红景天对体外培养肺腺癌细胞增殖的抑制作用 被引量：14

1

作者 盛辉 苑春莉 李洋 《中国实验诊断学》 2005年第6期936-937,共2页

目的研究红景天(Rhodiola)对体外培养肺腺癌SPC-A-1细胞的直接抑制作用及可能机制。方法通过液体培养法、克隆形成法、3H-TdR掺入法与MTT比色法分别检测给药后肺腺癌细胞的增殖情况、克隆形成率、DNA合成抑制率及生存率来探讨红景天的... 目的研究红景天(Rhodiola)对体外培养肺腺癌SPC-A-1细胞的直接抑制作用及可能机制。方法通过液体培养法、克隆形成法、3H-TdR掺入法与MTT比色法分别检测给药后肺腺癌细胞的增殖情况、克隆形成率、DNA合成抑制率及生存率来探讨红景天的抑瘤效应。结果与红景天共育24小时的细胞伸展不良,胞体回缩,贴附型细胞不贴壁,胞质粗糙,有大量颗粒状物堆积,而且药物浓度越大,形态学改变越明显。给药组肿瘤细胞增殖缓慢甚至停滞,出现细胞脱落、胞浆内颗粒状物堆积等形态学改变,克隆形成数明显少于对照组,3H-TdR掺入率减少,生存率下降。结论红景天对体外培养肺腺癌细胞均具有直接杀伤作用。红景天可能通过干扰细胞代谢、改变细胞外衣的性质抑制肿瘤细胞增殖。 展开更多

关键词 红景天/药理 克隆形成 DNA合成 肺癌 药物作用

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红景天对肝癌细胞增殖的抑制作用 被引量：7

2

作者 罗民 盛辉 王医林 《吉林医学》 CAS 2005年第12期1285-1286,共2页

目的:研究红景天(Rhodiola)对体外培养肝癌QGY-7703的直接抑制作用及可能机制。方法:通过液体培养法、克隆形成法、3H-TdR掺入法与MTT比色法分别检测给药后肿瘤细胞的增殖情况、克隆形成率、DNA合成抑制率及生存率来探讨红景天的抑瘤效... 目的:研究红景天(Rhodiola)对体外培养肝癌QGY-7703的直接抑制作用及可能机制。方法:通过液体培养法、克隆形成法、3H-TdR掺入法与MTT比色法分别检测给药后肿瘤细胞的增殖情况、克隆形成率、DNA合成抑制率及生存率来探讨红景天的抑瘤效应。结果:与红景天共育24h的细胞伸展不良,胞体回缩,贴附型细胞不贴壁,胞质粗糙,有大量颗粒状物堆积,而且药物浓度越大,形态学改变越明显。给药组肿瘤细胞增殖缓慢甚至停滞,出现细胞脱落、胞浆内颗粒状物堆积等形态学改变,克隆形成数明显少于对照组,cpm和A值明显降低即3H-TdR掺入率减少,生存率下降。结论:红景天对体外培养肝癌细胞均具有直接杀伤作用。 展开更多

关键词 红景天/药理 克隆形成 DNA合成 肺癌/药物作用

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促凋亡蛋白Bax和自噬相关蛋白LC3-Ⅱ参与穿心莲内酯对结肠癌细胞的抑制作用 被引量：8

3

作者 李静 何亮 +5 位作者 杨俐萍 赵文静 钱红燕 刘焕良 邵晶晶 王勇军 《肿瘤学杂志》 CAS 2017年第12期1085-1092,共8页

[目的]观察穿心莲内酯(Andrographolide,Andro)对不同分化结肠癌细胞克隆形成、迁移及凋亡的影响,检测凋亡蛋白Bax和自噬蛋白LC3-Ⅱ表达改变,探讨其分子机制。[方法]不同浓度Andro分别作用人结肠癌细胞株Caco-2(高分化)和Lovo(低分化)24... [目的]观察穿心莲内酯(Andrographolide,Andro)对不同分化结肠癌细胞克隆形成、迁移及凋亡的影响,检测凋亡蛋白Bax和自噬蛋白LC3-Ⅱ表达改变,探讨其分子机制。[方法]不同浓度Andro分别作用人结肠癌细胞株Caco-2(高分化)和Lovo(低分化)24h后,MTT法检测药物细胞毒性;划痕愈合、transwell观察细胞迁移能力;检测细胞克隆形成能力;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测Bax、LC3-Ⅱ及cleaved-caspase-3的蛋白表达水平。[结果 ](1)Andro以时间和浓度依赖的方式抑制结肠癌细胞生长,Lovo细胞对Andro的敏感性高于Caco-2细胞。(2)Andro明显抑制Caco-2和Lovo细胞的迁移及克隆形成能力,Lovo细胞的效应更为显著。(3)Andro增加Bax和LC3-Ⅱ表达,且在Lovo细胞中表现更明显。(4)凋亡酶caspase-3的激活参与了Andro诱导Caco-2和Lovo细胞的凋亡。[结论]低分化结肠癌细胞Lovo对Andro的敏感性明显高于高分化Caco-2细胞,Andro通过增加Bax的表达,激活caspase-3介导凋亡信号通路,同时通过增强LC3-Ⅱ表达,促进自噬过程,最终抑制结肠癌细胞生长。 展开更多

关键词 穿心莲内酯 结肠肿瘤 克隆形成 细胞迁移 凋亡 自噬

原文传递

原花青素对肺癌SPC-A-1细胞X射线放射增敏作用 被引量：8

4

作者 张小芳 赵健雄 《实用癌症杂志》 2010年第3期236-239,共4页

目的探讨葡萄籽原花青素提取物对肺腺癌SPC-A-1细胞X射线放疗的增敏作用以及其作为放疗增敏剂的可能机制。方法应用MTT法和集落形成法研究原花青素的放疗增敏效应,单因素方差分析确定增敏剂量和增敏作用,单击多靶曲线拟合计算增敏比及... 目的探讨葡萄籽原花青素提取物对肺腺癌SPC-A-1细胞X射线放疗的增敏作用以及其作为放疗增敏剂的可能机制。方法应用MTT法和集落形成法研究原花青素的放疗增敏效应,单因素方差分析确定增敏剂量和增敏作用,单击多靶曲线拟合计算增敏比及相关参数。流式细胞仪检测药物增敏后细胞凋亡和细胞周期的变化。结果 MTT检测结果表明,单独应用原花青素对SPC-A-1的抑制作用较弱,IC50大于400μg/ml;细胞药物处理后对X射线的敏感性增加,单因素方差分析表明药物和X射线有协同作用(P<0.05),100μg/ml时表现出增敏效应;集落形成结果表明,100μg/ml药物对X射线增敏作用明显,增敏比为2.56。流式细胞术检测发现试验组细胞出现了明显的凋亡峰,提示亚二倍体DNA含量的细胞数量明显增加,细胞凋亡率(28.2%)。实验显示原花青素可以诱导细胞凋亡,并将细胞阻滞于G1期。结论葡萄籽原花青素对肺腺癌SPC-A-1细胞有显著的放疗增敏作用,其机制可能是通过抑制细胞的增殖,G1期阻滞,诱导细胞凋亡。 展开更多

关键词 葡萄籽原花青素 肺癌SPC-A-1细胞 MTT 集落形成 流式细胞术

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miRNA-17-5p靶向调节CDKN1A对鼻咽癌细胞增殖的影响 被引量：7

5

作者 王雯珺 郭敏章 +1 位作者 列璞怡 伍思培 《中国临床研究》 CAS 2016年第2期149-152,共4页

目的研究微小核糖核酸(microRNA-5p,miR)-17-5p通过靶向调节细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1A(CDKN1A)对鼻咽癌细胞株CNE2增殖的影响。方法将miR-17-5p模拟物(mimics)转染人鼻咽癌细胞系CNE2,使用定量逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)和We... 目的研究微小核糖核酸(microRNA-5p,miR)-17-5p通过靶向调节细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1A(CDKN1A)对鼻咽癌细胞株CNE2增殖的影响。方法将miR-17-5p模拟物(mimics)转染人鼻咽癌细胞系CNE2,使用定量逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot检测miR-17-5p对CDKN1A的影响;生物信息学预测miR-17-5p是否有CDKN1A的结合位点;荧光素酶实验检测miR-17-5p是否可靶向调节CDKN1A;通过Western blot和克隆形成实验验证miR17-5p可否通过调节CDKN1A影响鼻咽癌细胞株CNE2的增殖。结果 Western blot和qRT-PCR实验显示,在蛋白水平和mRNA水平与对照组相比,过表达miR-17-5p可降低CDKN1A的表达(P<0.01);Target scan靶基因预测软件分析发现,在CDKN1A的3'UTR有两处miR-17-5p的结合位点;荧光素酶检测结果证实miR-17-5p可特异性的作用于这两个位点;克隆形成实验显示,Western blot和qRT-PCR实验显示,在蛋白水平和mRNA水平,过表达miR-17-5p可显著提高CNE2细胞的克隆形成率(P<0.05),同时过表达miR-17-5p和CDKN1A,则抵消了miR-17-5p对细胞增殖的影响(P<0.05)。结论 CDKN1A是miR-17-5p的靶基因,miR-17-5p通过靶向性抑制CDKN1A的表达可促进鼻咽癌细胞的增殖。 展开更多

关键词 鼻咽癌 细胞增殖 微小核糖核酸-17-5p 细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1A 靶基因 结合位点 克隆形成

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半枝莲醇提取物调控circ_0092283/miR-198对结直肠癌细胞克隆形成和凋亡的影响 被引量：6

6

作者 刘明胜 陈文超 蔡颖畅 《中国药师》 CAS 2021年第9期1606-1611,共6页

目的:探讨半枝莲醇提取物(EESB)对结直肠癌细胞HCT-116克隆形成和凋亡的影响及可能机制。方法:HCT-116细胞分为不同剂量(0,200,400,800μg·ml-1)EESB组、circ0092283小干扰RNA(si-circ0092283)组、小干扰RNA阴性对照(si-NC)组、400... 目的:探讨半枝莲醇提取物(EESB)对结直肠癌细胞HCT-116克隆形成和凋亡的影响及可能机制。方法:HCT-116细胞分为不同剂量(0,200,400,800μg·ml-1)EESB组、circ0092283小干扰RNA(si-circ0092283)组、小干扰RNA阴性对照(si-NC)组、400μg·ml-1 EESB+circ0092283过表达载体(pcDNA-circ0092283)组、400μg·ml-1EESB+miR-198抑制剂(anti-miR-198)组,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹(Western Blot)法检测细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)蛋白表达,实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测circ0092283和miR-198表达。收集30例结直肠癌患者的癌组织和癌旁组织,培养HCT-116和肠上皮细胞HIEC-6,RT-qPCR法检测组织和细胞中circ0092283和miR-198表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证circ0092283和miR-198调控关系。结果:不同剂量(200,400,800μg·ml-1)的EESB作用于HCT-116细胞或干扰circ0092283表达后,HCT-116细胞克隆形成数和细胞中Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),细胞凋亡率和细胞内Bax蛋白表达升高(P<0.05)。结直肠癌组织和HCT-116细胞中circ0092283呈高表达,而miR-198呈低表达。circ0092283靶向负调控miR-198。EESB抑制circ0092283表达,而促进miR-198表达;过表达circ0092283或抑制miR-198表达可降低EESB对HCT-116细胞克隆形成、细胞凋亡和Bal、Bax蛋白表达的影响。结论:EESB可能通过调控circ0092283/miR-198轴降低结直肠癌HCT-116细胞的克隆形成能力,并促进HCT-116细胞凋亡。 展开更多

关键词 半枝莲醇提取物 结直肠癌 circ_0092283 miR-198 克隆形成 凋亡

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Lnc RNA SNHG14通过调节miR-206表达来促进卵巢癌的发展

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作者 崔静 贾志燕 +1 位作者 王立君 郭姝媛 《中国现代药物应用》 2024年第13期170-174,共5页

目的探讨长链非编码RNA(Lnc RNA)小核仁RNA宿主基因14(SNHG14)在卵巢癌组织中的表达,以及Lnc RNA SNHG14通过微小RNA(miR)-206影响卵巢癌的增殖、迁移和侵袭能力。方法收集58例行卵巢癌根治手术患者的癌组织及其邻近的癌旁组织(距离癌组... 目的探讨长链非编码RNA(Lnc RNA)小核仁RNA宿主基因14(SNHG14)在卵巢癌组织中的表达,以及Lnc RNA SNHG14通过微小RNA(miR)-206影响卵巢癌的增殖、迁移和侵袭能力。方法收集58例行卵巢癌根治手术患者的癌组织及其邻近的癌旁组织(距离癌组织>3 cm),将其进行细胞培养,待细胞融合度达到70%左右时进行细胞转染,分别转染阴性对照质粒(si-NC组)、SNHG14高表达质粒(si-SNHG14组);采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测卵巢癌组织与癌旁组织中SNHG14、miR-206表达量,采用细胞增殖活性检测试剂盒(CCK-8)实验、平板克隆形成实验、Matrigel侵袭实验分别检测SNHG14对卵巢癌细胞的增殖能力、克隆形成数、迁移及侵袭;双荧光素酶报告实验检测Lnc RNA SNHG14与miR-206的靶向关系。结果与癌旁组织的(1.01±0.08)、(1.00±0.07)比较,卵巢癌组织中SNHG14表达量(2.56±0.57)升高、而miR-206表达量(0.36±0.11)降低(P<0.05);通过Pearson法检测卵巢癌组织中SNHG14与miR-206的相关性显示,SNHG14与miR-206呈负相关(r=-0.803,P<0.01)。与si-NC组的(1.01±0.06)、(1.00±0.08)比较,si-SNHG14组的SNHG14表达量(0.27±0.07)降低、miR-206表达量(2.96±0.45)升高(P<0.05);si-SNHG14组的吸光度(OD值)(0.29±0.05)较si-NC组的(0.79±0.06)降低,克隆形成数(52.35±7.37)较si-NC组的(120.51±19.34)减少(P<0.05)。si-SNHG14组的迁移细胞数(43.11±5.87)、侵袭细胞数(49.66±11.01)均较si-NC组的(117.11±10.48)、(122.30±12.97)明显减少(P<0.05)。采用starbase预测与SNHG14可互补结合的miR-206。转染miR-206 mimics可降低含有野生型载体的卵巢癌细胞的荧光素酶活性(P<0.05),而未能抑制含有突变型载体的卵巢癌细胞的荧光素酶活性(P>0.05)。结论卵巢癌组织和卵巢癌细胞中Lnc RNA SNHG14的表达会升高,Lnc RNA SNHG14可靶向miR-206,从而调节卵巢癌细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭。 展开更多

关键词 长链非编码RNA 小核仁RNA宿主基因14 微小RNA-206 卵巢癌细胞 增殖 克隆形成 迁移 侵袭

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ZBTB3表达对胶质母细胞瘤细胞增殖和克隆形成的调控

8

作者 王伟民 赵晨卉 +6 位作者 倪思琦 何庆玲 阮玉婷 吴宁霞 张婧 王迎伟 邱文 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2023年第3期297-303,共7页

目的:检查人胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)组织和细胞系中ZBTB3的表达,并探讨ZBTB3对GBM细胞增殖和克隆形成的影响及其调控机制。方法:通过GEPIA2数据库分析GBM患者肿瘤组织中ZBTB3的表达情况。RT-PCR、qPCR和Western blot检测GBM细胞... 目的:检查人胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)组织和细胞系中ZBTB3的表达,并探讨ZBTB3对GBM细胞增殖和克隆形成的影响及其调控机制。方法:通过GEPIA2数据库分析GBM患者肿瘤组织中ZBTB3的表达情况。RT-PCR、qPCR和Western blot检测GBM细胞系(U251、U373、U87)中ZBTB3的mRNA和蛋白表达水平,筛选出ZBTB3表达最高的U87细胞。CCK-8和克隆形成实验检测沉默ZBTB3基因对U87细胞增殖和克隆形成的影响。用p38MAPK、AMPK、Akt1抑制剂处理U87细胞后,Western blot检测p38MAPK、AMPK、Akt1的磷酸化水平,RT-PCR、qPCR和Western blot测定ZBTB3的mRNA和蛋白表达水平,CCK-8和克隆形成实验检测细胞增殖和克隆形成。结果:GBM患者肿瘤组织中ZBTB3的表达显著高于正常组织。U251、U373和U87细胞中均可见ZBTB3的表达,其中U87细胞表达最高。沉默ZBTB3基因能明显抑制U87细胞的增殖和克隆形成。抑制AMPK既能显著降低U87细胞ZBTB3的表达水平,又可明显减弱U87细胞增殖和克隆形成。结论:GBM组织和细胞系中ZBTB3的表达显著上调,GBM细胞中AMPK活化并上调ZBTB3基因的表达,促进GBM细胞的增殖和克隆形成。 展开更多

关键词 胶质母细胞瘤 ZBTB3 AMPK 增殖 克隆形成

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Er:YAG激光对人牙周膜细胞增殖和迁移的影响 被引量：4

9

作者 程群 杨明华 +2 位作者 陈斌 刘娟 闫福华 《国际口腔医学杂志》 CAS 北大核心 2015年第2期135-139,共5页

目的比较不同输出功率和照射时间的Er：YAG激光照射对体外培养的人牙周膜细胞增殖、克隆形成、迁移及转化生长因子-β1（TGF-β1）分泌的影响。方法酶消化法培养人牙周膜细胞,传至3~6代用于实验,按不同的输出功率、相同照射时间（0、0.4... 目的比较不同输出功率和照射时间的Er：YAG激光照射对体外培养的人牙周膜细胞增殖、克隆形成、迁移及转化生长因子-β1（TGF-β1）分泌的影响。方法酶消化法培养人牙周膜细胞,传至3~6代用于实验,按不同的输出功率、相同照射时间（0、0.45、0.60、0.75 W,10 s）及不同照射时间、相同输出功率（0、10、30、60 s,0.60 W）对接种细胞行Er：YAG激光照射,通过噻唑蓝法、克隆形成、划痕实验、酶联免疫吸附法观察激光照射对人牙周膜细胞增殖、克隆形成能力、细胞迁移及TGF-β1分泌的影响。结果输出功率为0.45、0.60 W,照射时间10 s时,可促进细胞的增殖及克隆形成（P〈0.05）,迁移速度和TGF-β1分泌也较对照组快,但此两组间差异无统计学意义。照射时间10 s,输出功率0.60 W时,细胞增殖及克隆形成率明显高于对照组（P〈0.05）,迁移速度和TGF-β1分泌较对照组快;60 s反之。结论在适度的功率和照射时间,Er：YAG激光对人牙周膜细胞增殖、克隆形成、迁移及TGF-β1分泌具有促进作用。 展开更多

关键词 ER:YAG激光 人牙周膜细胞 细胞增殖 细胞迁移 克隆形成 转化生长因子-Β1

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水飞蓟素对神经胶质瘤的体内外抑制作用及机制

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作者 刘明 刘熙鹏 +4 位作者 李淳 甄诚 刘春江 王海洋 巩建青 《中国药房》 CAS 北大核心 2023年第16期1955-1960,共6页

目的探讨水飞蓟素(SM)对神经胶质瘤的体内外抑制作用及潜在机制。方法将人神经胶质瘤细胞系U87随机分为对照组,低、中、高质量浓度SM组(50、100、200μg/mL),蛋白激酶B(又称Akt)激活剂组(SC7920μmol/L),高质量浓度SM联合Akt激活剂组(SM... 目的探讨水飞蓟素(SM)对神经胶质瘤的体内外抑制作用及潜在机制。方法将人神经胶质瘤细胞系U87随机分为对照组,低、中、高质量浓度SM组(50、100、200μg/mL),蛋白激酶B(又称Akt)激活剂组(SC7920μmol/L),高质量浓度SM联合Akt激活剂组(SM 200μg/mL+SC7920μmol/L)。经药物(对照组除外)处理后,检测各组细胞的光密度(OD)值、克隆形成率、凋亡率、增殖/凋亡相关蛋白[增殖细胞核抗原(PCNA)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3(caspase-3)]的表达情况和Akt/促分裂原活化的蛋白激酶(MAPK)信号通路相关蛋白[Akt、p38 MAPK、胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)]的磷酸化水平。于右侧腋窝内皮下注射U87细胞建立异种移植肿瘤裸鼠模型并将其分为对照组,低、中、高剂量SM组(25、50、100 mg/kg),Akt激活剂组(SC7940 mg/kg)、高剂量SM联合Akt激活剂组(SM 100 mg/kg+SC7940 mg/kg),每组5只。经药物(裸鼠对照组除外)干预后,称定其瘤体质量并计算瘤体体积。结果与对照组比较,SM各质量浓度组细胞的OD值,克隆形成率,PCNA、Bcl-2蛋白的表达水平,Akt、p38 MAPK、ERK1/2蛋白的磷酸化水平,以及裸鼠SM各剂量组裸鼠体内的瘤体质量及体积均显著降低/减小,细胞凋亡率和Bax、caspase-3蛋白的表达水平均显著升高,且均有剂量依赖性(P<0.05);Akt激活剂组上述指标的变化趋势与之相反(P<0.05),且Akt激活剂可明显减弱高质量浓度/高剂量SM对神经胶质瘤的体内外抑制作用(P<0.05)。结论SM可能通过抑制Akt/MAPK信号通路来促进U87细胞的凋亡,抑制其增殖、克隆形成以及异种移植瘤裸鼠体内肿瘤的生长。 展开更多

关键词 水飞蓟素 神经胶质瘤 蛋白激酶B/促分裂原活化的蛋白激酶信号通路 细胞增殖 克隆形成 细胞凋亡

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长链非编码RNA H19促进人胃癌MGC-803细胞增殖的实验研究 被引量：4

11

作者 尤梁惠 刘志军 德伟 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2014年第9期774-778,共5页

目的探讨长链非编码RNA H19在胃癌组织及细胞株中的表达情况及其对人胃癌细胞增殖的影响。方法采用实时定量PCR检测30例胃癌组织及其对应癌旁组织,以及胃癌细胞株MGC-803、SGC-7901和胃黏膜上皮正常GES-1细胞中H19的表达情况;分析胃癌组... 目的探讨长链非编码RNA H19在胃癌组织及细胞株中的表达情况及其对人胃癌细胞增殖的影响。方法采用实时定量PCR检测30例胃癌组织及其对应癌旁组织,以及胃癌细胞株MGC-803、SGC-7901和胃黏膜上皮正常GES-1细胞中H19的表达情况;分析胃癌组织H19表达与临床病理特征(年龄、性别、分化程度、肿瘤浸润深度、淋巴结转移及TNM分期)的关系。将胃癌MGC-803细胞分别转染H19特异性小干扰RNA(si-H19组)和阴性对照序列(si-NC组),分别采用四甲基偶氮唑蓝法和克隆形成实验检测两组细胞的增殖情况。结果与癌旁组织和黏膜上皮正常细胞相比较,胃癌组织和细胞株中H19的表达水平升高。胃癌组织中H19表达与年龄、性别、分化程度均无关(P>0.05),但与肿瘤浸润深度、淋巴结转移及TNM分期有关(P<0.05)。si-H19组中H19表达水平低于si-NC组,且细胞活力和细胞克隆数均低于si-NC组,以上差异均有统计学意义(P<0.05)。结论胃癌组织及细胞株中H19呈高表达,下调H19表达能显著抑制胃癌细胞的增殖能力,H19可能参与了胃癌的发生、发展。 展开更多

关键词 长链非编码RNA H19 胃癌 细胞增殖 克隆形成

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miR-146b-5p对骨肉瘤细胞增殖抑制及克隆形成的机制研究 被引量：2

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作者 姜富祥 阿尔宾 +1 位作者 高飞 王兴 《现代检验医学杂志》 CAS 2022年第3期37-42,104,共7页

目的检测骨肉瘤组织中miR-146b-5p表达,探究其对骨肉瘤(osteosarcoma,OS)细胞增殖、克隆形成的影响及潜在分子作用机制。方法选取2018年1月~2020年12月内蒙古自治区巴彦淖尔市医院病理科30组临床骨肉瘤组织及邻近正常组织标本,采用实时... 目的检测骨肉瘤组织中miR-146b-5p表达,探究其对骨肉瘤(osteosarcoma,OS)细胞增殖、克隆形成的影响及潜在分子作用机制。方法选取2018年1月~2020年12月内蒙古自治区巴彦淖尔市医院病理科30组临床骨肉瘤组织及邻近正常组织标本,采用实时荧光定量PCR实验(qRT-PCR)法检测组织中miR-146b-5p表达水平;通过介导转染miR-146b-5p mimics和miR-146b-5p ASO分别过表达和敲低miR-146b-5p表达,探究其对骨肉瘤细胞增殖及克隆形成的影响。通过生物学信息数据库预测miR-146b-5p的潜在靶基因,荧光素酶实验验证两者结合关系,分析miR-146b-5p对靶基因的调控作用。分析靶基因在骨肉瘤中的表达特征及与miR-146b-5p的相关性,通过细胞增殖实验验证两者的调控作用,以其探究在骨肉瘤中发挥功能的潜在分子机制。结果骨肉瘤组织中miR-146b-5p表达(4.096±1.237)显著低于邻近正常组织(5.895±0.834),差异有统计学意义(t=6.605,P<0.001)。miR-146b-5p过表达抑制了骨肉瘤细胞的增殖能力(t=13.233~34.599,均P<0.01)。miR-146b-5p过表达组克隆形成数目(48.912±2.032)较对照组(160.834±9.031)明显降低,差异有统计学意义(t=20.942,P<0.001)。DUSP16是miR-146b-5p的潜在靶基因,miR-146b-5p负向调控双特异性磷酸酶(dual specificity phosphatase 16,DUSP16)表达。骨肉瘤组织中DUSP16表达(5.683±0.457)较邻近正常组织(4.665±0.531)显著升高,差异有统计学意义(t=7.959,P<0.001),与miR-146b-5p表达呈负相关(r=-0.667,P<0.05)。共转染过表达DUSP16逆转了miR-146b-5p对骨肉瘤细胞增殖的抑制作用。miR-146b-5p过表达组P21水平(4.995±0.214)较对照组(1.001±0.002)显著升高,差异有统计学意义(t=32.325,P<0.001);当共转染DUSP16过表达后,P21表达(0.986±0.012)较单独过表达miR-146b-5p组(4.995±0.214)显著降低,差异有统计学意义(t=32.398,P<0.001)。结论骨肉瘤组织中miR-146b-5p显著低表达,其过表达抑制了骨肉瘤细胞的增殖及克隆� 展开更多

关键词 骨肉瘤 微小核糖核酸-146b-5p 双特异性磷酸酶16 增殖 克隆形成

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shRNA干扰eIF4A1基因对胶质瘤细胞体内外生物学特征的影响 被引量：3

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作者 张俊文 范文华 +3 位作者 方胜 陈虹 黄秉仁 刘福生 《中国科学：生命科学》 CSCD 北大核心 2019年第8期987-995,共9页

胶质瘤是颅内常见的肿瘤,其中恶性脑胶质瘤成弥漫性生长,尽管给予手术、放疗或化疗等综合治疗,仍极易复发,迫切需要探索新的治疗方法.但是胶质瘤的治疗靶点匮乏,因此探索有效的靶点对其治疗具有重要的意义.本研究中首先利用中国脑胶质... 胶质瘤是颅内常见的肿瘤,其中恶性脑胶质瘤成弥漫性生长,尽管给予手术、放疗或化疗等综合治疗,仍极易复发,迫切需要探索新的治疗方法.但是胶质瘤的治疗靶点匮乏,因此探索有效的靶点对其治疗具有重要的意义.本研究中首先利用中国脑胶质瘤基因组图谱计划数据库(Chinese glioma genome altas,CGGA)分析了真核生物翻译起始因子中eIF4A1与脑胶质瘤的关系.生物信息学分析显示,eIF4A与胶质瘤病理分级相关并且在胶质瘤细胞中高表达.eIF4A1的抑制剂Silvestrol明显抑制胶质瘤细胞的增殖能力.利用慢病毒感染胶质瘤细胞建立shRNA干扰eIF4A1基因的胶质瘤细胞株,进行了一系列体内外生物学特征的实验,研究结果发现,shRNA干扰eIF4A1基因后能够有效抑制胶质瘤细胞的增殖、克隆形成、细胞侵袭和迁移.因此,本实验研究证实eIF4A1是胶质瘤治疗的有效靶点,为胶质瘤的临床治疗提供可靠的理论基础. 展开更多

关键词 胶质瘤 eIF4A1 增殖 克隆形成 侵袭 迁移

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GPER抑制剂对雌激素长期诱导的MCF-12A乳腺上皮细胞生长和克隆形成的影响 被引量：3

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作者 王婧 洪端阳 +2 位作者 陈林 陈妍 沈祥春 《中国医院药学杂志》 CAS 北大核心 2017年第3期235-238,共4页

目的:研究GPER(G protein-coupled estrogen receptor,GPER)抑制剂对雌激素(estrogen,E2)长期作用下乳腺上皮细胞生长和克隆形成的影响,探讨阻断GPER受体防治乳腺癌的可能性。方法:分别使用E2、E2+G15和G15持续作用MCF-12A细胞5周(共传1... 目的:研究GPER(G protein-coupled estrogen receptor,GPER)抑制剂对雌激素(estrogen,E2)长期作用下乳腺上皮细胞生长和克隆形成的影响,探讨阻断GPER受体防治乳腺癌的可能性。方法:分别使用E2、E2+G15和G15持续作用MCF-12A细胞5周(共传11代)建立细胞模型,通过光镜观察细胞形态的变化、台盼蓝计数法分析细胞生长变化,采用Western blot检测雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)及GPER蛋白表达变化,软琼脂糖克隆形成实验分析细胞克隆形成能力。结果:(1)MCF-12A经E2(10,20和40 nmol·L^(-1))连续处理5周后,其体外生长能力与E2浓度呈一定剂量依赖性,其中,E2(20 nmol·L^(-1))组细胞呈多层重叠样生长,排列紊乱,形态变化最为显著。(2)相比于对照组,E2组中不同代数细胞的ERα蛋白表达明显下调,且呈一定时间依赖性,而GPER蛋白表达未见明显变化。(3)GPER抑制剂G15能抑制E2诱导的细胞生长。(4)G15抑制E2诱导的细胞克隆形成。结论:G15可抑制E2对乳腺上皮细胞MCF-12A的促生长及克隆形成作用,提示GPER抑制剂可能可作为乳腺癌的防治药物。 展开更多

关键词 17β-雌二醇 G蛋白偶联雌激素受体 MCF-12A 细胞生长 克隆形成

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shRNA靶向沉默CNTN1表达抑制乳腺癌细胞株MDA-MB-468增殖及克隆形成能力 被引量：3

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作者 贺赛 耿洁 +5 位作者 杨晓民 侯艳妮 范拥国 赵静 张静远 陈楠 《现代肿瘤医学》 CAS 北大核心 2021年第4期564-568,共5页

目的:探讨短发夹RNA(shRNA)靶向沉默CNTN1基因表达对乳腺癌MDA-MB-468细胞增殖及克隆形成能力的影响。方法:采用RT-PCR和Western blot法检测乳腺癌细胞株MCF7-ADR、MDA-MB-468、MCF7以及Hs578T中的CNTN1 mRNA和蛋白表达水平。采用Lipofe... 目的:探讨短发夹RNA(shRNA)靶向沉默CNTN1基因表达对乳腺癌MDA-MB-468细胞增殖及克隆形成能力的影响。方法:采用RT-PCR和Western blot法检测乳腺癌细胞株MCF7-ADR、MDA-MB-468、MCF7以及Hs578T中的CNTN1 mRNA和蛋白表达水平。采用Lipofectamine~(TM)2000向MDA-MB-468细胞株转染成功构建的靶向沉默CNTN1表达的shRNA载体片段,并采用RT-PCR法和Western blot法进行鉴定。分别通过MTT法、流式细胞仪技术和平板克隆实验检测各组细胞增殖及克隆形成能力的改变。结果:CNTN1 mRNA和蛋白表达水平在MDA-MB-468中最高。沉默组MDA-MB-468细胞发生G1期阻滞,增殖能力明显降低(P <0.05),克隆形成能力明显减弱(P <0.05)。结论:CNTN1基因在乳腺癌MDA-MB-468细胞中高表达,沉默其表达可抑制乳腺癌MDA-MB-468细胞增殖和克隆形成能力。 展开更多

关键词 乳腺癌 MDA-MB-468 CNTN1 增殖 克隆形成

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miR-505-3p对胃癌细胞增殖、克隆形成及迁移、侵袭的影响及机制研究 被引量：1

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作者 张金刚 齐普良 +2 位作者 吴刚 郭厚乐 王磊 《现代检验医学杂志》 CAS 2022年第4期69-74,153,共7页

目的检测胃癌组织及细胞中miR-505-3p表达,并探究其对胃癌细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭的影响及潜在分子机制。方法利用实时荧光定量PCR实验(qRT-PCR)检测胃癌组织、癌旁正常组织及胃癌细胞和人正常胃黏膜细胞中miR-505-3p相对表达;... 目的检测胃癌组织及细胞中miR-505-3p表达,并探究其对胃癌细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭的影响及潜在分子机制。方法利用实时荧光定量PCR实验(qRT-PCR)检测胃癌组织、癌旁正常组织及胃癌细胞和人正常胃黏膜细胞中miR-505-3p相对表达;构建miR-505-3p过表达、c-MYC过表达和敲低表达细胞系,通过CCK-8法,克隆斑点形成实验、Transwell侵袭/迁移实验检测miR-505-3p和c-MYC对胃癌细胞增殖、克隆形成及迁移、侵袭的影响;裸鼠皮下成瘤实验验证miR-505-3p对裸鼠肿瘤生长的影响;双荧光素报告实验验证miR-505-3p和c-MYC的靶向关系,并探究其两者间的表达调控作用;Western blot检测miR-505-3p和c-MYC对Wnt/β-catenin通路关键蛋白表达的影响。结果临床胃癌组织中miR-505-3p表达水平较正常癌旁组织显著下调(0.92±0.37 vs 1.74±0.59),差异有统计学意义(t=3.723,P<0.01)。胃癌细胞系MGC803(1.12±0.35),AZ521(2.31±0.24)和HGC-27(2.28±0.43)中miR-505-3p相对表达较人正常胃黏膜细胞系GES1(4.62±0.79)明显降低,差异有统计学意义(F=26.109,P<0.001)。miR-505-3p过表达组细胞增殖(0.92±0.27)、克隆形成(51.67±21.75)、迁移(43.25±15.47)、侵袭(38.53±14.76)能力较NC组(1.85±0.34,128.36±36.42,100.08±2.12,100.12±1.94)明显降低,差异均有统计学意义(t=3.131~7.166,均P<0.05);miR-505-3p过表达抑制了裸鼠生长。c-MYC是miR-505-3p的靶基因,miR-505-3p靶向负调控c-MYC。c-MYC过表达组细胞增殖(2.72±0.68)、迁移(147.15±20.36)、侵袭(145.46±22.73)能力较NC组(1.85±0.34,100.08±2.12,100.12±1.94)明显增高,差异均有统计学意义(t=2.455~4.456,均P<0.05);c-MYC过表达可逆转miR-505-3p对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。miR-505-3p过表达组Wnt(0.46±0.07),β-catenin(0.50±0.05)蛋白相对表达水平明显低于NC组(1.01±0.02,1.02±0.02),差异均有统计学意义(t=8.139,7.342,均P<0.001);过表达c-MYC能够逆转miR-505-3p对Wnt和β-catenin蛋� 展开更多

关键词 胃癌 微小核糖核酸-505-3p C-MYC 增殖 克隆形成 迁移 侵袭

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PRDM5基因抑制前列腺癌细胞22Rv1生长 被引量：2

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作者 王洋 夏梓元 +8 位作者 黄美金 任善成 朱焱 高莉 贺湘洁 徐光 丁桂龄 陆斌 孙颖浩 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期724-728,共5页

目的探讨PRDM5基因在前列腺癌细胞中的抑癌作用。方法采用聚合酶链反应(PCR)、限制性内切酶酶切、T4DNA连接酶连接等方法,克隆PRDM5基因并插入慢病毒载体中。将携带PRDM5基因的慢病毒质粒(或阴性对照质粒)与慢病毒包装质粒通过脂质体法... 目的探讨PRDM5基因在前列腺癌细胞中的抑癌作用。方法采用聚合酶链反应(PCR)、限制性内切酶酶切、T4DNA连接酶连接等方法,克隆PRDM5基因并插入慢病毒载体中。将携带PRDM5基因的慢病毒质粒(或阴性对照质粒)与慢病毒包装质粒通过脂质体法共转染293T细胞,收集病毒上清,感染人前列腺癌细胞株22Rv1。用蛋白质印迹法检测细胞PRDM5的表达,细胞倍增实验和平板克隆实验检测细胞增殖和克隆形成能力,软琼脂克隆形成实验检测细胞非锚着依赖性生长能力。结果成功构建PRDM5重组慢病毒载体,并包装获得慢病毒上清。将PRDM5重组慢病毒载体感染22Rv1细胞后,筛选得到稳定表达细胞株,蛋白质印迹法结果显示该细胞株能稳定表达外源性PRDM5蛋白。过表达PRDM5的前列腺癌22Rv1细胞的增殖能力[倍增时间:(52.5±1.4)h vs(44.0±1.3)h]、克隆形成能力[克隆形成数:(1 114±98)/皿vs(1 361±123)/皿]和非锚着依赖性生长能力[克隆形成数:(94.6±8.7)/孔vs(154.0±3.5)/孔]均低于阴性对照组(P<0.05)。结论前列腺癌22Rv1细胞中PRDM5的过表达具有抑制肿瘤细胞增殖、克隆形成和非锚着依赖性生长的能力。 展开更多

关键词 PRDM5 前列腺肿瘤 细胞增殖 克隆形成 非锚着依赖性生长

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小鼠骨髓瘤中肿瘤干细胞的初步分析 被引量：2

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作者 李雅婷 窦骏 +3 位作者 文萍 赵枫姝 蒋翠莲 顾宁 《微生物学免疫学进展》 2008年第4期31-35,共5页

探讨小鼠骨髓瘤(SP2/0细胞)中肿瘤干细胞存在与否。以克隆形成试验检测SP2/0细胞中具有形成克隆能力细胞的大体比例;采用BrdU标记滞留试验检测SP2/0细胞中含有DNA永生化链的细胞,即具有干细胞特性的细胞;检测SP2/0细胞中具有干细胞特性... 探讨小鼠骨髓瘤(SP2/0细胞)中肿瘤干细胞存在与否。以克隆形成试验检测SP2/0细胞中具有形成克隆能力细胞的大体比例;采用BrdU标记滞留试验检测SP2/0细胞中含有DNA永生化链的细胞,即具有干细胞特性的细胞;检测SP2/0细胞中具有干细胞特性的SP细胞存在情况及其比例。结果显示,SP2/0细胞中有一部分细胞具有形成克隆的能力;SP2/0细胞中含有DNA永生化链的细胞;SP2/0细胞中存在SP细胞,其比例约为0.7%。而且SP2/0细胞中存在肿瘤干细胞。 展开更多

关键词 肿瘤干细胞 克隆形成 DNA永生化链 SP细胞

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分泌蛋白CRLF1表达对结直肠癌细胞增殖和细胞克隆能力的影响 被引量：2

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作者 孙骥 熊永福 +1 位作者 崔文娟 李敬东 《现代医学》 2021年第9期995-1001,共7页

目的:深入研究细胞因子受体样因子1(CRLF1)表达对结直肠癌细胞增殖和细胞克隆能力的影响。方法:酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中CRLF1表达水平,提取新鲜肿瘤及癌旁组织样本RNA,测定CRLF1的相对表达量。培养人结直肠癌细胞株HCT116和SW6... 目的:深入研究细胞因子受体样因子1(CRLF1)表达对结直肠癌细胞增殖和细胞克隆能力的影响。方法:酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中CRLF1表达水平,提取新鲜肿瘤及癌旁组织样本RNA,测定CRLF1的相对表达量。培养人结直肠癌细胞株HCT116和SW620,合成si-NC和si-CRLF1小干扰RNA,对HCT116和SW620细胞进行转染,使用实时聚合酶链反应(real-time PCR)及ELISA法验证转染效率,CCK8实验检测转染后结直肠癌细胞增殖能力的变化,克隆形成实验检测细胞克隆形成的能力,流式细胞术检测细胞凋亡水平。Western blot检测AKT信号通路及变化。结果:结直肠癌患者血清CRLF1水平显著高于健康捐献者血清。结直肠癌组织中CRLF1 mRNAG表达水平显著高于癌旁组织。分别在两种细胞系中通过转染si-CRLF1以实现敲低CRLF1表达。敲低CRLF1表达后结直肠癌细胞HCT116和SW620的细胞增殖能力及细胞克隆形成能力明显减弱(P<0.05),细胞凋亡率显著升高。敲低CRLF1表达后p-AKT表达水平显著降低。结论:CRLF1表达通过调控AKT信号通路调控结直肠癌进展,该蛋白可能成为诊断结直肠癌的生物标志物以及治疗结直肠癌的潜在靶点。 展开更多

关键词 CRLF1 细胞增殖 克隆形成 结直肠癌

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高表达活化白细胞黏附分子对胃癌细胞增殖能力的影响

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作者 尚万兵 王变 《新乡医学院学报》 CAS 2022年第1期15-18,共4页

目的探讨活化白细胞黏附分子(CD166)在胃癌发生、发展中的作用机制。方法取对数生长期胃癌细胞AZ-521随机分为对照组和CD166组,对照组细胞转染慢病毒空载质粒,CD166组细胞转染pLOX-CWBmi1-CD166慢病毒质粒。采用荧光定量聚合酶链反应检... 目的探讨活化白细胞黏附分子(CD166)在胃癌发生、发展中的作用机制。方法取对数生长期胃癌细胞AZ-521随机分为对照组和CD166组,对照组细胞转染慢病毒空载质粒,CD166组细胞转染pLOX-CWBmi1-CD166慢病毒质粒。采用荧光定量聚合酶链反应检测2组AZ-521细胞中CD166 mRNA表达水平,Western blot法检测2组AZ-521细胞中CD166蛋白的表达,细胞计数试剂盒-8检测AZ-521细胞培养12、24、48 h时的增殖能力,吉姆萨染色实验检测AZ-521细胞克隆形成能力。体外构建裸鼠移植瘤模型,连续观察30 d,记录2组裸鼠成瘤情况,并比较第30天2组裸鼠肿瘤体积。结果CD166组AZ-521细胞中CD166 mRNA及蛋白表达水平均高于对照组(P<0.05)。12、24 h时,对照组与CD166组细胞增殖能力比较差异无统计学意义(P>0.05);48 h时,CD166组细胞的增殖能力显著高于对照组(P<0.05)。CD166组细胞克隆形成数显著高于对照组(P<0.05)。第30天时,CD166组小鼠的肿瘤体积显著大于对照组(P<0.05)。结论高表达CD166可促进胃癌细胞AZ-521的增殖能力。 展开更多

关键词 胃癌 CD166 细胞增殖 克隆形成 肿瘤形成

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