犀角地黄汤合银翘散对流感病毒性肺炎小鼠肺病毒滴度和肺组织病理改变的影响 被引量：26

1

作者 郝钰 李季倩 +3 位作者 吴莹 吴珺 路广林 黄启福 《北京中医药大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期739-744,793,共7页

目的观察经典合方犀角地黄汤合银翘散对流感病毒感染致病毒性肺炎小鼠的治疗作用,分析病毒滴度与肺组织病理改变的关系。方法 ICR小鼠120只随机分为6组:正常组,模型组,犀角地黄汤合银翘散中药高、中、低剂量组,利巴韦林组,25μL 50LD50... 目的观察经典合方犀角地黄汤合银翘散对流感病毒感染致病毒性肺炎小鼠的治疗作用,分析病毒滴度与肺组织病理改变的关系。方法 ICR小鼠120只随机分为6组:正常组,模型组,犀角地黄汤合银翘散中药高、中、低剂量组,利巴韦林组,25μL 50LD50病毒液滴鼻建立流感病毒鼠肺适应株感染的小鼠肺炎模型(除正常组外),感染后1 h,正常组和模型组予以双蒸水灌胃;中药高、中、低剂量组分别给予中药46、23、11.5 g/(kg.d)灌胃;利巴韦林组腹腔注射利巴韦林注射液0.1 g/(kg.d);各组均给药2次/d,连续给药7 d。每日观察小鼠的生存率、平均存活天数,体重、体温的变化至感染后14 d。BALB/c小鼠72只随机分为4组,正常组、模型组、中药中剂量组和利巴韦林组,在感染后的24、6、d分别取材,动态观察小鼠肺匀浆中病毒血凝滴度、肺组织切片在光镜和电镜下的病理改变。结果临床等效剂量(中剂量)的犀角地黄汤合银翘散可明显降低感染小鼠的死亡率,延长生存时间,增加体重和升高体温。感染组肺病毒滴度在第2天最高,随后显著下降,而肺组织病理改变在第6天达高峰,二者不同步。犀角地黄汤合银翘散在第2天可降低肺匀浆中的病毒滴度,第4天、第6天与模型组比无差异;在第6天可明显减轻感染小鼠肺组织炎症病变。结论犀角地黄汤合银翘散对小鼠流感病毒性肺炎有明显的治疗作用,直接的抗病毒增殖非其主要作用,可能主要通过抑制机体的炎症级联反应发挥作用。 展开更多

关键词 犀角地黄汤合银翘散 病毒性肺炎 流感病毒 病毒滴度 病理 小鼠

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应用荧光实时定量PCR方法检测重组慢病毒滴度及其感染效率 被引量：14

2

作者 马海燕 方彧聃 张敬之 《生命科学研究》 CAS CSCD 2009年第5期394-398,共5页

慢病毒载体已经广泛应用于动物模型中基因治疗的研究和转基因动物的制备,而准确地测定重组慢病毒的滴度和感染效率是其关键步骤.通过荧光实时定量PCR的方法定量分析重组慢病毒的颗粒数以及病毒的活性滴度,并以GFP报告基因的方法作为对... 慢病毒载体已经广泛应用于动物模型中基因治疗的研究和转基因动物的制备,而准确地测定重组慢病毒的滴度和感染效率是其关键步骤.通过荧光实时定量PCR的方法定量分析重组慢病毒的颗粒数以及病毒的活性滴度,并以GFP报告基因的方法作为对照来验证定量PCR方法的准确性.研究结果显示,应用荧光实时定量PCR法与GFP报告基因法测定得到的病毒活性滴度成正相关,而且前者可以更加准确地测定病毒滴度和病毒感染效率. 展开更多

关键词 慢病毒载体 荧光实时定量PCR 病毒滴度 整合拷贝数 感染效率

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gp64基因相应dsRNA对家蚕核型多角体病毒(BmNPV)增殖的抑制 被引量：9

3

作者 夏定国 张国政 +2 位作者 王文兵 赵巧玲 唐顺明 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期2882-2887,共6页

【目的】研究gp64基因相对应的多个dsRNA对家蚕核型多角体病毒增殖的抑制效果。【方法】体外合成dsRNA,通过病毒滴度试验、实时定量RT-PCR法研究gp64基因的不同区域、不同长度与RNAi干扰效果的关系。【结果】供试的6个dsRNA的最大抑制... 【目的】研究gp64基因相对应的多个dsRNA对家蚕核型多角体病毒增殖的抑制效果。【方法】体外合成dsRNA,通过病毒滴度试验、实时定量RT-PCR法研究gp64基因的不同区域、不同长度与RNAi干扰效果的关系。【结果】供试的6个dsRNA的最大抑制效果相当(滴度TCID50的最大抑制差值为4.00左右);经RNAi的不同时间点的gp64mRNA表达水平均明显下调(P<0.01),其中48h的gp64mRNA的表达量约为对照的1/300。【结论】6个dsRNA均能有效地抑制病毒的基因表达和增殖;gp64ORF第1390～1499位点(G3-3)是RNAi的较佳靶位点。 展开更多

关键词 双链RNA 家蚕核型多角体病毒 gp64基因 病毒滴度 实时定量RT-PCR

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p16逆转录病毒载体的构建及其高滴度克隆的杂交筛选 被引量：6

4

作者 武莎莎 王申五 +1 位作者 马丽萍 曹国栋 《中国生物化学与分子生物学报》 CSCD 2000年第1期82-85,共4页

构建多肿瘤抑制基因 p1 6( mts- 1 )的逆转录病毒载体 ,用一种简便的非放射性杂交方法 ,从多个包装细胞克隆中筛选出病毒滴度高的克隆 ,以提高病毒转导效率 .以 p1 6c DNA全长为目的基因 ,构建逆转录病毒载体 p LMSN,非脂质体转染试剂... 构建多肿瘤抑制基因 p1 6( mts- 1 )的逆转录病毒载体 ,用一种简便的非放射性杂交方法 ,从多个包装细胞克隆中筛选出病毒滴度高的克隆 ,以提高病毒转导效率 .以 p1 6c DNA全长为目的基因 ,构建逆转录病毒载体 p LMSN,非脂质体转染试剂转染兼性包装细胞 PT67,G41 8筛选抗性克隆 ,扩增单个克隆后提取包装细胞上清的病毒 RNA( v RNA) ,以碱性磷酸酶直接标记的目的基因为探针作斑点杂文 ,化学发光自显影法定量测定 ,在短时间内从多个候选克隆中筛选出高产毒的克隆 .为 p1 6基因治疗的实验研究奠定了物质基础 . 展开更多

关键词 p16逆转录病毒载体 vRNA斑点杂交 病毒滴度

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猪伪狂犬病毒Real-time PCR检测方法的建立和弱毒疫苗病毒含量的检测 被引量：7

5

作者 华涛 唐波 +5 位作者 黄江 常晨 刘国阳 张雪花 侯继波 张道华 《江西农业学报》 CAS 2019年第9期73-78,共6页

根据伪狂犬病毒的gB基因设计引物,将含gB基因的质粒作为标准品,绘制标准曲线,建立了伪狂犬病毒PRV的荧光定量PCR检测方法。该检测方法具有良好的重复性、敏感性和特异性,不与PCV2、PPV、CSFV、JEV和PRRSV发生反应。用该方法对不同滴度... 根据伪狂犬病毒的gB基因设计引物,将含gB基因的质粒作为标准品,绘制标准曲线,建立了伪狂犬病毒PRV的荧光定量PCR检测方法。该检测方法具有良好的重复性、敏感性和特异性,不与PCV2、PPV、CSFV、JEV和PRRSV发生反应。用该方法对不同滴度病毒液的基因拷贝数进行检测,发现病毒滴度和病毒拷贝数之间存在较好的相关性。采用该方法对7种商品化PRV弱毒疫苗进行病毒含量检测,结果显示不同商品化弱毒疫苗的病毒含量存在显著差异,与说明书标注的病毒含量基本一致。 展开更多

关键词 猪伪狂犬病毒 GB基因 荧光定量PCR 病毒滴度 基因拷贝数 疫苗含量

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呼吸道合胞病毒感染不同气道上皮细胞的病变特点及易感性分析 被引量：3

6

作者 金鑫 杨丽 +7 位作者 张梅 余本莉 尚鲁俊 杨斌 崔玉霞 范丽 余福勋 叶芝旭 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期371-377,共7页

为了比较几种不同气道上皮细胞对呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)感染后病变特点及易感性。采用RSV A2株感染Hep-2、A549、16HBE、BEAS-2B细胞后,奥林巴斯倒置免疫荧光显微镜观察细胞病变效应,免疫荧光检测RSV N蛋白... 为了比较几种不同气道上皮细胞对呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)感染后病变特点及易感性。采用RSV A2株感染Hep-2、A549、16HBE、BEAS-2B细胞后,奥林巴斯倒置免疫荧光显微镜观察细胞病变效应,免疫荧光检测RSV N蛋白表达及空斑实验测定细胞培养上清液中病毒滴度。结果显示RSV A2株感染Hep-2细胞后最早形成典型的合胞病变,A549细胞次之,16HBE及BEAS-2B形成病变的时间最晚。免疫荧光检测到RSV N蛋白表达特点与细胞病变特点一致。RSV A2在Hep-2上产生的病毒滴度最高,A549细胞次之,在16HBE上产生的病毒滴度最低。提示Hep-2、A549细胞对RSV具有高度易感性,以Hep-2最为敏感。而16HBE、BEAS-2B细胞对RSV感染不敏感,其中16HBE最不敏感。本研究可为选择合适的上皮细胞进行RSV相关研究奠定基础。 展开更多

关键词 呼吸道合胞病毒(RSV) 上皮细胞 细胞病变效应 易感性 病毒滴度

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重组腺病毒载体pAdBM5-GFP-hIL-2的构建及病毒滴度测定

7

作者 匡志鹏 李安娜 +4 位作者 罗小玲 谢裕安 梁安民 尚俊英 吴继宁 《现代肿瘤医学》 CAS 2009年第5期814-817,共4页

目的:构建重组腺病毒载体pAdBM5-GFP-hIL-2,并测定病毒滴度。方法:从Jurkat细胞中提取mRNA,设计特异性引物,通过RT-PCR法扩增hIL-2基因全编码区序列。将测序正确的片段用BglII和PmeI双酶切定向插入到pAdBM5-GFP腺病毒载体中。通过磷酸... 目的:构建重组腺病毒载体pAdBM5-GFP-hIL-2,并测定病毒滴度。方法:从Jurkat细胞中提取mRNA,设计特异性引物,通过RT-PCR法扩增hIL-2基因全编码区序列。将测序正确的片段用BglII和PmeI双酶切定向插入到pAdBM5-GFP腺病毒载体中。通过磷酸钙共沉淀法将线性化重组质粒和腺病毒骨架共转染HEK293A细胞,扩增纯化重组腺病毒,TCID50法测定重组腺病毒滴度。结果:成功构建出表达hIL-2基因的重组腺病毒载体(pAdBM5-GFP-hIL-2),获得了高滴度表达hIL-2基因的重组腺病毒。结论:重组腺病毒表达载体(pAdBM5-GFP-hIL-2)的成功构建及重组腺病毒的获得有利于进一步开展肝癌的转基因治疗研究。 展开更多

关键词 HIL-2 重组腺病毒载体 病毒滴度 pAdBM5-GFP

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呼吸道合胞病毒感染Hep-2及Vero细胞的病变特点及易感性分析 被引量：1

8

作者 叶芝旭 张梅 +3 位作者 金鑫 阳小凤 崔玉霞 余福勋 《中国当代医药》 CAS 2023年第9期7-10,17,F0003,共6页

目的比较Hep-2细胞与Vero细胞感染呼吸道合胞病毒(RSV)的病变特点、易感性,及RSV在两种细胞上产生的子代病毒的感染性。方法实验分为Hep-2空白对照组、Hep-2实验组、Vero空白对照组及Vero实验组。空白对照组未感染病毒,实验组为RSV以MO... 目的比较Hep-2细胞与Vero细胞感染呼吸道合胞病毒(RSV)的病变特点、易感性,及RSV在两种细胞上产生的子代病毒的感染性。方法实验分为Hep-2空白对照组、Hep-2实验组、Vero空白对照组及Vero实验组。空白对照组未感染病毒,实验组为RSV以MOI=1感染细胞。RSV感染两组细胞后,显微镜观察细胞病变效应(CPE),免疫荧光检测RSV N蛋白表达及空斑实验测定病毒滴度,并进一步予Hep-2实验组及Vero实验组产生的子代病毒感染A549细胞,空斑实验比较子代病毒的感染性。结果Hep-2实验组感染后48 h,Vero实验组感染后84 h时均可形成明显的合胞病变,两个实验组的细胞病变特点存在明显差异,免疫荧光检测RSV N蛋白表达特点与细胞病变特点一致,两个实验组均能产生的较高的病毒滴度。但当Hep-2实验组及Vero实验组产生的子代病毒感染A549细胞,发现感染后36、48 h,两组细胞的子代病毒滴度比较,差异无统计学意义(P>0.05),感染后60 h,Hep-2实验组细胞的子代病毒滴度高于Vero实验组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论RSV感染Hep-2及Vero细胞后均可形成明显的合胞病变,均能达到较高病毒滴度,但RSV在Hep-2细胞上产生的子代病毒感染性明显强于Vero细胞产生的子代病毒。 展开更多

关键词 呼吸道合胞病毒 细胞病变效应 易感性 子代病毒 病毒滴度

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重组腺病毒载体pDC316-hIL--24的构建及病毒滴度测定 被引量：2

9

作者 李书华 陈婷婷 +3 位作者 刘谕昆 李灏 陈艺瑛 张雅洁 《分子影像学杂志》 2014年第3期135-139,共5页

目的构建重组腺病毒载体pDC316-hIL-24,并测定病毒滴度。方法从HEK293细胞中提取mRNA,设计特异性引物,通过RT-PCR法扩增hIL-24基因全编码区序列。将测序正确的片段用BglⅡ和HindⅢ双酶切定向插入到pDC316-EGFP穿梭质粒中。构建重组穿梭... 目的构建重组腺病毒载体pDC316-hIL-24,并测定病毒滴度。方法从HEK293细胞中提取mRNA,设计特异性引物,通过RT-PCR法扩增hIL-24基因全编码区序列。将测序正确的片段用BglⅡ和HindⅢ双酶切定向插入到pDC316-EGFP穿梭质粒中。构建重组穿梭质粒pDC316-EGFP-hIL-24,在脂质体介导下与腺病毒辅助大质粒pBHGlox(delta)E1,3Cre共转染293细胞,包装产生复制缺陷型重组腺病毒pDC316-hIL-24,经HEK293细胞扩增,TCID50法测定重组腺病毒滴度。结果成功构建出表达h IL-24基因的重组腺病毒载体(pDC316-hIL-24),获得了高滴度表达hIL-24基因的重组腺病毒。结论重组腺病毒表达载体(pDC315-hIL-24)的成功构建及重组腺病毒的获得有利于进一步开展肿瘤的转基因治疗研究。 展开更多

关键词 hIL-24 重组腺病毒载体 病毒滴度 pDC316-hIL-24

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利用鸡胚成纤维细胞培养禽脑脊髓炎病毒的研究 被引量：1

10

作者 秦卓明 赵继勋 +5 位作者 杨建民 金维江 张世栋 贾强 徐怀英 何叶峰 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2003年第4期3-5,共3页

利用鸡胚成纤维细胞 (CEF)培养禽脑脊髓炎病毒 (AEV) ,经过六次盲传发现 :AEV在 CEF上无细胞病变 (CPE) ,但利用 CEF细胞上清接种 SPF鸡胚 ,可产生不同程度的 AE鸡胚病变。分别取不同时间的感染细胞上清 ,测定 AEV浓度 ,结合培养条件 ,... 利用鸡胚成纤维细胞 (CEF)培养禽脑脊髓炎病毒 (AEV) ,经过六次盲传发现 :AEV在 CEF上无细胞病变 (CPE) ,但利用 CEF细胞上清接种 SPF鸡胚 ,可产生不同程度的 AE鸡胚病变。分别取不同时间的感染细胞上清 ,测定 AEV浓度 ,结合培养条件 ,进而确定 AEV培养的最佳时机。结果表明 :以 AEV在 CEF上培养 7天最好 ,病毒滴度可达 10 2 .8EID50 / 0 .2 ml。将经 CEF培养的 AEV差速离心 (浓缩约 5 0 0倍 ) ,接种 SPF鸡胚 ,可产生典型的鸡胚病变 ,其滴度为 8× 10 5.0 EID50 / 0 .2 m l。通过 Cs Cl密度梯度离心提纯病毒 ,在电镜下观察到了大小基本一致的病毒粒子 ,病毒直径约为 2 5 nm。利用 AEV感染的 CEF或通过“细胞飞片”制备荧光片 ,建立了间接免疫荧光快速检验 CEF是否感染 AEV的方法。 展开更多

关键词 鸡胚 成纤维细胞 细胞培养 禽脑脊髓炎病毒 病毒滴度

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绵羊痘种毒保存期试验 被引量：1

11

作者 陈延飞 孙淼 +2 位作者 陈建 李岭 薛青红 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第6期78-82,共5页

鸡胚化绵羊痘羊体反应细胞毒(以下简称“绵羊痘种毒”)是制备绵羊痘活疫苗的基础种子,对于预防和控制绵羊痘疫情具有重要意义,定期对其检定十分必要。2000年版《中华人民共和国兽用生物制品规程》(以下简称“《规程》”)规定:绵羊痘种毒... 鸡胚化绵羊痘羊体反应细胞毒(以下简称“绵羊痘种毒”)是制备绵羊痘活疫苗的基础种子,对于预防和控制绵羊痘疫情具有重要意义,定期对其检定十分必要。2000年版《中华人民共和国兽用生物制品规程》(以下简称“《规程》”)规定:绵羊痘种毒在-30℃以下,保存期为10年。为进一步探究绵羊痘种毒的保存期,本试验选取1981年1月、1983年1月、1990年4月和2006年2月冻干并于-70℃保存至今的4株绵羊痘种毒,进行病毒含量测定和最小发痘量测定。结果显示,4株绵羊痘种毒的最小发痘量均达到10^(-5)/0.5 mL,符合《规程》之规定;病毒含量分别为10^(3.3)、10^(3.8)、10^(4.8)和10^(5.5) TCID_(50)/0.1 mL,且与最小发痘量在一定范围内呈正相关。结果表明,冻干绵羊痘种毒在-70℃条件下保存39年仍符合生产活疫苗的免疫原性标准,因此可将绵羊痘种毒的保存期延长至-70℃保存30年,本试验为绵羊痘种毒的保藏检定和疫苗生产提供数据支撑。 展开更多

关键词 绵羊痘病毒 种毒 保存期试验 病毒含量 最小发痘量

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Vδ2 γδ T细胞亚群在慢性HCV感染中的特征 被引量：2

12

作者 殷文伟 张琼方 +1 位作者 邵建营 童师雯 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1346-1349,共4页

目的:探讨γδT细胞及其亚群Vδ1和Vδ2 T细胞在慢性HCV感染中的作用。方法:采用流式细胞术检测人外周血γδT细胞及其亚群Vδ1和Vδ2 T细胞比例变化。结果:慢性HCV感染病人外周血中γδT细胞及其亚群Vδ1和Vδ2 T细胞比例与健康对照者... 目的:探讨γδT细胞及其亚群Vδ1和Vδ2 T细胞在慢性HCV感染中的作用。方法:采用流式细胞术检测人外周血γδT细胞及其亚群Vδ1和Vδ2 T细胞比例变化。结果:慢性HCV感染病人外周血中γδT细胞及其亚群Vδ1和Vδ2 T细胞比例与健康对照者相比无显著差异。相关性分析显示HCV感染患者Vδ2 T细胞数目与肝脏损伤成正相关而与病毒滴度不相关。慢性HCV感染病人Vδ2 T细胞处于活化状态,CD107a表达高于对照组。结论:Vδ2 T细胞亚群参与慢性HCV感染所致肝损伤。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 ΓΔT细胞 Vδ2 T细胞 病毒滴度 谷丙转氨酶

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鸡传染性喉气管炎的研究Ⅱ．鸡传染性喉气管炎病毒某些生物学特性的研究

13

作者 施开创 余克伦 《广西农业大学学报》 CSCD 1996年第3期246-252,共7页

对鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）的鸡胚、鸡胚肾细胞等培养系统进行研究；对病毒包涵体、病毒形态进行观察；对病毒毒价进行测定。结果，病毒在鸡胚绒毛尿囊膜产生痘斑和坏死灶，鸡胚发育不良并致死；鸡胚肾细胞稳定地产生合胞体等... 对鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）的鸡胚、鸡胚肾细胞等培养系统进行研究；对病毒包涵体、病毒形态进行观察；对病毒毒价进行测定。结果，病毒在鸡胚绒毛尿囊膜产生痘斑和坏死灶，鸡胚发育不良并致死；鸡胚肾细胞稳定地产生合胞体等细胞病变；绒毛尿囊膜切片经Ｈ－Ｅ梁色，可观察到紫红色嗜酸性核内包涵体充满细胞核；病毒细胞培养物粗提后用负染法电镜观察，绒毛尿囊膜用超薄切片法电镜观察，均可见到病毒颗粒，病毒直径约２４０～３００ｎｍ，核衣壳直径约１００～１４０ｎｍ，外有圆形或椭圆形囊膜；经微量培养系统测定，病毒毒价为１０６．１２ＴＣＩＤ５０／０．０５ｍＬ。 展开更多

关键词 传染性喉气管 病毒 培养系统 鸡病

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转移人端粒酶逆转录酶基因的实验研究 被引量：1

14

作者 杨玉琮 李旭 陈葳 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期549-551,557,共4页

目的　转移人端粒酶逆转录酶基因 (hTERT基因 ) ,建立其转移体系。方法　用脂质体转染的方法将逆转录病毒载体PLNC hTERT转入 ψ 2细胞 ,用产病毒的 ψ 2细胞克隆培养上清重复感染PA317细胞 ,建立产毒PA317/hTERT细胞 ;通过感染内皮细... 目的　转移人端粒酶逆转录酶基因 (hTERT基因 ) ,建立其转移体系。方法　用脂质体转染的方法将逆转录病毒载体PLNC hTERT转入 ψ 2细胞 ,用产病毒的 ψ 2细胞克隆培养上清重复感染PA317细胞 ,建立产毒PA317/hTERT细胞 ;通过感染内皮细胞检测基因转移效果。结果　ψ 2细胞培养上清重复感染 ,使PA317细胞所产病毒滴度提高 2 0倍 ,得到高滴度的PA317/hTERT包装细胞系。用该细胞系产生的病毒上清感染内皮细胞成功。 展开更多

关键词 转移人端粒酶逆转录酶基因 HTERT基因 脂质体 内皮细胞 病毒 细胞培养

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一种制备复制缺陷型重组水疱性口炎病毒新方法的建立 被引量：1

15

作者 贺番 葛金英 +1 位作者 郝永清 仇华吉 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期221-225,共5页

为了提高复制缺陷型重组水疱性口炎病毒(VSV△G*G)的制备效率,对传统制备方法进行了改良,在制备过程中先用VSV△G*G转导细胞1h后,再对其进行转染,24h后收集细胞上清并进行毒价测定。并与用传统方法制备的重组病毒的毒价进行比较,结果表... 为了提高复制缺陷型重组水疱性口炎病毒(VSV△G*G)的制备效率,对传统制备方法进行了改良,在制备过程中先用VSV△G*G转导细胞1h后,再对其进行转染,24h后收集细胞上清并进行毒价测定。并与用传统方法制备的重组病毒的毒价进行比较,结果表明,用改良方法与传统方法制备的重组病毒具有相同的毒价,但改良方法比传统方法节省了20～48h,同时减少了表达的G蛋白诱导细胞融合所造成的细胞损伤。表明改良方法能够代替传统方法制备出高毒价的复制缺陷型重组病毒。 展开更多

关键词 复制缺陷型重组水疱性口炎病毒 转染 转导 病毒毒价

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MCMV不同途径感染免疫缺损性小鼠体内效应的研究 被引量：1

16

作者 朱嘉明 周天鸿 《生命科学研究》 CAS CSCD 2003年第2期161-166,共6页

通过血管注射、腹下注射、唾液腺注射等3种不同途径将野生型小鼠巨细胞病毒(murinecytomegalovirus,MCMV)感染免疫缺损型小鼠CM17SCID(severecombinedimmunodeficiency,严重免疫缺损综合症),在感染后不同的时间内分别取唾液腺、脾、肝... 通过血管注射、腹下注射、唾液腺注射等3种不同途径将野生型小鼠巨细胞病毒(murinecytomegalovirus,MCMV)感染免疫缺损型小鼠CM17SCID(severecombinedimmunodeficiency,严重免疫缺损综合症),在感染后不同的时间内分别取唾液腺、脾、肝、肺和肾脏测定其病毒滴度,以及测定感染后SCID小鼠的死亡率.同时通过唾液腺注射RvM43突变株,测定病毒在唾液腺中的滴度.结果显示:经尾部血管途径注射的体内唾液腺、肺、脾、肝和肾脏的病毒滴度高峰期和SCID小鼠死亡时间均显著性早于经腹下注射、唾液腺注射途径.除唾液腺器官外,经唾液腺注射途径肺、脾、肝和肾脏的病毒的出现时间晚于经尾部血管和腹下注射途径.经唾液腺注射后,唾液腺中突变型RvM43在各时间点的病毒滴度及高峰出现时间与野生型相同.由此可知,从唾液腺感染小鼠后MCMV病毒在唾液腺中的生长不受M43基因突变的影响,小鼠巨细胞病毒不同途径感染免疫缺损型小鼠CM17SCID的体内生物学效应有差异.因此有必要通过不同途径感染宿主来研究MCMV基因的体内功能. 展开更多

关键词 MCMV 感染 免疫缺损性 体内效应 巨细胞病毒 疱疹病毒

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大鼠bcl-x_L cDNA的克隆和高滴度重组bcl-x_L腺相关病毒的制备

17

作者 何湘君 Kunlin JIN +1 位作者 Reed CLARK Steven H.GRAHAM 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期468-472,共5页

以RT PCR法从大鼠脑组织中克隆bcl XL 基因 ,将其定向插入带rep cap基因和neu基因的三功能腺相关病毒 (AAV)载体 ,转染HeLa细胞并以G4 18筛选 ,然后用腺病毒感染筛选后的细胞克隆 ,包装成重组腺相关病毒 .用带rep cap基因的C12细胞筛选... 以RT PCR法从大鼠脑组织中克隆bcl XL 基因 ,将其定向插入带rep cap基因和neu基因的三功能腺相关病毒 (AAV)载体 ,转染HeLa细胞并以G4 18筛选 ,然后用腺病毒感染筛选后的细胞克隆 ,包装成重组腺相关病毒 .用带rep cap基因的C12细胞筛选和滴定产生重组腺相关病毒的细胞克隆 ,粗制细胞裂解物中病毒滴度最高只有 3× 10 5IU ml.从产病毒量较高的克隆大量制备重组病毒 ,经肝素柱高压液相亲和层析法纯化、浓缩病毒后获得了高达 4× 10 11IU ml的重组病毒 .为研究脑缺血动物模型中BCL XL 展开更多

关键词 BCL-XL 腺相关病毒 病毒滴度 制备 重组病毒 载体

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天花粉蛋白对体内体外单纯疱疹病毒-1的抑制作用 被引量：1

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作者 陈光福 尹飞 +3 位作者 张红媛 黄文革 陈凤英 单金兰 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第19期2760-2763,共4页

目的探讨天花粉蛋白对体内体外单纯疱疹病毒-1(HSV-1)的抑制作用。方法动物随机分为模型对照组和天花粉蛋白治疗组,小鼠颅内接种HSV-1建立病毒性脑炎模型,治疗组于接种HSV-1前30min腹腔注射天花粉蛋白注射液,接种病毒后12、24、48和96h... 目的探讨天花粉蛋白对体内体外单纯疱疹病毒-1(HSV-1)的抑制作用。方法动物随机分为模型对照组和天花粉蛋白治疗组,小鼠颅内接种HSV-1建立病毒性脑炎模型,治疗组于接种HSV-1前30min腹腔注射天花粉蛋白注射液,接种病毒后12、24、48和96h、7d分别测定各组脑组织病毒滴定度。培养神经细胞分为正常对照组、病毒对照组、药物预处理组,接种病毒后12、24、48和96h分别测定各组培养神经细胞的病毒滴定度。结果天花粉蛋白治疗组于小鼠颅内接种HSV-1后12、24、48和96h、7d脑组织病毒滴度分别为(1.32±0.39)、(1.27±0.44)、(1.33±0.41)、(1.29±0.48)、(1.16±0.45),明显低于模型组(2.91±0.55)、(2.95±0.56)、(2.93±0.54)、(2.89±0.58)、(2.89±0.44),差异有显著性(P<0.001)。药物预处理组在12、24、48和96h后培养神经细胞病毒滴度分别为(1.12±0.34)、(1.18±0.40)、(1.24±0.38)、(1.26±0.42),明显低于病毒对照组(2.65±0.64)、(2.59±0.53)、(2.83±0.55)、(2.82±0.57),差异有显著性(P<0.001)。天花粉蛋白治疗组小鼠存活率为53.3%,模型组小鼠生存率为6.7%;天花粉蛋白预处理组神经细胞存活率均明显高于病毒对照组,差异有显著性(P<0.01)。结论天花粉蛋白对体内体外单纯疱疹病毒-1具有抑制作用。 展开更多

关键词 天花粉蛋白 单纯疱疹病毒-1 脑组织 细胞培养/神经细胞 病毒滴定度

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小鼠GITRL基因腺病毒载体的构建与鉴定 被引量：1

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作者 马洁 田洁 +5 位作者 刘艳 刘青玲 毛朝明 焦志军 许化溪 王胜军 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1075-1077,共3页

目的:构建重组腺病毒pAdEasy-GFP-GITRL,并测定病毒滴度。方法:从PIRES-GITRL载体上用BglⅡ和SalⅠ双酶切,回收目的基因GITRL,插入同样用BglⅡ和SalⅠ双酶切的穿梭质粒pAdtrack-CMV中,将线性化穿梭质粒骨架质粒pAdEasy-1共转染BJ5183菌... 目的:构建重组腺病毒pAdEasy-GFP-GITRL,并测定病毒滴度。方法:从PIRES-GITRL载体上用BglⅡ和SalⅠ双酶切,回收目的基因GITRL,插入同样用BglⅡ和SalⅠ双酶切的穿梭质粒pAdtrack-CMV中,将线性化穿梭质粒骨架质粒pAdEasy-1共转染BJ5183菌,鉴定正确后,将重组腺病毒载体pAdEasy-GFP-GITRL转染HEK293细胞,以包装出完整腺病毒。TCID50法测定重组腺病毒滴度,Western blot法检测GITRL蛋白表达。结果:成功构建小鼠GITRL基因的重组腺病毒载体(pAdEasy-GFP-GITRL),经包装后获得高滴度表达GITRL基因的重组腺病毒,病毒滴度为2.0×109pfu/mL。Western blot结果显示重组病毒载体能表达GITRL蛋白。结论:重组腺病毒表达载体(pAdEasy-GFP-GITRL)的成功构建及重组腺病毒的获得为GITRL基因干预治疗奠定了基础。 展开更多

关键词 GITRL 重组腺病毒 病毒滴度

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禽肉瘤白血病病毒重组载体的包装及病毒滴度的测定

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作者 龚萍 杨宇 +6 位作者 杨永平 叶胜强 王丽霞 邓兵 喻婷 钱运国 龚炎长 《湖北农业科学》 北大核心 2014年第22期5470-5473,共4页

将重组逆转录病毒融合蛋白表达载体RCASBP-GFP-SMARCE1包装为病毒颗粒,并测定其病毒滴度。利用脂质体转染法在DF-1细胞系中转染重组质粒,收集上清液,超速离心浓缩病毒,用GFP标记法测定病毒滴度。结果显示,转染后3-4 d可见少许GFP阳性细... 将重组逆转录病毒融合蛋白表达载体RCASBP-GFP-SMARCE1包装为病毒颗粒,并测定其病毒滴度。利用脂质体转染法在DF-1细胞系中转染重组质粒,收集上清液,超速离心浓缩病毒,用GFP标记法测定病毒滴度。结果显示,转染后3-4 d可见少许GFP阳性细胞的出现,6-7 d后所有细胞均有GFP的表达,11 d左右细胞达到超汇合状态,开始收集上清液;GFP标记法测定超速离心后的病毒滴度为5×10^10IU/mL。结果表明,成功制备了高滴度的重组逆转录病毒颗粒,为下一步在胚胎中进行相关基因的功能研究奠定了基础。 展开更多

关键词 逆转录病毒载体 病毒包装 绿色荧光蛋白 病毒滴度

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