微小RNA-34a-5p通过靶向鼠双微体4抑制巨噬细胞氧化应激损伤的作用

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作者 刘磊 傅立国 鞠勐 《中国当代医药》 CAS 2024年第23期28-31,共4页

目的探讨微小RNA-34a-5p(miR-34a-5p)通过靶向鼠双微体4(MDM4)抑制巨噬细胞氧化应激损伤的作用。方法THP-1人单核细胞复苏后,培养分化为巨噬细胞。设立空白对照组。剩余细胞加入人源氧化低密度脂蛋白,孵育48 h,分化为巨噬泡沫细胞。设... 目的探讨微小RNA-34a-5p(miR-34a-5p)通过靶向鼠双微体4(MDM4)抑制巨噬细胞氧化应激损伤的作用。方法THP-1人单核细胞复苏后,培养分化为巨噬细胞。设立空白对照组。剩余细胞加入人源氧化低密度脂蛋白,孵育48 h,分化为巨噬泡沫细胞。设立动脉粥样硬化(AS)对照组。miR-34a-5p质粒转染,设为miR-34a-5p质粒转染组。每组24个重复。比较三组巨噬细胞凋亡情况,丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)蛋白及活性氧(ROS)水平,MDM4阳性率。结果空白对照组凋亡率为(2.55±0.32)%,AS对照组凋亡率为(28.16±4.23)%,miR-34a-5p转染组为(13.48±1.66)%,三组比较差异有统计学意义(P<0.05)。AS对照组高于空白对照组与miR-34a-5p转染组,miR-34a-5p转染组高于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。三组MDA、SOD蛋白及ROS水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);AS对照组MDA、ROS水平最高,SOD水平最低,其次为miR-34a-5p转染组,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。空白对照组MDM4阳性率为(8.33±0.35)%,AS对照组为(29.26±3.48)%,miR-34a-5p转染组为(14.26±1.59)%,三组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论miR-34a-5p可下调MDM4,进而抑制巨噬细胞氧化应激损伤。 展开更多

关键词 微小RNA-34a-5p 靶向 鼠双微体4 巨噬细胞 氧化应激损伤

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猪瘟病毒E2蛋白抗原多肽与T4噬菌体SOC蛋白的融合表达 被引量：4

2

作者 吴健敏 任兆钧 +4 位作者 余兴龙 马钢 李吉平 涂长春 张念祖 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期14-17,共4页

利用 DNA重组技术将猪瘟病毒 (clascical swine fever virus,CSFV) E2蛋白主要抗原编码区基因 (m E2 )与 T4噬菌体 SOC基因融合 ,插入 T4噬菌体表达质粒 ,构建成 T4噬菌体 SOC位点表达 m E2的表达载体 p1Sm E2。将其转化至 BL2 1 (DE3 )... 利用 DNA重组技术将猪瘟病毒 (clascical swine fever virus,CSFV) E2蛋白主要抗原编码区基因 (m E2 )与 T4噬菌体 SOC基因融合 ,插入 T4噬菌体表达质粒 ,构建成 T4噬菌体 SOC位点表达 m E2的表达载体 p1Sm E2。将其转化至 BL2 1 (DE3 )菌 ,取经 IPTG诱导后表达的目的蛋白 SDC- m E2进行 SOS- PAGE、薄层凝胶扫描分析、Western blot及 EL ISA等方法检测。结果表明 ,表达的 SOC- m E2蛋白相对分子质量约 2 5 70 0 ,表达量占菌体总蛋白量的 36 .7%,并具有与 CSFV特异性抗体反应的活性。 展开更多

关键词 猪瘟病毒E2蛋白抗原多肽 T4噬菌体 SOC蛋白 融合表达

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鸡缩胆囊素(CCK)在T4噬菌体表面的展示及免疫原性研究 被引量：4

3

作者 舒鼎铭 覃健萍 +1 位作者 曹永长 毕英佐 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期705-710,共6页

采用T4噬菌体表面展示系统,将CCK-33肽四多串联体及八多串联体展示在T4噬菌体表面,并研究其免疫原性。将CCK四串联体和八串联体与SOC基因缺失的、依赖溶菌酶的噬菌体ΦT4-Z1重组,获得重组噬菌体ΦT-4CCK和ΦT-8CCK。SDS-PAGE和Western B... 采用T4噬菌体表面展示系统,将CCK-33肽四多串联体及八多串联体展示在T4噬菌体表面,并研究其免疫原性。将CCK四串联体和八串联体与SOC基因缺失的、依赖溶菌酶的噬菌体ΦT4-Z1重组,获得重组噬菌体ΦT-4CCK和ΦT-8CCK。SDS-PAGE和Western Blot检测结果表明,CCK多串联体蛋白已经成功展示在T4噬菌体表面,其融合蛋白分子量约30 ku和41 ku,能够与CCK标准阳性血清发生特异性反应。以重组噬菌体为免疫原制备油佐剂疫苗主动免疫胡须肉鸡后,抗体浓度显著升高,肉鸡的体重、采食量都有所提高,而料肉比有所下降。结果说明,鸡CCK蛋白展示在T4噬菌体表面具有良好的免疫原性。 展开更多

关键词 缩胆囊素 T4噬菌体 免疫原性

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T4噬菌体蛋白的分子改造及其应用前景 被引量：2

4

作者 逯凯 颜晨 任慧英 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第4期97-102,共6页

T4噬菌体是一种病毒,其基因、结构和生物学特性已清晰,利用各种分子操作技术可以对其进行进一步改造。利用位点特异性诱变,研究T4噬菌体某些基本蛋白的功能;普遍用来进行噬菌体改造的噬菌体展示技术已经成功在T4衣壳平台上展示目的抗原... T4噬菌体是一种病毒,其基因、结构和生物学特性已清晰,利用各种分子操作技术可以对其进行进一步改造。利用位点特异性诱变,研究T4噬菌体某些基本蛋白的功能;普遍用来进行噬菌体改造的噬菌体展示技术已经成功在T4衣壳平台上展示目的抗原;位点特异性诱变及噬菌体展示技术都可以用于改造噬菌体使其与哺乳动物细胞发生相互作用,也能获得除细菌宿主之外的可被噬菌体感染的细胞;还可在不断发展的噬菌体治疗研究中得到应用。这些噬菌体的改造方法都将会促进疫苗技术、噬菌体疗法和其他生物及医学科学分支的发展。论文对T4噬菌体的蛋白结构、噬菌体展示技术及相关的噬菌体治疗等内容进行了综述。 展开更多

关键词 T4噬菌体 结构蛋白 位点特异性突变 噬菌体展示 噬菌体治疗

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蛋白酶对水环境中病毒的灭活作用 被引量：2

5

作者 吕文洲 杨清香 +2 位作者 张昱 杨敏 朱春芳 《环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第5期93-96,共4页

以大肠杆菌噬菌体T4作为模式病毒 ,研究了蛋白酶对病毒的灭活作用 .试验结果表明 :蛋白酶灭活病毒的效果明显 .适宜条件下 ,6 7 5u/mL的蛋白酶K处理 1h对纯水中病毒 (6 2× 1 0 5PFU/L)和生活污水中病毒 (7 2× 1 0 5PFU/L)灭... 以大肠杆菌噬菌体T4作为模式病毒 ,研究了蛋白酶对病毒的灭活作用 .试验结果表明 :蛋白酶灭活病毒的效果明显 .适宜条件下 ,6 7 5u/mL的蛋白酶K处理 1h对纯水中病毒 (6 2× 1 0 5PFU/L)和生活污水中病毒 (7 2× 1 0 5PFU/L)灭活率分别达到了 99 4 %和 4 9 4 % ,处理 3h的灭活率分别是 >99 9%和 81 1 % ;工业蛋白酶 1 398在 75 0u/mL酶浓度下处理 1h对纯水水中病毒 (1 7× 1 0 5PFU/L)灭活率达到 74 4 % . 展开更多

关键词 蛋白酶 病毒 噬菌体T4 灭活 消毒

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新城疫病毒F基因重组噬菌体的构建及其免疫原性 被引量：3

6

作者 刘铀 毕英佐 曹永长 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期1270-1274,共5页

用PCR方法扩增不含信号序列、长度为1566bp、编码522个氨基酸的新城疫病毒(NDV)F基因片段,将其克隆至pR质粒获得重组质粒pR-F,以此转化大肠杆菌E2,用溶菌酶缺陷噬菌体T4-Z1感染重组E2菌,F基因经同源重组整合到噬菌体基因组中,用PCR方法... 用PCR方法扩增不含信号序列、长度为1566bp、编码522个氨基酸的新城疫病毒(NDV)F基因片段,将其克隆至pR质粒获得重组质粒pR-F,以此转化大肠杆菌E2,用溶菌酶缺陷噬菌体T4-Z1感染重组E2菌,F基因经同源重组整合到噬菌体基因组中,用PCR方法筛选重组噬菌体并命名为T4-Z1-F。将T4-Z1-F制备成油乳剂疫苗免疫10日龄SPF鸡,25日龄加强免疫1次。结果表明,表达F蛋白的重组噬菌体具有良好的免疫原性,可诱导免疫鸡产生特异性抗体并对NDV强毒攻击提供部分免疫保护。 展开更多

关键词 重组噬菌体 新城疫病毒 免疫原性 F基因 PCR方法 构建 特异性抗体 信号序列 基因片段 重组质粒 大肠杆菌 同源重组 SPF鸡 10日龄 疫苗免疫 免疫保护 诱导免疫 氨基酸 R质粒 溶菌酶 基因组 油乳剂 F蛋白 NDV E2 强毒 鸡产

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胰高血糖素样肽1受体N端片段与exendin-4的亲和位点分析 被引量：2

7

作者 高蔚丰 刘美云 马昱澍 《华东理工大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期66-70,共5页

通过易错PCR(epPCR)方法建立了一个鼠肺的胰高血糖素样肽1受体(GLP-1R)N端片段的噬菌体随机突变展示肽库。根据筛选出的突变体来分析突变后胰高血糖素样肽1受体N端片段(nGLP-1R)与exendin-4结合活性。实验结果显示:保守的半胱氨酸C26发... 通过易错PCR(epPCR)方法建立了一个鼠肺的胰高血糖素样肽1受体(GLP-1R)N端片段的噬菌体随机突变展示肽库。根据筛选出的突变体来分析突变后胰高血糖素样肽1受体N端片段(nGLP-1R)与exendin-4结合活性。实验结果显示:保守的半胱氨酸C26发生突变后并未引起nGLP-1R与其配体exendin-4结合能力的改变,第101位和108位氨基酸是nGLP-1R与exendin-4结合的潜在位点。 展开更多

关键词 胰高血糖素样肽1受体 EXENDIN-4 易错PCR 噬菌体表面展示

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猪圆环病毒II型衣壳蛋白片段与T4噬菌体SOC蛋白的融合表达

8

作者 王宪文 毕英佐 +4 位作者 王新卫 焦玉萍 谢青梅 曹永长 于康震 《中国农学通报》 CSCD 2008年第5期58-61,共4页

将PCV2衣壳蛋白片段与T4噬菌体SOC蛋白在大肠杆菌中融合表达。利用PCR技术扩增猪圆环病毒Cap基因。将Cap基因克隆至T4噬菌体表达质粒pSOC的SOC基因(T4噬菌体表面非结构蛋白基因)下游,构建成T4噬菌体SOC位点表达Cap的表达载体pSOC-Cap。... 将PCV2衣壳蛋白片段与T4噬菌体SOC蛋白在大肠杆菌中融合表达。利用PCR技术扩增猪圆环病毒Cap基因。将Cap基因克隆至T4噬菌体表达质粒pSOC的SOC基因(T4噬菌体表面非结构蛋白基因)下游,构建成T4噬菌体SOC位点表达Cap的表达载体pSOC-Cap。将其转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后表达的目的蛋白SOC-Cap进行SDS-PAGE与Western-blot方法检测。表达的SOC-Cap蛋白相对分子质量约28kD,表达量占菌体总蛋白量的22.31%,并具有与PCV2特异性抗体反应的活性。PCV2衣壳蛋白片段与T4噬菌体SOC蛋白的融合表达后,表达量较高,并具有免疫活性,有望用于猪圆环病毒II型的诊断和预防。 展开更多

关键词 猪圆环病毒II型 衣壳蛋白 T4噬菌体 融合表达

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禽流感病毒NP蛋白与T4噬菌体SOC蛋白的融合表达 被引量：1

9

作者 王新卫 毕英佐 +2 位作者 马静云 詹爱军 曹永长 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期889-892,共4页

利用PCR技术扩增禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)NP基因。将NP基因克隆至T4噬菌体表达质粒pSOC的SOC基因(T4噬菌体表面非结构蛋白基因)下游,构建成T4噬菌体SOC位点表达NP的表达载体pSOC-NP。将其转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG... 利用PCR技术扩增禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)NP基因。将NP基因克隆至T4噬菌体表达质粒pSOC的SOC基因(T4噬菌体表面非结构蛋白基因)下游,构建成T4噬菌体SOC位点表达NP的表达载体pSOC-NP。将其转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后表达的目的蛋白SOC-NP进行SDS-PAGE与Western-blot方法检测。结果表明,表达的SOC-NP蛋白相对分子质量约58kD,表达量占菌体总蛋白量的20.34%,并具有与AIV特异性抗体反应的活性。 展开更多

关键词 禽流感病毒 核蛋白 T4噬菌体 融合表达

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噬菌体表面展示技术筛选胰高血糖样肽1受体N端片段的Exendin-4亲和位点

10

作者 高蔚丰 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第34期16775-16777,共3页

[目的]通过噬菌体表面展示技术寻找胰高血糖素样肽1受体N端片段(nGLP-1R)结合Exendin-4的关键位点。[方法]通过易错PCR建立一个鼠肺nGLP-1R(从第21个氨基酸到第145个氨基酸)的噬菌体随机突变展示肽库。根据筛选出的突变体分析突变后nGLP... [目的]通过噬菌体表面展示技术寻找胰高血糖素样肽1受体N端片段(nGLP-1R)结合Exendin-4的关键位点。[方法]通过易错PCR建立一个鼠肺nGLP-1R(从第21个氨基酸到第145个氨基酸)的噬菌体随机突变展示肽库。根据筛选出的突变体分析突变后nGLP-1R与Exendin-4结合活性。[结果]nGLP-1R第30位、第46位和第92位氨基酸是其与Exendin-4结合的潜在位点。[结论]关键位点单个氨基酸残基的突变可以改变nGLP-1R蛋白质的生物学活性。 展开更多

关键词 胰高血糖素样肽1受体 EXENDIN-4 易错PCR 噬菌体表面展示

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丙型肝炎病毒非结构蛋白4A人源单链可变区抗体的筛选与鉴定 被引量：19

11

作者 钟彦伟 成军 +4 位作者 施双双 夏小兵 王刚 杨继珍 陈菊梅 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期422-424,共3页

目的利用噬菌体表面展示技 术,从半合成人源化单链可变区抗体库中筛选、鉴定丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS4A 的单 链可变区抗体(ScFv)及其编码基因,为抗HCV的细胞内免疫基因治疗研究开辟新途径。方法采用噬菌体表面展示技术,以重组的... 目的利用噬菌体表面展示技 术,从半合成人源化单链可变区抗体库中筛选、鉴定丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS4A 的单 链可变区抗体(ScFv)及其编码基因,为抗HCV的细胞内免疫基因治疗研究开辟新途径。方法采用噬菌体表面展示技术,以重组的HCV非结构蛋白NS4A为包被抗原,从噬菌体单链可变区抗体库中经过3轮“吸附-洗脱-扩增”筛选过 程,获得抗原结合活性较强的HCV NS4A人单链可变区抗体片段阳性克隆,并对其 进行免疫学活性及编码基因序列测定。结果筛选得到 的ScFv片段具有抗HCV NS4A的特异性,编码基因符合人源化单链可变区抗体编码基因的特 点。结论利用噬菌体抗体库技术,成功获得HCV NS4A的特异性人抗体,为进一步研究HCV NS4A的生物学功能及细胞内免疫抗HCV基因治疗方 案奠定基础。 展开更多

关键词 非结构蛋白NS4A 单链抗体 丙型肝炎 HCV

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丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4A抗原模拟表位的筛选和鉴定 被引量：10

12

作者 钟彦伟 成军 +6 位作者 陈新华 王刚 洪源 王琳 李莉 张玲霞 陈菊梅 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期347-349,352,共4页

目的　筛选丙型肝炎病毒 (hepatitisCvirus,HCV)非结构蛋白NS4A(HCVNS4A)特异性噬菌体模拟表位 ,为抗HCV的疫苗研究探索新途径。方法　以抗 HCVNS4A的单克隆抗体作为固相筛选分子 ,对人工合成的噬菌体随机 1 2肽库进行 5轮“吸附 洗脱... 目的　筛选丙型肝炎病毒 (hepatitisCvirus,HCV)非结构蛋白NS4A(HCVNS4A)特异性噬菌体模拟表位 ,为抗HCV的疫苗研究探索新途径。方法　以抗 HCVNS4A的单克隆抗体作为固相筛选分子 ,对人工合成的噬菌体随机 1 2肽库进行 5轮“吸附 洗脱 扩增”的筛选过程 ,随机挑取 45个克隆 ,经噬菌体酶联免疫吸附法 (ELISA)鉴定并进行交叉反应实验以及竞争抑制性结合实验 ,最后对所选克隆进行DNA序列分析 ,以确定HCVNS4A抗原的模拟表位。结果　经噬菌体富集后 ,从随机筛选的 45个克隆中得到 1 3个阳性克隆 ,确定氨基酸序列XXRXXMXPXXXI为HCVNS4A的模拟表位。结论　用噬菌体 1 2肽库成功筛选得到HCVNS4A的模拟表位 。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 非结构蛋白NS4A 抗原 模拟表位 筛选 鉴定

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自然环境中T4型噬菌体g23基因多样性研究进展 被引量：8

13

作者 王光华 刘俊杰 Makoto Kimura 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期732-739,共8页

过去的20多年,伴随着分子生物学技术在环境微生物研究中的应用,环境中细菌和真菌群落基因多样性及与其生存环境间的关系逐渐被揭示,但对于地球上广泛存在且数量巨大的生命体-噬菌体基因多样性研究还很少。本文以编码T4型噬菌体主要壳蛋... 过去的20多年,伴随着分子生物学技术在环境微生物研究中的应用,环境中细菌和真菌群落基因多样性及与其生存环境间的关系逐渐被揭示,但对于地球上广泛存在且数量巨大的生命体-噬菌体基因多样性研究还很少。本文以编码T4型噬菌体主要壳蛋白基因g23为目标,综述了近年来T4型噬菌体在海洋、湖泊和稻田中基因多样性的研究进展。研究结果表明T4型噬菌体g23基因分布与其生存环境关系很大,许多g23基因按获取环境不同划分为几个新类群。同时文中也指出了针对环境中T4型噬菌体g23基因研究应该注意的几点问题及未来的研究发展趋势。 展开更多

关键词 噬菌体 T4型噬菌体 g23基因 病毒生态 稻田

原文传递

猪瘟病毒E2蛋白重组T4噬菌体的构建及免疫学特性 被引量：5

14

作者 吴健敏 任兆钧 +2 位作者 余兴龙 张念祖 涂长春 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期521-524,共4页

利用重组 PCR技术将猪瘟病毒 (CSFV) E2基因与 T4噬菌体 SOC基因 C端融合 ,构建了大小为 12 33bp的SOC/ E2融合基因 ,将其插入携带 T4溶菌酶基因 (e)和 denv基因的 T4重组载体 (p RH) ,构建了重组载体 p RSE2 ,通过重组载体与缺失突变型... 利用重组 PCR技术将猪瘟病毒 (CSFV) E2基因与 T4噬菌体 SOC基因 C端融合 ,构建了大小为 12 33bp的SOC/ E2融合基因 ,将其插入携带 T4溶菌酶基因 (e)和 denv基因的 T4重组载体 (p RH) ,构建了重组载体 p RSE2 ,通过重组载体与缺失突变型 T4噬菌体基因发生同源重组 ,将 SOC/ E2融合基因整合入 T4噬菌体的基因组中。经EL ISA、Western blot等免疫学检测证实 ,T4噬菌体表达的 E2融合蛋白具有 CSFV免疫学活性 ,动物试验证实 T4 .SOC. 展开更多

关键词 猪瘟病毒 E2蛋白重组 T4噬菌体 构建技术 免疫学特性

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一株宽宿主谱裂解性大肠杆菌噬菌体的进化分析 被引量：6

15

作者 周艳 包红朵 +2 位作者 张辉 张莉莉 王冉 《中国动物传染病学报》 CAS 2014年第6期71-76,共6页

裂解性噬菌体能够特异性裂解细菌,本研究分析了一株从自然界中分离的宽宿主谱裂解性大肠杆菌噬菌体的种属和进化关系。前期用Adams双层平板琼脂法从猪场污水中分离纯化出一株裂解性噬菌体v B_Eco M_JS09,裂解谱分析能够裂解禽致病性大... 裂解性噬菌体能够特异性裂解细菌,本研究分析了一株从自然界中分离的宽宿主谱裂解性大肠杆菌噬菌体的种属和进化关系。前期用Adams双层平板琼脂法从猪场污水中分离纯化出一株裂解性噬菌体v B_Eco M_JS09,裂解谱分析能够裂解禽致病性大肠杆菌和产肠毒素大肠杆菌。扩增分析gene18、gene 23序列,并根据gp18和gp23氨基酸序列构建系统进化树,分析JS09的遗传进化关系。结果表明噬菌体v B_Eco M_JS09基因组为ds DNA,属于有尾噬菌体目、肌尾噬菌体科、T4-like噬菌体、T-evens亚群。其gp18氨基酸序列与大肠杆菌噬菌体RB69同源性最高,为100%;gp23氨基酸序列与大肠杆菌T4噬菌体同源性最高为96%。该结果为禽致病性大肠杆菌和产肠毒素大肠杆菌的防控提供了生物学基础。 展开更多

关键词 禽致病性大肠杆菌 产肠毒素大肠杆菌 宽宿主谱裂解性大肠杆菌噬菌体 T4-like噬菌体 进化分析

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载脂蛋白A-I模拟肽D4F通过抑制caspase-12减轻氧化低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞凋亡 被引量：6

16

作者 田华 李严严 +6 位作者 丁明德 杨娜娜 焦鹏 桑慧 方永奇 姚树桐 秦树存 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1750-1755,共6页

目的:探讨载脂蛋白A-I(apolipoprotein A-I,Apo A-I)模拟肽D4F对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导的巨噬细胞凋亡和内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)凋亡途径关键分子caspase-12的影响,并... 目的:探讨载脂蛋白A-I(apolipoprotein A-I,Apo A-I)模拟肽D4F对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导的巨噬细胞凋亡和内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)凋亡途径关键分子caspase-12的影响,并阐明其可能的分子机制。方法:体外培养RAW264.7巨噬细胞,给予12.5、25和50 mg/L D4F、5 mmol/L ERS抑制剂4-苯丁酸(4-phenylbutyric acid,PBA)或5μmol/L二亚苯基碘鎓(diphenyleneiodonium,DPI)预处理1 h后,再加入100 mg/L ox-LDL或4 mg/L ERS诱导剂衣霉素(tunicamycin,TM)继续培养24 h。MTT法检测细胞活力;TUNEL法检测细胞凋亡情况;试剂盒测定细胞内丙二醛(malondialdehyde,MDA)和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)氧化酶活性;Western blot法检测caspase-12的表达变化。结果:与ERS抑制剂PBA相似,D4F可抑制ox-LDL或TM所致的巨噬细胞活力降低和凋亡,且呈浓度依赖性(P<0.05)。与氧化应激抑制剂DPI相似,D4F显著抑制ox-LDL诱导的氧化应激反应,表现为ROS和MDA生成减少(P<0.01)、SOD活性增加以及NADPH氧化酶活性降低(P<0.05);与PBA和DPI相似,D4F可减轻ox-LDL诱导的巨噬细胞caspase-12活化,且呈浓度依赖性(P<0.05);另外,D4F还可抑制TM诱导的caspase-12活化(P<0.05)。结论:D4F能够抑制ox-LDL诱导的巨噬细胞凋亡,其机制至少部分是通过减轻氧化应激继而抑制caspase-12活化实现的。 展开更多

关键词 载脂蛋白A-I模拟肽D4F CASPASE-12 氧化低密度脂蛋白 巨噬细胞 细胞凋亡

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利用T4噬菌体展示猪瘟病毒E2抗原 被引量：3

17

作者 吴健敏 任兆钧 +2 位作者 余兴龙 涂长春 张念祖 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2004年第11期61-64,共4页

利用重组PCR技术将猪瘟病毒 (CSFV )E2蛋白主要抗原编码区基因 (mE2 )与T4噬菌体SOC基因融合 ,构建了大小为 643bp的SOC mE2融合基因 ,再将其插入携带T4溶菌酶基因 (e)和(denV)基因的T4重组载体 (PRH) ,构建了重组载体pRsmE2。通过重组... 利用重组PCR技术将猪瘟病毒 (CSFV )E2蛋白主要抗原编码区基因 (mE2 )与T4噬菌体SOC基因融合 ,构建了大小为 643bp的SOC mE2融合基因 ,再将其插入携带T4溶菌酶基因 (e)和(denV)基因的T4重组载体 (PRH) ,构建了重组载体pRsmE2。通过重组载体与缺失突变型T4发生同源重组 ,可将SOC mE2融合基因整合入T4的基因组中 ,并成功地将大小约 2 1 5aaSOC mE2融合蛋白展示于T4噬菌体衣壳表面。经Westernblot、胶体金免疫电镜等免疫学检测证实 ,展示于T4表面的mE2融合蛋白具有CSFV免疫学活性。 展开更多

关键词 重组载体 融合基因 抗原编码区 融合蛋白 噬菌体展示 携带 免疫学检测 猪瘟病毒 CSFV 利用

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重组白细胞介素4受体(IL-4R)噬菌体单链抗体库构建及筛选 被引量：5

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作者 杨光勇 郭海涛 +5 位作者 刘茜明 何光志 田维毅 蔡琨 王平 王文佳 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期829-833,共5页

目的应用噬菌体展示技术构建重组白细胞介素4受体（IL-4R）噬菌体单链抗体（sc Fv）库,并从抗体库中进行筛选。方法利用重组人IL-4R（rh IL-4R）蛋白免疫BALB/c小鼠,提取总RNA,反转录PCR扩增V_H和V_L基因,经重叠延伸PCR扩增出带有限制... 目的应用噬菌体展示技术构建重组白细胞介素4受体（IL-4R）噬菌体单链抗体（sc Fv）库,并从抗体库中进行筛选。方法利用重组人IL-4R（rh IL-4R）蛋白免疫BALB/c小鼠,提取总RNA,反转录PCR扩增V_H和V_L基因,经重叠延伸PCR扩增出带有限制性酶切位点的sc Fv,用限制性内切酶SfiⅠ和NotⅠ分别双酶切sc Fv和p CANTAB5E载体,利用T4连接酶进行连接,转入感受态细菌E.coli TG1中制备转化子;在培养基中培养得到噬菌体单链抗体库;通过3轮富集和筛选,选择抗原亲和力最强的克隆进行测序分析。结果经过3轮筛选,构建了库容为2×10~8的rh IL-4R单链抗体库,测序结果显示抗rh IL-4R蛋白sc Fv基因全长741 bp,编码247个氨基酸。通过VBASE2数据库分析,抗rh IL-4R蛋白的V_H和V_L基因序列都存在3个互补决定区和4个骨架区。结论成功构建了抗rh IL-4R蛋白噬菌体sc Fv库。 展开更多

关键词 重组人白细胞介素4(rhIL-4R) 噬菌体展示技术 单链抗体

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采用“乐高”拼接法模拟“T_(4)噬菌体”型DNA拓扑结构

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作者 谈浚杰 李明坤 +4 位作者 孟子汶 毕美营 韦佳勋 汪朝阳 应明 《山东化工》 CAS 2023年第11期36-39,共4页

采用“乐高”拼接法以双链DNA为原始材料,模拟了一种“T_(4)噬菌体”型DNA拓扑结构。其中由15个“梁销”结构组成了噬菌体的头部、颈部、尾部和底板,再选用限制性内切酶AbsI、BbvCI、XbaI将各部分组件缝合在一起,最终形成了一种“T_(4)... 采用“乐高”拼接法以双链DNA为原始材料,模拟了一种“T_(4)噬菌体”型DNA拓扑结构。其中由15个“梁销”结构组成了噬菌体的头部、颈部、尾部和底板,再选用限制性内切酶AbsI、BbvCI、XbaI将各部分组件缝合在一起,最终形成了一种“T_(4)噬菌体”型核酸纳米颗粒,头部高度100 nm,直径60 nm;尾鞘70 nm,直径15 nm,基本符合真实噬菌体的结构。 展开更多

关键词 核酸自组装 “乐高”拼接 T_(4)噬菌体

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固定化海洋脱氮假弧菌转氨酶实现可循环生物催化

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作者 邵小芙 果波 +1 位作者 高嵩 曹阳 《江苏海洋大学学报（自然科学版）》 CAS 2023年第4期22-28,共7页

海洋脱氮假弧菌ω-转氨酶区别于以往报道的ω-转氨酶,可实现对催化中心的远端手性位点的立体选择性识别,这种独特的(S)-型转氨基催化活性使其可在1-四氢萘胺和1-氨基茚满的脱氨基反应中发挥高效效用。但酶材料的生产及使用成本限制了其... 海洋脱氮假弧菌ω-转氨酶区别于以往报道的ω-转氨酶,可实现对催化中心的远端手性位点的立体选择性识别,这种独特的(S)-型转氨基催化活性使其可在1-四氢萘胺和1-氨基茚满的脱氨基反应中发挥高效效用。但酶材料的生产及使用成本限制了其应用。以可高效保留酶的精细化功能的T4噬菌体衣壳为固定化材料,通过将海洋脱氮假弧菌ω-转氨酶与T4噬菌体衣壳附加蛋白Soc构建融合,成功实现了海洋脱氮假弧菌ω-转氨酶位于T4噬菌体衣壳Soc结合位点的结合固定。固定化酶保留了较好的催化活性,且每轮回收的酶活平均保留率>92%。该方法基于Soc蛋白及T4噬菌体衣壳间的高生物亲和性以生物材料建立了海洋脱氮假弧菌ω-转氨酶的酶活精细化固定化方式,实现了对酶催化活性的高效回收,有望推动海洋脱氮假弧菌ω-转氨酶的应用发展。 展开更多

关键词 ω-转氨酶 T4噬菌体衣壳 固定化酶 生物催化 立体选择性

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