天然水蛭素对实验性肝纤维化大鼠肝脏结缔组织生长因子mRNA表达的影响 被引量：23

1

作者 贾彦 牛英才 +2 位作者 张英博 周丽 董妙先 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期95-97,共3页

目的观察水蛭素对肝纤维化大鼠肝脏组织结缔组织生长因子(Connective tissue growth factor,CTGF)mRNA表达的影响。方法SD大鼠60只随机分为空白对照组、模型组和水蛭素组共3组,每组20只,用40%四氯化碳(carbon tetra-chloride,CC l4)复... 目的观察水蛭素对肝纤维化大鼠肝脏组织结缔组织生长因子(Connective tissue growth factor,CTGF)mRNA表达的影响。方法SD大鼠60只随机分为空白对照组、模型组和水蛭素组共3组,每组20只,用40%四氯化碳(carbon tetra-chloride,CC l4)复制大鼠肝纤维化模型,水蛭素干预12周后处死大鼠,采用实时荧光定量PCR法检测大鼠肝组织CTGFmRNA的表达。结果模型组CTGF mRNA 2-ΔΔC t值(3.59±0.52)显著高于正常对照组(1.02±0.23)(P<0.05),表明模型组CTGF mRNA表达上调。与模型组比较,水蛭素组CTGF mRNA 2-ΔΔC t值(1.83±0.34)显著降低(P<0.05),表明CTGF mRNA表达下调。结论水蛭素可能通过下调CTGF mRNA的表达,抑制肝脏细胞外基质异常增生发挥抗肝纤维化作用。 展开更多

关键词 水蛭素 肝纤维化 结缔组织生长因子 实时荧光定量pcr

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加减地黄饮子对老年性痴呆模型大鼠Bax和Bcl-2 mRNA表达的影响 被引量：8

2

作者 牛英才 董妙先 +1 位作者 周丽 谢宁 《上海中医药杂志》 北大核心 2007年第10期72-74,共3页

目的观察β-淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)大鼠海马双侧注射后大脑组织Bax和Bcl-2 mRNA表达的变化及加减地黄饮子的干预作用。方法采用大鼠海马立体定向注射凝聚态Aβ1-40诱导老年性痴呆(Alzheimer’s disease,AD)动物模型。采用实时荧光定量... 目的观察β-淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)大鼠海马双侧注射后大脑组织Bax和Bcl-2 mRNA表达的变化及加减地黄饮子的干预作用。方法采用大鼠海马立体定向注射凝聚态Aβ1-40诱导老年性痴呆(Alzheimer’s disease,AD)动物模型。采用实时荧光定量PCR法检测大鼠大脑组织Bcl-2和Bax mRNA的表达。结果与假手术组比较,模型组Bax2-ΔΔCt显著升高,而Bcl-22-ΔΔCt显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,盐酸多奈哌齐组、加减地黄饮子组Bax2-ΔΔCt显著降低(P<0.05),而加减地黄饮子组Bcl-22-ΔΔCt显著升高(P<0.05)。结论海马注射Aβ1-40可诱导大鼠脑组织BaxmRNA表达上调和Bcl-2表达下调,而加减地黄饮子可通过抑制海马组织BaxmRNA的表达和促进Bcl-2mRNA表达,进而起到减少神经细胞凋亡的作用。 展开更多

关键词 加减地黄饮子 老年性痴呆 细胞凋亡 实时荧光定量pcr

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低分子姬松茸多糖对荷瘤小鼠肿瘤组织CD44 mRNA表达的影响 被引量：8

3

作者 牛英才 赵学梅 +2 位作者 张春 周丽 刘吉成 《辽宁中医杂志》 CAS 北大核心 2008年第10期1482-1484,共3页

目的:观察低分子姬松茸多糖(Low Molecular Weight Polysaccharide Isolated from Agaricus blazei Murill,LM-PAB)对荷瘤小鼠肿瘤组织中CD44 mRNA表达的影响。方法:BALB/c小鼠右侧腋窝皮下接种S180肉瘤,腹腔注射50、100和200 mg/(kg.d)... 目的:观察低分子姬松茸多糖(Low Molecular Weight Polysaccharide Isolated from Agaricus blazei Murill,LM-PAB)对荷瘤小鼠肿瘤组织中CD44 mRNA表达的影响。方法:BALB/c小鼠右侧腋窝皮下接种S180肉瘤,腹腔注射50、100和200 mg/(kg.d)LMPAB,连续7天。给药结束后24h取肿瘤组织,实时定量RT-PCR法检测肿瘤组织CD44 mR-NA表达水平。结果:与模型对照组比较,LMPAB各剂量组50、100和200mg/(kg.d))CD44 mRNAΔCt显著升高(P<0.01),表明CD44 mRNA表达下调,并呈剂量依赖性。结论:LMPAB可能通过降低CD44 mRNA的表达,抑制了流动的肿瘤细胞与内皮细胞的黏附,从而减少肿瘤转移。 展开更多

关键词 CD44 姬松茸 多糖 实时定量pcr 黏附

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二苯乙烯苷对SAMP8小鼠APP mRNA和PS1 mRNA表达的影响 被引量：7

4

作者 刘玲 朱晓莹 +2 位作者 黎昀 赖术 黄忠仕 《中国实验方剂学杂志》 CAS 北大核心 2013年第1期240-243,共4页

目的:探讨灌胃给二苯乙烯苷(TSG)后SAMP8小鼠β淀粉样蛋白前体(APP)mRNA和早老蛋白-1(PS1)mRNA表达的变化。方法:6月龄快速老化模型小鼠SAMP8 50只,随机均分为SAMP8空白组,阳性药石杉碱甲对照组,高、中、低剂量TSG组(0.3,0.1,0.033 g
... 目的:探讨灌胃给二苯乙烯苷(TSG)后SAMP8小鼠β淀粉样蛋白前体(APP)mRNA和早老蛋白-1(PS1)mRNA表达的变化。方法:6月龄快速老化模型小鼠SAMP8 50只,随机均分为SAMP8空白组,阳性药石杉碱甲对照组,高、中、低剂量TSG组(0.3,0.1,0.033 g·kg-1·d-1)共6组;6月龄正常老化小鼠SAMR1鼠10只为正常对照组。各组分别灌胃相应药物60 d后,应用实时定量PCR法检测海马组织APP和早老蛋白-1(PS1)mRNA的表达。结果:与SAMP8空白组比较,TSG组APP mRNA 2-△△CT值明显降低,PS1 mRNA 2-△△CT值也明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05),表明TSG组APP mRNA和PS1 mRNA表达下调。结论:二苯乙烯苷对痴呆小鼠SAMP8有显著地抗痴呆作用,其作用机制可能与调控APP,PS1表达有关。 展开更多

关键词 二苯乙烯苷 老年性痴呆 β淀粉样蛋白前体 早老蛋白-1 实时荧光定量pcr

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海马注射β-淀粉样蛋白对BACE1 mRNA的影响及通络救脑口服液的干预作用 被引量：5

5

作者 张晓杰 牛英才 +1 位作者 周丽 李澎涛 《中药药理与临床》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期50-53,共4页

目的:探讨大鼠大脑海马注射β-淀粉样蛋白1-40对BACE1mRNA表达的影响及通络救脑口服液对其的干预作用。方法:采用大脑海马立体定向注射β-淀粉样蛋白1-40诱导Alzheimer's病动物模型后,药物干预4周,第5周应用实时定量PCR法检测BACE1m... 目的:探讨大鼠大脑海马注射β-淀粉样蛋白1-40对BACE1mRNA表达的影响及通络救脑口服液对其的干预作用。方法:采用大脑海马立体定向注射β-淀粉样蛋白1-40诱导Alzheimer's病动物模型后,药物干预4周,第5周应用实时定量PCR法检测BACE1mRNA表达。结果:模型组BACE12-ΔΔCt为4.67±0.52,2-ΔΔCt显著多于假手术组(1.07±0.08,P<0.01),表明模型组BACE1mRNA表达上调;与模型组比较,盐酸多萘哌齐组(1.80±0.23)、通络救脑口服液48mg、24mg、12mg/kg·d分别为2.92±0.22、1.54±0.25和0.54±0.11,2-ΔΔCt显著减少,表明BACE1mRNA表达下调。结论:大脑海马注射β-淀粉样蛋白1-40后大鼠海马组织BACE1mRNA表达水平明显增高,通络救脑口服液可以抑制海马组织BACE1mRNA的表达,从而发挥其抗老年性痴呆的作用。 展开更多

关键词 β位APP裂解酶1 阿尔茨海默氏病 通络救脑口服液 实时荧光定量pcr

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MS2噬菌体在贝类食源性病毒检测中过程质控应用 被引量：5

6

作者 徐蕾蕊 魏海燕 +7 位作者 马丹 汪琦 张西萌 李丹 付溥博 刘莉 魏咏新 曾静 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1584-1590,共7页

目的研究MS2噬菌体作为过程质控品在贝类食源性病毒检测中的应用。方法采用双层琼脂培养法制备MS2噬菌体悬液,计算效价;实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检验其稳定性;比较3种RNA提取方法的提取效率,确定M S2噬菌体的最适添... 目的研究MS2噬菌体作为过程质控品在贝类食源性病毒检测中的应用。方法采用双层琼脂培养法制备MS2噬菌体悬液,计算效价;实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检验其稳定性;比较3种RNA提取方法的提取效率,确定M S2噬菌体的最适添加量范围;分析M S2噬菌体添加对贝类食源性病毒检测的影响。结果稳定性研究表明-20℃和-80℃28 d MS2噬菌体(悬液的效价浓度为7.13×1011pfu/m L)时RNA含量无明显变化[t=0.464,P=0.653(-20℃);t=0.602,P=0.561(-80℃)]。MS2噬菌体最适添加量范围为7.13×108~7.13×107pfu/m L。在最适添加范围内,试剂盒方法和Trizol裂解结合磁珠纯化方法回收率均>1%。2种阳性样品均被检出,其Ct值比较接近,M S2噬菌体对贝类食源性病毒检测无影响(t=0.170,P=0.873)。结论M S2噬菌体可作为贝类食源性病毒qRT-PCR检测的过程质控品,是监控假阴性结果的一种简便有效的方法。 展开更多

关键词 MS2噬菌体 过程质控品 食源性病毒 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-pcr) 贝类

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人膝关节软骨下骨成骨细胞和软骨细胞的共培养 被引量：5

7

作者 张立智 蒋垚 +1 位作者 毛彦杰 黄成龙 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第11期1909-1916,共8页

背景:软骨细胞移植等组织工程方法已经成为非常有潜力的骨关节炎治疗措施,软骨下骨的成骨细胞对软骨细胞的作用不仅参与骨关节炎的发生和发展,而且与细胞移植治疗预后有着密切的关系。目的:培养人膝关节软骨下骨成骨细胞和软骨细胞,构... 背景:软骨细胞移植等组织工程方法已经成为非常有潜力的骨关节炎治疗措施,软骨下骨的成骨细胞对软骨细胞的作用不仅参与骨关节炎的发生和发展,而且与细胞移植治疗预后有着密切的关系。目的:培养人膝关节软骨下骨成骨细胞和软骨细胞,构建两者共培养的细胞培养模型,探讨软骨下骨成骨细胞对软骨细胞的作用。方法:收集骨关节炎患者行全膝关节置换和严重创伤患者行截肢后遗弃的胫骨平台组织,采用Ⅰ型胶原酶连续消化后进行贴壁培养的方法,培养软骨下骨的成骨细胞,应用Ⅱ型胶原酶消化方法,培养软骨细胞,然后应用多孔插入器细胞培养池构建成骨细胞和软骨细胞三维共培养模型。结果与结论:通过免疫组化,NBT/BCIP染色,茜素红染色等检查,证实成功培养出成骨细胞和软骨细胞。实时定量RT-PCR显示,在与骨关节炎的软骨下骨成骨细胞共培养的软骨细胞中,Ⅱ型胶原和蛋白聚糖基因的表达明显下降。可见骨关节炎患者的成骨细胞能促进软骨细胞的退变。 展开更多

关键词 组织构建 软骨组织构建 软骨下骨 成骨细胞 软骨细胞 骨关节炎 共培养 实时定量RT-pcr Ⅱ型胶原 蛋白聚糖 Ⅰ型胶原 碱性磷酸酶 国家自然科学基金 组织构建图片文章

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Influence of different Fe sources and concentrations on formation of magnetosomes in Acidithiobacillus ferrooxidans 被引量：4

8

作者 刘文斌 武海艳 +1 位作者 刘学端 刘新星 《中国有色金属学会会刊：英文版》 EI CSCD 2008年第6期1379-1385,共7页

紧张 Acidithiobacillus ferrooxidans ATCC 23270 的整个染色体被生物信息学分析，在 magnetotactic 细菌的功能的一些相当或相同的事物基因是可得到的。为了响应不同 Fe 来源和集中，获得 Acidithiobacillus ferrooxidans 的 magnetos... 紧张 Acidithiobacillus ferrooxidans ATCC 23270 的整个染色体被生物信息学分析，在 magnetotactic 细菌的功能的一些相当或相同的事物基因是可得到的。为了响应不同 Fe 来源和集中，获得 Acidithiobacillus ferrooxidans 的 magnetosomes 形成机制的进一步的知识，时间的基因表示 mpsA 介绍， magA， mamB 并且你被使用实时量的反向的 transcription-PCR 检验。magnetosomes 和 magnetotaxis 的微生物引起的形成也在不同 Fe2+ 集中下面被学习。结果显示 1622 ATCC 23270， 0276， 1124 和 2572 的 ORF 数字与 mpsA 是相应的，你，在 magnetotactic 细菌的 magA 和 mamB 基因。mpsA， magA 和 mamB 的表示层次是直接在 150200 点与铁的集中，和最高的表示有关铺平 mmol/L 铁被获得。在 ATCC 23270 和房间的 magnetotaxis 的 magnetosomes 的数字是显著地这三基因与表示有关铺平，建议这些基因在在 A 的 magnetosome 形成的过程期间与铁运输是相关的。ferrooxidans。 展开更多

关键词 氧化亚铁 生物技术 pcr 转录技术

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八种灭活型病毒保存液对病毒核酸稳定性的影响 被引量：2

9

作者 杨怡 宋庆贺 +1 位作者 王霞 董莲华 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2021年第5期500-504,共5页

目的评价八种不同的灭活型病毒保存液对病毒核酸的保护效果。方法收集八种商业化的灭活型病毒保存液,分别将新冠病毒假病毒标准物质和禽流感病毒样本加入保存液中,同时设置2个对照组(生理盐水和磷酸盐缓冲液),在保存温度为24℃和37℃条... 目的评价八种不同的灭活型病毒保存液对病毒核酸的保护效果。方法收集八种商业化的灭活型病毒保存液,分别将新冠病毒假病毒标准物质和禽流感病毒样本加入保存液中,同时设置2个对照组(生理盐水和磷酸盐缓冲液),在保存温度为24℃和37℃条件下,保存时间为0 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h,分别提取各保存液中的病毒核酸,采用逆转录荧光定量PCR(RT-qPCR)和逆转录数字PCR方法(RT-dPCR)检测病毒核酸的含量变化。结果四种商业化病毒保存液A、E、G、H在不同温度和时间条件下对病毒核酸的保存效果明显。另外四种保存液保护效果较差:保存液B和C在37℃条件下12 h后保存效果变差,保存液D的保存效果在24℃和37℃下6 h后均明显减弱;保存液F对病毒核酸没有任何保护作用。结论病毒保存液的保护效果差会导致核酸检测的假阴性,建议开展核酸检测时对使用的病毒保护液进行质量控制。 展开更多

关键词 病毒保存液 禽流感病毒 新型冠状病毒 假病毒标准物质 逆转录实时荧光定量pcr 逆转录数字pcr

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通络救脑口服液对AD模型大鼠Bax和Bcl-2 mRNA的影响

10

作者 张晓杰 牛英才 +1 位作者 周丽 李澎涛 《中华中医药学刊》 CAS 2007年第5期926-928,共3页

目的:探讨大鼠大脑海马立体定向注射β-淀粉样蛋白1-40对Bax和Bcl-2mRNA表达的影响及通络救脑口服液对其干预作用。方法:140只Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为空白对照组、假手术组、阴性对照组、阳性对照组、实验组(12、24、48mg.kg-1.... 目的:探讨大鼠大脑海马立体定向注射β-淀粉样蛋白1-40对Bax和Bcl-2mRNA表达的影响及通络救脑口服液对其干预作用。方法:140只Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为空白对照组、假手术组、阴性对照组、阳性对照组、实验组(12、24、48mg.kg-1.d-1)共7组。采用大脑海马立体定向注射β-淀粉样蛋白1-40诱导Alzheimer's病动物模型后,药物干预4周,第5周应用实时定量PCR法检测Bax和Bcl-2mRNA表达。结果:与假手术组比较,模型组Bax2-ΔΔCt明显升高,而Bcl-22-ΔΔCt明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05),表明模型组Bax mRNA表达上调,而Bcl-2mRNA表达下调。与模型组比较,盐酸多萘哌齐组、通络救脑口服液各剂量组Bax2-ΔΔCt显著降低,表明Bax mRNA表达下调;而盐酸多萘哌齐组、通络救脑口服液各剂量组Bcl-22-ΔΔCt显著升高,表明Bcl-2mRNA表达上调。结论:大脑海马注射β-淀粉样蛋白1-40后大鼠海马组织Bax mRNA表达水平明显增高,Bcl-2表达明显降低,而通络救脑口服液可以抑制海马组织Bax mRNA的表达和促进Bcl-2mRNA表达,从而发挥其抗老年性痴呆神经细胞凋亡的作用。 展开更多

关键词 细胞凋亡 阿尔茨海默氏病 通络救脑口服液 实时荧光定量pcr 老年性痴呆

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隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞增殖及血管内皮生长因子mRNA表达的影响 被引量：13

11

作者 邓凤春 于占江 +3 位作者 杨钰 赵红晔 王滨 周丽 《中国医药导报》 CAS 2015年第6期7-10,共4页

目的通过测定隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞增殖及血管内皮生长因子（VEGF）mRNA的影响,探讨其抗肿瘤的作用机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响,采用Real Time RT-PCR检测隐丹参酮对... 目的通过测定隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞增殖及血管内皮生长因子（VEGF）mRNA的影响,探讨其抗肿瘤的作用机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响,采用Real Time RT-PCR检测隐丹参酮对VEGF m RNA表达的影响。结果 20、40、60、80、100μmol/L的隐丹参酮作用于人胃癌SGC-7901细胞6-48 h,其生长和增殖均受到一定程度的抑制;24 h为隐丹参酮对SGC-7901细胞抑制作用的最佳时间,IC50为59.11μmol/L;选取40、60和80μmol/L 3个剂量作用于人胃癌细胞SGC7901 24 h后,60和80μmol/L的隐丹参酮均可下调VEGF m RNA的表达（均P〈0.01）。结论隐丹参酮可抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,并能抑制VEGF mRNA的表达,提示这可能是其抗肿瘤的作用机制之一。 展开更多

关键词 隐丹参酮 人胃癌SGC-7901细胞 四甲基偶氮唑蓝 血管内皮生长因子 实时荧光定量pcr

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检测施马伦贝格病毒核酸的荧光定量RT-PCR方法 被引量：1

12

作者 张永宁 吴绍强 +5 位作者 吕继洲 冯春燕 王彩霞 邓俊花 袁向芬 林祥梅 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1824-1829,共6页

根据施马伦贝格病毒(Schmallenberg virus,SBV)S基因节段设计一对引物和TaqMan探针,建立了检测SBV核酸的荧光定量RT-PCR方法。通过优化反应体系和反应条件,该方法对101~107半数组织培养感染量(TCID50)的SBV核酸呈现良好的线性关系。利... 根据施马伦贝格病毒(Schmallenberg virus,SBV)S基因节段设计一对引物和TaqMan探针,建立了检测SBV核酸的荧光定量RT-PCR方法。通过优化反应体系和反应条件,该方法对101~107半数组织培养感染量(TCID50)的SBV核酸呈现良好的线性关系。利用德国FLI制备和保存的SBV核酸阳性(n=140)、SBV核酸阴性(n=132)和辛波血清群相关病毒核酸样品(n=16),对该方法的敏感性、特异性和重复性进行了验证。结果表明,所建立方法与FLI研制的SBV荧光定量RT-PCR具有相近的敏感性,两者对140份SBV核酸阳性样品的检测符合率达96.4%(135/140);可灵敏地检测出1TCID50的SBV RNA,并具有良好的重复性;除道格拉斯病毒(Douglas virus)外,与辛波血清群相关病毒核酸无交叉反应。用该方法对采自内蒙古呼和浩特市某养殖场的绵羊血清(n=47)和澳大利亚进口绵羊血清(n=47)的RNA进行了检测,结果未发现SBV核酸阳性样品。SBV荧光定量RTPCR检测方法的建立为应对施马伦贝格病提供了有效的检测手段。 展开更多

关键词 施马伦贝格病毒 核酸 引物 TAQMAN探针 荧光定量RT-pcr

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植物实时荧光定量PCR内参基因的选择 被引量：71

13

作者 胡瑞波 范成明 傅永福 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2009年第6期30-36,共7页

实时荧光定量RT-PCR(real-tim e quantitative reverse transcription PCR,qRT-PCR)具有定量准确、灵敏度高和高通量等特点,已被广泛应用于基因的表达分析。常规qRT-PCR采用相对定量进行分析,其关键步骤是选择合适的稳定内参基因进行校... 实时荧光定量RT-PCR(real-tim e quantitative reverse transcription PCR,qRT-PCR)具有定量准确、灵敏度高和高通量等特点,已被广泛应用于基因的表达分析。常规qRT-PCR采用相对定量进行分析,其关键步骤是选择合适的稳定内参基因进行校正和标准化。持家基因被广泛用作内参基因,但在所有生理条件下均稳定表达的理想内参基因并不存在。大多数传统内参基因已不能满足qRT-PCR准确定量的要求。基于基因芯片表达数据和EST数据库并结合qRT-PCR,可以筛选稳定性好的新的内参基因。简要综述了植物qRT-PCR内参基因的研究进展,并就内参基因的选择中应注意的问题进行了探讨。 展开更多

关键词 实时荧光定量RT-pcr 内参基因 GENORM 基因表达

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‘琯溪蜜柚’荧光定量PCR内参基因的筛选 被引量：15

14

作者 王梨嬛 潘永娟 +2 位作者 杨莉 蔡盛华 黄新忠 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期48-54,共7页

【目的】为了克隆‘琯溪蜜柚’的管家基因,并筛选合适的管家基因作为内参,【方法】以‘琯溪蜜柚’盛花期后5个不同时期的果实汁胞,以及根﹑茎﹑叶为材料,采用实时荧光定量PCR技术,分析actin1﹑β-tubulin﹑18S rRNA﹑EF1-α和Ubiquitin ... 【目的】为了克隆‘琯溪蜜柚’的管家基因,并筛选合适的管家基因作为内参,【方法】以‘琯溪蜜柚’盛花期后5个不同时期的果实汁胞,以及根﹑茎﹑叶为材料,采用实时荧光定量PCR技术,分析actin1﹑β-tubulin﹑18S rRNA﹑EF1-α和Ubiquitin 5个管家基因在不同材料中的表达情况,并结合geNorm、NormFinder﹑comparative Delta-CT和BestKeeper 4种评估方法进行稳定性分析。【结果】结果表明,actin1和β-tubulin是‘琯溪蜜柚’果实发育进程中较为稳定的内参基因,而EF1-α和β-tubulin则是研究不同组织特定靶基因表达中稳定的内参基因。【结论】筛选出了‘琯溪蜜柚’最佳的内参基因β-tubulin,为今后目的基因的表达分析奠定了基础。 展开更多

关键词 '琯溪蜜柚’ 荧光定量pcr 内参基因

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HPV mRNA实时荧光定量PCR检测及其与宫颈癌发生的关系 被引量：13

15

作者 贾政军 周玉春 +5 位作者 胡蓉 彭向京 黄定梅 王华 王丹 何思 《实用预防医学》 CAS 2012年第3期354-358,共5页

目的建立一种反转录实时荧光定量PCR检测HPV mRNA表达量的方法,研究HPV mRNA表达量与宫颈癌发展的关系。方法取155例宫颈组织标本进行病理学诊断,同时分别进行HPV DNA实时荧光定量PCR检测、HPV E7 mRNA反转录实时荧光定量PCR检测。结果... 目的建立一种反转录实时荧光定量PCR检测HPV mRNA表达量的方法,研究HPV mRNA表达量与宫颈癌发展的关系。方法取155例宫颈组织标本进行病理学诊断,同时分别进行HPV DNA实时荧光定量PCR检测、HPV E7 mRNA反转录实时荧光定量PCR检测。结果在所有的HPV DNA阳性标本中,宫颈炎和CINⅠ期标本mR-NA表达率为0,CINⅡ期标本mRNA表达率为50%,CINⅢ期标本mRNA表达率为50%,宫颈癌标本mRNA表达率为87.5%;表达水平依次增加。结论 HPV mRNA的表达率及表达量随宫颈癌的发展而增加和增强,其表达水平与宫颈癌发展呈正相关性;HPV mRNA定量检测方法的建立,可以为宫颈癌的预防、发展监测、手术预后等提供重要的临床指导。 展开更多

关键词 人乳头瘤病毒 反转录实时荧光定量pcr MRNA表达 宫颈癌

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内参基因在昆虫实时荧光定量PCR中的研究进展 被引量：10

16

作者 史彩华 张友军 《应用昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期237-246,共10页

作为一种高效的定量PCR技术,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)因其灵敏度高、特异性强、定量准确等优点,已被广泛运用于昆虫基因表达和转录分析。然而,为了控制样本RNA在质量和逆转录效率上存在差异,必须筛选表达稳定的"看家基因"作... 作为一种高效的定量PCR技术,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)因其灵敏度高、特异性强、定量准确等优点,已被广泛运用于昆虫基因表达和转录分析。然而,为了控制样本RNA在质量和逆转录效率上存在差异,必须筛选表达稳定的"看家基因"作为内参基因,对目的基因表达量进行校正和标准化。许多学者研究表明,昆虫种类和实验条件的不同,导致选择的内参基因也不尽相同。因此,本文综述了前人有关昆虫内参基因的研究及其稳定性评价,为其它昆虫内参基因的研究提供理论参考依据。 展开更多

关键词 昆虫 内参基因 QRT-pcr

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实时荧光定量检测HCV RNA含量的临床意义 被引量：8

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作者 张冬雷 施健 +5 位作者 崔之础 王惠民 鞠少卿 李立人 倪红兵 苏建友 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2005年第1期39-43,共5页

目的:建立实时荧光定量RT-PCR(RFQ-RT-PCR)检测HCV RNA含量的方法,初步探讨HCV RNA含量变化与病情的相关性. 方法:HCV抗体阳性样本80例,包括慢性肝炎(CH) 39例,肝硬化(LC)23例,肝癌(HCC)18例,献血员样本40例为正常对照.在HCV基因组5’... 目的:建立实时荧光定量RT-PCR(RFQ-RT-PCR)检测HCV RNA含量的方法,初步探讨HCV RNA含量变化与病情的相关性. 方法:HCV抗体阳性样本80例,包括慢性肝炎(CH) 39例,肝硬化(LC)23例,肝癌(HCC)18例,献血员样本40例为正常对照.在HCV基因组5’非编码区(5’UTR)设计特异性引物和一对杂交探针,构建相应基因片段载体,体外转录RNA作为标准品,根据其建立的标准曲线对血清HCV RNA进行定量,同时用传统的套式RT-PCR进行定性分析. 结果:本法检测HCV RNA含量的线性范围为1012-104copies/L,批内和批间重复性测定的v分别为1.68-5.97%和6.40-10.58%.在HCV抗体阳性患者中, 肝硬化和肝癌患者的HCV RNA含量显著高于慢性肝炎患者(7.75±0.29,7.86±0.32 vs 4.67±0.41,P<0.05), 而且HCV RNA含量与ALT水平呈正相关(r=0.89, t=8.29,P<0.05). 结论:RFQ-RT-PCR检测HCV RNA含量具有较好的灵敏度和特异性,其含量与丙型肝炎患者的病情变化及严重程度有一定相关性. 展开更多

关键词 HCV抗体 RNA 含量 实时荧光定量 患者 阳性 慢性肝炎 RT—pcr 基因组 体外转录

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广东省揭阳市2016—2020年外环境禽流感病毒监测 被引量：8

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作者 方琪 郑育驯 +1 位作者 许瑶珊 洪艳苹 《中国热带医学》 CAS 2021年第2期177-180,共4页

目的了解揭阳市外环境禽流感病毒动态分布情况和流行特点,评估人感染禽流感病毒的风险,为人禽流感防控提供科学依据。方法按随机抽样的方法,对揭阳市2016—2020年5个县(市、区)禽类市场进行相关标本采集,用实时荧光定量(RT-PCR)对标本... 目的了解揭阳市外环境禽流感病毒动态分布情况和流行特点,评估人感染禽流感病毒的风险,为人禽流感防控提供科学依据。方法按随机抽样的方法,对揭阳市2016—2020年5个县(市、区)禽类市场进行相关标本采集,用实时荧光定量(RT-PCR)对标本进行流感病毒A型检测,阳性标本再进行H5N6、H7N9、H9N2亚型禽流感病毒核酸检测。结果揭阳市2016—2020年共采集外环境标本1 798份,甲型流感病毒(FluA)阳性标本660份,阳性率为36.71%;其中H5N6、H7N9、H9N2亚型阳性率分别为1.61%、1.28%和21.91%。普宁市和惠来县的外环境禽流感病毒阳性率较高,分别为54.14%和51.43%。揭西县的外环境禽流感病毒阳性率最低,为4.84%。不同类型标本检测阳性率最高为清洗禽类污水(47.09%)。结论揭阳市禽类市场外环境中存在H5N6、H7N9、H9N2及多种亚型混合的禽流感病毒污染,禽流感病毒流行区域较广,存在感染人的风险,应继续加强外环境禽流感实时监测和城乡禽类市场卫生监管。 展开更多

关键词 禽流感 外环境 禽流感病毒 禽流感病毒亚型 实时荧光定量逆转录pcr 监测

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microRNA-150在结直肠癌组织中的表达及临床意义 被引量：2

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作者 樊智彬 于卫芳 +4 位作者 张丽静 刘博 吴晨鹏 张学明 赵增仁 《山东大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2013年第11期85-89,共5页

目的检测microRNA-150(miR-150)在结肠癌细胞株、结直肠癌(CRC)组织中的表达,分析其与临床特征间的关系。方法采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测8种结肠癌细胞株及45例CRC患者癌组织及对应正常组织中miR-150的表达情况,... 目的检测microRNA-150(miR-150)在结肠癌细胞株、结直肠癌(CRC)组织中的表达,分析其与临床特征间的关系。方法采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测8种结肠癌细胞株及45例CRC患者癌组织及对应正常组织中miR-150的表达情况,分析其表达与CRC临床病理资料之间的关系。结果 miR-150在8种结肠癌细胞株中表达明显降低,CRC组织中miR-150的表达较同一患者正常黏膜组织中的miR-150表达明显下调(P<0.05);miR-150在CRC组织中的表达与肿瘤的分化程度(P<0.05)及病理类型(P<0.01)密切相关。结论 miR-150在CRC中表达下调,其低表达与CRC的分化及病理类型相关,可作为结直肠癌诊断及治疗的指标之一。 展开更多

关键词 microRNA-150 结直肠癌 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应 黏液癌

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HPSE和Syndecan-1与人类早期复发性自然流产关系 被引量：2

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作者 穆雅琴 刘润花 +4 位作者 朱壮彦 王健 刘丽华 王喜英 赵富玺 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期606-608,共3页

目的探讨乙酰肝素酶(heparanase,HPSE)和蛋白聚糖1(syndecan-1)在人类早期复发性自然流产绒毛组织中的表达及两者与复发性自然流产的关系。方法采用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测山西大同地区非意愿性正常妊娠者(35例... 目的探讨乙酰肝素酶(heparanase,HPSE)和蛋白聚糖1(syndecan-1)在人类早期复发性自然流产绒毛组织中的表达及两者与复发性自然流产的关系。方法采用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测山西大同地区非意愿性正常妊娠者(35例)和早期复发性自然流产者(28例)绒毛组织中HPSE和syndecan-1的mRNA表达水平,分析探讨两者与自然流产关系。结果 HPSE mRNA在正常妊娠组表达的阳性率为85.71%(30/35),明显高于复发性自然流产组的57.14%(16/28),差异有统计学意义(P<0.05);而在正常妊娠组syndecan-1 mRNA的阳性表达率为54.28%(19/35),明显低于复发性自然流产组的82.14%(23/28),差异亦有统计学意义(P<0.05);HPSE和syndecan-1蛋白表达呈负相关(r=-0.386,P<0.01)。结论在复发性自然流产中HPSE的表达降低,导致降解细胞外基质能力下降,syndecan-1表达增高,影响胚泡植入,导致自然流产的发生。 展开更多

关键词 复发性自然流产 乙酰肝素酶(HPSE) 蛋白聚糖1(syndecan-1) 实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-pcr)

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