf多聚体

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血友病A的基因治疗研究进展 被引量：2

5

作者 王英 夏家辉 《生命科学研究》 CAS CSCD 2000年第S1期37-41,61,共6页

血友病A是由于编码凝血因子Ⅷ (简称FⅧ )的基因先天性异常而导致的机体出血紊乱性遗传病 ,基因治疗是彻底治愈血友病A的一种最为理想的治疗措施 .就FⅧ基因及其蛋白质分子的结构与性质、基因治疗载体构建、靶细胞、动物模型及其临床应... 血友病A是由于编码凝血因子Ⅷ (简称FⅧ )的基因先天性异常而导致的机体出血紊乱性遗传病 ,基因治疗是彻底治愈血友病A的一种最为理想的治疗措施 .就FⅧ基因及其蛋白质分子的结构与性质、基因治疗载体构建、靶细胞、动物模型及其临床应用作一简要综述 . 展开更多

关键词 血友病A 凝血因子ⅷ 基因治疗

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基于FⅧ探讨不同脱盐方式的效果及对其成分的影响

6

作者 裴仁俊 杜晞 +5 位作者 孙盼 黎小月 蒋鹏 李长清 林方昭 曹海军 《中国输血杂志》 CAS 2024年第3期304-311,共8页

目的基于人凝血因子Ⅷ(human coagulation factorⅧ,FⅧ)比较5种脱盐方法的脱盐效果及对FⅧ成分的影响,为蛋白脱盐方式提供参考。方法分别用Sephadex G-25 Medium凝胶、Fractogel EMD BioSEC凝胶、超滤、室温透析和4℃透析5种方法对人F... 目的基于人凝血因子Ⅷ(human coagulation factorⅧ,FⅧ)比较5种脱盐方法的脱盐效果及对FⅧ成分的影响,为蛋白脱盐方式提供参考。方法分别用Sephadex G-25 Medium凝胶、Fractogel EMD BioSEC凝胶、超滤、室温透析和4℃透析5种方法对人FⅧ进行脱盐处理。通过Na^(+)、柠檬酸根离子、甘氨酸去除率评估脱盐效果。通过脱盐前后FⅧ蛋白回收率、FⅧ活性(coagulation factorⅧactivity,FⅧ∶C)、VWF抗原(VWF antigen,VWF∶Ag)、VWF活性(VWF activity,VWF∶Ac)、VWF多聚体及SDS-PAGE分析,评估其对FⅧ成分的影响。结果在脱盐效果方面:Na+在超滤脱盐时去除率最低,为(97.90±0.06)%,Fractogel EMD BioSEC凝胶脱盐去除率最高,为(99.82±0.07)%。除Sephadex G-25 Medium凝胶脱盐与Fractoge EMD BioSEC凝胶脱盐间Na^(+)去除率无统计学意义(P=0.90)外,其他4种方法间Na+去除率存在统计学意义。甘氨酸在超滤脱盐时去除率最低,为(95.78±0.42)%,Fractogel EMD BioSEC凝胶脱盐去除率最高,为(99.81±0.08)%。除超滤脱盐外,其他4种脱盐方法间甘氨酸去除率无统计学意义。柠檬酸根离子在5种方法间去除率均无统计学意义(P=0.85)。对于FⅧ成分的影响方面:超滤脱盐FⅧ∶C、VWF∶Ag、VWF∶Ac及蛋白回收率最高,分别为(18.34±1.99)IU/mL、(11.81±0.33)IU/mL、(12.26±0.58)IU/mL、(97.13±1.37)%。5种方法脱盐前后VWF∶Ac/VWF∶Ag无明显变化。SDS-PAGE及VWF多聚体分析表明,不同脱盐方法对蛋白组成种类影响不明显。结论尽管不同方式脱盐对FⅧ蛋白组成种类无明显影响,但脱盐效果存在差异,不同方式脱盐对蛋白回收率、FⅧ∶C、VWF∶Ag及VWF∶Ac影响显著。蛋白处理过程中,对于脱盐方式的选择应给予足够重视。 展开更多

关键词 人凝血因子ⅷ 脱盐 凝胶层析 超滤 透析

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人凝血因子Ⅷ/血管性血友病因子复合物制备工艺中除菌滤器的选择

7

作者 郭全娟 周安 +4 位作者 刘文杰 徐一轲 史文强 陈晨 菅长永 《中国输血杂志》 CAS 2023年第6期483-487,共5页

目的筛选适用于人凝血因子Ⅷ/血管性血友病因子复合物(FⅧ/VWF)的除菌滤器,对除菌过滤工艺进行研究。方法采用过滤量、过滤通量、FⅧ效价回收率、VWF效价回收率、VWF抗原回收率、蛋白质回收率、VWF分子分布等指标,评估4种除菌级滤器过滤... 目的筛选适用于人凝血因子Ⅷ/血管性血友病因子复合物(FⅧ/VWF)的除菌滤器,对除菌过滤工艺进行研究。方法采用过滤量、过滤通量、FⅧ效价回收率、VWF效价回收率、VWF抗原回收率、蛋白质回收率、VWF分子分布等指标,评估4种除菌级滤器过滤FⅧ/VWF复合物的效果。选择其中过滤性能最优的除菌滤器,以过滤总蛋白量、蛋白回收率、过滤效率作为指标,通过一般全因子设计试验,确定适宜的过滤蛋白浓度和过滤速度范围,从而确定工艺操作参数。结果Sartobran P、Sartopore 2 XLG、Sartopore Platinum和Sartopore 2 XLI过滤通量分别为1.71±0.01,1.80±0.01,1.34±0.01,1.81±0.04 L·(m^(2))^(-1)·min^(-1);FⅧ效价回收率(%)分别为97.09±2.82,99.22±0.99,96.87±1.85,93.76±1.21,VWF效价回收率(%)分别为98.12±1.42,99.95±1.85,94.80±1.62,92.09±1.67。Sarto⁃pore 2 XLG与Sartobran P相比,过滤通量(P=0.0004,P<0.001)具统计学意义;与Sartopore Platinum相比,过滤通量(P=5.9ⅹ10-7,P<0.001)、VWF效价回收率(P=0.02,P<0.05)具统计学意义;与Sartopore 2 XLI相比,FⅧ效价回收率(P=0.004,P<0.01)、VWF效价回收率(P=0.005,P<0.01)具统计学意义。Sartopore 2 XLG的最优工艺操作空间为:蛋白浓度0.45~0.58mg/mL,过滤速度为1.48~2.95L·(m^(2))^(-1)·min^(-1)。结论适合FⅧ/VWF复合物除菌过滤的滤器为Sartopore 2 XLG,DoE试验证明Sartopore 2 XLG具有良好的工艺操作空间。 展开更多

关键词 人凝血因子ⅷ/血管性血友病因子复合物 除菌滤器 工艺操作空间

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人凝血因子Ⅷ工艺过程效价检测与分析 被引量：3

8

作者 李青 刘晓 +4 位作者 文圆 窦姿 张安山 张金 何彦林 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2017年第2期186-191,共6页

目的测定人凝血因子Ⅷ(human coagulation factorⅧ,FⅧ)生产过程中各关键质控点的FⅧ活性,计算各工序收率。方法采用FⅧ效价测定法(一期法)测定原料血浆、冷沉淀溶解液、化学沉淀后溶液、S/D病毒灭活后溶液、层析纯化洗脱液、超滤后原... 目的测定人凝血因子Ⅷ(human coagulation factorⅧ,FⅧ)生产过程中各关键质控点的FⅧ活性,计算各工序收率。方法采用FⅧ效价测定法(一期法)测定原料血浆、冷沉淀溶解液、化学沉淀后溶液、S/D病毒灭活后溶液、层析纯化洗脱液、超滤后原液、冻干后样品及干热后样品中FⅧ的效价;Lowry法测定各样品的蛋白含量并计算比活;根据各步制品的效价和重量计算各工序FⅧ活性的收率。结果 10批血浆中FⅧ效价平均值为(0.62±0.17)IU/ml,比活平均值(0.011±0.003)IU/mg;FⅧ活性在各步工序中回收率为:离心冷沉淀工序73.78%,化学沉淀工序79.64%,S/D病毒灭活工序93.10%,离子交换层析工序64.96%,超滤工序94.20%,冻干工序90.33%,干热病毒灭活工序79.25%,整个工艺FⅧ的总活性回收率23.96%。按照血浆中FⅧ平均含量0.62 IU/ml计算,每升血浆可产出FⅧ149 IU。7批FⅧ的生产过程中,原液中FⅧ比活较冷沉淀平均提高了170倍。结论获得了由原料血浆到FⅧ成品各关键工序的收率,为生产出高纯度、高质量的FⅧ提供了数据支持。 展开更多

关键词 人凝血因子ⅷ 效价 比活 工艺过程 收率

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两种不同工艺制备的人凝血因子Ⅷ的比较 被引量：2

9

作者 余伟 牟蕾 +2 位作者 鲁涛 李伟 王黔川 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2015年第12期1320-1323,共4页

目的比较甘氨酸/Na Cl沉淀工艺(盐析工艺)和层析工艺制备的人凝血因子Ⅷ(FⅧ)。方法对盐析工艺和层析工艺制备的工艺过程样品和成品,采用双缩脲法检测蛋白含量,ACL7000血凝仪检测FⅧ凝固活性,并计算比活性,按《中国药典》三部(2010版)... 目的比较甘氨酸/Na Cl沉淀工艺(盐析工艺)和层析工艺制备的人凝血因子Ⅷ(FⅧ)。方法对盐析工艺和层析工艺制备的工艺过程样品和成品,采用双缩脲法检测蛋白含量,ACL7000血凝仪检测FⅧ凝固活性,并计算比活性,按《中国药典》三部(2010版)要求进行Tween-80残留量、TNBP残留量、外观、可见异物、水分、热原和异常毒性检测。结果层析工艺中以新鲜冰冻血浆为原料制备冷沉淀能较好地保证FⅧ的收率;聚乙二醇沉淀步骤能降低操作体积;层析处理能有效去除杂蛋白,使FⅧ比活至少提高25倍;S/D和80℃72 h病毒灭活处理对FⅧ质量无明显影响。两种工艺制备成品的外观、可见异物、异常毒性和热原检查均符合《中国药典》三部(2010版)相关规定,但层析工艺中FⅧ比活明显高于盐析工艺,并且对TNBP和Tween-80的去除效果更显著。结论层析工艺制备的FⅧ比活、Tween-80和TNBP残留量等关键性指标均优于甘氨酸/Na Cl沉淀工艺,该工艺更适于FⅧ的规模化生产。 展开更多

关键词 人凝血因子ⅷ 盐析 层析

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用于人凝血因子Ⅷ生产的DEAE 650M层析凝胶使用寿命的评价 被引量：2

10

作者 吴佳君 谢一舟 +4 位作者 范林 罗超 黄琰 牟蕾 余伟 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2020年第4期399-401,共3页

目的评价用于人凝血因子Ⅷ生产的DEAE 650M层析凝胶的使用寿命。方法在人凝血因子Ⅷ生产用DEAE 650M凝胶层析系统基础上,将柱体积缩小353倍,建立DEAE 650M凝胶层析柱缩小模型。采用该模型连续层析10批次人凝血因子Ⅷ样品,每次层析前均用... 目的评价用于人凝血因子Ⅷ生产的DEAE 650M层析凝胶的使用寿命。方法在人凝血因子Ⅷ生产用DEAE 650M凝胶层析系统基础上,将柱体积缩小353倍,建立DEAE 650M凝胶层析柱缩小模型。采用该模型连续层析10批次人凝血因子Ⅷ样品,每次层析前均用1 mol/mL的NaCl上样,检测理论塔板数和对称系数,以确认柱效;同时分析样品比活性、层析收率、层析纯化倍数、层析上样比例。结果 DEAE 650M凝胶层析缩小模型每次层析人凝血因子Ⅷ样品前,理论塔板数均> 2 000,对称系数均在1. 0~1. 4范围内;纯化后样品比活性均高于20 IU/mg,层析收率均高于40%,层析纯化倍数均大于20倍,层析上样比例均大于25 IU/mL。结论 DEAE 650M凝胶用于人凝血因子Ⅷ生产至少可循环使用10次。 展开更多

关键词 人凝血因子ⅷ DEAE 650M凝胶 使用寿命

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人凝血因子Ⅷ活性生物检定统计法(显色法)的建立 被引量：2

11

作者 林涛 刘珣 +4 位作者 谈丽君 皮亚琨 刘菊 吴蓉 丁亚凌 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2016年第6期628-631,共4页

目的依据《欧洲药典》8.0版规定的生物统计检定法原理,建立检测人凝血因子Ⅷ（FⅧ）活性的显色法。方法采用斜率比模型中随机区组设计显色法实验,进行数据统计分析及结果计算。以FⅧ国际标准品及FⅧ原液、成品为测试样品,确定其线性范围... 目的依据《欧洲药典》8.0版规定的生物统计检定法原理,建立检测人凝血因子Ⅷ（FⅧ）活性的显色法。方法采用斜率比模型中随机区组设计显色法实验,进行数据统计分析及结果计算。以FⅧ国际标准品及FⅧ原液、成品为测试样品,确定其线性范围,并验证其重复性、中间精密度、专属性;用《中国药典》三部（2010版）规定的一期法和建立的方法进行比较。结果当FⅧ效价在0-17.85 IU/L范围内时,标准品和样品的线性相关系数（r）均大于0.99;重复性相对标准偏差（RSD）为2.1%;2位实验人员测定结果经t检验,差异无统计学意义（P〉0.05）;该方法置信限范围为80%-120%。两种方法检测结果差异无统计学意义（P〉0.05）。结论该方法操作简便、快速,测定结果稳定、准确,检测水平符合《欧洲药典》要求,可用于FⅧ活性检测。 展开更多

关键词 人凝血因子ⅷ 效价 生物检定统计法 显色法

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不同配方的冻干保护剂对人凝血因子Ⅷ制品干热法灭活猪细小病毒效果的影响 被引量：2

12

作者 李策生 邹莉 +5 位作者 李陶敬 胡勇 邢延涛 彭焱 周雁翔 李娟 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第12期1772-1775,共4页

目的研究不同配方的冻干保护剂对人凝血因子Ⅷ制品干热法灭活非脂包膜指示病毒猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)效果的影响。方法取人凝血因子Ⅷ原液,分别加入A、B、C 3种配方(氯化钠浓度为C<A<B)缓冲液,经超滤透析制备人凝血... 目的研究不同配方的冻干保护剂对人凝血因子Ⅷ制品干热法灭活非脂包膜指示病毒猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)效果的影响。方法取人凝血因子Ⅷ原液,分别加入A、B、C 3种配方(氯化钠浓度为C<A<B)缓冲液,经超滤透析制备人凝血因子Ⅷ半成品后,加入>6 LgTCID50/ml的指示病毒PPV,进行冻干、干热法灭活(100℃30 min),检测残余PPV滴度;用筛选出的最佳配方制备3批人凝血因子Ⅷ半成品,进行冻干和干热法灭活,检测残余PPV滴度,验证PPV灭活效果;按照《中国药典》三部(2010版)人凝血因子Ⅷ的成品检测要求对人凝血因子Ⅷ效价、外观、水分、复溶时间和复溶后外观进行检测。结果在100℃30 min条件下,可有效灭活配方A制备的人凝血因子Ⅷ半成品中的指示病毒PPV,确定配方A为最佳冻干保护剂配方;3批凝血因子Ⅷ经干热灭活后,可使残余PPV滴度下降(4.08±0.02)LgTCID50/0.1 ml,且灭活过程对人凝血因子Ⅷ的生物学活性无明显影响,步骤活性回收率为(91.1±2)%。结论已成功研制出1种冻干保护剂配方,应用干热灭活法对人凝血因子Ⅷ制品中非脂包膜病毒PPV具有较好的灭活效果,该方法与有机溶剂/表面活性剂(solvent/detergent,S/D)法联合去除/灭活病毒,可有效提高人凝血因子Ⅷ产品的安全性。 展开更多

关键词 冷冻干燥 人凝血因子ⅷ 猪细小病毒 灭活

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一种人凝血因子Ⅷ产品的临床前药物安全性评价 被引量：1

13

作者 牟蕾 鲁涛 +2 位作者 王黔川 李伟 余伟 《中国输血杂志》 CAS 北大核心 2016年第1期46-49,共4页

目的评价1种以新鲜冰冻血浆为原料制备的人凝血因子Ⅷ(FⅧ)产品的药物安全性。方法按照《中国药典》方法对小鼠和豚鼠腹腔注射FⅧ做异常毒性试验;采用体外试管法进行兔红细胞体外溶血试验;采用同体自身对照法进行兔血管刺激性试验;对F... 目的评价1种以新鲜冰冻血浆为原料制备的人凝血因子Ⅷ(FⅧ)产品的药物安全性。方法按照《中国药典》方法对小鼠和豚鼠腹腔注射FⅧ做异常毒性试验;采用体外试管法进行兔红细胞体外溶血试验;采用同体自身对照法进行兔血管刺激性试验;对FⅧ制备过程的添加剂残留量进行毒理分析。结果小鼠和豚鼠经腹腔注射本品<30min均无异常反应,观察期结束时,小鼠平均增加体重>50%,豚鼠平均增加体重>20%;体外溶血试验在15、30、45min,60、120和180 min均未观察到兔红细胞溶血,也未见红细胞聚集;多次和单次静脉注射新西兰兔,除部分对照组和试验组动物出现由于给药时机械操作或反复给药引起的与本品无关的红斑和轻微血管扩张外,均未见明显异常;本品的铝残留量<30μg/L,抗-A抗-B血凝素均<1∶64,Tween-80残留量<100μg/m L、磷酸三丁酯残留量<10μg/m L、聚乙二醇残留量<0.5 g/L。结论该FⅧ产品经动物及体外的药理毒理试验和病毒安全性试验证明是安全的,可用于临床。 展开更多

关键词 人凝血因子ⅷ(fⅷ) 异常毒性试验 溶血试验 刺激性试验

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抗人凝血因子Ⅷ-C1C2区单克隆抗体的制备及鉴定 被引量：1

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作者 张婷婷 赵益明 +2 位作者 李振宇 沈飞 阮长耿 《苏州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2010年第1期106-109,共4页

目的制备抗人凝血因子Ⅷ(FⅧ)C1C2区单克隆抗体(mAb),并对其进行生化和生物学鉴定。方法采用基因重组技术表达FⅧ-C1C2区蛋白(rFⅧ-C1C2),以rFⅧ-C1C2免疫8周龄Balb/C小鼠,小鼠脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合后,ELISA法筛选阳性克隆,制... 目的制备抗人凝血因子Ⅷ(FⅧ)C1C2区单克隆抗体(mAb),并对其进行生化和生物学鉴定。方法采用基因重组技术表达FⅧ-C1C2区蛋白(rFⅧ-C1C2),以rFⅧ-C1C2免疫8周龄Balb/C小鼠,小鼠脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合后,ELISA法筛选阳性克隆,制备稳定分泌抗rFⅧ-C1C2mAb的细胞株,并对mAb进行生化和免疫学鉴定。结果获得一株抗rFⅧ-C1C2区单克隆抗体阳性克隆2B11,命名为SZ-133。琼脂糖双扩散鉴定为IgG1类,Westernblot法证实SZ-133可与rFⅧ-C1C2区蛋白及重组的全长FⅧ特异性结合,但不影响FⅧ的凝血活性。结论表达了rFⅧ-C1C2,并制备出了抗人凝血因子Ⅷ的单克隆抗体SZ-133,它能特异识别血浆及重组的FⅧ,有可能用于基础和临床应用研究。 展开更多

关键词 人凝血因子ⅷ(fⅷ)C1C2区 原核表达 单克隆抗体 鉴定

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一种离子交换层析制备人凝血因子Ⅷ方法的建立及保护剂配方的筛选 被引量：1

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作者 牟蕾 鲁涛 +2 位作者 王黔川 李伟 余伟 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2015年第11期1206-1210,共5页

目的建立一种离子交换层析结合病毒灭活方式获得人凝血因子Ⅷ(FⅧ)的方法,并筛选其保护剂配方。方法采用聚乙二醇沉淀法及离子交换层析法对血浆来源的冷沉淀进行纯化,经S/D和80℃72 h干热两步病毒灭活法进行病毒灭活,验证灭活效果,并筛... 目的建立一种离子交换层析结合病毒灭活方式获得人凝血因子Ⅷ(FⅧ)的方法,并筛选其保护剂配方。方法采用聚乙二醇沉淀法及离子交换层析法对血浆来源的冷沉淀进行纯化,经S/D和80℃72 h干热两步病毒灭活法进行病毒灭活,验证灭活效果,并筛选最佳保护剂配方。结果聚乙二醇沉淀后的FⅧ纯度较新鲜血浆提高了约110倍,离子交换层析纯化后FⅧ纯度提高30倍以上;S/D和80℃72 h干热法的灭活效果良好。最佳保护剂配方为0.01 mol/L枸橼酸钠、0.001 mol/L氯化钙、8 mg/ml白蛋白和40 mg/ml盐酸精氨酸。结论该方法可制备纯度较高、稳定性和安全性较好的FⅧ制品,确定的保护剂配方对干热灭活的耐受性良好。 展开更多

关键词 人凝血因子ⅷ 离子交换层析 保护剂 病毒灭活

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重组人凝血因子Ⅷ产品中CHO细胞DNA残留量的检测 被引量：1

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作者 侯慧丽 王艺诺 +3 位作者 汤晓闯 梁明征 马杉姗 韩成权 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第6期667-670,共4页

目的建立特异的重组人凝血因子Ⅷ产品中CHO细胞DNA残留量的检测方法,并进行验证及初步应用。方法采用磁珠分离法提取样品中残留的CHO细胞DNA,再利用Taqman探针法对样品和标准DNA进行Q-PCR检测,根据标准曲线进行DNA残留量分析。对建立的... 目的建立特异的重组人凝血因子Ⅷ产品中CHO细胞DNA残留量的检测方法,并进行验证及初步应用。方法采用磁珠分离法提取样品中残留的CHO细胞DNA,再利用Taqman探针法对样品和标准DNA进行Q-PCR检测,根据标准曲线进行DNA残留量分析。对建立的方法进行专属性、准确性、重复性及中间精密度验证,并对重组人凝血因子Ⅷ原液的CHO细胞DNA残留量进行检测。结果该方法 DNA浓度在0.003~300 pg/μL范围内,线性关系良好,R2为0.999,灵敏度可达0.003 pg/μL;对大肠埃希菌DNA无特异性扩增曲线,专属性良好;检测高、中、低浓度DNA加标量样品的回收率分别为82.68%、71.75%和72.67%,准确性良好;重复性检测的RSD为7.02%,中间精密度检测的RSD为9.31%,重复性及精密度良好。用该方法检测的3批重组人凝血因子Ⅷ原液的DNA残留量均远低于100 pg/剂量。结论成功建立了特异的CHO细胞DNA残留量的检测方法,该方法专属性好,准确性及精密度高,可作为CHO宿主细胞DNA残留量的常规检测方法。 展开更多

关键词 人凝血因子ⅷ CHO细胞 DNA残留量 荧光定量PCR

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柱前衍生HPLC法测定人凝血因子Ⅷ中氨基酸的含量

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作者 王月 喻剑虹 +4 位作者 刘莹 罗晶 郑宵蓓 张雪 龚钦 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第12期1402-1406,1410,共6页

目的 建立人凝血因子Ⅷ中氨基酸含量的柱前衍生HPLC检测方法。方法 采用6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯(6-aminoquinoline-N-hydroxysuccinimide carbamate,AQC)在一定条件下与氨基酸形成稳定的衍生产物(柱前衍生),再通过... 目的 建立人凝血因子Ⅷ中氨基酸含量的柱前衍生HPLC检测方法。方法 采用6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯(6-aminoquinoline-N-hydroxysuccinimide carbamate,AQC)在一定条件下与氨基酸形成稳定的衍生产物(柱前衍生),再通过高效液相色谱仪,采用氨基酸分析柱(150 mm×3.9 mm,4μm)检测,以不同流动相进行梯度洗脱[在《中国药典》三部(2015版)的基础上进行调整],柱温为37℃,流速为1.0 mL/min,检测波长为248 nm。同时验证方法的系统适应性、专属性、线性范围、精密性及准确度。结果 甘氨酸及盐酸赖氨酸均可在25 min内获得较好分离,与相应相邻色谱峰之间的分离度均>1.5,拖尾因子在0.95~1.40之间;各样品的氨基酸种类均能正确检出,混合样品与单纯样品出峰时间保持一致,且供试品溶液与对照品溶液主峰保留时间相对偏差均<2%;当甘氨酸浓度在12.5~62. 5μg/mL,盐酸赖氨酸浓度在4.0~20.0μg/mL时,与相应氨基酸与内标峰面积比呈良好的线性关系,相关系数(r)分别为0.999 9和0.999 8;甘氨酸及盐酸赖氨酸重复性的相对标准偏差(RSD)分别为0.4%和0.5%,中间精密度RSD分别为1.3%和1.0%;两种氨基酸的回收率均在95%~105%范围内,RSD均≤2%。结论 建立的方法具有良好的专属性、精密性及准确度,可用于测定人凝血因子Ⅷ中的氨基酸含量。 展开更多

关键词 人凝血因子ⅷ 氨基酸含量 柱前衍生化 HPLC 甘氨酸 盐酸赖氨酸

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