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实时荧光RT-PCR一步法检测苹果茎沟病毒 被引量：22
1
作者 郭立新 向本春 +3 位作者 陈红运 段维军 陈洪俊 朱水芳 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期57-61,共5页
根据苹果茎沟病毒(ASGV)各分离物外壳蛋白(CP)基因的保守序列,设计并合成1对特异性引物和1条TaqMan-MGB探针,建立了对ASGV的实时荧光RT-PCR检测方法。TaqMan-MGB探针3’端具有小沟结合分子(Minor groove binder, MGB),提高了探针的Tm值... 根据苹果茎沟病毒(ASGV)各分离物外壳蛋白(CP)基因的保守序列,设计并合成1对特异性引物和1条TaqMan-MGB探针,建立了对ASGV的实时荧光RT-PCR检测方法。TaqMan-MGB探针3’端具有小沟结合分子(Minor groove binder, MGB),提高了探针的Tm值,缩短了探针长度,解决了病毒各分离物之间基因组变异较大、难以找到较长一致的序列来设计探针的困难。该方法的检测灵敏度比常规RT-PCR电泳检测高约10倍,对于ASGV等在果树体内含量较低的病毒尤为适用。此方法快速、灵敏,整个检测过程完全闭管,无需PCR后处理。 展开更多
关键词 苹果茎沟病毒(ASGV) 实时荧光rt-pcr 检测 TAQMAN-MGB探针
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应用实时荧光定量PCR技术快速检测甲型H1N1流感病毒 被引量：9
2
作者 陈棋炯 孙永祥 +2 位作者 丁水军 傅丹青 戴城钢 《中国卫生检验杂志》 CAS 2010年第6期1394-1396,共3页
目的:对疑似甲型H1N1流感患者标本进行病毒核酸检测确诊,探讨实时荧光定量PCR检测方法在流行性感冒检测诊断中的意义。方法:采用WHO标准实时荧光定量PCR方法对2009年6月～12月萧山地区采集的436份疑似甲型H1N1流感患者咽拭子标本进行病... 目的:对疑似甲型H1N1流感患者标本进行病毒核酸检测确诊,探讨实时荧光定量PCR检测方法在流行性感冒检测诊断中的意义。方法:采用WHO标准实时荧光定量PCR方法对2009年6月～12月萧山地区采集的436份疑似甲型H1N1流感患者咽拭子标本进行病毒核酸检测,并对甲型H1N1流感病毒、甲1型流感病毒、甲3型流感病毒和乙型流感病毒进行快速分型。结果:436份咽拭子标本中有144份呈甲型H1N1流感病毒核酸阳性,阳性率33.03%,另检出甲1型流感病毒15份,甲3型流感病毒30份,没有检出乙型流感病毒。结论:实时荧光定量PCR方法操作方便、耗时短、特异性强、灵敏度高,可作为甲型H1N1流感疫情可靠的快速诊断方法。 展开更多
关键词 甲型H1N1流感病毒 实时荧光定量pcr rt-pcr 快速检测
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应用TaqMan MGB探针技术检测菜豆荚斑驳病毒 被引量：10
3
作者 闻伟刚 谭钟 +1 位作者 张吉红 张颖 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期51-54,共4页
根据菜豆荚斑驳病毒(Bean pod mottle virus,BPMV)不同分离株外壳蛋白基因(coat protein,CP)的保守序列,设计了特异性引物与TaqMan MGB荧光探针,建立了BPMV的实时荧光RT-PCR检测方法。该方法与酶联免疫检测方法相比,灵敏度提高了100倍,... 根据菜豆荚斑驳病毒(Bean pod mottle virus,BPMV)不同分离株外壳蛋白基因(coat protein,CP)的保守序列,设计了特异性引物与TaqMan MGB荧光探针,建立了BPMV的实时荧光RT-PCR检测方法。该方法与酶联免疫检测方法相比,灵敏度提高了100倍,具有快速、灵敏和高特异性的优点,适于对BPMV的快速检测。应用该方法,对来自美国不同地区的携带有BPMV的大豆样品进行检测,均能够得到BPMV的典型扩增曲线,表明引物与探针对BPMV不同分离株具有良好的简并性。 展开更多
关键词 菜豆荚斑驳病毒 TAQMAN MGB探针 实时荧光rt—pcr 检测
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戊型肝炎病毒各生物标志物之间关系分析 被引量：9
4
作者 赵晨燕 李卓 +4 位作者 阎宝山 张峰 郝娃 张春涛 王佑春 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期6-9,共4页
目的分析戊型肝炎病毒（HEV）各生物标志物之间关系以及各标志物在早期诊断中的作用。方法从临床收集急性散发性肝炎患者的血清，用酶联免疫（EIA）试剂检测HEV IgG抗体、IgM抗体和抗原，用实时荧光RT-PCR方法检测核酸，比较其相关关系... 目的分析戊型肝炎病毒（HEV）各生物标志物之间关系以及各标志物在早期诊断中的作用。方法从临床收集急性散发性肝炎患者的血清，用酶联免疫（EIA）试剂检测HEV IgG抗体、IgM抗体和抗原，用实时荧光RT-PCR方法检测核酸，比较其相关关系。结果在121例急性散发性肝炎中，HEV IgM抗体阴性者为51例，其中抗原或／和核酸阳性者占45．1％；IgM抗体阳性者70份，其中抗原或／和核酸阳性者占67．1％。HEV IgG抗体在IgM抗体、抗原和核酸均阴性的患者中阳性率为53．6％；在IgM阴性而抗原或／和核酸阳性者中阳性率为73．9％；在IgM阳性的HEV感染者中阳性率为92．9％。HEV抗原与核酸的符合率为81．8％，抗原与IgM抗体的符合率为58．7％，而IgM抗体与核酸的符合率为53．7％。结论在HEV感染的早期诊断中增加抗原和核酸的检测有助于提高检出率。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 实时荧光rt-pcr IGM抗体 IGG抗体
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西生菜中低污染量GⅡ型诺如病毒的富集与定量检测研究 被引量：8
5
作者 管锦绣 许喜林 +3 位作者 翁文川 凌莉 刘静宇 冼钰茵 《食品安全质量检测学报》 CAS 2017年第9期3536-3542,共7页
目的优化新鲜西生菜中低污染量的GⅡ型诺如病毒富集方法,比较实时荧光RT-PCR与微滴式数字RT-PCR检测方法,研究适用于新鲜西生菜中低污染量的GⅡ型诺如病毒的定量检测方法。方法选取洗脱液种类、沉淀剂种类、沉淀剂作用温度及沉淀剂作用... 目的优化新鲜西生菜中低污染量的GⅡ型诺如病毒富集方法,比较实时荧光RT-PCR与微滴式数字RT-PCR检测方法,研究适用于新鲜西生菜中低污染量的GⅡ型诺如病毒的定量检测方法。方法选取洗脱液种类、沉淀剂种类、沉淀剂作用温度及沉淀剂作用时间4个因素进行研究,以确定较优的GⅡ型诺如病毒富集条件。结合较优的富集条件,分别采用实时荧光RT-PCR方法和微滴式数字RT-PCR方法进行定量检测。结果病毒富集方法研究表明:洗脱液为牛肉膏-甘氨酸洗脱液、沉淀剂为PEG6000+PEG8000、沉淀剂作用温度为4℃,沉淀剂作用时间为4 h为较优条件,此时富集后的平均病毒浓度最高,平均回收率可达53.43%。实时荧光RT-PCR的检测限为1.44×10~4 copies/g;而微滴式数字RT-PCR的检测限为7.86×10~2 copies/g。结论通过优化西生菜中低污染量的GⅡ诺如病毒富集方法,比较实时荧光RT-PCR方法与微滴式数字RT-PCR方法定量检测病毒的效果,建立了适用于西生菜样品中低污染量GⅡ诺如病毒的定量检测方法。 展开更多
关键词 西生菜 GⅡ型诺如病毒 富集 实时荧光rt-pcr 微滴式数字rt-pcr
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实时荧光RT-PCR方法检测齿兰环斑病毒与建兰花叶病毒 被引量：8
6
作者 闻伟刚 谭钟 崔俊霞 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期101-104,共4页
齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)与建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)是严重危害兰科植物的2种主要病毒。本研究根据病毒不同分离株外壳蛋白基因的保守序列,分别设计了ORSV与CymMV各自的特异性引物与荧光探... 齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)与建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)是严重危害兰科植物的2种主要病毒。本研究根据病毒不同分离株外壳蛋白基因的保守序列,分别设计了ORSV与CymMV各自的特异性引物与荧光探针,建立了基于TaqMan探针的实时荧光RT-PCR检测方法。该方法与酶联免疫检测方法相比,灵敏度提高104倍,具有快速、灵敏和高特异性的优点,适合对ORSV和CymMV的快速检测。应用该方法,从来自台湾的蝴蝶兰样品中检出齿兰环斑病毒。 展开更多
关键词 齿兰环斑病毒 建兰花叶病毒 实时荧光rt-pcr 检测
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实时荧光RT-PCR检测辣椒轻斑驳病毒的初步研究 被引量：8
7
作者 郭京泽 李兴红 +3 位作者 廖芳 张文明 刘鹏 刘跃庭 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期117-120,共4页
本研究选取辣椒轻斑驳病毒PMMoV、烟草花叶病毒TMV、黄瓜花叶病毒CMV和马铃薯Y病毒PVY作为试验材料,根据PMMoV衣壳蛋白(CP)RNA的序列特异性位点,设计出Taqman荧光探针及其引物,采用实时荧光RT-PCR技术对PMMoV进行快速检测,同时与ELISA... 本研究选取辣椒轻斑驳病毒PMMoV、烟草花叶病毒TMV、黄瓜花叶病毒CMV和马铃薯Y病毒PVY作为试验材料,根据PMMoV衣壳蛋白(CP)RNA的序列特异性位点,设计出Taqman荧光探针及其引物,采用实时荧光RT-PCR技术对PMMoV进行快速检测,同时与ELISA方法进行了灵敏度比较,结果表明:该方法具有较高的灵敏度及较强的特异性,PMMoV检测结果为阳性,TMV、CMV和PVY均无荧光信号,为阴性,灵敏度是传统的ELISA方法的100倍,而且大大缩短了检测时间。该方法快速、准确、灵敏、简便、安全,具有实际应用价值,适用于植物病毒病害的快速检测。 展开更多
关键词 辣椒轻斑驳病毒 实时荧光rt-pcr 双抗夹心酶联免疫吸附法
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实时荧光RT-PCR检测香蕉苞片花叶病毒方法的建立 被引量：8
8
作者 闻伟刚 谭钟 张颖 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期417-420,共4页
香蕉苞片花叶病毒(Banana bract mosaic virus,BBrMV)是我国对外检疫性有害生物。为防止该有害生物传入我国,根据BBrMV不同分离株外壳蛋白基因(coat protein,CP)的保守序列,设计特异性引物与TaqMan荧光探针,建立了BBrMV的实时荧光RT-PC... 香蕉苞片花叶病毒(Banana bract mosaic virus,BBrMV)是我国对外检疫性有害生物。为防止该有害生物传入我国,根据BBrMV不同分离株外壳蛋白基因(coat protein,CP)的保守序列,设计特异性引物与TaqMan荧光探针,建立了BBrMV的实时荧光RT-PCR检测方法。结果表明,该方法检测BBrMV的2个不同来源毒株,均能够得到典型扩增曲线,Ct值分别为26.65和27.52;而马铃薯Y病毒、李属坏死环斑病毒以及桃丛簇花叶病毒等其它毒株则没有典型扩增曲线,也无Ct值。灵敏度比较发现,该方法比普通RT-PCR检测方法的灵敏度提高1000倍,具有快速、灵敏和高特异性的优点,适合对BBrMV的检测。 展开更多
关键词 香蕉苞片花叶病毒 TAQMAN探针 实时荧光rt—pcr 检测
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湖南省规模化猪场H1N1猪流感流行病学调查 被引量：7
9
作者 禹思宇 易征璇 +3 位作者 孟芳 欧阳振宇 唐连飞 朱中武 《湖南农业科学》 2011年第3期126-128,共3页
为了解H1N1猪流感(SIV)在湖南省规模化猪场中感染和流行情况,2010年6月采用间接ELISA和实时荧光RT-PCR对1 065份猪血清、16 796份猪棉拭子和360份肺脏样品进行检测。结果显示,SIV H1N1抗体阳性率达37.84%,猪场阳性率达100%;H1N1猪流感... 为了解H1N1猪流感(SIV)在湖南省规模化猪场中感染和流行情况,2010年6月采用间接ELISA和实时荧光RT-PCR对1 065份猪血清、16 796份猪棉拭子和360份肺脏样品进行检测。结果显示,SIV H1N1抗体阳性率达37.84%,猪场阳性率达100%;H1N1猪流感病毒抗原阳性率为0.12%,SIV在湖南的流行情况有着明显的区域性差异。 展开更多
关键词 H1N1猪流感病毒 ELISA 实时荧光rt-pcr 流行病学调查
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广东首例苏里南输入性寨卡病毒感染病例的实验室检测 被引量：7
10
作者 梁洁怡 戴俊 +8 位作者 黎东红 师永霞 黄吉城 袁帅 郑夔 李小波 张显光 宋卫 吴惠明 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期522-525,共4页
目的对从广州白云国际机场口岸入境的一例自苏里南归国发热人员进行寨卡病毒实验室检测。方法采集发热人员的血液和唾液样本,同时使用两种寨卡病毒实时荧光RT-PCR试剂进行寨卡病毒核酸检测。RT-PCR扩增寨卡病毒部分基因片段,并进行序列... 目的对从广州白云国际机场口岸入境的一例自苏里南归国发热人员进行寨卡病毒实验室检测。方法采集发热人员的血液和唾液样本,同时使用两种寨卡病毒实时荧光RT-PCR试剂进行寨卡病毒核酸检测。RT-PCR扩增寨卡病毒部分基因片段,并进行序列测定和同源性比较。基于扩增片段构建系统进化树,分析输入性病例的来源。结果实时荧光RT-PCR结果显示,该病例血清样本寨卡病毒核酸弱阳性、唾液样本寨卡病毒核酸阳性。RT-PCR扩增出预期大小约1.5Kb片段,测序结果表明该片段与巴西寨卡病毒株(GenBank号KX197250)相应序列的同源性为99%。系统进化树显示该病毒属亚洲谱系。结论根据患者流行病学史、临床表现和病例标本核酸检测情况,确诊该病例为广东首例从苏里南地区输入性寨卡病例。 展开更多
关键词 寨卡病毒 实时荧光rt-pcr 核酸检测 进化分析
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苹果茎沟病毒实时荧光RT-PCR反应体系的优化 被引量：6
11
作者 郭立新 向本春 朱水芳 《北方园艺》 CAS 北大核心 2009年第3期8-11,共4页
以健康昆诺阿藜叶片和受ASGV侵染的昆诺阿藜叶片为试材,利用Trizol试剂提取植物总RNA,将实时荧光RT-PCR体系的主要成分设定梯度,根据每个成分的变化引起的(Rn值和Ct值的差异,探讨苹果茎沟病毒实时荧光RT-PCR技术中反应体系的主要成分对... 以健康昆诺阿藜叶片和受ASGV侵染的昆诺阿藜叶片为试材,利用Trizol试剂提取植物总RNA,将实时荧光RT-PCR体系的主要成分设定梯度,根据每个成分的变化引起的(Rn值和Ct值的差异,探讨苹果茎沟病毒实时荧光RT-PCR技术中反应体系的主要成分对扩增结果的影响。最终确定了RT-PCR反应体系的最佳条件为:25μL体系中,Mg2+浓度为3.5 mM,引物浓度为0.6μM,探针浓度为0.6μM,总RNA含量为20 ng。利用此反应体系进行扩增,△Rn值比未优化时高出一个数量级,表明该体系适合ASGV实时荧光RT-PCR检测分析。 展开更多
关键词 苹果茎沟病毒(ASGV) 实时荧光rt-pcr 优化
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不同的核酸提取方法在布鲁氏菌检测中的应用评价
12
作者 常秀琴 郝梦 +2 位作者 徐珂 海晓梅 白小成 《宁夏医学杂志》 CAS 2024年第7期614-617,共4页
目的比较不同核酸提取方法对布鲁氏菌检出率的影响,为布鲁氏菌核酸快速提取检测提供技术参考。方法分别使用磁珠法、直接裂解法和高温裂解法对感染布鲁氏菌患者的20例全血样本、10例关节腔及浆膜腔积液样本进行核酸提取,然后进行实时荧... 目的比较不同核酸提取方法对布鲁氏菌检出率的影响,为布鲁氏菌核酸快速提取检测提供技术参考。方法分别使用磁珠法、直接裂解法和高温裂解法对感染布鲁氏菌患者的20例全血样本、10例关节腔及浆膜腔积液样本进行核酸提取,然后进行实时荧光RT-PCR检测,采用SPSS 22.0对结果进行统计分析,评价该核酸快速提取试剂的DNA提取效率。结果磁珠法阳性检出率为100%,Ct值中位数为29.17(21.19~31.33),批内变异系数(CV)最高为1.33%。直接裂解法阳性检出率为63.33%,Ct值中位数为33.29(28.69~34.54),批内CV最高为1.28%。高温裂解法阳性检出率为100%,Ct值中位数为30.26(26.63~33.85),批内CV最高为1.21%。高温裂解法和磁珠法检出率比较差异无统计学意义(P>0.05),直接裂解法检出率显著低于磁珠法和高温裂解法(P<0.05)。结论核酸快速提取试剂在高温裂解条件下可保证核酸提取效率和重复性稳定,具有操作简单、检测时间短、降低实验室生物安全风险等优势,可以应用于布鲁氏菌的核酸检测。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 核酸快速提取 磁珠法 实时荧光rt-pcr
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基于TaqMan MGB探针的花生矮化病毒检测研究 被引量：6
13
作者 闻伟刚 谭钟 张颖 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期121-124,共4页
花生矮化病毒(Peanut stunt virus,PSV)是我国进境检疫性有害生物。本研究根据该病毒不同分离株外壳蛋白基因(coat protein,CP)的保守序列,设计了特异性引物与TaqMan MGB荧光探针,建立了PSV的实时荧光RT-PCR检测方法。方法特异性研究表... 花生矮化病毒(Peanut stunt virus,PSV)是我国进境检疫性有害生物。本研究根据该病毒不同分离株外壳蛋白基因(coat protein,CP)的保守序列,设计了特异性引物与TaqMan MGB荧光探针,建立了PSV的实时荧光RT-PCR检测方法。方法特异性研究表明,针对PSV的2个不同株系PSV-E和PSV-W,均能够得到典型扩增曲线,Ct值分别为20.10和21.22;而对于黄瓜花叶病毒、番茄不孕病毒、马铃薯Y病毒、菜豆荚斑驳病毒以及烟草环斑病毒等其他毒株则没有典型扩增曲线,也无Ct值。灵敏度比较发现,该方法比普通RT-PCR检测方法的灵敏度提高100倍,具有快速、灵敏和高特异性的优点,适合对PSV的检测。 展开更多
关键词 花生矮化病毒 TAQMAN MGB探针 实时荧光rt-pcr 检测
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啤酒花潜隐类病毒的实时荧光RT-PCR检测 被引量：6
14
作者 郭立新 段维军 +3 位作者 张祥林 邓丛良 闻伟刚 李世访 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期466-473,共8页
根据啤酒花潜隐类病毒(HpLVd)各分离物基因序列,设计并合成1对特异性引物和1条TaqMan-MGB探针,建立了对HpLVd的实时荧光RT-PCR检测方法。通过对反应体系的优化,确定了HpLVd的实时荧光RT-PCR最佳反应条件:Mg2+终浓度为5.5 mmol/L,引物终... 根据啤酒花潜隐类病毒(HpLVd)各分离物基因序列,设计并合成1对特异性引物和1条TaqMan-MGB探针,建立了对HpLVd的实时荧光RT-PCR检测方法。通过对反应体系的优化,确定了HpLVd的实时荧光RT-PCR最佳反应条件:Mg2+终浓度为5.5 mmol/L,引物终浓度为0.7μmol/L,探针终浓度为0.5μmol/L。灵敏度对比试验结果显示,实时荧光RT-PCR的灵敏度较普通RT-PCR通过琼脂糖凝胶电泳高10倍,在25μL反应体系中,总RNA含量达到20 pg就能通过实时荧光RT-PCR检测出来。此方法也能成功检测田间样品上的啤酒花潜隐类病毒。 展开更多
关键词 啤酒花潜隐类病毒 实时荧光rt-pcr 检测 TAQMAN-MGB探针
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基于实时荧光RT-PCR法对新型冠状病毒核酸检测的研究 被引量：5
15
作者 梁圣楠 刘漩 梅金红 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期1171-1176,共6页
新型冠状病毒肺炎是由一种新的冠状病毒SARS-CoV-2引起的急性呼吸道传染病,以发热、咳嗽、乏力为主要临床表现,严重者会出现急性呼吸窘迫综合征甚至死亡。该病毒传染性强,主要通过飞沫传播,已经对人的身体健康、国家经济及世界公共卫生... 新型冠状病毒肺炎是由一种新的冠状病毒SARS-CoV-2引起的急性呼吸道传染病,以发热、咳嗽、乏力为主要临床表现,严重者会出现急性呼吸窘迫综合征甚至死亡。该病毒传染性强,主要通过飞沫传播,已经对人的身体健康、国家经济及世界公共卫生安全造成了严重的损害。目前,临床诊断主要依据患者流行病学、临床表现、胸部CT及实验室检查,其中实验室检查中的实时荧光RT-PCR和基因组测序为诊断金标准。选择快速、高效的病原学检测方法对提高疾病诊断率、治愈率,降低患病率、死亡率起关键作用。RT-PCR相较于基因组测序具有操作简单、周期短的优点,对新型冠状病毒的确诊尤为重要。本文就不同实时荧光RT-PCR法对新型冠状病毒核酸检测的灵敏度、特异性和实用性等方面进行综述,为临床医生选择更为高效的核酸检测方法提供参考。 展开更多
关键词 新型冠状病毒(SARS-CoV-2) COVID-19 实时荧光rt-pcr 核酸检测
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利用实时荧光RT-PCR方法检测番茄环斑病毒和烟草环斑病毒 被引量：3
16
作者 杨翠云 于翠 +1 位作者 张舒亚 高焕利 《植物检疫》 2006年第S1期31-34,共4页
根据番茄环斑病毒和烟草环斑病毒各分离物CP基因的保守序列分别设计并合成1对引物和1条TaqMan荧光探针,分别建立了ToRSV和TRSV的实时荧光RT-PCR检测方法。该方法具有更加灵敏、特异、快速和简便的特点,在口岸病害检疫中具有广泛的应用... 根据番茄环斑病毒和烟草环斑病毒各分离物CP基因的保守序列分别设计并合成1对引物和1条TaqMan荧光探针,分别建立了ToRSV和TRSV的实时荧光RT-PCR检测方法。该方法具有更加灵敏、特异、快速和简便的特点,在口岸病害检疫中具有广泛的应用前景。 展开更多
关键词 番茄环斑病毒 烟草环斑病毒 实时荧光rt-pcr 检测方法
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多重核酸检测系统同时检测22种呼吸道病原体的应用效果研究 被引量：1
17
作者 徐亮 邱灿林 +4 位作者 徐子强 邓俊兴 丰建国 曾鑫 王衍芬 《现代医药卫生》 2023年第24期4141-4144,共4页
目的采用多重核酸检测系统同时检测22种呼吸道病原体,了解韶关市儿童急性呼吸道感染(ARI)常见病毒病原体的构成情况及流行特征。方法选择粤北人民医院作为监测点,按要求及时采集呼吸道患者标本886份送至韶关市疾病预防控制中心微生物检... 目的采用多重核酸检测系统同时检测22种呼吸道病原体,了解韶关市儿童急性呼吸道感染(ARI)常见病毒病原体的构成情况及流行特征。方法选择粤北人民医院作为监测点,按要求及时采集呼吸道患者标本886份送至韶关市疾病预防控制中心微生物检验室,采用多重核酸检测系统定性检测22种呼吸道病原体,包括新型冠状病毒、冠状病毒HKU1、冠状病毒NL63、冠状病毒229E、冠状病毒OC43、人类偏肺病毒、人鼻病毒/肠道病毒、甲型流感病毒、甲型流感病毒H1、甲型流感病毒H1-2009、甲型流感病毒H3、乙型流感病毒、副流感病毒1型、副流感病毒2型、副流感病毒3型、副流感病毒4型、呼吸道合胞病毒、副百日咳杆菌、百日咳杆菌、肺炎衣原体、肺炎支原体。同时采用传统的荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)对上述样品进行同样项目的检测,对比检测结果准确性。结果886份标本中检出阳性425份,核酸检出率为47.97%(425/886),FluA检出率最高,为15.46%,其他病毒的检出率从高到低依次为鼻病毒(HRV)9.48%、人副流感病毒(HPIV)6.55%、乙型流感病毒(FluB)5.87%、RSV 4.29%、腺病毒(ADV)2.82%、MPV 2.03%、HCoV 1.02%、HBoV 0.45%。FluA、HRV、HPIV、FluB、RSV和MPV的分布有一定季节特征,而ADV、HCoV和HBoV季节特征均不明显。FluA、HPIV、RSV在1~<3岁组检出率均较高;HRV、MPV、HCoV在1~<3岁组检出率均较高;FluB在≥6岁组检出率较高。荧光定量PCR检测结果与上述检测结果一致。结论韶关市儿童急性呼吸道感染(ARI)的病毒病原种类较多,位于前3位依次是FluA、HRV和HPIV。部分病原感染有季节流行特征,与年龄也存在一定相关性。 展开更多
关键词 急性呼吸道感染 实时荧光rt-pcr 多病原检测 病毒病原体
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建立基于TaqMan探针的李坏死环斑病毒实时荧光RT-PCR检测方法 被引量：4
18
作者 朱建裕 黄秋霞 +1 位作者 高必达 朱水芳 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1295-1299,共5页
李坏死环斑病毒(Prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)是世界部分范围内分布的有害生物,亦是我国重点关注的检疫对象。根据PNRSV各株系衣壳蛋白基因的保守序列,设计特异性引物和TaqMan荧光探针,进行了探针、引物和Mg2+浓度等反应体系... 李坏死环斑病毒(Prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)是世界部分范围内分布的有害生物,亦是我国重点关注的检疫对象。根据PNRSV各株系衣壳蛋白基因的保守序列,设计特异性引物和TaqMan荧光探针,进行了探针、引物和Mg2+浓度等反应体系和条件的优化实验,确定最佳的引物浓度为400 nmol/L、探针浓度为333 nmol/L、Mg2+离子浓度为5 mmol/L和dNTPs浓度为0.43 mmol/L时,其灵敏度达23个拷贝数。利用建立的实时荧光RT-PCR检测方法对PNRSV樱桃分离物进行了成功检测。这个方法具有灵敏、准确、简便、快速的特点,适合于李坏死环斑病毒的检测和鉴定。 展开更多
关键词 李坏死环斑病毒 分子检测 实时荧光rt-pcr
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一步法实时RT-PCR快速检测手足口病肠道病毒 被引量：4
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作者 林裕龙 温坤 +3 位作者 潘玉先 王压娣 晋晶 车小燕 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期169-171,共3页
目的探讨实时荧光RT-PCR在手足口病(HFMD)肠道病毒快速检测中的应用价值。方法以实时荧光RT-PCR检测64例临床初诊为HFMD患儿标本中总肠道病毒(EV)、柯萨奇病毒A组16型(CA16)和肠道病毒71型(EV71),用RD细胞、Vero细胞和Hep-2细胞进行病... 目的探讨实时荧光RT-PCR在手足口病(HFMD)肠道病毒快速检测中的应用价值。方法以实时荧光RT-PCR检测64例临床初诊为HFMD患儿标本中总肠道病毒(EV)、柯萨奇病毒A组16型(CA16)和肠道病毒71型(EV71),用RD细胞、Vero细胞和Hep-2细胞进行病毒分离培养,以免疫荧光法鉴别分离培养的EV71。结果64例标本中,EV(+)/EV71(+)为23.4%(15/64)、EV(+)/CA16(+)为48.4%(31/64)、EV(+)/EV71(-)/CA16(-)为10.9%(7/64)、EV(-)/EV71(-)/CA16(-)为17.2%(11/64)。实时荧光RT-PCR检测为EV71且病毒分离培养出现细胞病变效应的培养细胞经抗EV71单克隆抗体免疫荧光检测均为阳性,未发生细胞病变效应或非EV71的培养细胞均为阴性。结论实时荧光RT-PCR检测HFMD病原具有特异和快速等优点,与病毒分离培养具有较高的一致性,可用于手足口病的早期诊断和鉴别诊断。 展开更多
关键词 手足口病 实时荧光rt-pcr 肠道病毒 免疫荧光检测
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新型冠状病毒快速抗原检测与核酸检测结果一致与不一致因素探讨
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作者 郝铮 杨洪 +2 位作者 汪轩羽 翟振翔 洪燕英 《标记免疫分析与临床》 CAS 2023年第2期233-236,共4页
目的研究发热患者新型冠状病毒快速抗原筛查(以下简称“抗原检测”)与新型冠状病毒核酸检测(以下简称“核酸检测”)的一致性,探讨其不一致的因素。方法回顾2022年11月28日至2022年12月11日本院发热门诊的发热患者158例(新冠核酸阴性患... 目的研究发热患者新型冠状病毒快速抗原筛查(以下简称“抗原检测”)与新型冠状病毒核酸检测(以下简称“核酸检测”)的一致性,探讨其不一致的因素。方法回顾2022年11月28日至2022年12月11日本院发热门诊的发热患者158例(新冠核酸阴性患者82例,新冠核酸阳性患者76例),对每位患者采集鼻咽拭子,用胶体金免疫层析法进行抗原检测;同时在1支胍盐灭活的病毒采样管内采集鼻咽和口咽两支拭子,采用实时荧光定量反转录PCR方法检测新型冠状病毒核酸,评价抗原检测结果与核酸循环阈(Ct)值的相关性;按照Ct值对样本分组(Ct<25、25≤Ct≤30、30<Ct<35),进行统计分析;再对Ct<25且抗原检测为阴性的10例样本进行后序追踪分析。结果发热0.5~5d,体温在37.5~39.8℃的158例患者,82例抗原检测与核酸检测均阴性,抗原检测与核酸检测的一致性为100%;76例核酸检测阳性患者,抗原检测与核酸检测的一致性为75.7%(54/76),其中核酸检测Ct值<25,抗原检测的阳性检出率为82.1%(46/56),Ct值25≤Ct≤30,抗原检测的阳性检出率为66.6%(8/12),Ct值30<Ct<35,抗原检测的阳性检出率为0%(0/8)。结论新型冠状病毒感染以核酸检测结果为金标准,胶体金法抗原检测阳性,可作为发热患者新型冠状病毒感染快速辅助诊断方法。抗原检测阳性检出率与病毒核酸载量成正相关。抗原检测阴性,不能完全排除新型冠状病毒感染,应采取核酸检测以明确诊断。 展开更多
关键词 新型冠状病毒 抗原检测 实时荧光rt-pcr 奥密克戎BF.7变异株
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