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人特异性T细胞系间接识别猪抗原 被引量:2
1
作者 沈佰华 谢晋 +3 位作者 李宁丽 张冬青 周洪 周光炎 《上海免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2001年第4期210-212,共3页
SLA (swineleukocyteantigen )特异性CD4+T细胞系和自身APC以及猪PBMC共同孵育时 ,T细胞增殖反应很强 ,而同仅有自身APC或猪PBMC刺激时的T细胞增殖有显著差异。提示抗原特异性CD4+T细胞系以间接途径识别SLA抗原。该识别能被抗人CD4和HL... SLA (swineleukocyteantigen )特异性CD4+T细胞系和自身APC以及猪PBMC共同孵育时 ,T细胞增殖反应很强 ,而同仅有自身APC或猪PBMC刺激时的T细胞增殖有显著差异。提示抗原特异性CD4+T细胞系以间接途径识别SLA抗原。该识别能被抗人CD4和HLAII类抗体阻断 ,而抗SLAII类抗体阻断作用很弱 ,表明HLAII类分子在间接识别中起重要作用 ,这一结果不同于直接从外周血中分离的未经抗原致敏的T细胞。直接识别猪APC递呈的抗原。有可能异种移植初期以直接识别为主导 。 展开更多
关键词 间接识别 T细胞系 异种反应SLA HLA
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建立猪MHCⅠ类抗原特异性人T细胞系的探讨 被引量:1
2
作者 唐军 张冬青 +4 位作者 沈佰华 周洪 周芸 柳子星 周光炎 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期337-339,共3页
目的 建立间接识别中国版纳猪SLAⅠ类P1分子的特异性人T细胞系的方法 ,以进一步研究SLAⅠ类分子的间接识别在猪→人异种细胞性排斥中的作用。方法 以E·coli中表达并纯化的SLAⅠ类分子P1为抗原 ,体外反复刺激健康人PBMC ,3H TdR... 目的 建立间接识别中国版纳猪SLAⅠ类P1分子的特异性人T细胞系的方法 ,以进一步研究SLAⅠ类分子的间接识别在猪→人异种细胞性排斥中的作用。方法 以E·coli中表达并纯化的SLAⅠ类分子P1为抗原 ,体外反复刺激健康人PBMC ,3H TdR掺入法筛选特异性增殖的T细胞 ,FACS作表型初步分析。结果 初步测定健康人外周血版纳猪SLAⅠ类P1分子特异性T细胞反应频率约 6 .67× 1 0 - 7,所建 4个T细胞系表型均为TCRαβ+ ,其中 3株以CD4+ 为主 ,1株以CD8+ 为主。结论 利用E .coli表达的纯蛋白抗原可建立间接识别版纳猪SLAⅠ类P1分子的特异性人T细胞系。 展开更多
关键词 猪白细胞抗原 基因表达 T细胞系 间接识别 器官移植 急性细胞性排斥
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MBP-特异性T细胞的生物学性状分析
3
作者 吴晓秋 张凤蕴 +5 位作者 樊拥军 赵育莹 王红 王丽群 李春江 杨景云 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2003年第1期29-30,共2页
目的 :在C57BL/ 6小鼠建立MBP 特异性T细胞系 ,并探讨其生物学特性。方法 :取MBP免疫的C57BL/ 6小鼠腹股间淋巴结的淋巴细胞在体外培养 ,用MBP及同系小鼠的脾细胞反复刺激 ,建立了MBP 特异性T淋巴细胞。以流式细胞仪检测其细胞表面标志 ... 目的 :在C57BL/ 6小鼠建立MBP 特异性T细胞系 ,并探讨其生物学特性。方法 :取MBP免疫的C57BL/ 6小鼠腹股间淋巴结的淋巴细胞在体外培养 ,用MBP及同系小鼠的脾细胞反复刺激 ,建立了MBP 特异性T淋巴细胞。以流式细胞仪检测其细胞表面标志 ,以ELISA双抗体夹心法检测MBP 特异性T细胞产生的IFN γ及IL 4水平。结果 :CD4 + T细胞占 90 %以上。MBP 特异性T细胞主要产生IFN γ。结论 :该T细胞系为CD4 + 、Th1类淋巴细胞 ;在C57BL/ 展开更多
关键词 细胞克隆 髓碱性蛋白 实验性自身免疫性脑脊髓
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人外周血T细胞系间接识别SLAⅠ类分子引起的异种细胞增殖反应
4
作者 唐军 周芸 +3 位作者 柳子星 张勇 王胜旺 周光炎 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第7期536-539,共4页
目的 确认猪→人异种移植中存在针对猪白细胞抗原 (swineleukocyteantigen ,SLA)Ⅰ类分子的间接识别而引起的急性细胞性排斥。方法 用纯化的中国版纳猪SLAⅠ类P1基因工程蛋白为抗原 ,体外反复刺激健康人外周血T细胞 ,建立P1特异性T细... 目的 确认猪→人异种移植中存在针对猪白细胞抗原 (swineleukocyteantigen ,SLA)Ⅰ类分子的间接识别而引起的急性细胞性排斥。方法 用纯化的中国版纳猪SLAⅠ类P1基因工程蛋白为抗原 ,体外反复刺激健康人外周血T细胞 ,建立P1特异性T细胞系。观察抗原特异性CD4 + T细胞系在自身APC存在下对版纳猪外周血单个核细胞与软骨细胞的反应性 ,以及HLA DR单抗与氯喹的阻断作用。结果 建立 10株SLAⅠ类P1抗原特异性T细胞系 ,其中 8株以TCRαβ+ CD4 + 为主要表型 ,将其合并使用。该CD4 + P1特异性T细胞系在自身APC存在下对相同品系版纳猪PBMC与软骨细胞均产生显著增殖反应。经抗人HLA DR单抗与氯喹处理均能明显阻断其增殖反应。结论 健康人外周血T细胞可通过间接识别SLAⅠ类抗原对版纳猪细胞产生明显应答。 展开更多
关键词 异种移植 猪白细胞抗原 T淋巴细胞 异种排斥反应 间接识别
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MBP特异性T细胞系的建立(英文)
5
作者 樊拥军 张凤蕴 陈君平 《哈尔滨医科大学学报》 CAS 2001年第3期161-163,共3页
目的 建立MBP特异性自身反应性T细胞克隆 ,为进一步探讨EAE的发病机制和治疗奠定基础。方法 以MBP肽免疫C5 7BL 6小鼠 ,取其淋巴结细胞 ,加同系鼠脾细胞体外共同培养于含IL 2的培养液中 ,并以MBP肽反复刺激。收集培养细胞 ,以流式细... 目的 建立MBP特异性自身反应性T细胞克隆 ,为进一步探讨EAE的发病机制和治疗奠定基础。方法 以MBP肽免疫C5 7BL 6小鼠 ,取其淋巴结细胞 ,加同系鼠脾细胞体外共同培养于含IL 2的培养液中 ,并以MBP肽反复刺激。收集培养细胞 ,以流式细胞仪进行鉴定。结果 流式细胞仪分析显示 ,90 %以上的细胞为CD4+ T细胞。结论 成功地建立了C5 7BL 6小鼠的MBP反应性T细胞克隆 ,该细胞克隆为MBP特异性自身反应性CD4+ T细胞。 展开更多
关键词 细胞系 髓碱性蛋白 实验性自身免疫性脑脊髓炎 MBP T细胞 EAE
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砷在体外对人T淋巴细胞和Jurkat T细胞系的生长抑制作用 被引量:6
6
作者 张跃新 刘开泰 +4 位作者 谢瑶云 王国荃 谢风莲 古丽 汤建安 《新疆医科大学学报》 CAS 2003年第1期3-5,共3页
目的:通过三氧化二砷在体外对人 T淋巴细胞生长的影响 ,探讨三氧化二砷的免疫毒性和免疫抑制作用的机制。 方法 :应用正常人外周血 T细胞和人 Jurkat T细胞作为体外实验模型 ,观察不同浓度 (0 .5~ 10 0μM)三氧化二砷对正常人淋巴细胞... 目的:通过三氧化二砷在体外对人 T淋巴细胞生长的影响 ,探讨三氧化二砷的免疫毒性和免疫抑制作用的机制。 方法 :应用正常人外周血 T细胞和人 Jurkat T细胞作为体外实验模型 ,观察不同浓度 (0 .5~ 10 0μM)三氧化二砷对正常人淋巴细胞和人 Jurkat T细胞的生长影响 ,并用电镜观察三氧化二砷对人 Jurkat T细胞的形态学改变。结果 :体外实验结果显示 ,三氧化二砷在 0 .5~ 10 0 μM浓度范围对正常人 T细胞和人 Jurkat T细胞的生长有明显的抑制作用 ,并随着三氧化二砷的浓度增高而抑制作用增强 ,呈现为剂量 -反应关系。三氧化二砷对正常人 T淋巴细胞和人 Jurkat T细胞的 IC50 分别为 8.0 5 μM和 8.9μM。电镜观察结果提示 ,三氧化二砷 (5 μM,2 4 h)处理 Jurkat T细胞 ,导致较多细胞出现细胞体积缩小 ,细胞核内染色质浓集于核膜内面成团块状 ,或染色体断裂成碎块状 ,或胞核固缩边缘化等典型的凋亡细胞特征性形态改变。存活的部分细胞线粒体增生 ,提示细胞功能活跃。同时 ,见到许多细胞浆内有空泡形成。结论 :三氧化二砷在体外能明显地抑制人 T淋巴细胞生长 ,这种生长抑制作用的机制之一是诱导细胞凋亡 。 展开更多
关键词 三氧化二砷 人T淋巴细胞 JurkatT细胞系 体外实验 细胞凋亡
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芦荟大黄素对Jurkat T细胞增殖和凋亡的作用及机制 被引量:6
7
作者 胡芬 孙文武 +1 位作者 宋志成 杨文修 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期231-236,共6页
目的研究芦荟大黄素对Jurkat T细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用,并探讨可能的机制。方法应用细胞计数测定增殖,Hoechst/PI双染法及DNA片断化分析细胞凋亡特征,流式细胞术检测细胞周期分布。进一步应用二氢乙锭荧光染色测量活性氧产物,West... 目的研究芦荟大黄素对Jurkat T细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用,并探讨可能的机制。方法应用细胞计数测定增殖,Hoechst/PI双染法及DNA片断化分析细胞凋亡特征,流式细胞术检测细胞周期分布。进一步应用二氢乙锭荧光染色测量活性氧产物,Western blotting检测胞浆细胞色素C(Cyt-c)的量,比色法检测caspase-3和caspase-9活性。结果芦荟大黄素剂量和时间依赖性地抑制JurkatT细胞增殖。芦荟大黄素诱发细胞核皱缩,核DNA片断化,细胞周期出现亚G1期凋亡峰,且停滞于G2/M期。芦荟大黄素介导细胞内活性氧水平显著提高,线粒体释放Cyt-c量显著增加,caspase-3和caspase-9活性显著增强。结论芦荟大黄素剂量依赖性地抑制Jurkat T细胞增殖并诱导其凋亡。诱导凋亡的机制中,包括增加活性氧产物和线粒体损伤途径。 展开更多
关键词 芦荟大黄素 JURKAT T细胞系 增殖 凋亡 细胞周期 活性氧 线粒体
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稳定表达PDCoV-S和RBD蛋白的293T细胞系构建与免疫原性评价
8
作者 肖丽 赵淑庆 +6 位作者 袁雪松 范丽原 易鑫 陈琢琦 李彬 李基棕 主性 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期959-965,共7页
为构建稳定表达猪δ冠状病毒(PDCoV)S和RBD蛋白的293T细胞系,获得PDCoV S和RBD蛋白。本研究将优化合成的PDCoV S蛋白全长基因及其RBD的表达质粒进行双酶切鉴定,将重组质粒pLV-S-Puro、pLV-RBD-Puro、psPRX2、pMD2.G同时转染293T细胞中... 为构建稳定表达猪δ冠状病毒(PDCoV)S和RBD蛋白的293T细胞系,获得PDCoV S和RBD蛋白。本研究将优化合成的PDCoV S蛋白全长基因及其RBD的表达质粒进行双酶切鉴定,将重组质粒pLV-S-Puro、pLV-RBD-Puro、psPRX2、pMD2.G同时转染293T细胞中进行慢病毒包装,收集上清感染293T细胞,经嘌呤霉素初筛得到的多细胞克隆,进一步通过终点稀释法筛选获得稳定表达PDCoV S和RBD蛋白的单克隆293T细胞系,通过Western blot检测蛋白表达,用纯化的PDCoV S和RBD蛋白分别免疫BALB/c小鼠,对重组蛋白进行免疫原性检测。结果表明,稳定表达PDCoV S和RBD蛋白的293T细胞系构建成功,获得了重组慢病毒,纯化PDCoV S和RBD重组蛋白均可以诱导小鼠产生较高的IgG抗体(S:1.2;RBD:0.9),中和抗体水平分别达1∶128和1∶64。本研究构建的293T细胞系能稳定表达PDCoV S和RBD蛋白,为进一步研制PDCoV亚单位疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 293T细胞系 PDCoV 慢病毒 稳定表达
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转导反向6A8α-甘露糖苷酶cDNA对抗Fas抗体诱导Jurkat细胞凋亡的影响 被引量:3
9
作者 岳玮 史耕先 +2 位作者 王壮志 刘音 朱立平 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2001年第2期136-140,共5页
用梯形DNA电泳与Gimsa染色研究人T细胞瘤细胞株Jurkat在转导编码人 6A8α 甘露糖苷酶基因的反向cDNA后 ,对抗Fas抗体诱导凋亡敏感性的变化 ,并用间接免疫荧光染色 (流式细胞仪 )检测细胞表面Fas分子的表达。结果表明 ,抗Fas抗体诱导细胞... 用梯形DNA电泳与Gimsa染色研究人T细胞瘤细胞株Jurkat在转导编码人 6A8α 甘露糖苷酶基因的反向cDNA后 ,对抗Fas抗体诱导凋亡敏感性的变化 ,并用间接免疫荧光染色 (流式细胞仪 )检测细胞表面Fas分子的表达。结果表明 ,抗Fas抗体诱导细胞 2 4h后 ,野生型及转导空载载体的Jurkat细胞出现明显的梯形DNA ,两者之间无明显差异 ,但转导反向 6A8cDNA的细胞未见明显的梯形DNA。Gimsa染色结果显示转导反向 6A8cDNA的Ju rkat细胞中凋亡细胞数明显减少 ,而转导空载载体则无影响。Jurkat细胞为Fas(CD95 ,Apo 1)全阳性细胞 ,转导反向 6A8cDNA或空载载体对Fas表达阳性率与Fas表达强度无明显影响。以上结果提示 ,转导编码 6A8α 甘露糖苷酶基因的反向cDNA使人T细胞株Jurkat对抗人Fas抗体诱导的凋亡作用产生耐受。 展开更多
关键词 细胞凋亡 反向6A8cDNA 反向6A8α-甘露糖苷酶 抗Fas抗体 JURKAT细胞
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CpG岛岸甲基化调控人T细胞系中lag3表达 被引量:2
10
作者 郝书民 仇超 +2 位作者 张林霞 张晓燕 徐建青 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期491-495,共5页
目的探讨表观遗传因素DNA甲基化对人T细胞系中淋巴细胞活化基因3(1ympho—cyteactivationgene3,lag3)表达的影响。方法检测不同T细胞系中lag3的表达水平,选定lag3表达高低相对的细胞系组成研究系统。分析lag3启动子和转录区的CpG分... 目的探讨表观遗传因素DNA甲基化对人T细胞系中淋巴细胞活化基因3(1ympho—cyteactivationgene3,lag3)表达的影响。方法检测不同T细胞系中lag3的表达水平,选定lag3表达高低相对的细胞系组成研究系统。分析lag3启动子和转录区的CpG分布以确定潜在表观调控区(CpG岛和CpG岛岸),分别测定各T细胞系中相关区段的DNA甲基化水平。用5-杂氮胞苷(5-Aza.2'-deoxycytidine,5-Aza-2’-dc)对细胞系做去甲基化处理,检测z0邸表达水平及DNA甲基化水平的变化。结果lag3表达水平在J.CaM1.6和CEM细胞中极低,在JurkatE6-1细胞中相对较高。不同细胞系中,CpG岛均高度甲基化;CpG岛岸在J.CaM1.6和CEM细胞中高度甲基化,但在JurkatE6—1细胞中甲基化水平较低。5-Aza-2’-dc处理后,J.CaM1.6和CEM细胞中lag3mRNA和蛋白质的表达均显著上调,且伴随CpG岛岸去甲基化;而JurkatE6-1细胞中,未见CpG岛岸甲基化和lag3表达水平的显著变化。5-Aza-2'-dc处理不能使CpG岛去甲基化。结论CpG岛岸的甲基化与去甲基化是lag3转录的表观调控开关。 展开更多
关键词 DNA甲基化 CpG岛岸 lag3 人T细胞系
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过表达泛素偶联酶E2C对293T细胞增殖的影响 被引量:2
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作者 黄湘 邱玉林 +2 位作者 谭家余 乔亚峰 李明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期634-636,共3页
目的:构建稳定过表达人类泛素偶联酶E2C(UBE2C)的293T人胚肾细胞株,初步探讨其对293T细胞增殖的影响。方法:采用脂质体法将已成功构建的pcDNA3.1(-)/UBE2C真核表达质粒转入293T人胚肾细胞株中,随后经G418筛选4周,得到阳性克隆细胞株;用W... 目的:构建稳定过表达人类泛素偶联酶E2C(UBE2C)的293T人胚肾细胞株,初步探讨其对293T细胞增殖的影响。方法:采用脂质体法将已成功构建的pcDNA3.1(-)/UBE2C真核表达质粒转入293T人胚肾细胞株中,随后经G418筛选4周,得到阳性克隆细胞株;用Western blot技术检测并鉴定UBE2C基因在293T细胞中的表达情况;用MTT法检测UBE2C对293T细胞增殖的影响。结果:Western blot检测显示,转pcDNA3.1(-)/UBE2C组293T细胞的UBE2C蛋白表达水平明显高于转pcDNA3.1(-)组(P<0.01)。MTT法检测结果显示转pcDNA3.1(-)/UBE2C组293T细胞的增殖速度明显快于转pcDNA3.1(-)组(P<0.01)。结论:成功建立稳定过表达UBE2C的293T细胞株,过表达UBE2C可促进293T细胞的增殖。 展开更多
关键词 UBE2C 过表达 293T细胞株 增殖
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人HoxA10基因真核表达载体构建和表达产物的鉴定 被引量:2
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作者 胡双纲 姚广新 +2 位作者 赵晓明 孙赟 高玉平 《生殖与避孕》 CAS CSCD 2013年第6期383-386,401,共5页
目的:克隆人子宫内膜容受性标志分子HoxA10基因的cDNA,转入真核细胞载体,并在293T细胞中进行表达和鉴定。方法:应用RT-PCR法从人子宫内膜组织中扩增HoxA10基因的cDNA编码区序列,将PCR产物克隆至pCMV-HA真核表达载体中,测序鉴定该载体。... 目的:克隆人子宫内膜容受性标志分子HoxA10基因的cDNA,转入真核细胞载体,并在293T细胞中进行表达和鉴定。方法:应用RT-PCR法从人子宫内膜组织中扩增HoxA10基因的cDNA编码区序列,将PCR产物克隆至pCMV-HA真核表达载体中,测序鉴定该载体。以LipofectamineTM2000将该载体转染入293T细胞中,Western blotting检测HoxA10蛋白的表达。结果:PCR扩增出的人HoxA10基因cDNA正确克隆到了pCMV-HA载体,成功构建了pCMV-HA-HoxA10重组载体;将其转染入293T细胞,用HoxA10和HA抗体进行Western blotting,均检测到了融合蛋白的表达。结论:携带有HA蛋白标签的人HoxA10基因的真核表达载体pCMV-HA-HoxA10克隆及表达成功,为进一步研究HoxA10与其它蛋白质的相互作用以及建立HoxA10的荧光素酶报告基因分析系统奠定了基础。 展开更多
关键词 HOXA10基因 真核表达载体 293T细胞 HA标签 基因表达
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STI571对食管癌细胞株CE-48T和CE-81T的体外杀伤作用
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作者 张蓬原 李宝江 +5 位作者 苏晓东 温浙盛 赵进明 张兰军 龙浩 戎铁华 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第4期456-460,共5页
背景与目的:酪氨酸激酶是细胞增殖和分化的介导者,有研究显示,其在食管癌的发生发展中起重要的促进作用。STI571为血小板衍生的生长因子受体β(platelet-derivedgrowthfactorreceptorβ,PDGFR-β)的酪氨酸激酶抑制剂;食管癌组织中可高表... 背景与目的:酪氨酸激酶是细胞增殖和分化的介导者,有研究显示,其在食管癌的发生发展中起重要的促进作用。STI571为血小板衍生的生长因子受体β(platelet-derivedgrowthfactorreceptorβ,PDGFR-β)的酪氨酸激酶抑制剂;食管癌组织中可高表达PDGFR-β。本实验的目的就是检测靶向治疗新药STI571对食管癌细胞株的体外杀伤作用。方法:使用Westernblot分析检测两种细胞株CE-48T和CE-81T中PDGFR-α和PDGFR-β的表达,然后应用MTT法测出STI571对两种细胞的IC50值,以AnnexinV/PI染色检测细胞凋亡情况,再用Westernblot检测STI571处理前后p-PDGFR-β的表达。结果:CE-48T细胞表达PDGFR-β而不表达PDGFR-α;而CE-81T细胞既不表达PDGFR-β,也不表达PDGFR-α。STI571对PDGFR-β阳性的CE-48T细胞具有很强的抑制作用,其平均IC50值为(8.32±1.50)μmol/L,而对PDGFR-β阴性的CE-81T细胞的抑制作用较弱,其平均IC50值为(41.02±7.64)μmol/L。AnnexinV/PI染色检测表明以STI571以10μmol/L作用CE-48T细胞12h,细胞凋亡率为(52.43±5.30)%,增加作用时间和药物浓度不能增加凋亡率。使用STI571处理CE-48T细胞后,p-PDGFR-β的表达受到抑制,而对CE-81T细胞没有影响。结论:STI571可诱导PDGFR-β表达阳性食管癌细胞凋亡,在体外有明显的杀伤作用,p-PDGFR-β可能是STI571的主要作用靶点。 展开更多
关键词 食管肿瘤 酪氨酸激酶抑制剂 STI571 PDGFR—β ET-48T细胞株 CE-81T细胞株 细胞凋亡 Western blot ANNEXIN V
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HIV-1潜伏感染人Jurkat T细胞模型的建立 被引量:1
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作者 李琳 仇超 +6 位作者 李亮助 刘爱平 邱趁丽 周明哲 张晓燕 徐建青 朱焕章 《中国艾滋病性病》 CAS 2011年第4期387-390,394,共5页
目的建立Ⅰ型艾滋病病毒(HIV-1)潜伏感染人Jurkat T细胞的模型,为进一步研究HIV-1潜伏感染机制奠定基础。方法利用一种表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的HIV-1假病毒感染人Jurkat T细胞,采用流式细胞术分选出GFP-细胞群,之后经激活剂曲古... 目的建立Ⅰ型艾滋病病毒(HIV-1)潜伏感染人Jurkat T细胞的模型,为进一步研究HIV-1潜伏感染机制奠定基础。方法利用一种表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的HIV-1假病毒感染人Jurkat T细胞,采用流式细胞术分选出GFP-细胞群,之后经激活剂曲古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)刺激后,再次采用流式细胞术分选出GFP+细胞,并通过有限稀释法制备获得单克隆细胞系。利用流式细胞术及酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测单克隆细胞系在TSA刺激前后的GFP+细胞比例及HIV-1病毒抗原p24;并用Alu-长末端重复序列(LTR)套式聚合酶链反应(Nested PCR)检测单克隆细胞系中HIV-1基因组的整合情况。结果获得了5株HIV-1潜伏感染的Jurkat单克隆细胞系,对这5株单克隆细胞系分别进行激活剂处理,发现无论是GFP表达细胞比例或HIV-1病毒蛋白p24抗原的表达,皆显著高于激活剂处理前的背景表达水平(P<0.05);并能从这5个单克隆细胞系基因组中扩增出针对HIV-1基因组的特异条带。结论已获得的5株单克隆细胞系具有HIV-1潜伏细胞的生物学特点,表明已成功地建立了HIV-1潜伏感染细胞模型。该模型可用于各种药物或激活剂的筛选和检测,也为进一步研究HIV-1潜伏感染机制奠定了工作基础。 展开更多
关键词 艾滋病病毒Ⅰ型 JURKAT T细胞系 绿色荧光蛋白 潜伏感染模型
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人乳头瘤病毒特异性T细胞系细胞冻存后细胞的存活率及功能 被引量:1
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作者 王雪莲 葛安兴 腾秀志 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2014年第4期33-36,共4页
研究人乳头瘤病毒特异性 T 细胞系细胞冻存后细胞的存活率及功能。应用包含10%二甲基亚砜、90%小牛血清的冻存液冻存6个 T 细胞系(5个 CD4 T 细胞系,1个 CD8 T 细胞系)细胞,液氮中冻存32~54个月后复苏,台盼蓝染色法检测复苏后 T ... 研究人乳头瘤病毒特异性 T 细胞系细胞冻存后细胞的存活率及功能。应用包含10%二甲基亚砜、90%小牛血清的冻存液冻存6个 T 细胞系(5个 CD4 T 细胞系,1个 CD8 T 细胞系)细胞,液氮中冻存32~54个月后复苏,台盼蓝染色法检测复苏后 T 细胞系细胞的存活率,用酶联免疫斑点法(enzyme-linked immunospot assay,ELISPOT)检测复苏后 T 细胞系细胞的功能。结果显示,6个 T 细胞系细胞液氮冻存解冻后细胞的存活率为24.7%~93.5%,过夜培养后细胞的存活率为2.5%~72.2%。CD8 T 细胞系细胞的存活率高于 CD4 T细胞系细胞。6个复苏后的 T 细胞系细胞在 PHA 诱导后均能分泌 IFN-γ。人乳头瘤病毒特异性 T 细胞系细胞冻存复苏后能够保持较好的存活率和功能。 展开更多
关键词 细胞冻存 人乳头瘤病毒 T 细胞系细胞
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人肌细胞增强因子2C基因慢病毒载体的构建及其在293T细胞中的表达 被引量:1
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作者 孙兆刚 付鹏 +3 位作者 刘爱华 王静波 孙新六 刘兴田 《中华临床医师杂志(电子版)》 CAS 2012年第20期80-82,共3页
目的构建人肌细胞增强因子2C(MEF2C)慢病毒表达载体并检测其表达性能,以便应用过表达技术进一步研究MEF2C的功能。方法以人MEF2C基因序列为模板合成其编码框序列,通过限制性内切酶NotⅠ和NsiⅠ酶切、T4DNA连接酶连接,将MEF2C插入慢病毒... 目的构建人肌细胞增强因子2C(MEF2C)慢病毒表达载体并检测其表达性能,以便应用过表达技术进一步研究MEF2C的功能。方法以人MEF2C基因序列为模板合成其编码框序列,通过限制性内切酶NotⅠ和NsiⅠ酶切、T4DNA连接酶连接,将MEF2C插入慢病毒载体质粒LV5-GFP,构建人MEF2C基因重组慢病毒质粒载体,转化感受态细菌,筛选阳性克隆,与包装质粒通过脂质体共转染人胚肾细胞系293T,进行慢病毒包装并测定病毒滴度。病毒感染293T细胞,荧光显微镜下观察感染效率,PCR方法检测MEF2C mRNA的过表达情况。结果成功构建慢病毒表达载体LV5-MEF2C-GFP,三质粒共转染293T细胞后形成假慢病毒颗粒;浓缩假病毒后测定其滴度为2×109TU/ml;以复感染系数MOI为5感染293T细胞,感染效率在70%以上。PCR证实感染带有目的基因假病毒的293T细胞表达MEF2CmRNA的水平较感染阴性对照病毒的293T细胞表达水平明显升高(t=11.93,P=0.000)。结论成功构建MEF2C慢病毒表达系统,为应用过表达技术探索其在肿瘤发生和发展中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 慢病毒属 绿色荧光蛋白质类 MEF2C 293T细胞
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γ-分泌酶抑制剂DAPT抑制Jurkat T细胞增殖 被引量:1
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作者 李玉婷 邢飞跃 郭中峰 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期152-156,共5页
目的:探讨γ-分泌酶抑制剂DAPT在体外对人T淋巴细胞白血病JurkatT细胞株增殖的抑制作用及其某些机制。方法:通过倒置显微镜和MTT法检测DAPT对Jurkat T细胞聚集的影响和对其增殖的抑制作用;利用碘化丙锭染色结合流式细胞术检测DAPT对Jurk... 目的:探讨γ-分泌酶抑制剂DAPT在体外对人T淋巴细胞白血病JurkatT细胞株增殖的抑制作用及其某些机制。方法:通过倒置显微镜和MTT法检测DAPT对Jurkat T细胞聚集的影响和对其增殖的抑制作用;利用碘化丙锭染色结合流式细胞术检测DAPT对Jurkat T细胞周期的影响;藉免疫印迹法检测DAPT对Jurkat T细胞周期蛋白ICBP90表达的影响。结果:DAPT能显著影响Jurkat T细胞的聚集,抑制Jurkat T细胞的增殖,使其细胞周期停滞于S期,且周期蛋白ICBP90的表达下调。结论:γ-分泌酶抑制剂DAPT能够抑制Jurkat T细胞的增殖和细胞周期的进行,其抑制作用可能与ICBP90蛋白表达的下调有关。 展开更多
关键词 反义CCAAT盒结合蛋白(ICBP90) 人T淋巴细胞白血病JurkatT细胞 γ-分泌酶抑制剂DAPT 细胞增殖 细胞周期
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砷诱导人T淋巴细胞表达HMG2基因的克隆研究 被引量:1
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作者 张跃新 刘妍 +3 位作者 刘开泰 成军 陈新华 王国荃 《地方病通报》 2004年第1期1-4,共4页
目的 为了解三氧化二砷诱导人T淋巴细胞的差异表达基因 ,探讨砷对淋巴细胞基因转录的影响机制。方法 在体外用三氧化二砷处理人JurkatT淋巴细胞 ( 5 μmol/L ,2 4h)后 ,应用抑制性消减杂交技术 (SSH)和克隆技术构建差异表达的cDNA文... 目的 为了解三氧化二砷诱导人T淋巴细胞的差异表达基因 ,探讨砷对淋巴细胞基因转录的影响机制。方法 在体外用三氧化二砷处理人JurkatT淋巴细胞 ( 5 μmol/L ,2 4h)后 ,应用抑制性消减杂交技术 (SSH)和克隆技术构建差异表达的cDNA文库 ,用PCR技术和测序技术鉴定阳性克隆。结果 用SSH技术构建了由三氧化二砷诱导的JurkatT淋巴细胞的差异表达基因的正向消减cDNA文库。经测序分析结果显示 ,该文库中含有高泳动类蛋白 2 (HMG2 )基因片段 ,同源性 98%。结论 我们的研究结果提示三氧化二砷 ( 5 μM ,2 4h)可诱导HMG2的转录 。 展开更多
关键词 三氧化二砷 JURKAT T淋巴细胞 铁蛋白重链 基因克隆
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L615诱导的T杀伤细胞系的建立及其生物学特性的研究
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作者 李昆 程一棹 《大连医学院学报》 1993年第1期16-22,共7页
本实验用 MMC-L615瘤苗主动免疫诱导的小鼠免疫膊细胞,在含有 rIL-2(2~u/ml)的 RPMI1640全培基中连续传代并经瘤苗的反复刺激而建成了一株细胞毒性 T 细胞系(定名为 Tc-L615细胞系)并对其各种生物学特性及体外细胞毒活性做了进一步的研究。
关键词 白细胞介素 肿瘤 免疫疗法
原文传递
人LIGHT基因的克隆及其在293T细胞中的表达
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作者 姜曼 黄钢 +1 位作者 黎万玲 白云 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第8期667-669,共3页
目的 克隆人LIGHT分子的全长cDNA ,构建重组真核表达质粒pCI neo LIGHT并在 2 93T细胞上获得稳定表达。方法 从人T细胞cDNA文库中用PCR技术克隆人LIGHT全长cDNA ,装入T Easy载体 ,测序证实后 ,将LIGHTcDNA装入质粒pCI neo中构建真核... 目的 克隆人LIGHT分子的全长cDNA ,构建重组真核表达质粒pCI neo LIGHT并在 2 93T细胞上获得稳定表达。方法 从人T细胞cDNA文库中用PCR技术克隆人LIGHT全长cDNA ,装入T Easy载体 ,测序证实后 ,将LIGHTcDNA装入质粒pCI neo中构建真核表达载体。用电穿孔法转染 2 93T细胞 ,经G418筛选后 ,用流式细胞仪检测LIGHT分子的表达。结果 测序证实克隆的LIGHT全长cDNA阅读框正确完整 ,酶切证实LIGHT pCI neo中LIGHT插入方向正确。转染的2 93T细胞经G418筛选 3个月后 ,流式细胞仪检测有 78 69%的细胞表达人LIGHT分子。结论 成功克隆LIGHT基因并获得稳定表达膜型LIGHT分子的 2 93T细胞系。 展开更多
关键词 LIGHT 293T细胞 基因克隆 真核表达
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