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丹参酮Ⅱ-A在RAW264.7细胞系中的抗炎症作用机制 被引量：28
1
作者 唐涛 郭伟强 +2 位作者 王珏 陈明洁 何光源 《生物技术通讯》 CAS 2007年第1期51-53,共3页
目的:丹参酮Ⅱ-A是丹参的一种重要成分。研究丹参酮Ⅱ-A的抗炎症机制。方法:以小鼠腹腔巨噬细胞系RAW264.7作为药物刺激靶细胞,使用不同浓度的分析纯丹参酮Ⅱ-A对RAW264.7细胞系进行刺激,在细胞被刺激24、48h后,使用MTT比色法和半定量RT... 目的:丹参酮Ⅱ-A是丹参的一种重要成分。研究丹参酮Ⅱ-A的抗炎症机制。方法:以小鼠腹腔巨噬细胞系RAW264.7作为药物刺激靶细胞,使用不同浓度的分析纯丹参酮Ⅱ-A对RAW264.7细胞系进行刺激,在细胞被刺激24、48h后,使用MTT比色法和半定量RT-PCR法对刺激后的细胞进行检测。结果:通过MTT比色法检测,发现丹参酮Ⅱ-A抑制炎症细胞的增殖,初步计算出丹参酮Ⅱ-A的半抑制浓度(IC50)为43.2μmol/L;在半定量RT-PCR实验中发现,在发生炎症后,丹参酮Ⅱ-A通过抑制磷脂酶A2来减轻炎症。结论:在炎症发生后,丹参酮Ⅱ-A通过抑制磷脂酶A2来达到其抗炎症的作用。 展开更多
关键词 丹参酮Ⅱ-A MTT比色法 半定量rt-pcr 磷脂酶A2
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叶绿素合成关键酶基因表达的半定量RT-PCR分析 被引量：33
2
作者 姚嘉龙 郭蓓 谢皓 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期593-598,共6页
为了解叶绿素合成关键酶基因在大豆不同生育期的表达情况,本研究以拟南芥叶绿素合成关键酶基因序列设计引物,大豆科丰14和它的持绿突变体BN108为试材,利用半定量RT-PCR分析了9种叶绿素合成关键酶基因在开花期和成熟前期表达量的变化。... 为了解叶绿素合成关键酶基因在大豆不同生育期的表达情况,本研究以拟南芥叶绿素合成关键酶基因序列设计引物,大豆科丰14和它的持绿突变体BN108为试材,利用半定量RT-PCR分析了9种叶绿素合成关键酶基因在开花期和成熟前期表达量的变化。结果表明,HEMA、GSA、HEME、POR、CHLG基因在成熟前期表达量显著下降(p<0.05),尤其是HEMA和GSA基因的表达量下降幅度较大,说明上述基因在叶绿素生物合成过程中起到主要调控作用;而突变体BN108有别于科丰14,GSA、HEME、CHLM和CAO基因表达量在成熟前期不降反升,推测持绿突变体在成熟前期叶绿素能够维持较大的合成量,是植物持绿现象的重要原因之一。 展开更多
关键词 大豆 叶绿素 关键酶基因 表达 半定量PT-pcr
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小麦硫转运蛋白基因半定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：14
3
作者 陈昕 王保莉 +1 位作者 曲东 张燕 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期309-313,共5页
为进一步研究干旱胁迫下小麦硫转运蛋白基因(ST)的表达,选用小麦-αT ubu lin基因(T a)为内参照,提取小麦根系总RNA,反转录cDNA,同批异管对2个基因片段进行PCR扩增.通过对PCR体系中M g2+浓度、退火温度及循环次数的优化和对体系重复性... 为进一步研究干旱胁迫下小麦硫转运蛋白基因(ST)的表达,选用小麦-αT ubu lin基因(T a)为内参照,提取小麦根系总RNA,反转录cDNA,同批异管对2个基因片段进行PCR扩增.通过对PCR体系中M g2+浓度、退火温度及循环次数的优化和对体系重复性、准确性的分析,最终建立了一个稳定、方便的半定量RT-PCR体系.该体系可用于比较不同小麦样品间硫转运蛋白基因的表达,且因为两对引物均垮内含子,其稳定RT-PCR体系,也为实验室建立小麦mRNA反转录体系提供了参考依据. 展开更多
关键词 小麦 硫转运蛋白 半定量rt pcr Α-TUBULIN
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草菇冷诱导相关基因的克隆及序列分析 被引量：26
4
作者 孙晓红 冯爱萍 +1 位作者 陈明杰 潘迎捷 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期88-93,共6页
利用差异显示技术分离获得草菇低温特异DNA片段,经与正常草菇和低温诱导草菇cDNA分别southern杂交验证后,得到低温特异性片段。采用PCR标记技术对获得的低温特异性片段进行DIG标记,以此为探针,对低温处理的草菇cDNA文库进行筛选,获得4... 利用差异显示技术分离获得草菇低温特异DNA片段,经与正常草菇和低温诱导草菇cDNA分别southern杂交验证后,得到低温特异性片段。采用PCR标记技术对获得的低温特异性片段进行DIG标记,以此为探针,对低温处理的草菇cDNA文库进行筛选,获得4个阳性克隆,分别进行测序。序列同源性比较分析发现,Cor3基因与s-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶有很高的同源性,Cor4基因与40S核糖体蛋白S9有很高的同源性,这两个基因可能与草菇的低温自溶现象有关。Cor1基因与脉孢菌的保守假设蛋白(conservedhypotheticalprotein)有同源性,Cor2基因与辅酶A连接酶有同源性。半定量RT-PCR验证发现Cor1和Cor2基因在正常情况下没有表达,低温处理后有表达,Cor3和Cor4基因在正常情况下有表达,低温处理后表达量增加。 展开更多
关键词 低温特异性片断 低温cDNA文库 半定量rt-pcr
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半定量RT-PCR法在检测基因表达水平中的应用 被引量：13
5
作者 王荣 李红菊 《阜阳师范学院学报（自然科学版）》 2007年第1期49-52,共4页
半定量逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR法)是近年来常用的一种快速、简捷、特异的RNA检测方法,也是探讨基因转录水平的有效手段.该文就半定量RT-PCR法的检测步骤及技术的关键因素(总RNA提取、引物设计、循环数的确定和内参的选择等)进行综述.
关键词 半定量rt—pcr 检测 基因表达
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半定量RT-PCR技术的研究及应用 被引量：12
6
作者 金凤媚 薛俊 +1 位作者 郏艳红 刘仲齐 《天津农业科学》 CAS 2008年第1期10-13,共4页
介绍了半定量逆转录多聚合酶链式反应(RT-PCR)技术的原理和实验过程中潜在的问题,并且讨论了该技术在实际中的应用。
关键词 半定量rt—pcr 反应参数 应用
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半定量RT-PCR在基因表达方面的应用 被引量：16
7
作者 高海波 张拴林 陈燕红 《畜禽业》 2008年第2期34-37,共4页
RT-PCR是一种常用的具有很高灵敏度和特异性的基因表达检测方法。它有定量RT-PCR和半定量RT-PCR法。半定量RT-PCR法因其对试验条件的要求不高,费用低、普通实验室容易做到而被经常使用。本文从半定量RT-PCR的原理、技术、操作步骤及注... RT-PCR是一种常用的具有很高灵敏度和特异性的基因表达检测方法。它有定量RT-PCR和半定量RT-PCR法。半定量RT-PCR法因其对试验条件的要求不高,费用低、普通实验室容易做到而被经常使用。本文从半定量RT-PCR的原理、技术、操作步骤及注意事进行了综述。 展开更多
关键词 半定量rt-pcr 基因表达 应用
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不同日龄猪腹脂中脂肪酸合成酶(FAS)基因表达规律的研究 被引量：19
8
作者 单体中 汪以真 +2 位作者 刘建新 许梓荣 冯杰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期662-666,共5页
从猪腹脂中提取总RNA，用RT-PCR扩增脂肪酸合成酶基因（FAS），获得一条206bp的片段，以pGEM-TEasyvector为载体，将该基因片段克隆到大肠杆菌E.coli DH5α，筛选阳性克隆并测序。测序结果表明，得到的片段为FAS基因的部分序列，与GenB... 从猪腹脂中提取总RNA，用RT-PCR扩增脂肪酸合成酶基因（FAS），获得一条206bp的片段，以pGEM-TEasyvector为载体，将该基因片段克隆到大肠杆菌E.coli DH5α，筛选阳性克隆并测序。测序结果表明，得到的片段为FAS基因的部分序列，与GenBank中登录的猪FAS基因（AY183428）494～699之间序列同源性达到100％。以FAS基因片段的克隆为基础，构建了优化的半定量RT-PCR法，以18S rRNA为内标，研究从1日龄到28周龄杜长大腹脂中FAS基因表达的规律。结果显示，从1日龄到28周龄，FAS基因在腹脂mRNA水平呈逐渐升高的趋势；统计分析发现，1日龄与28周龄FAS在腹脂中mRNA水平存在显著性差异（P〈0．05）。 展开更多
关键词 猪 脂肪酸合成酶 基因克隆 腹脂 半定量rt-pcr
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水分胁迫下小麦类脱水素基因表达的半定量RT-PCR分析 被引量：16
9
作者 张晓娟 张林生 杨颖 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期2158-2162,共5页
以‘郑引1号’小麦为材料,经水分胁迫后进行RT-PCR扩增,结果在胁迫条件下获得500bp的脱水素基因(wzy1-1)。利用半定量RT-PCR方法,分析‘陕合6号’和‘郑引1号’小麦在正常供水条件下及PEG6000胁迫后18、24和42h,以及复水6和12h时wzy1-1... 以‘郑引1号’小麦为材料,经水分胁迫后进行RT-PCR扩增,结果在胁迫条件下获得500bp的脱水素基因(wzy1-1)。利用半定量RT-PCR方法,分析‘陕合6号’和‘郑引1号’小麦在正常供水条件下及PEG6000胁迫后18、24和42h,以及复水6和12h时wzy1-1在叶片中的表达。结果表明:2个小麦品种中wzy1-1在水分胁迫后18h均有表达,至胁迫24、48h时表达量较18h均有所增多;复水6h后该基因表达迅速降低,至复水后12h表达消失。且该基因在‘陕合6号’(抗旱性较强)叶片中表达量较‘郑引1号’(抗旱性较弱)高,表明该基因的表达与小麦的抗旱性密切相关。 展开更多
关键词 半定量rt-pcr 水分胁迫 基因表达 小麦
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玉米S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因家族成员在盐胁迫条件下的差异表达 被引量：19
10
作者 朱晶莹 王寒玉 +1 位作者 张晏萌 余爱丽 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期427-431,493,共6页
S-腺苷甲硫氨酸合成酶(SAMS)是植物代谢过程中的一个关键酶,催化甲基供体和化合物前体S-腺苷甲硫氨酸的合成。为研究S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因在盐胁迫条件下的响应和功能,以玉米甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因为内参基因,通过半定量RT... S-腺苷甲硫氨酸合成酶(SAMS)是植物代谢过程中的一个关键酶,催化甲基供体和化合物前体S-腺苷甲硫氨酸的合成。为研究S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因在盐胁迫条件下的响应和功能,以玉米甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因为内参基因,通过半定量RT-PCR法分析玉米SAMS基因在盐胁迫条件下的表达模式。结果表明,玉米SAMS基因家族4个成员(SAMS1、SAMS2、SAMS3和SAMS4)在正常生长(对照)和盐胁迫条件下都表达,对照根茎中的表达量大于叶中。SAMS1受盐胁迫后,茎中表达量降低,而叶中表达量略有增加,根中无明显变化。SAMS2和SAMS4受盐胁迫明显诱导,而SAMS3似乎不受盐胁迫诱导,处理植株与对照株相比均无差异。说明玉米SAMS基因家族的4个基因在表达模式上存在差异,推测在功能上存在分工的不同。 展开更多
关键词 玉米 S-腺苷甲硫氨酸合成酶(SAMS) 盐胁迫 表达分析 半定量rt-pcr
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冈比亚按蚊嗅觉结合蛋白候选基因cDNA的克隆、鉴定及其表达型分析 被引量：15
11
作者 李正西 Jing-Jiang Zhou 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期417-423,共7页
疟蚊主要依靠嗅觉发现寄主。非洲疟蚊冈比亚按蚊Anophelesgambiae是一种嗜吸人血的疟疾传播媒介昆虫。该文作者基于其全基因组序列 ,采用RT PCR和标准分子克隆技术获得 2个嗅觉结合蛋白候选基因agLZ3788和agLZ9988。测序分析结果表明 ,... 疟蚊主要依靠嗅觉发现寄主。非洲疟蚊冈比亚按蚊Anophelesgambiae是一种嗜吸人血的疟疾传播媒介昆虫。该文作者基于其全基因组序列 ,采用RT PCR和标准分子克隆技术获得 2个嗅觉结合蛋白候选基因agLZ3788和agLZ9988。测序分析结果表明 ,它们具有嗅觉结合蛋白的标志性结构域。进一步采用半定量RT PCR技术研究了它们的空间表达型 ,结果发现它们不但在雌蚊触角中表达 ,也在其他部位 (尤其是蚊虫足部 )有强的表达。这一发现说明疟蚊嗅觉结合蛋白可能具有更广的功能 。 展开更多
关键词 疟蚊 冈比亚按蚊 嗅觉结合蛋白 半定量rt-pcr 空间表达型
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投喂高脂饲料后草鱼主要生化指标和乙酰辅酶A羧化酶1 mRNA表达的变化 被引量：20
12
作者 汪开毓 苗常鸿 +5 位作者 黄锦炉 王均 连海 吴春艳 牟巧凤 付希 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期2375-2383,共9页
为了研究草鱼肝脏对高脂饲料的代谢调控机理,试验研究了连续12周投喂含8.1%脂肪的饲料对草鱼血清生化指标、肝胰脏生化指标及乙酰辅酶A羧化酶1(ACC1)mRNA表达的影响。将120尾平均体重为(15.0±2.4)g的健康草鱼随机为高脂组和基础组... 为了研究草鱼肝脏对高脂饲料的代谢调控机理,试验研究了连续12周投喂含8.1%脂肪的饲料对草鱼血清生化指标、肝胰脏生化指标及乙酰辅酶A羧化酶1(ACC1)mRNA表达的影响。将120尾平均体重为(15.0±2.4)g的健康草鱼随机为高脂组和基础组,分别投喂含8.1%脂肪的高脂饲料和4.6%脂肪的基础饲料,并在试验的第4、8、12周检测草鱼血清中甘油三酯(TG)、总胆固醇(CHO)含量及谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性以及肝胰脏中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性。在试验第12周,制作病理切片观察肝胰脏组织形态,并应用半定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测肝胰脏ACC1 mRNA的相对表达量。结果表明:试验期间,高脂组草鱼肝细胞出现损伤,并随投喂时间的延长而加重;高脂组草鱼血清中AST、ALT活性及TG、CHO含量以及肝胰脏中MDA含量均随投喂时间的延长而显著或极显著上升(P<0.05或P<0.01),而肝胰脏中SOD和CAT活性则随投喂时间的延长而显著或极显著下降(P<0.05或P<0.01)。在试验第12周,高脂组草鱼血清中AST、ALT活性及TG、CHO含量以及肝胰脏中MDA含量均显著或极显著高于基础组(P<0.05或P<0.01),而肝胰脏中SOD和CAT活性则显著或极显著低于基础组(P<0.05或P<0.01);与基础组相比,高脂组草鱼肝胰脏ACC1 mRNA相对表达量极显著升高(P<0.01)。由此得出,高脂饲料的连续投喂升高了草鱼的血脂水平,并使草鱼肝胰脏出现损伤,其作用机制可能与高脂饲料降低草鱼抗氧化能力以及促进肝脏脂肪合成有关。 展开更多
关键词 草鱼 高脂饲料 生化指标 ACC1 mRNA 半定量rt-pcr
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家蚕信息素结合蛋白BmPBP2和BmPBP3基因的初步鉴定及表达分析 被引量：15
13
作者 龚达平 赵萍 +3 位作者 林英 张辉洁 夏庆友 向仲怀 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期355-362,共8页
嗅觉对昆虫的生存、繁殖等起着重要的作用。依据家蚕Bombyxmori全基因组序列设计特异引物,扩增得到了两个信息素结合蛋白BmPBP2和BmPBP3基因的cDNA片段。结合已报道的家蚕信息素结合蛋白BmPBP1和两个普通气味结合蛋白BmGOBP的信息,对其... 嗅觉对昆虫的生存、繁殖等起着重要的作用。依据家蚕Bombyxmori全基因组序列设计特异引物,扩增得到了两个信息素结合蛋白BmPBP2和BmPBP3基因的cDNA片段。结合已报道的家蚕信息素结合蛋白BmPBP1和两个普通气味结合蛋白BmGOBP的信息,对其基因结构分析表明,这5个基因均由3个外显子组成,具有保守的外显子/内含子边界和典型的6个Cys残基,且3个PBP基因在基因组上串联分布。序列同源性分析表明,BmPBP2和BmPBP3与烟草天蛾的PBP2和PBP3的同源性高达69%和63%。半定量RT-PCR分析结果显示,BmPBP2和BmPBP3基因在成虫触角中特异表达,且雌雄表达水平相当。这些结果表明BmPBP2和BmPBP3可能起着性信息素识别的作用。 展开更多
关键词 家蚕 嗅觉 气味结合蛋白 信息素结合蛋白 半定量rt-pcr
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刺五加皂苷合成关键酶基因表达的半定量RT-PCR分析 被引量：17
14
作者 邢朝斌 龙月红 +3 位作者 吴鹏 何闪 梁能松 李宝财 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期691-696,共6页
根据已克隆的刺五加鲨烯合酶(squalene synthase,SS)、鲨烯环氧酶(squalene epoxidase,SE)和β-香树酯醇合成酶(β-amyrin synthase,bAS)基因序列信息设计引物,通过半定量RT-PCR分析了SS、SE和bAS基因在刺五加不同生长发育时期和不同器... 根据已克隆的刺五加鲨烯合酶(squalene synthase,SS)、鲨烯环氧酶(squalene epoxidase,SE)和β-香树酯醇合成酶(β-amyrin synthase,bAS)基因序列信息设计引物,通过半定量RT-PCR分析了SS、SE和bAS基因在刺五加不同生长发育时期和不同器官中表达量的变化。结果表明,SS、SE和bAS基因在各生长发育时期和各器官中均有表达,但表达量差异显著(P<0.05),三者均在盛花期表达量最高,之后降低,进入果实成熟期后SS和bAS的表达量迅速回升,SE无显著变化。SS和bAS在叶片和根中的表达量较高,SE表达量的最大值出现在叶片和幼茎中。刺五加SS、SE和bAS基因的表达间存在显著的正相关关系(P<0.05)。研究结果为进一步分析关键酶基因对刺五加三萜皂苷生物合成的影响奠定了基础。 展开更多
关键词 关键酶基因 表达 半定量rt—pcr
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牡丹开花调控转录因子基因PrSOC1的克隆与表达分析 被引量：16
15
作者 刘传娇 王顺利 +4 位作者 薛璟祺 朱富勇 任秀霞 李名扬 张秀新 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期2259-2267,共9页
以紫斑牡丹(Paeonia rockii)花芽为试验材料,采用RT-PCR的方法克隆得到1个牡丹开花调控的重要转录因子SUPPRESSOR OF OVEREXPRESSION OF CONSTANS1(SOC1)基因的同源基因PrSOC1,其c DNA开放阅读框长度为678 bp,3′非编码区为421 bp,编码... 以紫斑牡丹(Paeonia rockii)花芽为试验材料,采用RT-PCR的方法克隆得到1个牡丹开花调控的重要转录因子SUPPRESSOR OF OVEREXPRESSION OF CONSTANS1(SOC1)基因的同源基因PrSOC1,其c DNA开放阅读框长度为678 bp,3′非编码区为421 bp,编码225个氨基酸,Gen Bank登录号为KJ427808。序列比对和结构域分析表明,此蛋白包含典型的MADS-box和K-box结构域,C末端还含有一个保守性很高的基序—SOC1 MOTIF,与葡萄中的SOC1蛋白最为相似。系统进化树分析表明,PrSOC1与葡萄Vv SOC1的亲缘关系最近,属于MADS基因家族中的SOC1/TM3亚家族。半定量RT-PCR表明,PrSOC1基因在紫斑牡丹花芽中的表达量最高,根、茎、叶片中次之,种子中最少。在不同品种牡丹的花芽中,PrSOC1和其光周期途径上游的CO家族基因Ps COL4的表达量没有显著的品种间差异,推测PrSOC1具有很高的保守性,可能是参与牡丹成花的重要基因。利用原核表达系统成功表达了PrSOC1蛋白,并构建了PrSOC1的植物超表达载体,为进一步研究PrSOC1的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 牡丹 PrSOC1 半定量rt-pcr 原核表达
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牛膝多糖对断奶仔猪抗菌肽Protegrin-1 mRNA表达的影响 被引量：15
16
作者 赵玉蓉 陈清华 +3 位作者 贺建华 范志勇 周灿 刘祝英 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期80-84,共5页
本文旨在探讨牛膝多糖(ABPS)对断奶仔猪抗菌肽Protegrin-1(PG-1)mRNA表达的影响。试验采用单因子设计,按照日粮处理因素不同,设对照组、抗生素组、0.05%、0.10%和0.15%牛膝多糖组,共5个处理。选用28日龄杜长大仔猪160头,随机分入5个处理... 本文旨在探讨牛膝多糖(ABPS)对断奶仔猪抗菌肽Protegrin-1(PG-1)mRNA表达的影响。试验采用单因子设计,按照日粮处理因素不同,设对照组、抗生素组、0.05%、0.10%和0.15%牛膝多糖组,共5个处理。选用28日龄杜长大仔猪160头,随机分入5个处理,每个处理4个重复,每个重复8头猪(公母各半)。采用半定量RT-PCR法,以18SrRNA为内标,检测PG-1mRNA相对表达量。结果表明:日粮中添加牛膝多糖均不同程度地促进断奶仔猪骨髓抗菌肽PG-1mRNA的表达。与对照组相比,0.05%、0.10%和0.15%牛膝多糖组分别使断奶仔猪PG-1mRNA的相对表达量增加14.9%(P>0.05)、36.4%(P<0.05)和7.3%(P<0.05);与抗生素组相比,其PG-1mRNA的相对表达量分别增加7.8%(P>0.05)、27.9%(P>0.05)和19.4%(P>0.05)。即牛膝多糖能显著促进断奶仔猪骨髓抗菌肽PG-1mRNA表达,且日粮中以0.10%添加量为适宜。 展开更多
关键词 半定量rt-pcr 牛膝多糖 断奶仔猪 抗菌肽 Protegrin-1 基因表达
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玉米FAD2基因的克隆及序列分析(英文) 被引量：14
17
作者 陶芳 朱苏文 +1 位作者 范军 程备久 《植物生理与分子生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期649-656,共8页
高等植物中的△12脂肪酸脱饱和酶是将油酸转化为亚油酸的酶。根据已发表的其他高等植物的FAD2基因的保守序列设计同源引物,通过RT-PCR从玉米幼胚中扩增得到一个特异的cDNA基因片段。通过生物信息学分析,从玉米幼胚cDNA和基因组中均扩增... 高等植物中的△12脂肪酸脱饱和酶是将油酸转化为亚油酸的酶。根据已发表的其他高等植物的FAD2基因的保守序列设计同源引物,通过RT-PCR从玉米幼胚中扩增得到一个特异的cDNA基因片段。通过生物信息学分析,从玉米幼胚cDNA和基因组中均扩增得到1164bpFAD2基因(GenBank登陆号:DQ496227),它编码387个氨基酸,含有完整的ORF框,在ORF框内无内含子。序列联配与树状分析结果表明,FAD2推导的氨基酸序列与其他物种的?12脱饱和酶基因具有同源性。它含有3个组氨酸保守域和2段很长的疏水区,是一个跨膜4次的膜结合蛋白。半定量RT-PCR分析显示FAD2基因在玉米幼胚中表达量最高,在叶、茎、根中亦有低水平表达。 展开更多
关键词 玉米 FAD2基因 半定量rt—pcr
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甘薯NPR1基因半定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：8
18
作者 陈观水 潘大仁 +3 位作者 周以飞 林生 高丽华 杨志伟 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2007年第1期56-59,共4页
为进一步研究甘薯病原微生物的侵染对甘薯病程相关非表达子1基因(NPR1)表达的影响,以甘薯肌动蛋白(β-ac-tin)基因为内参照基因,提取甘薯叶片总RNA,反转录为cDNA,同批异管对该2个基因进行PCR扩增.通过对循环数的优化和对体系重复性、准... 为进一步研究甘薯病原微生物的侵染对甘薯病程相关非表达子1基因(NPR1)表达的影响,以甘薯肌动蛋白(β-ac-tin)基因为内参照基因,提取甘薯叶片总RNA,反转录为cDNA,同批异管对该2个基因进行PCR扩增.通过对循环数的优化和对体系重复性、准确性的分析,建立了一个稳定、方便的半定量RT-PCR体系. 展开更多
关键词 甘薯 病程相关非表达子1(NPR1) 基因表达 半定量rt-pcr
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小麦TaLSD1锌指蛋白基因的电子克隆及序列分析 被引量：14
19
作者 黄新杰 郭军 +2 位作者 屈志鹏 黄丽丽 康振生 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期2147-2152,共6页
采用电子克隆与RT-PCR相结合的技术,在条锈菌(Pucciniastriiformis f.sp.tritici)侵染的小麦中克隆了一个LSD1型锌指蛋白基因,命名为TaLSD1(GenBank登录号为EF553327)。序列分析表明,该基因全长1024bp,编码生成1个包含3个保守LSD1型锌... 采用电子克隆与RT-PCR相结合的技术,在条锈菌(Pucciniastriiformis f.sp.tritici)侵染的小麦中克隆了一个LSD1型锌指蛋白基因,命名为TaLSD1(GenBank登录号为EF553327)。序列分析表明,该基因全长1024bp,编码生成1个包含3个保守LSD1型锌指结构(CxxCxRxxLMYxxGASxVxCxxC)且长度为146个氨基酸的多肽。进化树分析表明,TaLSD1与水稻(Oryza sativa)、拟南芥(Arabidopsis thaliana)和芜菁(Brassica rapa)中部分含有3个保守LSD1型锌指结构的同源基因亲缘关系较近,而与其它包含不同数目的LSD1型锌指结构基因亲缘关系较远。推测TaLSD1在进化中丢失了部分序列,进而执行新的功能。半定量RT-PCR结果显示,该基因在亲和以及非亲和组合中的表达模式很相似,均表现在前期基因表达被抑制而后期恢复正常。初步推测TaLSD1在转录水平上的表达受光诱导,同时,作为一个细胞程序性死亡的负调控因子在小麦与条锈菌互作过程中起作用。 展开更多
关键词 条锈菌 电子克隆 进化树分析 半定量rt-pcr LSDl型锌指结构
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酪氨酸酶在不同被毛颜色羊驼皮肤组织中的表达与定位 被引量：15
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作者 姜俊兵 于秀菊 +1 位作者 贺俊平 董常生 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期2555-2560,共6页
【目的】研究酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)在不同毛色羊驼皮肤组织中的表达与定位,为揭示羊驼被毛颜色形成的机制奠定基础。【方法】采用半定量RT-PCR方法检测TYR mRNA在不同毛色羊驼皮肤组织中的相对表达量,采用免疫组织化学技术对TYR在... 【目的】研究酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)在不同毛色羊驼皮肤组织中的表达与定位,为揭示羊驼被毛颜色形成的机制奠定基础。【方法】采用半定量RT-PCR方法检测TYR mRNA在不同毛色羊驼皮肤组织中的相对表达量,采用免疫组织化学技术对TYR在羊驼皮肤中的表达进行定位。【结果】不同毛色羊驼皮肤组织中均有TYR基因mRNA的表达,有色被毛皮肤组织中TYR的基因mRNA表达量显著高于白色被毛组织的表达量;在有色被毛皮肤组织中,TYR阳性反应区主要集中于毛球部位,即毛根成形部;而白色被毛组织中,TYR阳性反应区主要位于毛根壶腹部及膨大部,即毛根永久部。【结论】综合分析TYR基因mRNA表达量及蛋白定位结果可知,TYR是成熟黑色素细胞的标记分子之一,羊驼毛色形成取决于成熟黑色素细胞在毛囊组织中的相对数量及分布部位。 展开更多
关键词 羊驼 被毛颜色 酪氨酸酶 半定量rt-pcr 免疫组织化学
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