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甘蔗根癌农杆菌介导转化海藻糖合酶基因获得抗渗透胁迫能力增强植株 被引量:42
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作者 王自章 张树珍 +1 位作者 杨本鹏 李杨瑞 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期140-146,共7页
由双拷贝CaMV35S启动子驱动担子菌灰树花 (Grifolafrondosa)的海藻糖合酶基因 (TSase)构建植物表达载体 pBBBT ,通过三亲交配法将 pBBBT导入根癌农杆菌EHA10 5菌株 ,经根癌农杆菌介导转化甘蔗 (Saccha rumhybrid)栽培品种 ,以增强甘蔗... 由双拷贝CaMV35S启动子驱动担子菌灰树花 (Grifolafrondosa)的海藻糖合酶基因 (TSase)构建植物表达载体 pBBBT ,通过三亲交配法将 pBBBT导入根癌农杆菌EHA10 5菌株 ,经根癌农杆菌介导转化甘蔗 (Saccha rumhybrid)栽培品种 ,以增强甘蔗的抗旱能力。结果表明 ,甘蔗胚性愈伤组织对EHA10 5菌株敏感 ,甘蔗外植体开始大量形成胚性愈伤组织时是感染的适宜时期 ,用膦丝菌素 (PPT)筛选 ,抗性植株发生频率平均为 4 .5 %。经PCR及dot Southern检测证明 ,TSase已经整合到甘蔗基因组中。部分转化植株根叶畸形、株型异常、生长缓慢。移栽到含PEG80 0 0 17.4 % (w/v)的MS培养基后 。 展开更多
关键词 甘蔗 根癌 农杆菌介导转化 海藻糖合酶基因 抗渗透胁迫能力 增强植株
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Expression of the Grifola frondosa Trehalose Synthase Gene and Improvement of Drought-Tolerance in Sugarcane (Saccharum officinarum L.) 被引量:24
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作者 Shu-Zhen Zhang Ben-Peng Yang +4 位作者 Cui-Lian Feng Ru-Kai Chen Jing-Ping Luo Wen-Wei cai Fei-Hu Liu 《Journal of Integrative Plant Biology》 SCIE CAS CSCD 2006年第4期453-459,共7页
Trehalose Is a nonreduclng dlsaccharlde of glucose that functions as a protectant In the stabilization of blologlcal structures and enhances stress tolerance to abiotic stresses in organisms. We report here the expres... Trehalose Is a nonreduclng dlsaccharlde of glucose that functions as a protectant In the stabilization of blologlcal structures and enhances stress tolerance to abiotic stresses in organisms. We report here the expression of a Grlfola frondosa trehalose synthase (TSase) gene for Improving drought tolerance In sugarcane (Saccharum offlclnarum L.). The expression of the transgene was under the control of two tandem copies of the CaMV35S promoter and transferred Into sugarcane by Agrobacterium tumefaciens EHA105. The transgenlc plants accumulated high levels of trehalose, up to 8.805-12.863 mg/g fresh weight, whereas It was present at undetectable level in nontransgenlc plants. It has been reported that transgenlc plants transformed with Escherlchla coil TPS (trehalose-6-phosphatesynthase) and/or TPP (trehalose-6-phosphate phosphatase) are severely stunted and have root morphologlc alterations. Interestingly, our transgenlc sugarcane plants had no obvious morphological changes and no growth Inhibition in the field. Trehalose accumulation in 35S-35S:TSase plants resulted In In- creased drought tolerance, as shown by the drought and the drought physiological Indexes, such as the rate of bound water/free water, plasma membrane permeability, malondlaldehyde content, chlorophyll a and b contents, and activity of SOD and POD of the excised leaves. These results suggest that transgenlc plants transformed with the TSase gene can accumulate high levels of trehalose and have enhanced tolerance to drought. 展开更多
关键词 drought tolerance Grifola frondosa Saccharum officinarum trehalose synthase gene.
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芝田硫化叶菌麦芽寡糖基海藻糖合酶基因在大肠杆菌中的克隆和表达 被引量:11
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作者 陈炜 刘莉 +1 位作者 孙培钰 金城 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期57-61,共5页
用PCR 方法从芝田硫化叶菌中扩增了编码一种新酶,即麦芽寡糖基海藻糖合酶( MTSase) 的基因,扩增的2-2kb DNA 插入到原核表达载体pBV220 中,构建成重组质粒pSBGT1 。pSBGT1 中MTSase ... 用PCR 方法从芝田硫化叶菌中扩增了编码一种新酶,即麦芽寡糖基海藻糖合酶( MTSase) 的基因,扩增的2-2kb DNA 插入到原核表达载体pBV220 中,构建成重组质粒pSBGT1 。pSBGT1 中MTSase 基因在大肠杆菌中得到表达。SDSPAGE 分析表达产物MTSase蛋白的分子量约为74kDa ,同核苷酸序列测定所推导的值相符。表达产物占细胞总蛋白约4-4 % 。pSBGT1 产生的重组酶作用于淀粉部分水解物,使DE 值降低,得到非还原糖或低还原糖。 展开更多
关键词 MTSASE 海藻糖 酶法 大肠杆菌 基因克隆
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以玉米幼胚为受体转化海藻糖合成酶基因 被引量:8
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作者 张志勇 陈梅 +1 位作者 李晚忱 付凤玲 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期743-746,757,共5页
将含酿酒酵母海藻糖合成酶基因(TPS1)的重组质粒pC1300 WTPS,用农杆菌EHA105介导转化玉米幼胚,不经诱导愈伤组织而直接筛选分化成苗。通过对幼胚大小和半胱氨酸(Cys)浓度筛选,发现长度在1.5~2.0mm的幼胚更适合农杆菌介导的幼胚转化,并... 将含酿酒酵母海藻糖合成酶基因(TPS1)的重组质粒pC1300 WTPS,用农杆菌EHA105介导转化玉米幼胚,不经诱导愈伤组织而直接筛选分化成苗。通过对幼胚大小和半胱氨酸(Cys)浓度筛选,发现长度在1.5~2.0mm的幼胚更适合农杆菌介导的幼胚转化,并且在农杆菌与幼胚的共培养阶段添加200mg/L的半胱氨酸,能够有效降低幼胚在农杆菌浸染过程中的褐化率(29.3%),比对照褐化率(53.7%)降低近一半。经PCR检测216株转化植株,得到1株阳性植株。 展开更多
关键词 玉米 幼胚 海藻糖合成酶基因
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Genetic Transformation of Tobacco with the Trehalose Synthase Gene from Grifola frondosa Fr. Enhances the Resistance to Drought and Salt in Tobacco 被引量:9
5
作者 Shu-ZhenZHANG Ben-PengYANG +1 位作者 Cui-LianFENG Huo-LongTANG 《Journal of Integrative Plant Biology》 SCIE CAS CSCD 2005年第5期579-587,共9页
Trehalose is a non-reducing disaccharide of glucose that functions as a protectant in the stabilization of biological structures and enhances the tolerance of organisms to abiotic stress. In the present study, we repo... Trehalose is a non-reducing disaccharide of glucose that functions as a protectant in the stabilization of biological structures and enhances the tolerance of organisms to abiotic stress. In the present study, we report on the expression of the Grifola frondosa Fr. Trehalose synthase (Tsase) gene for manipulating abiotic stress tolerance in tobacco (Nicotiana tabaccum L.). The expression of the transgene was under the control of two tandem copies of the CaMV3 5 S promoter and was transferred into tobacco by Agrobacterium tumefaciens EHA105. Compared with non-transgenic plants, transgenic plants were able to accumulate high levels of products of trehalose, which were increased up to 2.126–2.556 mg/g FW, although levels were undetectable in non-transgenic plants. This level of trehalose in transgenic plants was 400-fold higher than that of transgenic tobacco plants cotransformed with Escherichia coli TPS and TPP on independent expression cassettes, twofold higher than that of transgenic rice plants transformed with a bi functional fusion gene (TPSP) of the trehalose-6-phosphate (T-6-P) synthase (TPS) and T-6-P phosphatase (TPP) of E. coli, and 12-fold higher than that of transgenic tobacco plants transformed the yeast TPS1 gene. It has been reported that transgenic plants with E. coli TPS and/or TPP were severely stunted and had morphological alterations of their roots. Interestingly, our transgenic plants have obvious morphological changes, including thick and deep-coloured leaves, but show no growth inhibition; moreover, these morphological changes can restore to normal type in T2 progenies. Trehalose accumulation in 35S–35S:Tsase plants resulted in increased tolerance to drought and salt, as shown by the results of tests on drought, salt tolerance, and drought physiological indices, such as water content in excised leaves, malondialdehyde content, chlorophyll a and b contents, and the activity of superoxide dismutase and peroxidase in excised leaves. These results suggest that transgenic plants transformed w 展开更多
关键词 drought and salt tolerance genetic transformation Grifola frondosa Fr. Nicotiana tabaccum L. trehalose synthase gene
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密码子优化提高海藻糖合成酶基因在大肠杆菌中的表达水平 被引量:9
6
作者 张晓元 郝荣华 +3 位作者 刘飞 袁丹丹 陈勉 凌沛学 《食品与药品》 CAS 2019年第1期1-6,共6页
目的优化灰色链霉菌海藻糖合成酶(Trehalose synthase,TreS)基因密码子,提高海藻糖合成酶大肠杆菌基因工程菌株表达水平。方法基于大肠杆菌基因组密码子偏好数据表对tres基因进行密码子优化得基因tres1。基因工程法构建分别含tres及tres... 目的优化灰色链霉菌海藻糖合成酶(Trehalose synthase,TreS)基因密码子,提高海藻糖合成酶大肠杆菌基因工程菌株表达水平。方法基于大肠杆菌基因组密码子偏好数据表对tres基因进行密码子优化得基因tres1。基因工程法构建分别含tres及tres1基因的表达载体pET-26b(+)-tres和pET-26b(+)-tres1,CaCl2法转入大肠杆菌BL21(DE3)获得表达海藻糖合成酶的大肠杆菌基因工程菌株,采用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,对摇瓶发酵粗酶液进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析及酶活性测定以确定表达水平。结果 1707 bp海藻糖合成酶tres基因共优化碱基序列268 bp,优化后序列的GC含量由65.8%降低至54.4%,密码子适应指数(CAI)由0.37提升至0.97,SDS-PAGE及酶活性分析表明,含pet-26b(+)-tres1表达载体的大肠杆菌基因工程菌株海藻糖合成酶蛋白表达量高,酶活性比含pet-26b(+)-tres工程菌提高60.3%以上。结论密码子优化可有效提高海藻糖合成酶TreS蛋白在大肠杆菌中的表达,为海藻糖合成酶的异源高效表达提供了重要参考。 展开更多
关键词 海藻糖合成酶 密码子 海藻糖 基因表达
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水生栖热菌FL-03海藻糖合酶基因的克隆及真核表达 被引量:6
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作者 刘俊梅 聂海彦 +1 位作者 郑微微 胡耀辉 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第23期267-270,共4页
通过基因工程技术合成海藻糖合酶Tres全基因,插入到毕赤酵母菌表达载体pPICZα中。电转化毕赤酵母菌GS115后,经Zeocin抗性筛选阳性菌株。用PCR和全基因测序鉴定目的基因的表达。通过诱导表达目的蛋白,并以SDS-PAGE和Western blotting进... 通过基因工程技术合成海藻糖合酶Tres全基因,插入到毕赤酵母菌表达载体pPICZα中。电转化毕赤酵母菌GS115后,经Zeocin抗性筛选阳性菌株。用PCR和全基因测序鉴定目的基因的表达。通过诱导表达目的蛋白,并以SDS-PAGE和Western blotting进行鉴定。成功地构建了pPICZα-Tres重组质粒,并证明目的基因已整合于毕赤酵母菌的基因组。 展开更多
关键词 海藻糖合酶 Tres全基因 基因克隆 真核表达
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海藻糖的应用及其合酶基因TPS在植物转基因中的研究进展 被引量:5
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作者 刘占磊 黄丛林 +1 位作者 张秀海 吴忠义 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2009年第6期54-58,共5页
海藻糖是一种非还原性双糖,具有很高的稳定性和很强的吸水性等性质,能够提高生物体对各种非生物胁迫的抵抗能力。目前有很多研究表明通过转化海藻糖合酶基因增加体内海藻糖含量可能成为选育作物抗逆品种的新方法。该文对海藻糖的理化性... 海藻糖是一种非还原性双糖,具有很高的稳定性和很强的吸水性等性质,能够提高生物体对各种非生物胁迫的抵抗能力。目前有很多研究表明通过转化海藻糖合酶基因增加体内海藻糖含量可能成为选育作物抗逆品种的新方法。该文对海藻糖的理化性质、生物学特性及其应用情况作了简要的概述,并介绍了编码酵母海藻糖合酶复合体基因的组成以及各个组成基因的功能,着重阐述了海藻糖合酶基因在植物转基因方面(尤其在提高植物抗逆性)的研究进展。 展开更多
关键词 海藻糖 海藻糖合酶基因 抗逆性
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海藻糖合酶基因工程菌诱导表达条件的研究 被引量:3
9
作者 陈颖 朱月明 +3 位作者 张峻 李明春 齐欣 唐柳 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期178-179,193,共3页
实验将构建后的重组质粒pET21TreS转入大肠杆菌Rosetta gami(DE3)中,得到海藻糖合酶基因工程菌,并通过对培养时间、温度及诱导剂浓度等条件的优化,对其进行诱导表达,得到了该基因工程菌诱导表达的最适条件:发酵培养至菌体浓度(OD600)至... 实验将构建后的重组质粒pET21TreS转入大肠杆菌Rosetta gami(DE3)中,得到海藻糖合酶基因工程菌,并通过对培养时间、温度及诱导剂浓度等条件的优化,对其进行诱导表达,得到了该基因工程菌诱导表达的最适条件:发酵培养至菌体浓度(OD600)至0.6~0.8时,以1mmol/L浓度的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG),37℃,诱导2h后得到的蛋白表达量较高。 展开更多
关键词 海藻糖合酶 基因工程菌 诱导表达
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海藻糖合酶基因的克隆及其植物表达载体的构建 被引量:2
10
作者 张树珍 郑学勤 《生命科学研究》 CAS CSCD 2000年第2期130-135,共6页
从担子菌灰树花的菌丝体中提取总 RNA,并纯化出 m RNA,m RNA经反转录合成c DNA第一链 ,以 c DNA第一链为模板经 PCR扩增海藻糖合酶 ( Tsase)基因 ,获得一长约2 .2 kb的片段 ,把该片段连接到 p GEM○R- T- easy vector上进行测序 ,其全长... 从担子菌灰树花的菌丝体中提取总 RNA,并纯化出 m RNA,m RNA经反转录合成c DNA第一链 ,以 c DNA第一链为模板经 PCR扩增海藻糖合酶 ( Tsase)基因 ,获得一长约2 .2 kb的片段 ,把该片段连接到 p GEM○R- T- easy vector上进行测序 ,其全长共 2 1 99bp.随后将此片段以正向插入植物表达载体 p BI1 2 1的 35S启动子和 NOS终止子之间 ,构建了一植物表达载体 p BT;又把 ubi- L启动子插入 p BI1 2 1的 H ind + Xbal位点构建 p UB,再把海藻糖合酶基因以正向插入载体 p UB的 Bam H1 + Sst1位点构建了另一植物表达载体 p UBT. 展开更多
关键词 海藻糖合酶 植物表达载体 基因克隆
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Trehalose Synthase Gene Transfer Mediated by Agrobacterium tumefaciens Enhances Resistance to Osmotic Stress in Sugarcane 被引量:1
11
作者 WANGZi-zhang ZHANGShu-zhen +1 位作者 YANGBen-peng LIYang-rui 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2003年第1期19-26,共8页
Trehalose synthase gene (TSase) from Grifola frondosa was transferred into sugarcane (Sac-charum hybrid L.) using Agrobacterium-mediated method to improve sugarcane drought-tolerance. The results indicated that embryo... Trehalose synthase gene (TSase) from Grifola frondosa was transferred into sugarcane (Sac-charum hybrid L.) using Agrobacterium-mediated method to improve sugarcane drought-tolerance. The results indicated that embryogenic callus of sugarcane was sensitive to A. tumefaciens EHA105 strain in the transformation system employed. The high frequency PPT-resistant plants were obtained from transformated with 3 weeks callus after incubation, which reached 4.5% on average. The transgenic plants were confirmed by PCR and Southern analysis. Some transgenic plants showed multiple phenotypic alterations and some plants demonstrated improvement tolerance to osmotic stress. 展开更多
关键词 Agrobacterium tumefaciens TRANSFORMATION trehalose synthase gene SUGARCANE
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一种快速筛选海藻糖合成酶突变体体系的建立 被引量:1
12
作者 李庆业 韦宇拓 +2 位作者 王倩倩 刘一 黄日波 《工业微生物》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期22-26,共5页
利用λRed重组系统对大肠杆菌JM109的6-磷酸海藻糖合成酶基因OtsA和6-磷酸海藻糖酯酶基因otsB进行敲除,获得otsA和otsB基因失活的大肠杆菌突变体,该突变体由于对渗透压变得非常敏感,在含5%NaCl和0.5%麦芽糖的培养基中生长缓慢,然而当导... 利用λRed重组系统对大肠杆菌JM109的6-磷酸海藻糖合成酶基因OtsA和6-磷酸海藻糖酯酶基因otsB进行敲除,获得otsA和otsB基因失活的大肠杆菌突变体,该突变体由于对渗透压变得非常敏感,在含5%NaCl和0.5%麦芽糖的培养基中生长缓慢,然而当导入有活力的外源海藻糖合成酶基因后,由于能在胞内合成海藻糖,增强了细胞抗高渗透压培养基的能力,因而可让otsA和otsB基因缺失后的JM109得以恢复其生长能力。通过比较它们在高渗透压的培养基中的生长速度,可以筛选出含有不同活力的海藻糖合成酶突变体。 展开更多
关键词 λRed重组系统 海藻糖合成酶基因 基因缺失
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海藻糖合成酶基因的克隆及原核表达 被引量:1
13
作者 尚宏丽 顾英 +1 位作者 付莉 张挺 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第7期844-847,共4页
目的克隆海藻糖合成酶(Trehalose synthase,Tres)基因,并在大肠杆菌中表达重组酶。方法以长白山温泉Thermus thermophilus SH-110基因组DNA为模板,PCR扩增Tres基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,构建重组表达质粒pET-30a(+)-Tres,转... 目的克隆海藻糖合成酶(Trehalose synthase,Tres)基因,并在大肠杆菌中表达重组酶。方法以长白山温泉Thermus thermophilus SH-110基因组DNA为模板,PCR扩增Tres基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,构建重组表达质粒pET-30a(+)-Tres,转化E.coli BL21(DE3),分别采用IPTG和乳糖诱导表达,并对表达产物进行SDS-PAGE、Western blot和薄层色谱(Thin layer chromatography,TLC)分析。结果重组表达质粒pET-30a(+)-Tres经双酶切及测序证实构建正确;IPTG和乳糖均能诱导重组蛋白的表达,且乳糖诱导的蛋白表达量较高;表达的重组酶Tres相对分子质量约为110 000,可与鼠抗6×His单克隆抗体特异性结合;粗酶液的酶活力为8 760 U/μg,是野生菌酶活的10倍;重组酶水解麦芽糖产物经TLC分析证实,其具有较强的海藻糖合成酶活性。结论已成功在大肠杆菌中表达了重组Tres,为大规模生产海藻糖奠定了基础。 展开更多
关键词 海藻糖合成酶 克隆 原核细胞 基因表达
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萌发期和苗期玉米转海藻糖合酶基因的抗旱性研究 被引量:1
14
作者 董春林 张彦琴 +5 位作者 杨丽莉 梁改梅 杨睿 常建忠 赵巧红 张明义 《安徽农业科学》 CAS 2019年第17期28-31,共4页
在PEG溶液模拟干旱条件下,研究了不同玉米品种(2个转基因品系和各自受体对照)发芽率、伤害率、芽根比、叶片含水量、叶片SOD活性、POD活性和MDA含量,并对其在种子盒、花盆和田间的耐旱性进行了比较。结果表明,萌发期与苗期抗旱性表现基... 在PEG溶液模拟干旱条件下,研究了不同玉米品种(2个转基因品系和各自受体对照)发芽率、伤害率、芽根比、叶片含水量、叶片SOD活性、POD活性和MDA含量,并对其在种子盒、花盆和田间的耐旱性进行了比较。结果表明,萌发期与苗期抗旱性表现基本一致,2个转基因品系(T09100-3和H5T37)分别比各自受体(综31和178)耐旱性高。 展开更多
关键词 转海藻糖合酶基因 玉米 抗旱性 PEG模拟干旱胁迫
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麦芽寡糖基海藻糖合酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达
15
作者 沈文 王金富 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2006年第3期290-293,共4页
应用PCR方法,从芝田硫化叶菌B12中扩增了麦芽寡糖基海藻糖合酶基因(TreY),扩增产物大小为2.2kb,将扩增片段与pUCm-T连接,得到重组质粒pUCm-T-TreY,CaCl2法转化DH5α,并筛选阳性克隆。用BamHI/NdeI分别双酶切pUCm-T-TreY和表达载体pET21a... 应用PCR方法,从芝田硫化叶菌B12中扩增了麦芽寡糖基海藻糖合酶基因(TreY),扩增产物大小为2.2kb,将扩增片段与pUCm-T连接,得到重组质粒pUCm-T-TreY,CaCl2法转化DH5α,并筛选阳性克隆。用BamHI/NdeI分别双酶切pUCm-T-TreY和表达载体pET21a,连接后得重组pET21a-TreY,转化大肠杆菌DE3并进行了表达。表达产物经SDS-PAGE分析,得到一条分子量约为74kDa的特异条带,同核苷酸序列所推导的值相符。 展开更多
关键词 麦芽寡糖基海藻糖合酶基因 克隆 表达 序列分析
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响应面法优化海藻糖合酶产菌的发酵条件 被引量:1
16
作者 顾英 宋玉坤 尚宏丽 《中国农学通报》 CSCD 2012年第9期235-240,共6页
为了优化响应面法海藻糖合酶产生菌pET-30a(+)/TreS的发酵培养基,用Plackett-Burman设计法评价发酵培养基的8个成分对海藻糖合酶的影响,然后用最陡爬坡实验确定重要成分在中心复合设计中的取值变化范围,最后用中心复合设计响应面法求出... 为了优化响应面法海藻糖合酶产生菌pET-30a(+)/TreS的发酵培养基,用Plackett-Burman设计法评价发酵培养基的8个成分对海藻糖合酶的影响,然后用最陡爬坡实验确定重要成分在中心复合设计中的取值变化范围,最后用中心复合设计响应面法求出了重要成分的最佳浓度。结果表明:麦芽糖、蛋白胨和牛肉膏对海藻糖合酶酶活力影响显著(P<0.05),是重要成分,其最佳浓度分别为:麦芽糖22.07 g/L、蛋白胨5.46 g/L、牛肉膏2.16 g/L。优化后的培养基酶活力达到0.826 U/mL,比基础发酵培养基培养重组菌的酶活力提高了2倍。说明数理统计实验设计及分析的方法成功地用于了海藻糖合酶基因工程菌pET-30a(+)/TreS的发酵培养基优化,为工业化发酵生产海藻糖合酶奠定了理论基础。 展开更多
关键词 海藻糖合酶 基因工程菌 发酵条件 优化 响应面分析法
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海藻糖合酶基因转化黑麦草及耐旱性研究 被引量:14
17
作者 贾炜珑 胡鸢雷 +3 位作者 张彦芹 杨丽莉 林忠平 吴锜 《分子植物育种》 CAS CSCD 2007年第1期27-31,共5页
以多年生黑麦草(Lolium perenne L.)种子成熟胚为外植体,在MS附加5mg/L2,4-D、500mg/L的L-脯氨酸、130mg/L天门冬酰氨、10mg/LAgNO3的诱导培养基(MSJ)上诱导胚性愈伤组织。用基因枪法将ubiqutin启动子驱动的海藻糖合酶基因(TPS基因)转... 以多年生黑麦草(Lolium perenne L.)种子成熟胚为外植体,在MS附加5mg/L2,4-D、500mg/L的L-脯氨酸、130mg/L天门冬酰氨、10mg/LAgNO3的诱导培养基(MSJ)上诱导胚性愈伤组织。用基因枪法将ubiqutin启动子驱动的海藻糖合酶基因(TPS基因)转入多年生黑麦草的胚性愈伤。在含有5mg/LBialaphos的选择培养基上经过2个月的抗性筛选,抗性愈伤组织在分化培养基上生成了898株再生植株,其中的220株检测为阳性株,检测的阳性率占供检株数的24.5%。PCR分析及PCR-Southern杂交鉴定表明,TPS基因已整合到黑麦草的基因组中。抗旱性鉴定表明,转基因黑麦草在干旱胁迫条件下的保水能力增强,电解质渗出率明显低于对照,耐旱性提高。 展开更多
关键词 黑麦草 海藻糖合酶基因(触因) 转基因 再生植株 耐旱性
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基因枪介导甘蔗遗传转化研究初报 被引量:7
18
作者 张树珍 郑学勤 《热带作物学报》 CSCD 2001年第1期35-41,共7页
将从灰树花(Grifola frondosa)中分离克隆到的海藻糖合酶cDNA以正向插入植物表达载体pBI121/BamHI+Sst1位点,获得一植物表达载体pBT:又用Ubi-L启动子插入植物表达载体pBI121/... 将从灰树花(Grifola frondosa)中分离克隆到的海藻糖合酶cDNA以正向插入植物表达载体pBI121/BamHI+Sst1位点,获得一植物表达载体pBT:又用Ubi-L启动子插入植物表达载体pBI121/HindⅢ+Xbal位点,获得重组质粒pUB,再把海藻糖合酶cDNA正向插入pUB/BamHI+SstI位点,获得另一植物表达载体pUBT。然后通过基因枪法分别用植物表达载体pBT和pUBT转化甘蔗。再生植株的点杂交和PCR-Southern杂交表明海藻糖合酶基因已整合进甘蔗的基因组中。 展开更多
关键词 海藻糖合酶基因 遗传转化 甘蔗 基因枪
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转海藻糖合酶基因玉米株系的获得及其抗旱性研究 被引量:4
19
作者 张彦琴 董春林 +6 位作者 杨丽莉 梁改梅 李洁 杨睿 常建忠 赵巧红 张明义 《山西农业科学》 2016年第1期1-4,39,共5页
采用农杆菌介导玉米萌发种子转化方法,将海藻糖合酶基因(TPS)导入玉米自交系昌7-2中。PCR和Southern blot检测结果表明,目的基因已导入转化植株并整合到受体基因组上。田间抗旱性鉴定和生理生化指标结果显示,转基因植株(株系)的抗旱性... 采用农杆菌介导玉米萌发种子转化方法,将海藻糖合酶基因(TPS)导入玉米自交系昌7-2中。PCR和Southern blot检测结果表明,目的基因已导入转化植株并整合到受体基因组上。田间抗旱性鉴定和生理生化指标结果显示,转基因植株(株系)的抗旱性明显高于对照。说明海藻糖合酶基因具有抗旱功能,利用植物基因工程技术对其进行玉米抗旱育种是切实可行的。 展开更多
关键词 玉米 海藻糖合酶基因 抗旱性 遗传转化
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碱茅6-磷酸海藻糖合成酶基因的克隆及其耐逆性分析 被引量:8
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作者 李莹 柳参奎 《草业学报》 CSCD 北大核心 2015年第1期99-106,共8页
从碱茅酵母cDNA文库中经过NaCl、NaHCO。筛选,均得到长为1153bp碱茅6一磷酸海藻糖合成酶基因(PutTPS)片段。通过3’End cDNA amplification方法获得基因缺失的3’序列,该基因全长3358 bp,编码882个氨基酸。氨基酸序列比较结果表明... 从碱茅酵母cDNA文库中经过NaCl、NaHCO。筛选,均得到长为1153bp碱茅6一磷酸海藻糖合成酶基因(PutTPS)片段。通过3’End cDNA amplification方法获得基因缺失的3’序列,该基因全长3358 bp,编码882个氨基酸。氨基酸序列比较结果表明,PutTPS氨基酸序列与水稻、拟南芥、玉米等多种高等植物的TPS蛋白的同源性高达60%~90%。利用Northern blot技术,研究该基因的组织表达模式及NaCl、NaHCO3胁迫处理下基因的表达模式变化;同时对转pYES2-PutTPS基因酵母菌株进行盐、碱、氧化胁迫、渗透胁迫处理,观察其在逆境下的生存表现。结果表明,PutTPS具有组织表达特异性,其中在根和花中表达量最大;NaCl、NaHCO3会诱导PutTPS基因在根和叶中的上调表达;同时重组酵母菌株对盐碱、氧化、渗透胁迫及干旱等逆境的适应能力显著增强。以上研究结果表明,碱茅PutTPS基因与逆境之间具有一定的应答关系,并在植物适应环境逆境过程中起着重要的作用。 展开更多
关键词 碱茅 6-磷酸海藻糖合成酶 基因表达 酵母
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