金葡菌TG-TPase嵌合基因在甲醇营养型酵母中的表达 被引量：1

1

作者 杨杰 饶贤才 +7 位作者 侯瑞 胡晓梅 陈志瑾 丛延广 谭银铃 朱军民 周莹冰 胡福泉 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期145-149,共5页

目的设计耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)耐药相关TG-TPase嵌合基因,构建其真核表达质粒,为嵌合基因的高效、分泌型表达奠定基础。方法在序列结构分析的基础上,设计引物从MRSA菌株中扩增... 目的设计耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)耐药相关TG-TPase嵌合基因,构建其真核表达质粒,为嵌合基因的高效、分泌型表达奠定基础。方法在序列结构分析的基础上,设计引物从MRSA菌株中扩增其耐药性相关转糖基酶(TGase)和转肽酶(TPase)活性片段,进一步用酶切连接等分子生物学操作构建TG-TPase嵌合基因,亚克隆至酵母表达质粒pPIC9K中,转化DH5α大肠埃希菌。经酶切、PCR和核苷酸测序鉴定正确的重组质粒用SalⅠ线性化,整合入甲醇营养型毕赤酵母GS115中,在DNA和基因转录水平鉴定出阳性重组酵母。结果采用PCR从MRSA基因组中扩增得到了873bp的TGase片段和1044bp的TPase片段。以酶切连接构建的TG-TPase嵌合基因经酶切、PCR鉴定,能获得约1900bp的融合片段,与预期结果相符,测序表明序列和阅读框均正确。线性化的重组质粒转化GS115后,得到5个高拷贝阳性转化子,经诱导表达和PCR鉴定,这些转化子能转录出目的基因的mRNA。结论成功构建了含TG-TPase嵌合基因的重组毕赤酵母工程菌,为进一步高效制备嵌合蛋白、进而利用其酶学活性进行抗耐药性金葡菌抑制剂的筛选创造前提。 展开更多

关键词 MRSA tpase TGASE 毕赤酵母

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Tei指数、TAPSE联合NT-proBNP、hs-cTnI评估儿童重症肺炎右心功能的早期价值探讨 被引量：3

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作者 陆文婷 梁世山 《心血管病防治知识（学术版）》 2021年第15期16-18,共3页

目的探索儿童重症肺炎中重症超声右心功能指标和超敏心肌肌钙蛋白I(high-sensitivity cardiac troponin I,hs-cTnI)、N端B型脑钠肽前体(N-terminal pro-brain natriuretic peptide,NT-proBNP)对右心功能评估的应用价值。方法选取我院202... 目的探索儿童重症肺炎中重症超声右心功能指标和超敏心肌肌钙蛋白I(high-sensitivity cardiac troponin I,hs-cTnI)、N端B型脑钠肽前体(N-terminal pro-brain natriuretic peptide,NT-proBNP)对右心功能评估的应用价值。方法选取我院2020年1-12月收治的83例重症肺炎患儿及同期体检的40名健康儿作为对照,重症肺炎组分为右心衰组(37例,44.58%)(pulmonary arterial hypertension,PAH)和非右心衰组(46例,55.42%)。评估三组病例重症超声右心功能指标右心室心肌做功指数(Tei index,Tei指数)、三尖瓣环收缩期位移(tricuspid annular plane systolic excurtion,TAPSE)和NT-proBNP、hs-cTnI。结果右心衰组的Tei指数、NT-proBNP、hs-cTnI明显高于非右心衰组和对照组,右心衰组的TAPSE明显低于非右心衰组和对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论床旁重症超声右心功能指标Tei指数、TPASE和心肌标志物NT-proBNP、hs-cTnI有助于在儿童重症肺炎中早期识别右心功能不全,有助于早期评估,展开精准医疗。 展开更多

关键词 儿童 重症肺炎 右心功能 TEI指数 tpase NT-PROBNP hs-cTnI

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胸腺嘧啶磷酸化酶及二氢嘧啶脱氢酶与卡培他滨及氟尿嘧啶关系的研究 被引量：2

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作者 徐雅莉 孙强 +3 位作者 叶敏 周易冬 茅枫 关竞红 《中国肿瘤临床与康复》 2008年第4期289-293,共5页

目的 考察乳腺癌组织（Ca）及癌旁正常乳腺组织（Nor）中胸腺嘧啶磷酸化酶（TP酶）及二氢嘧啶脱氢酶（DPD酶）与化疗药物卡培他滨（CAP）及其活性代谢产物氟尿嘧啶（5-Fu）浓度的相关性。方法 应用ELISA方法定量测定26例经病理证实为乳... 目的 考察乳腺癌组织（Ca）及癌旁正常乳腺组织（Nor）中胸腺嘧啶磷酸化酶（TP酶）及二氢嘧啶脱氢酶（DPD酶）与化疗药物卡培他滨（CAP）及其活性代谢产物氟尿嘧啶（5-Fu）浓度的相关性。方法 应用ELISA方法定量测定26例经病理证实为乳腺癌患者的癌组织及正常组织中TP酶及DPD酶的表达水平；应用高效液相色谱法（HPLC）定量测定癌组织及正常组织中的CAP及5-Fu浓度。结果 TP酶在癌组织中平均表达水平是386．1163ng／mg蛋白，在正常组织中为42．5682ng／mg蛋白。DPD酶在癌组织中平均表达水平是209．528ng／mg蛋白，在正常组织中为339．368ng／mg蛋白。CAP／5-Fu比值范围是0．0804～5．0000。结论 在P=0．05水平上，癌组织中11P酶表达水平远远高于其在正常组织中的表达水平，DPD酶在癌组织及正常组织中的表达水平没有差异，但具有很强的相关性（Spearman相关系数=0．43〉Ts0.05／2（26）=0．390，P〈0．05）。TP／DPD预测CAP／5-Fu的效能高于TP酶及DPD酶。 展开更多

关键词 TP酶 DPD酶 高效液相色谱法(HPLC) 卡培他滨 氟尿嘧啶 乳腺肿瘤

原文传递

抗耐药性金黄色葡萄球菌嵌合药靶的设计与构建 被引量：3

4

作者 杨杰 饶贤才 +3 位作者 侯瑞 胡珍 方昕 陈志瑾 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期704-709,718,共7页

目的设计耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药相关TG-TPase嵌合基因,进行分子建模及三维结构观察,并构建了原核表达质粒,进行嵌合基因的表达、纯化,为进一步利用其酶学活性建立抑制分子筛选系统奠定基础。方法运用Bioedit和DNAStar软件... 目的设计耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药相关TG-TPase嵌合基因,进行分子建模及三维结构观察,并构建了原核表达质粒,进行嵌合基因的表达、纯化,为进一步利用其酶学活性建立抑制分子筛选系统奠定基础。方法运用Bioedit和DNAStar软件对MRSA耐药性相关转糖基酶(TGase)和转肽酶(TPase)活性片段序列和活性区结构特点及其活性发挥进行分析,设计TG-TPase嵌合药靶,并通过引物设计从MRSA菌株中克隆PBP2的TG基因片段和PBP2a的TP基因片段,进一步用引物延伸法、酶切连接等分子生物学操作构建TG-TPase嵌合基因并亚克隆至原核表达质粒pET30b中,转化Rosetta(DE3)plysS大肠埃希菌,用IPTG进行诱导表达,并小量发酵重组菌,对嵌合基因表达产物进行初步纯化和Western blotting鉴定。结果设计的TG-TPase嵌合药靶包括PBP2分子的TGase活性区、绞链区的N-端,PBP2a分子绞链区C-端及完整的TPase结构域,融合基因为1 935 bp,编码645个氨基酸,等电点为7.10,相对分子质量72 000。用PCR法从MRSA菌株中成功克隆了青霉素结合蛋白PBP2的TG片段和PBP2a的TP片段,构建了TG-TPase嵌合基因及其原核表达质粒,并在大肠埃希菌中表达出药靶蛋白,表达结果与预期设计相符合。融合蛋白纯化分析表明,融合蛋白以包涵体形式存在,在变性条件下经Ni-NTA亲和柱纯化,纯度达90%以上。结论成功设计、构建了耐药性金葡菌TG-TPase嵌合基因及其重组表达工程菌,并对融合蛋白进行了初步纯化,为进一步利用其酶学活性进行抗耐药性金葡菌抑制剂的筛选奠定基础。 展开更多

关键词 MRSA 分子设计 TG-tpase 原核表达 鉴定

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MRSA耐药相关TG-TPase嵌合基因的原核表达与纯化 被引量：2

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作者 杨杰 饶贤才 +7 位作者 侯瑞 胡晓梅 陈志瑾 丛延广 谭银铃 朱军民 周莹冰 胡福泉 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期158-162,166,共6页

目的设计、构建耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA)耐药相关TG-TPase嵌合基因,进行原核表达、纯化探索,为进一步利用其酶学活性建立抑制剂筛选系统奠定基础。方法通过引物设计,从盐平板法筛选... 目的设计、构建耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA)耐药相关TG-TPase嵌合基因,进行原核表达、纯化探索,为进一步利用其酶学活性建立抑制剂筛选系统奠定基础。方法通过引物设计,从盐平板法筛选的MRSA菌株中分别克隆PBP2的TG基因片段和PBP2a的TP片段,分别克隆入T载体,对阳性重组子进行酶切/再连接,构建TG-TPase嵌合基因,经核苷酸测序鉴定正确的嵌合基因再亚克隆到pET22b,构建表达载体,转化Rosetta(DE3)plysS,用IPTG进行诱导表达,并对表达的蛋白进行SDS-PAGE、质谱和Western blotting鉴定。小量发酵重组菌,对嵌合基因表达产物进行初步纯化。结果从13株临床分离的金葡菌中筛选出2株高耐药性MRSA菌株,用PCR法从中成功地克隆到青霉素结合蛋白PBP2的TG片段和PBP2a的TP片段,构建了TG-TPase嵌合基因及其原核表达载体,并在大肠埃希菌中表达,产量达菌体总蛋白的43%。融合蛋白纯化分析表明,嵌合蛋白以包涵体形式存在,在变性条件下经Ni-NTA亲和柱纯化,纯度达90%以上。结论成功设计并构建了耐药性金葡菌TG-TPase嵌合基因及其重组表达工程菌,为进一步利用其酶学活性进行抗耐药性金葡菌抑制剂的筛选奠定基础。 展开更多

关键词 MRSA TG-tpase 原核表达 纯化 鉴定

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变形链球菌临床株F-ATPase亚基基因uncEBF在mRNA水平的表达 被引量：4

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作者 杨德琴 刘天佳 +3 位作者 亓庆国 付春华 庄姮 李颂 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期737-741,共5页

目的:研究变形链球菌临床分离株耐酸因子F-ATPase c、a、b亚基联合基因uncEBF在mRNA水平的表达差异,探讨基因表达水平与细菌耐酸力以及uncEBF基因型的关系。方法:应用半定量RT-PCR两步法和凝胶成像系统定量软件分析,分别对18株来自不同... 目的:研究变形链球菌临床分离株耐酸因子F-ATPase c、a、b亚基联合基因uncEBF在mRNA水平的表达差异,探讨基因表达水平与细菌耐酸力以及uncEBF基因型的关系。方法:应用半定量RT-PCR两步法和凝胶成像系统定量软件分析,分别对18株来自不同基因型和不同耐酸力变链菌的uncEBF基因表达水平进行评价,以SPSS11.0软件分析和比较mRNA表达的差异。结果:不同基因型及不同耐酸力菌株un-cEBF的mRNA表达水平不同(P<0.05),表现为A基因型uncEBF表达高于B基因型,高耐酸力菌株un-cEBF表达高于低耐酸力菌株。结论:变链菌不同基因型uncEBF基因的表达水平不同,表达水平高低与菌株的耐酸力相关。 展开更多

关键词 变形链球菌 F-Atpase 半定量 RT-PCR 基因表达

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槐定碱对慢性心衰大鼠心肌保护作用机制的研究 被引量：5

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作者 胡淑婷 宫京梅 +1 位作者 周永忠 刘红梅 《宁夏医学杂志》 CAS 2014年第9期769-771,共3页

目的研究槐定碱对慢性心衰大鼠心肌保护作用的机制。方法将60只雄性SD大鼠分为假手术组、心衰组、低(5 mg·kg-1)、中(10 mg·kg-1)、高(20 mg·kg-1)剂量槐定碱干预组(每组12只),运用激光扫描共聚焦显微镜、蛋白印迹等方... 目的研究槐定碱对慢性心衰大鼠心肌保护作用的机制。方法将60只雄性SD大鼠分为假手术组、心衰组、低(5 mg·kg-1)、中(10 mg·kg-1)、高(20 mg·kg-1)剂量槐定碱干预组(每组12只),运用激光扫描共聚焦显微镜、蛋白印迹等方法研究各组心肌细胞胞浆内咖啡因诱导钙瞬变及钙泵(SERCA2a)表达的变化。结果与假手术组相比较,心衰组大鼠心肌细胞肌浆网内钙瞬变幅度显著下降(18.33±1.52与36.18±2.64,P<0.05);中、高剂量药物干预组大鼠心肌细胞肌浆网内钙瞬变幅度较心衰组明显升高(33.45±2.47、32.19±1.98与18.33±1.52,P<0.05);心衰组大鼠心肌细胞SERCA2a表达较假手术组明显下调,中、高剂量药物干预组大鼠心肌细胞SERCA2a表达较心衰组均明显升高。结论 SERCA2a表达上调促使肌浆网内钙容量增加是槐定碱心肌保护作用的主要机制之一。 展开更多

关键词 心力衰竭 槐定碱 钙瞬变 钙泵

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实时荧光定量检测盐胁迫下香蕉幼苗CaM和Ca^2＋-ATPase基因的相对表达量 被引量：5

8

作者 王文昌 周双云 +3 位作者 乔飞 吉福桑 李元元 李新国 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期1745-1751,共7页

通过增加外源CaCl_2和钙离子螯合剂EGTA处理后,研究香蕉幼苗在60 mmol/L NaCl人工模拟的盐胁迫0、4 h、8 h、12 h、24 h和48 h不同时间下,测定其叶片和根的CaM和Ca^(2+)-ATPase基因的相对表达量。结果表明,在NaCl胁迫过程中,香蕉幼苗在... 通过增加外源CaCl_2和钙离子螯合剂EGTA处理后,研究香蕉幼苗在60 mmol/L NaCl人工模拟的盐胁迫0、4 h、8 h、12 h、24 h和48 h不同时间下,测定其叶片和根的CaM和Ca^(2+)-ATPase基因的相对表达量。结果表明,在NaCl胁迫过程中,香蕉幼苗在正常的生长条件下,其根和叶片的CaM基因和Ca^(2+)-ATPase基因均有表达。巴西蕉幼苗根在盐胁迫过程中Ca M基因没有发生显著变化,但是粉蕉根却发生了显著变化,这可能与粉蕉耐盐性高于巴西有关。随着盐胁迫时间的延长,巴西蕉和粉蕉幼苗根的Ca^(2+)-ATPase基因的相对表达量均呈现先上升后下降的趋势。 展开更多

关键词 香蕉幼苗 盐胁迫 CaM基因 Ca2+-Atpase基因 荧光定量

原文传递

雌激素对雌性大鼠颏舌肌肌质网Ca^(2+)-ATPase活性及其基因表达的影响 被引量：2

9

作者 宋玮华 刘月华 +2 位作者 齐娟 邵校 王飞 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期536-539,共4页

目的:观察雌激素对雌性大鼠颏舌肌细胞肌质网(sarcoplasmic reticulum,SR)Ca2+-ATPase活性及其基因表达的影响,探索其影响颏舌肌功能的分子生物学机制。方法:将30只成年雌性SD大鼠随机分为对照组(control)、去卵巢组(ovariectomy,OVX)... 目的:观察雌激素对雌性大鼠颏舌肌细胞肌质网(sarcoplasmic reticulum,SR)Ca2+-ATPase活性及其基因表达的影响,探索其影响颏舌肌功能的分子生物学机制。方法:将30只成年雌性SD大鼠随机分为对照组(control)、去卵巢组(ovariectomy,OVX)、去卵巢回补激素组(ovariectomy with 17β-estradiol,OVX+E2)。术后6周,处死动物,提取颏舌肌SR。采用定磷法检测颏舌肌SR Ca2+-ATPase活性,荧光定量RT-PCR测定SR Ca2+-ATP酶mRNA表达的变化。结果:OVX组血清雌激素水平及子宫湿重较对照组明显降低(雌二醇P<0.01;子宫湿重P<0.01),而OVX+E2组与对照组相比差别无统计学意义(P>0.05)。OVX组颏舌肌SR Ca2+-ATP酶活性较对照组明显降低(P<0.01);OVX+E2组较OVX组有明显提高(P<0.01)、与对照组相比差别无统计学意义(P>0.05)。OVX组颏舌肌SR Ca2+-ATPase mRNA表达较对照组明显降低(P<0.01);OVX+E2组较OVX组有明显提高(P<0.01)、与正常组相比差别无统计学意义(P>0.05)。结论:成年雌性大鼠雌激素水平的变化可引起颏舌肌SR Ca2+-ATP酶活性及其mRNA表达的变化,雌激素可能通过该途径改变颏舌肌功能. 展开更多

关键词 雌激素 颏舌肌 肌质网 CA^2+-ATP酶 基因表达

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非小细胞肺癌组织中TP酶激活蛋白SH3功能结合蛋白2的表达及临床意义 被引量：1

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作者 张满堂 吴小永 杜敏 《临床肺科杂志》 2023年第2期189-194,共6页

目的检测非小细胞肺癌(NSCLC)组织和细胞中TP酶激活蛋白SH3功能结合蛋白2(G3BP2)的表达情况,分析G3BP2对NSCLC细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法收集NSCLC患者120例,腺癌47例,鳞状细胞癌73例。免疫组织化学检测腺癌、鳞状细胞癌组织中G3... 目的检测非小细胞肺癌(NSCLC)组织和细胞中TP酶激活蛋白SH3功能结合蛋白2(G3BP2)的表达情况,分析G3BP2对NSCLC细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法收集NSCLC患者120例,腺癌47例,鳞状细胞癌73例。免疫组织化学检测腺癌、鳞状细胞癌组织中G3BP2的表达情况,分析G3BP2表达与患者临床病理特征的关系。蛋白免疫印迹实验和qRT-PCR检测SPC-A-1、16HBE细胞中G3BP2的表达。对NCI-H226、SPC-A-1细胞转染si-NC、si-G3BP2质粒,检测敲低G3BP2对细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。结果腺癌组织和鳞状细胞癌组织中G3BP2的阳性表达率无统计学差异(P>0.05),G3BP2阳性与TNM分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。NCI-H226和SPC-A-1细胞中G3BP2蛋白及mRNA的表达高于16HBE细胞。敲低G3BP2可明显抑制NCI-H226、SPC-A-1细胞的增殖和侵袭并增强细胞凋亡。结论G3BP2在NSCLC组织中的阳性表达与TNM分期、淋巴结转移有关,敲低G3BP2的表达可显著抑制NSCLC的进展。 展开更多

关键词 非小细胞肺癌 TP酶激活蛋白SH3功能结合蛋白2 增殖 侵袭 凋亡

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高粱ATP合成酶E亚基基因(SbATPase-E)的克隆及其抗逆功能研究 被引量：1

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作者 张静 张登峰 +6 位作者 孙永华 李永祥 石云素 宋燕春 杜金友 王天宇 黎裕 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期897-905,共9页

高粱是一种抗旱性较强的禾谷类作物。本研究在高粱中克隆到一个全长为693 bp的编码ATP合成酶E亚基的基因(SbATPase-E)。在高粱幼苗期,SbATPase-E基因受Na Cl和脱落酸(ABA)处理诱导上调表达。该基因在拟南芥中过量表达可提高转基因植株... 高粱是一种抗旱性较强的禾谷类作物。本研究在高粱中克隆到一个全长为693 bp的编码ATP合成酶E亚基的基因(SbATPase-E)。在高粱幼苗期,SbATPase-E基因受Na Cl和脱落酸(ABA)处理诱导上调表达。该基因在拟南芥中过量表达可提高转基因植株的耐旱性和耐盐性,在逆境胁迫条件下转基因拟南芥植株较野生型植株根系发达,可能是转基因植株耐旱性和耐盐性提高的主要原因。在干旱胁迫条件下,转基因植株中DREB2A、P5CS1、RD29A、RAB18和ABI1基因的表达量相对于野生型植株中的表达量提高更为显著;在高盐处理条件下,转基因植株中SOS1和SOS2基因的表达量也较野生型植株中的表达量明显提高。这些抗逆相关基因的上调表达可能是转基因植株抗逆性提高的主要分子机制。 展开更多

关键词 高粱 拟南芥 ATP合成酶 耐旱性 耐盐性

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