PCR扩增溶血素(suilysin,SLY)基因,克隆后测序,利用原核表达载体pET-28a及表达宿主菌E.coli BL21(DE3)构建SLY原核表达系统,采用SDS-PAGE检测蛋白表达情况,借助Ni-NTA亲和层析法纯化蛋白,获得具有序列保守且可溶性的SLY蛋白。显微镜形...PCR扩增溶血素(suilysin,SLY)基因,克隆后测序,利用原核表达载体pET-28a及表达宿主菌E.coli BL21(DE3)构建SLY原核表达系统,采用SDS-PAGE检测蛋白表达情况,借助Ni-NTA亲和层析法纯化蛋白,获得具有序列保守且可溶性的SLY蛋白。显微镜形态学观察显示,质量浓度为0.4 mg/L的SLY在37℃条件下作用2 h可使贴壁hCMEC/D3(人脑微血管内皮细胞)全部死亡。通过分光光度法测定SLY对人红细胞的溶血活性,结果显示1μg SLY可使2.25×10^(10)个人红细胞完全溶解。Real-time RT-PCR结果显示,SLY处理所致破碎的红细胞上清可使hCMEC/D3细胞炎性因子IL-6和IL-8转录水平分别升高80倍和100倍以上,且该作用效果显著高于超声破碎红细胞的方式。结果表明,SLY具有显著的细胞毒性,其导致红细胞溶血可能是猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)引起机体炎症反应的原动力。展开更多
文摘PCR扩增溶血素(suilysin,SLY)基因,克隆后测序,利用原核表达载体pET-28a及表达宿主菌E.coli BL21(DE3)构建SLY原核表达系统,采用SDS-PAGE检测蛋白表达情况,借助Ni-NTA亲和层析法纯化蛋白,获得具有序列保守且可溶性的SLY蛋白。显微镜形态学观察显示,质量浓度为0.4 mg/L的SLY在37℃条件下作用2 h可使贴壁hCMEC/D3(人脑微血管内皮细胞)全部死亡。通过分光光度法测定SLY对人红细胞的溶血活性,结果显示1μg SLY可使2.25×10^(10)个人红细胞完全溶解。Real-time RT-PCR结果显示,SLY处理所致破碎的红细胞上清可使hCMEC/D3细胞炎性因子IL-6和IL-8转录水平分别升高80倍和100倍以上,且该作用效果显著高于超声破碎红细胞的方式。结果表明,SLY具有显著的细胞毒性,其导致红细胞溶血可能是猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)引起机体炎症反应的原动力。
文摘目的分析血清铁蛋白(serum ferritin,SF)、红细胞分布宽度(redblood cell distribution width,RDW)和红细胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate,ESR)在食管癌诊断及预后中的价值。方法收集四川省林业中心医院收治的食管癌患者140例,反流性食管炎患者92例,同期收集健康人群140例。采用血液分析仪检测外周全血RDW,采用化学发光法检测血清SF水平,采用魏氏法检测ESR值。结果与反流性食管炎(SF:168.7±16.8μg/L;RDW:13.4±2.3%;ESR:15.3±2.6mm/h)和健康对照(SF:160.3±15.5μg/L;RDW:12.7±2.1%;ESR:15.6±2.8mm/h)相比,SF、RDW和ESR水平在食管癌(SF:321.5±37.1μg/L;RDW:22.5±3.0%;ESR:27.5±7.8mm/h)患者中均显著升高(P<0.05)。Spearman相关性分析显示,SF、RDW和ESR水平与TNM分期(SF:r=0.327,P<0.001;RDW:r=0.264,P=0.002;ESR:r=0.283,P=0.001)均呈线性关联,且三者的水平在Ⅲ~Ⅳ期患者中最高,但SF、RDW和ESR水平与组织学类型均无显著相关性(SF:r=0.012,P=0.884;RDW:r=-0.119,P=0.160;ESR:r=-0.018,P=0.834)。ROC结果显示,联合SF、RDW和ESR在鉴别食管癌与反流性食管炎和健康对照的曲线下面积(area under ROC curve,AUC)为0.923(95%CI:0.893~0.974,P<0.001),灵敏度为92.3%,特异性为83.4%。生存分析显示,相比低SF组和低RDW组,高SF组(χ^2=15.366,P<0.001)和高RDW组(χ^2=6.012,P=0.014)生存率显著降低,而低ESR组和高ESR组间生存率差异无统计学意义(χ^2=1.695,P=0.193)。结论联合SF、RDW和ESR对食管癌的诊断及发病风险评估具有价值,且SF和RDW在食管癌预后评价中有重要意义。
