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番木瓜环斑病毒PCR检测技术研究 被引量:23
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作者 肖火根 胡晋生 范怀忠 《中国病毒学》 CAS CSCD 2000年第4期367-372,共6页
建立了检测番木瓜环斑病毒 (PRV)的免疫捕捉 PCR (IC PCR)法、ELISA PCR法和巢式 PCR法 ,它们分别能从 10 - 4、10 - 7和 10 - 14 稀释度的番木瓜叶粗汁液 (所含鲜叶组织的量分别 0 .5ug、0 .5ng和 5× 10 - 6ng)中检测出PRV。
关键词 番木瓜环斑病毒 免疫捕捉-pcr 检测技术
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蝴蝶兰查尔酮合酶基因cDNA的克隆、鉴定及其原核表达 被引量:14
2
作者 韩颖颖 明凤 +4 位作者 王敬文 梁斌 郭滨 叶鸣明 沈大棱 《复旦学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期235-239,共5页
利用逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)得到在蝴蝶兰花瓣中特异性表达的查尔酮合酶cDNA(pchs 1) .DNA序列分析表明 ,该序列与已发表的查尔酮合酶基因有很高的同源性 .将此cDNA序列不改变阅读框架克隆到pET 2 4α(+)原核表达载体上 ,经IPT... 利用逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)得到在蝴蝶兰花瓣中特异性表达的查尔酮合酶cDNA(pchs 1) .DNA序列分析表明 ,该序列与已发表的查尔酮合酶基因有很高的同源性 .将此cDNA序列不改变阅读框架克隆到pET 2 4α(+)原核表达载体上 ,经IPTG诱导后 ,SDS PAGE的结果表明有预测大小的蛋白受诱导表达 ,该基因在植物中的功能验证工作正在进行中 . 展开更多
关键词 蝴蝶兰 查尔酮合酶 反转录pcr 表达
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用RT-PCR对mRNA进行定量分析 被引量:9
3
作者 戴建国 肖华胜 +2 位作者 张萍 陈镔复 赵文明 《第四军医大学学报》 CAS 1999年第3期242-243,共2页
编码蛋白质的mRNA通过反转录酶的作用,将mR-NA反转录成cDNA,再通过PCR扩增,DNA产物得到指数形式的增加.在一定循环数内,PCR产物的量与其模板cD-NA,也就是相应mRNA的浓度有关.PCR产物电泳后掺入溴化乙锭,可通过扫描荧光强度来... 编码蛋白质的mRNA通过反转录酶的作用,将mR-NA反转录成cDNA,再通过PCR扩增,DNA产物得到指数形式的增加.在一定循环数内,PCR产物的量与其模板cD-NA,也就是相应mRNA的浓度有关.PCR产物电泳后掺入溴化乙锭,可通过扫描荧光强度来确定PCR产物的量.通过优化实验条件,可计算出所检测的mRNA的相对含量. 展开更多
关键词 RT-pcr 溴化乙锭 MRNA 聚合酶链反应
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空气和空调器样本中SARS冠状病毒的检测 被引量:13
4
作者 杜宗敏 王效义 +9 位作者 戴二黑 刘海洪 韩延平 庞昕 翟俊辉 杨瑞馥 吴清发 李京湘 杨玲 汪建 《中国消毒学杂志》 CAS 北大核心 2005年第2期156-158,共3页
为研究SARS的传播途径,给医务人员防护提供依据。采用8级安德森空气微生物采样器对SARS病房中空气进行采样、收集空调器冷凝水和空调器滤网尘土标本,应用常规反转录套式PCR检测样本中SARS冠状病毒。结果,共检测40份样,检出阳性标本18份... 为研究SARS的传播途径,给医务人员防护提供依据。采用8级安德森空气微生物采样器对SARS病房中空气进行采样、收集空调器冷凝水和空调器滤网尘土标本,应用常规反转录套式PCR检测样本中SARS冠状病毒。结果,共检测40份样,检出阳性标本18份,阳性率为45%;其中空气标本36份,阳性15份,2份空调滤网尘土标本均为阳性,2份空调冷凝水标本检出1份阳性。随机挑选PCR阳性标本2份进行病毒分离试验,2份均为阳性。结果显示,检测SARS病房空气标本以及空调器冷凝水和空调器滤网尘土标本,均获得较高的SARS冠状病毒阳性率并分离到存活病毒。表明环境空气中存在活的SARS冠状病毒,推测SARS确有可能通过空气飞沫传播,本结果可供SARS病房的医护人员采取防护措施参考。 展开更多
关键词 安德森采样器 反转录套式pcr 重症呼吸综合症 冠状病毒
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p16、p21基因表达缺失在原发性肝癌中的临床意义 被引量:8
5
作者 李锡锋 施乐华 +1 位作者 龚仁彦 王葵 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2008年第9期677-680,共4页
背景与目的:P16,P21蛋白是调控细胞周期的抑制蛋白,在调节细胞增殖中起非常重要的作用,其基因缺失,失活与多种肿瘤的发生,发展有关,本研究观察原发性肝癌中P16、P21蛋白表达及其基因缺失情况,探讨p16、p21基因表达缺失的临床意义。方法... 背景与目的:P16,P21蛋白是调控细胞周期的抑制蛋白,在调节细胞增殖中起非常重要的作用,其基因缺失,失活与多种肿瘤的发生,发展有关,本研究观察原发性肝癌中P16、P21蛋白表达及其基因缺失情况,探讨p16、p21基因表达缺失的临床意义。方法:采用回顾性分析方法,收集原发性肝癌42例,正常肝组织(距离癌组织≥2cm)36例,应用Western印迹试验、逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测肝癌和正常肝组织中P16、P21蛋白的表达和相应mRNA扩增情况。结果:在癌组织中,P16蛋白缺失率为24例(24/42,57.1%),正常肝组织中P16蛋白缺失率为13.9%(5/36);而相应组织中P21蛋白缺失率分别为45.2%(19/42)和19.4%(7/36)。两者在癌和正常肝组织中缺失差异均有显著性(P<0.05)。14例癌组织(38.9%,14/36)仅p16mRNA转录而未表达蛋白。P16、P21蛋白的低表达与肝癌大小、分化程度关系密切(P<0.05),而与是否有包膜、是否肝硬化等无关。结论:P16、P21蛋白的表达缺失与肝癌发生发展密切相关,两者可作为判断肝癌恶性程度的参考指标。 展开更多
关键词 P16基因 P21基因 肝细胞癌 免疫印迹试验 逆转录聚合酶链反应
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蛋氨酸裂解酶的基因克隆及序列分析 被引量:10
6
作者 马百坤 唐晓莹 +1 位作者 黄惠臣 时永辉 《医学研究生学报》 CAS 2006年第12期1063-1066,共4页
目的:克隆蛋氨酸裂解酶(METase)中阴道毛滴虫蛋氨酸裂解酶(TVMGL1)基因,探讨重组METase(rMETase)对肿瘤细胞生长的抑制作用。方法:从培养的阴道毛滴虫提取总RNA,以此为模板,利用RT-PCR获取TVMGL1基因,琼脂糖电泳分离纯化所得目的基因并... 目的:克隆蛋氨酸裂解酶(METase)中阴道毛滴虫蛋氨酸裂解酶(TVMGL1)基因,探讨重组METase(rMETase)对肿瘤细胞生长的抑制作用。方法:从培养的阴道毛滴虫提取总RNA,以此为模板,利用RT-PCR获取TVMGL1基因,琼脂糖电泳分离纯化所得目的基因并克隆至T-Vector,AB I 3730自动序列分析仪分析所得基因序列。结果:PCR产物经琼脂糖电泳,目的基因片段大小与预期大小相符;序列分析所得基因序列为1 191 bp,与国外报导的序列相符。结论:从培养的阴道毛滴虫中成功克隆出TVMGLV1基因,为METase抗肿瘤作用的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 蛋氨酸裂解酶 基因克隆 反转录pcr
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油茶总RNA的提取与内参基因的初选 被引量:9
7
作者 宋志波 刘敏 +5 位作者 贾宝光 田雷 曾艳玲 周俊琴 谭晓风 张琳 《经济林研究》 北大核心 2014年第2期93-98,共6页
为得到高质量的油茶总RNA及稳定的内参基因,以油茶良种‘华硕’为试验材料,采用ambion试剂盒结合CTAB法进行总RNA提取。获得的总RNA完整性好,纯度高;从前期构建的油茶转录组数据中选取ACT(肌动蛋白基因)等14个基因作为候选内参基因,共设... 为得到高质量的油茶总RNA及稳定的内参基因,以油茶良种‘华硕’为试验材料,采用ambion试剂盒结合CTAB法进行总RNA提取。获得的总RNA完整性好,纯度高;从前期构建的油茶转录组数据中选取ACT(肌动蛋白基因)等14个基因作为候选内参基因,共设计22对引物,通过RT-PCR反应体系的优化及琼脂糖凝胶电泳检测,快速筛选出了适合油茶不同组织(器官)的内参基因。ALB(清蛋白基因),EF1α(延伸因子基因),ETIF3H(启动因子基因),UBC2(泛素结合酶基因)可以作为油茶果实初选内参基因,EF1α可以作为油茶根、茎、花及果实内参基因,ETIF3H可以作为油茶根、茎、叶、花瓣的内参基因。 展开更多
关键词 油茶 RNA提取 内参基因 逆转录pcr
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人食管鳞癌中血管内皮生长因子C mRNA的表达及其临床意义 被引量:7
8
作者 张红新 张岚 +4 位作者 贺付成 宋一民 高冬玲 陈奎生 张云汉 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第24期3697-3700,共4页
目的检测食管鳞癌组织中血管内皮生长因子C(VEGF-C)在mRNA水平的表达并探讨其与淋巴结癌转移的关系。方法采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)法和原位杂交(ISH)技术,检测VEGF-CmRNA在49例人食管鳞癌手术标本中的表达及定位特征。结果在4... 目的检测食管鳞癌组织中血管内皮生长因子C(VEGF-C)在mRNA水平的表达并探讨其与淋巴结癌转移的关系。方法采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)法和原位杂交(ISH)技术,检测VEGF-CmRNA在49例人食管鳞癌手术标本中的表达及定位特征。结果在49例食管鳞癌组织中,VEGF-CISH阳性表达者23例,阳性紫蓝色颗粒主要定位于肿瘤细胞胞质内,其表达在发生淋巴结转移组中明显高于无淋巴结转移组,差异有统计学意义(χ2=31.3,P<0.01)。29例食管鳞癌组织中出现RT-PCR阳性结果,其表达与淋巴结转移密切相关(χ2=23.3,P<0.01),在淋巴结转移组中的表达明显高于无转移组。VEGF-CmRNA的表达与患者年龄、性别和病理学分级无关(P>0.05),差异均无统计学意义。结论VEGF-CmRNA在食管鳞癌中呈选择性的表达,并与食管鳞癌的淋巴结转移密切相关。 展开更多
关键词 食管鳞状细胞癌 血管内皮生长因子C 原位杂交 逆转录pcr 淋巴道转移
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RT-PCR分析肉芽组织生长过程中VEGF及β3整合素mRNA的表达 被引量:6
9
作者 张聚良 王岭 +2 位作者 晋援朝 黄庆生 金卫林 《第四军医大学学报》 北大核心 2001年第2期145-147,共3页
目的 观察血管内皮生长因子 (vascular endothelialgrowth factor,VEGF)及 β3整合素 m RNA在肉芽组织血管生成中表达的动态变化 .方法 采用 RT- PCR法定量分析人正常皮下组织、增殖期肉芽组织 (伤后 7~ 12 d)及成熟期肉芽组织 (伤后... 目的 观察血管内皮生长因子 (vascular endothelialgrowth factor,VEGF)及 β3整合素 m RNA在肉芽组织血管生成中表达的动态变化 .方法 采用 RT- PCR法定量分析人正常皮下组织、增殖期肉芽组织 (伤后 7~ 12 d)及成熟期肉芽组织 (伤后 30~ 35 d) VEGF及β3整合素 m RNA的水平 .结果 在正常皮下组织中 ,VEGF及β3整合素 m RNA呈低表达 ,而在增殖期肉芽组织中表达升高 ,待肉芽组织完全成熟后二者的表达又有所降低 .结论  VEGF及β3整合素 m RNA的水平与肉芽组织的血管生长过程呈动态相关 。 展开更多
关键词 逆转录-pcr 新生血管化 内皮生长因子 MRNA 内素组织生长
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沙鼠感染幽门螺杆菌后胃粘膜INF-γ、IL-4及IL-12p40表达水平的分析 被引量:5
10
作者 刘开云 郭刚 +1 位作者 解庆华 邹全明 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第13期1320-1322,共3页
目的通过比较幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)感染蒙古沙鼠前后胃粘膜INF-γ、IL-4及IL-12p40mRNA水平的变化,确定Hp感染在蒙古沙鼠胃粘膜诱发的免疫应答方式。方法采用临床分离的Hp强毒株对蒙古沙鼠进行感染,4周后剖杀。取胃粘膜组... 目的通过比较幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)感染蒙古沙鼠前后胃粘膜INF-γ、IL-4及IL-12p40mRNA水平的变化,确定Hp感染在蒙古沙鼠胃粘膜诱发的免疫应答方式。方法采用临床分离的Hp强毒株对蒙古沙鼠进行感染,4周后剖杀。取胃粘膜组织作半定量RT-PCR检测INF-γ、IL-4及IL-12p40mRNA。结果与对照组相比,沙鼠感染Hp后,胃粘膜INF-γmRNA水平显著增加(P<0·05),IL-4mRNA水平显著降低(P<0·05),IL-12p40mRNA水平变化不显著(P>0·05)。结论Hp感染沙鼠诱导Th1型免疫应答,同时抑制Th2免疫应答,而对单核巨噬细胞的活化作用不明显。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 免疫应答 RT-pcr 蒙古沙鼠
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膀胱癌组织中上皮细胞钙依粘连蛋白基因启动子区CpG岛甲基化状态的分析 被引量:6
11
作者 赵敏 李智 +2 位作者 于永春 段建敏 李晶华 《检验医学》 CAS 北大核心 2005年第1期55-58,共4页
  目的 探讨膀胱癌中肿瘤抑制基因上皮细胞钙依粘连蛋白(E cadherin)启动子区CpG岛的甲基化状 态及其与mRNA表达的关系。方法 收集30例新鲜的膀胱癌组织及其癌周正常组织;采用甲基化特异聚合酶 链反应(MSP)检测E cadherin基因启...   目的 探讨膀胱癌中肿瘤抑制基因上皮细胞钙依粘连蛋白(E cadherin)启动子区CpG岛的甲基化状 态及其与mRNA表达的关系。方法 收集30例新鲜的膀胱癌组织及其癌周正常组织;采用甲基化特异聚合酶 链反应(MSP)检测E cadherin基因启动子区CpG岛的甲基化状态;采用逆转录PCR检测E cadherin基因的mR NA表达。结果 E cadherin基因在膀胱癌组织中的甲基化阳性率(43.3%)显著高于在癌周正常组织中的甲基 化阳性率(6.7%,P<0.01);在复发性膀胱癌中的甲基化阳性率(64.7%)显著高于在原发性膀胱癌中的甲基化 阳性率(15.4%,P<0.05);在不同分级、分期膀胱癌中的差异无显著性。13例异常甲基化的膀胱癌组织中有10 例未检测到CDH1mRNA的表达,而13例未甲基化膀胱癌组织中有2例未检测到,二者差异有显著性(P< 0.01)。结论 E cadherin在膀胱癌组织中有一定程度的过甲基化,但与膀胱癌的临床分期和病理分级无显著相 关性,提示其可能参与了膀胱癌的发生;E cadherin基因CpG岛的过甲基化可能成为判断膀胱癌复发的指标之 一;E cadherin基因CpG岛的过甲基化可能是造成E cadherinmRNA不表达的原因之一。 展开更多
关键词 膀胱癌组织 E-CADHERIN基因 甲基化 CPG岛 上皮细胞 正常组织 基因启动子区 粘连蛋白 RNA 表达
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中华豆芫菁β-actin基因cDNA的克隆、序列分析及表达量检测 被引量:5
12
作者 霍棠 姜鸣 +1 位作者 吕淑敏 张雅林 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2012年第11期97-102,111,共7页
【目的】克隆中华豆芫菁(Epicauta chinensis Laporte)β-actin基因全长cDNA序列,并检测其在相对实时定量研究中作为内参基因的可靠性。【方法】采用RT-PCR和RACE技术扩增中华豆芫菁β-actin基因全长cD-NA序列,利用生物信息学软件对其... 【目的】克隆中华豆芫菁(Epicauta chinensis Laporte)β-actin基因全长cDNA序列,并检测其在相对实时定量研究中作为内参基因的可靠性。【方法】采用RT-PCR和RACE技术扩增中华豆芫菁β-actin基因全长cD-NA序列,利用生物信息学软件对其进行序列分析;并用实时定量PCR方法检测在中华豆芫菁雄性成虫脑、中肠、精巢和脂肪体4种不同组织中及注射刺激和非刺激条件下β-actin基因的表达量。【结果】中华豆芫菁β-actin基因全长1 673bp,其中5′非编码区88bp,3′非编码区455bp,开放阅读框为1 120bp,编码376个氨基酸,推测其编码蛋白分子质量约为93.6ku,理论等电点为5.09,富含6类特定功能位点,其氨基酸序列与其他昆虫的β-actin序列一致性可达97%~99%;实时定量PCR结果显示,该基因在中华豆芫菁不同组织、注射刺激与非刺激情况下表达量无显著差异(P>0.05)。【结论】中华豆芫菁β-actin基因可作为基因表达定量研究中的可靠内参。该基因的cDNA序列已递交GenBank,获得登录号为JQ764814。 展开更多
关键词 中华豆芫菁 Β-ACTIN基因 反转录pcr RACE技术 实时定量pcr
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玉米mRNA差异显示与杂种优势关系的研究 被引量:6
13
作者 姜涛 王丕武 张君 《玉米科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期41-45,共5页
以玉米抽穗前期幼叶作为材料,应用mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)分析亲本与杂交种之间杂种优势表现,从基因差异表达方面来探讨玉米杂种优势的机理。结果表明,杂交种和亲本之间存在明显的基因差异表达,差异表达模式可分为单亲表达一致型、... 以玉米抽穗前期幼叶作为材料,应用mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)分析亲本与杂交种之间杂种优势表现,从基因差异表达方面来探讨玉米杂种优势的机理。结果表明,杂交种和亲本之间存在明显的基因差异表达,差异表达模式可分为单亲表达一致型、双亲共沉默型、单亲表达沉默型和杂种特异表达类型4种。对12个性状进行相关分析,结果表明,在72个相关系数中有10个相关显著。对于4种不同差异表达模式和12个性状的中亲优势(MPH)进行相关分析,在72个相关系数中仅有2个达到显著或极显著水平。对于4种不同差异表达模式和12个性状的超亲优势(BPH)进行相关分析,在72个相关系数中有4个达到显著或极显著水平。 展开更多
关键词 玉米 反转录pcr技术 杂种优势
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基于蔬菜核酸检测实验的探究性实验教学设计
14
作者 刘金钏 严慧玲 +1 位作者 郭新波 向楠 《实验室科学》 2024年第1期58-61,65,共5页
以蔬菜中维生素C积累相关基因的检测为例,探索将操作难度相对较高的RNA相关的核酸检测实验应用于本科实验教学中。实践结果表明,学生们可顺利掌握蔬菜中核糖核酸(RNA)的提取、反转录合成互补DNA(cDNA)、PCR扩增检验目的基因表达等RNA相... 以蔬菜中维生素C积累相关基因的检测为例,探索将操作难度相对较高的RNA相关的核酸检测实验应用于本科实验教学中。实践结果表明,学生们可顺利掌握蔬菜中核糖核酸(RNA)的提取、反转录合成互补DNA(cDNA)、PCR扩增检验目的基因表达等RNA相关的实验操作技能,达到了预期的教学目标。本实验项目的实施促进了学生们对多门学科知识的融会贯通,有助于其提高发现问题和解决问题的能力并形成探索精神和创新思维。这对培养具有创新创业实践能力的复合型人才具有重要的作用。 展开更多
关键词 实验教学 RNA提取 反转录pcr 核酸检测
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三氯乙烯药疹样皮炎患者外周血淋巴细胞趋化因子受体基因表达 被引量:4
15
作者 李森华 付艳艳 +5 位作者 黄汉林 彭瑾瑜 朱彦博 吴丁兰 杨爱初 常弘 《中国职业医学》 CAS 北大核心 2008年第3期200-202,共3页
目的探讨三氯乙烯药疹样皮炎(DMLT)患者外周血淋巴细胞内趋化因子受体(CXCR2)基因的表达水平,同时研究外周静脉血代替皮肤组织作为研究样本的可行性。方法取DMLT患者的新鲜抗凝外周静脉血,用淋巴细胞分离液分离得到淋巴细胞,加TRIzol用... 目的探讨三氯乙烯药疹样皮炎(DMLT)患者外周血淋巴细胞内趋化因子受体(CXCR2)基因的表达水平,同时研究外周静脉血代替皮肤组织作为研究样本的可行性。方法取DMLT患者的新鲜抗凝外周静脉血,用淋巴细胞分离液分离得到淋巴细胞,加TRIzol用氯仿、异戊醇抽提得到RNA,反转录为cDNA,通过聚合酶链反应扩增目的基因,电泳后以吸光度法检测25例DMLT患者、30例三氯乙烯接触者和30例正常人血液中CXCR2的表达水平。结果以β-actin作为内参照,病例组中,25例DMLT患者CXCR2表达水平明显高于对照组,分别为0.670±0.472、0.267±0.157(P<0.02)。结论CXCR2在DMLT患者体内表达水平显著上调,推测该基因在DMLT发病过程中的某些相关环节起了作用,趋化炎症细胞到炎症发生区域发生反应。 展开更多
关键词 三氯乙烯 药疹样皮炎 趋化因子受体基因 反转录聚合酶链反应 表达水平
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NDGA诱导人胶质瘤细胞株分化过程中基因组甲基化及甲基转移酶的变化及意义 被引量:4
16
作者 卢佳友 卞修武 +2 位作者 赵雯 徐承平 蒋雪峰 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期283-286,共4页
目的 了解去甲二氢愈创木酸 (Nordihydroguaiareticacid ,NDGA)处理前后两种人胶质瘤细胞系CHG 5、SHG 4 4甲基转移酶 (DNAmethyltransferase ,DNMT)活性、DNMTmRNA表达和基因组甲基化程度的改变。方法 以NDGA处理人恶性胶质瘤细胞系C... 目的 了解去甲二氢愈创木酸 (Nordihydroguaiareticacid ,NDGA)处理前后两种人胶质瘤细胞系CHG 5、SHG 4 4甲基转移酶 (DNAmethyltransferase ,DNMT)活性、DNMTmRNA表达和基因组甲基化程度的改变。方法 以NDGA处理人恶性胶质瘤细胞系CHG 5及SHG 4 4,观察两种细胞增殖和分化状态 ;采用同位素微量示踪法测定甲基转移酶活性和基因组DNA甲基化程度 ;应用RT PCR法测定DNMTmRNA表达水平。结果 NDGA处理后两种细胞增殖速度明显减缓 ,分化水平升高 ;DNMT活性显著降低、基因组甲基化程度明显升高 ;而DNMTmRNA改变不明显。结论 NDGA能抑制甲基转移酶的活性 ,升高基因组甲基化水平 ,这些作用可能与其诱导恶性胶质细胞瘤分化的机制有关。 展开更多
关键词 胶质瘤 去甲二氢愈创木酸 NDGA 甲基化 细胞增殖 CHC-5 SHC-44 甲基转移酶
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实时定量RT-PCR检测博尔纳病病毒方法的建立 被引量:2
17
作者 钱钧 包丽丽 +6 位作者 贾丽娜 李小光 佟雷 宋武琦 翟爱霞 李玉军 张凤民 《哈尔滨医科大学学报》 CAS 北大核心 2007年第4期293-295,共3页
目的建立检测博尔纳病病毒(BDV)RNA的实时定量RT-PCR(real-time RT-PCR)方法。方法设计BDV-p40基因特异性引物和探针,优化反应条件;并以已知的BDV-p40基因扩增产物的克隆为标准品,建立标准曲线;然后对已知BDV RNA进行实时定量RT-PCR的... 目的建立检测博尔纳病病毒(BDV)RNA的实时定量RT-PCR(real-time RT-PCR)方法。方法设计BDV-p40基因特异性引物和探针,优化反应条件;并以已知的BDV-p40基因扩增产物的克隆为标准品,建立标准曲线;然后对已知BDV RNA进行实时定量RT-PCR的特异性和敏感性检测。结果建立了特异检测BDV RNA的实时定量RT-PCR技术,并且可以检测到感染细胞中1个拷贝以上BDV RNA。结论本技术可以直接用于BDV感染的检测和定量分析。 展开更多
关键词 博尔纳病病毒 逆转录聚合酶链反应 实时pcr
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大鼠肝再生增强因子的基因克隆 被引量:4
18
作者 黄志刚 刘殿武 +2 位作者 张辉 杨维青 刘树贤 《河北医科大学学报》 CAS 2001年第6期325-327,I002,共4页
目的克隆大鼠肝再生增强因子基因编码序列 ,并在原核细胞表达。方法按文献报道大鼠肝再生增强因子核苷酸序列合成引物 ,从 2周龄大鼠肝组织提取RNA ,利用RT PCR扩增大鼠肝再生增强因子基因编码区 ;将PCR扩增片段亚克隆到pBV2 2 1质粒 ,... 目的克隆大鼠肝再生增强因子基因编码序列 ,并在原核细胞表达。方法按文献报道大鼠肝再生增强因子核苷酸序列合成引物 ,从 2周龄大鼠肝组织提取RNA ,利用RT PCR扩增大鼠肝再生增强因子基因编码区 ;将PCR扩增片段亚克隆到pBV2 2 1质粒 ,构建原核表达重组载体 ,导入到大肠杆菌后热诱导表达目的蛋白。结果从大鼠肝脏的RNA中扩增到长约 4 0 0bp的肝再生增强因子cDNA编码区基因 ,序列分析表明与文献报道一致 ;重组克隆经热诱导表达出分子量约 15kD大小的蛋白质 ,与预期值一致。结论从 2周龄大鼠肝组织中成功克隆肝再生增强因子基因 ,并获得了原核细胞高效表达。 展开更多
关键词 肝再生增强因子 克隆细胞 RT-pcr 大鼠 基因克隆
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逆转录PCR及原位杂交检测人IgA肾病肾脏中TGF-β mRNA 被引量:4
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作者 王子慧 于鼎 王瑞绵 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 1998年第4期43-47,共5页
为研究转化生长因子-β(TGF-β)在IgA肾病病理机制中的作用,本文用逆转录PCR(RT-PCR)法及原位杂交法检测IgA肾病患者肾活检组织中的TGF-βmRNA。结果证实:在人正常肾和IgA肾病肾组织中均可检测到... 为研究转化生长因子-β(TGF-β)在IgA肾病病理机制中的作用,本文用逆转录PCR(RT-PCR)法及原位杂交法检测IgA肾病患者肾活检组织中的TGF-βmRNA。结果证实:在人正常肾和IgA肾病肾组织中均可检测到TGF-βmRNA的RT-PCR扩增产物;TGF-βmRNA原位杂交的阳性信号主要分布于肾小管和集合管上皮细胞内,肾小球内的阳性信号较弱,且强度与系膜的增生程度有关。 展开更多
关键词 TGF-Β 逆转录pcr 原位杂交 IGA肾病
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FD耐热逆转录酶的部分酶学性质研究 被引量:4
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作者 郑佐华 周宗祥 +3 位作者 朱蔚 殷长传 季朝能 毛裕民 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1998年第2期170-174,共5页
FD耐热逆转录酶(FD-TRT)来自一株栖热杆菌菌株.通过RT-PCR方法,论文对FD-TRT的部分酶学性质进行了研究.FD耐热逆转录酶能耐受95℃的高温,最适反应温度在65~75℃左右,这时RNA的高级结构能解开,... FD耐热逆转录酶(FD-TRT)来自一株栖热杆菌菌株.通过RT-PCR方法,论文对FD-TRT的部分酶学性质进行了研究.FD耐热逆转录酶能耐受95℃的高温,最适反应温度在65~75℃左右,这时RNA的高级结构能解开,可以提高逆转录反应的效率;同时引物和RNA模板识别的专一性强,可大大提高逆转录的特异性.实验表明FD-TRT逆转录反应的最适条件为:25mmol/LTris-HCl(pH8.8,15mmol/L(NH4)2SO4,100μg/ml明胶,500μmol/LdNTPs,25pmol逆转录引物,1mmol/LMnCl2,2UFD耐热逆转录酶,反应在65~70℃下进行.在上述条件下,用RT-PCR可检出少于5pg外周血总RNA中特异的α珠蛋白mRNA. 展开更多
关键词 逆转录酶 耐热 逆转录 pcr
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