Racl／MAPK／ERK通路在大鼠呼吸机相关性肺损伤中的作用及机制 被引量：10

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作者 陶广华 潘灵辉 +3 位作者 荆忍 林飞 戴惠军 葛万运 《中华危重病急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期249-254,共6页

目的探讨Ras相关C3肉毒素底物1／丝裂素活化蛋白激酶，细胞外信号调节激酶（Rac1／MAPK／ERK）信号通路在大鼠呼吸机相关性肺损伤（VILI）中的作用及其机制。方法将30只SD大鼠按随机数字表法分为自主呼吸组、正常潮气量（VT）组和大VT... 目的探讨Ras相关C3肉毒素底物1／丝裂素活化蛋白激酶，细胞外信号调节激酶（Rac1／MAPK／ERK）信号通路在大鼠呼吸机相关性肺损伤（VILI）中的作用及其机制。方法将30只SD大鼠按随机数字表法分为自主呼吸组、正常潮气量（VT）组和大VT组，每组10只。自主呼吸组大鼠保留自主呼吸；正常VT组和大VT组大鼠均行气管切开后气管插管，双肺分别给予6mL/kg和40mL／kg VT的机械通气并维持麻醉。通气4h后处死大鼠取心脏血、支气管肺泡灌洗液（BALF）和肺组织。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定血清和BALF中白细胞介素（IL-1β、IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、髓过氧化物酶（MPO）及巨噬细胞炎症因子-2（MIP-2）水平。测定肺组织湿／干重比值（W／D）；苏木素-伊红（HE）染色后，光镜下观察肺组织病理学改变，并进行病理学评分；透射电镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞（AECⅡ）超微结构改变；采用免疫组化法检测肺组织磷酸化细胞外信号调节激酶（p-ERK）阳性表达，采用免疫荧光技术检测肺组织Rac1和F-肌动蛋白（F-actin）的阳性表达；采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（RT-qPCR）检测肺组织ERK及Rael的mRNA表达；采用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测肺组织Rac1、p-ERK及F-aetin的蛋白表达。结果①与自主呼吸组比较，机械通气两组肺W/D比值均明显升高，以大VT组升高更为显著（6．64±0．88比1．79±0．36，P〈0．01）。②自主呼吸组肺组织及AECⅡ超微结构无明显病理学改变。正常VT组肺组织有轻微水肿及少量炎性细胞浸润；AECⅡ板层小体较少，细胞膜绒毛分布欠均匀。大VT组肺组织明显水肿，肺间隔增宽，肺泡充血，伴有大量炎性细胞浸润，肺泡结构紊乱；AECⅡ形态不规则，核固缩明显，胞质中板层小体数量减少且分布不均。大VT组肺组织病理学评分� 展开更多

关键词 呼吸机相关性肺损伤 ras相关c3肉毒素底物1 细胞外信号调节激酶 F-肌动蛋白 细胞骨架

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Ras相关C3肉毒杆菌毒素底物1在肺部疾病中作用及机制的研究进展

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作者 许文霞 方育 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期1338-1344,共7页

Ras相关C3肉毒杆菌毒素底物1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1,RAC1)是Ras GTPase超家族的重要成员,在细胞的运动、增殖、黏附等方面发挥核心作用,同时还参与调节血管通透性以及细胞屏障功能。近年来,RAC1在多种肺部疾病发... Ras相关C3肉毒杆菌毒素底物1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1,RAC1)是Ras GTPase超家族的重要成员,在细胞的运动、增殖、黏附等方面发挥核心作用,同时还参与调节血管通透性以及细胞屏障功能。近年来,RAC1在多种肺部疾病发生、发展过程的作用逐渐受到关注,并逐渐成为肺部疾病研究的新方向。本文系统阐述了RAC1的生物学特性并总结了其在肺肿瘤、慢性阻塞性肺疾病、肺损伤和动脉型肺动脉高压中的功能及分子机制,以期为肺部疾病的治疗提供新思路。 展开更多

关键词 ras相关c3肉毒杆菌毒素底物1 肺癌 慢性阻塞性肺疾病 肺损伤 动脉型肺动脉高压

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川芎嗪对小鼠脑缺血再灌注损伤的影响 被引量：6

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作者 喻志慧 黎良达 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期1648-1652,共5页

目的研究川芎嗪缓解小鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)的作用及其机制。方法(1)按照体重将BALB/C小鼠随机分为5组:假手术组,模型组和低、中、高3个剂量实验组。用改良尼龙线栓塞法制备小鼠CIRI模型。造模后,低、中、高3个剂量实验组分别给予... 目的研究川芎嗪缓解小鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)的作用及其机制。方法(1)按照体重将BALB/C小鼠随机分为5组:假手术组,模型组和低、中、高3个剂量实验组。用改良尼龙线栓塞法制备小鼠CIRI模型。造模后,低、中、高3个剂量实验组分别给予川芎嗪1,2,4 mg·kg^-1,均连续干预15 d。计算小鼠的脑梗死面积百分比,用试剂盒法检测丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。(2)将HT22细胞分为11组:空白对照组(不做处理),H2 O2组、低、中、高3个剂量实验组(5,10,20 mg·L^-1川芎嗪分别处理24 h)和第1干预组至第6干预组。第1干预组至第3干预组分别转染Lipofectamine 2000(NC)、mimics和inhibitor,第4干预组至第6干预组分别加入过表达Ras相关的C3肉毒素底物1(RAC1)、敲低RAC1、慢病毒处理和敲低RAC1后转染inhibitor。除空白对照组外,其他细胞经120μmol·L^-1 H2O2处理0.5 h。以流式细胞仪检测细胞凋亡率和活性氧(ROS)相对表达水平;用蛋白质印迹法检测RAC1蛋白表达水平。结果(1)假手术组、模型组和低、高2个剂量实验组的小鼠脑梗死面积百分率分别为(0.41±0.15)%,(35.22±2.49)%,(26.58±2.13)%和(14.26±1.57%);这4组的MDA分别为(0.83±0.11),(1.95±0.36),(1.51±0.32)和(1.13±0.22)nmol·mg^-1;这4组的SOD分别为(92.13±13.58),(41.37±5.64),(61.05±8.97)和(79.48±9.80)NU·mg^-1,模型组与假手组相比或者低、高2个剂量实验组与模型组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。(2)空白对照组、H2O2组和低、高2个剂量实验组的ROS相对表达水平分别为(0.10±0.02)×10-2,1.00±0.14,0.71±0.08和0.38±0.05;H2O2组与空白对照组相比或者低、高剂量2个实验组与H2 O2组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。第1干预组至第3干预组的RAC1蛋白表达水平分别为1.00±0.11,0.34±0.04和2.07±0.15,第2,3干预组与第1干预组比较或第3干预组与第2干预组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);空白对� 展开更多

关键词 川芎嗪 脑缺血再灌注损伤 ras相关的c3肉毒素底物1 氧化应激

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HIF-1α和Rac1在肝细胞癌中的表达及其意义 被引量：5

4

作者 王云雀 黄湘壹 《中国现代医学杂志》 CAS 北大核心 2017年第20期76-81,共6页

目的探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和Ras相关的C3肉毒底物1(Racl)在肝细胞癌中的表达及其临床意义。方法选取正常肝组织20例、肝硬化组织42例及肝细胞癌组织58例,应用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法检测组织中HIF-1... 目的探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和Ras相关的C3肉毒底物1(Racl)在肝细胞癌中的表达及其临床意义。方法选取正常肝组织20例、肝硬化组织42例及肝细胞癌组织58例,应用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法检测组织中HIF-1α和Racl蛋白的表达,分析其表达与临床病理特征的关系,并结合临床资料进行分析。结果 HIF-1α主要为胞核或胞浆着色,Rac1为胞浆着色。HIF-1α蛋白在正常肝组织中的阳性表达率为0.0%(0/20),肝硬化组织为45.2%(19/42),原发性肝癌组织为81.0%(47/58),其中高分化阳性表达率为53.3%,中分化为83.3%,低分化为100.0%。HIF-1α蛋白在原发性肝癌发生、发展中的表达依次升高(P<0.05)。且原发性肝癌组织中HIF-1α蛋白表达与淋巴结转移有关。Rac1蛋白表达在正常肝组织中的阳性表达率为0.0%(0/20),癌旁肝硬化组织为40.5%(17/42),原发性肝癌组织为77.6%(45/58),其中高分化阳性表达率为60%,中分化为73%,低分化为94.7%。Rac1蛋白在肝癌发生、发展中的表达依次升高(P<0.05)。肝癌组织Rac1蛋白表达与淋巴结转移有关。HIF-1α蛋白的阳性表达率与Rac1蛋白的阳性表达率呈正相关(P<0.05)。结论 HIF-1α、Rac1与原发性肝癌癌变及进展有关,联合检测两者蛋白的表达有助于判断肝癌的病变程度及预后。 展开更多

关键词 原发性肝癌 缺氧诱导因子-1Α ras相关的c3肉毒底物1 免疫组织化学法

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小GTP酶Rac1对肺癌A549细胞凋亡和吞噬作用的影响 被引量：5

5

作者 齐晨 彭静静 +3 位作者 张淡宜 苏兆亮 王胜军 许化溪 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2017年第2期93-97,共5页

目的:分析肺癌A549细胞Rac1的表达水平及其对细胞吞噬功能的影响。方法:采用姜黄素诱导A549细胞凋亡;采用流式细胞术检测Rac1抑制剂对A549细胞凋亡的影响;将A549细胞与同系凋亡细胞共培养,应用荧光显微镜技术观察Rac1下调对A549细胞清... 目的:分析肺癌A549细胞Rac1的表达水平及其对细胞吞噬功能的影响。方法:采用姜黄素诱导A549细胞凋亡;采用流式细胞术检测Rac1抑制剂对A549细胞凋亡的影响;将A549细胞与同系凋亡细胞共培养,应用荧光显微镜技术观察Rac1下调对A549细胞清除凋亡细胞能力的影响。用qRT-PCR检测细胞Rac1 mRNA表达水平。结果:流式双染和Hoechst染色荧光显微镜观察结果显示,Rac1抑制剂能够明显增强姜黄素诱导的A549细胞凋亡,凋亡细胞率相对于未加入Rac1抑制剂时显著上升,且呈现与Rac1抑制剂的剂量依赖特性。此外,Rac1抑制剂能明显下调A549细胞的吞噬能力。结论:Rac1可抑制肺癌A549细胞的凋亡,增强其吞噬功能。 展开更多

关键词 肺癌A549细胞 ras相关c3肉毒素底物1 细胞凋亡 细胞吞噬

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Rac1促进异质型细胞叠套结构的形成 被引量：1

6

作者 胡涛 冯鹏飞 +7 位作者 李浩源 周鲁林 牛祖彪 黄一诺 王小宁 王晨曦 刘惠 吴成君 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期4123-4134,共12页

异质型细胞叠套结构(heterotypic cell-in-cell structure,heCICs)与肿瘤发生和发展密切相关,在生命科学研究中的重要性逐渐显露。Ras相关C3肉毒毒素底物1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1,Rac1)属于经典的Rho GTP酶,在细... 异质型细胞叠套结构(heterotypic cell-in-cell structure,heCICs)与肿瘤发生和发展密切相关,在生命科学研究中的重要性逐渐显露。Ras相关C3肉毒毒素底物1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1,Rac1)属于经典的Rho GTP酶,在细胞骨架以及细胞运动中起到关键调控作用。为研究Rac1在he CICs形成中的作用和机制,利用活细胞示踪剂cell-tracker分别标记肿瘤细胞和免疫杀伤细胞,建立heCICs模型。利用Rac1抑制剂NSC23766抑制Rac1活性后发现,肿瘤细胞与免疫杀伤细胞之间的heCICs形成率显著降低。通过分子克隆技术获得重组质粒pQCXIP-Rac1-EGFP,进行病毒包装感染肿瘤细胞获得Rac1过表达细胞系。进一步检测Rac1过表达对heCICs形成能力的影响,结果表明,Rac1表达水平升高后,heCICs形成率显著升高。本研究显示Rac1具有促进he CICs形成的作用,这为Rac1作为细胞叠套相关疾病的药物治疗靶点奠定了研究基础。 展开更多

关键词 异质型细胞叠套结构 肿瘤发生 ras相关c3肉毒毒素底物1 免疫治疗

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电针对佐剂性关节炎大鼠膝关节滑膜VEGF/Vav2/Rac1信号通路的影响 被引量：1

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作者 孙晓莹 龙轶映 +6 位作者 赵凌云 吴庆泽 瞿启睿 祁芳 刘梨 艾坤 张亮 《湖南中医药大学学报》 CAS 2023年第10期1830-1837,共8页

目的观察电针对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠膝关节滑膜组织内血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、鸟嘌呤核苷酸交换因子2(vav guanine nucleotide exchange factor 2,Vav2)和Ras相关C3肉毒素底物... 目的观察电针对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠膝关节滑膜组织内血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、鸟嘌呤核苷酸交换因子2(vav guanine nucleotide exchange factor 2,Vav2)和Ras相关C3肉毒素底物1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1,Rac1)表达的影响,探究电针干预类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)血管新生的可能机制。方法将40只SPF级SD雄性大鼠随机分成4组(空白组、模型组、西药组和电针组),每组10只。除空白组,其他3组采用尾根部皮下注射完全弗氏佐剂制成AA大鼠模型。造模后第2天开始干预,电针组进行电针干预,以左侧足三里与关元穴配穴,右侧足三里与同侧阿是穴配穴,每次20 min,每天干预1次,共干预21次;西药组给予甲氨蝶呤灌胃给药,每周1次,共干预3次。观察各组体质量、关节红肿等一般情况,每3天测量1次大鼠后双侧足跖容积。干预结束后,通过大鼠一般情况、体质量、足跖容积分析各组大鼠足跖肿胀程度,HE染色观察AA大鼠膝关节滑膜组织的病理形态学,免疫组织化学法检测膝关节滑膜组织内CD31表达变化,Western blot法检测大鼠膝关节滑膜组织VEGF、Vav2和Rac1蛋白表达量。结果与空白组相比,模型组大鼠第21天足跖容积均明显增大(P<0.01),膝关节滑膜组织出现显著性病理改变,CD31表达量明显升高(P<0.05),VEGF、Vav2、Rac1蛋白表达量显著升高(P<0.01)。与模型组相比,西药组足跖容积在第21天显著减小(P<0.01),膝关节滑膜组织病理改变明显改善,VEGF、Vav2表达量明显下降(P<0.05),Rac1蛋白表达量显著下降(P<0.01);电针组足跖容积在第21天显著减小(P<0.01),膝关节滑膜组织病理改变明显改善,VEGF、Rac1表达量明显下降(P<0.05),Vav2蛋白表达量显著下降(P<0.01)。结论电针改善RA的作用机制可能与抑制VEGF/Vav2/Rac1信号通路,进而抑制血管新生有关。 展开更多

关键词 佐剂性关节炎 电针 血管内皮生长因子 鸟嘌呤核苷酸交换因子2 ras相关c3肉毒素底物1 血管新生

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PSD-95在七氟烷麻醉致新生大鼠远期学习记忆功能损害机制中的作用 被引量：5

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作者 杨宝锋 王婕 +3 位作者 李长生 刘俊鹏 缪长虹 卢锡华 《中华行为医学与脑科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期774-780,共7页

目的探讨突触后致密物-95(postsynaptic density-95,PSD-95)在七氟烷麻醉致新生大鼠远期学习记忆功能损害机制中的作用。方法选择SPF级鼠龄7 d的SD大鼠54只,按照随机数字法分为3组:对照组(暴露于空气)、模型组(暴露于2.1%的七氟烷,4 h/d... 目的探讨突触后致密物-95(postsynaptic density-95,PSD-95)在七氟烷麻醉致新生大鼠远期学习记忆功能损害机制中的作用。方法选择SPF级鼠龄7 d的SD大鼠54只,按照随机数字法分为3组:对照组(暴露于空气)、模型组(暴露于2.1%的七氟烷,4 h/d,连续3 d)、PSD-95抑制剂组(吸入七氟烷+腹腔注射NA-1,连续5 d),每组18只。Morris水迷宫实验和新异物体识别实验检测各组大鼠的视空间学习记忆和识别记忆能力;RT-qPCR检测大鼠海马组织kalirin、Rac1和PSD-95的mRNA水平;Western blot检测大鼠海马组织kalirin、Rac1、PSD-95及凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2和Bax的表达;免疫组化检测海马组织kalirin和Rac1的表达水平。采用SPSS 23.0软件对数据进行统计分析,采用重复测量方差分析、单因素方差分析进行组间比较。结果重复测量方差分析显示,在水迷宫实验中三组大鼠寻找平台潜伏期、游泳距离的组间和时间交互作用显著,均差异有统计学意义(F时间×组别=36.539,41.548;均P<0.01)。简单效应分析显示,模型组中第2~6天的平台潜伏期及游泳距离均长于对照组(第2~6天平台潜伏期:t=14.039,17.147,13.155,13.831,27.247,均P<0.01;第2~6天游泳距离:t=10.122,20.987,7.267,10.011,8.121,均P<0.01)。与模型组比较,PSD-95抑制剂组大鼠在2~6 d的平台潜伏期延长(t=7.948,14.768,11.582,12.832,24.346;均P<0.01),游泳距离增加(t=8.235,24.325,11.234,12.031,7.036;均P<0.01)。新物体识别实验发现,模型组中的新物体探索时间显著长于对照组[(21.30±2.27)s,(19.21±1.42)s,t=1.843,P<0.01],PSD-95抑制剂组中的新物体探索时间[(26.83±2.13)s]明显长于模型组(t=4.844,P<0.01)。模型组中的新异物体差异指数显著低于对照组[(0.41±0.12),(0.59±0.10),t=3.416,P<0.01],PSD-95抑制剂组中的新异物体差异指数[(0.37±0.08)]明显低于模型组(t=0.696,P<0.05)。qRT-PCR结果发现,模型组中的Rac1、kalirin和PSD-95 mRNA表达均低于对照组(t=9.969,3.954 展开更多

关键词 突触后致密物-95 七氟烷 远期学习记忆 人钾蛋白 ras相关c3肉毒素底物1

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PI3K/Akt信号通路参与LPS诱导大鼠肺微血管内皮细胞表达RACK1及rac1 被引量：4

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作者 尤青海 王巾枚 +2 位作者 孙耕耘 蒋丽娟 李文妹 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2020年第1期41-45,共5页

目的探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路对脂多糖(LPS)诱导大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)表达活化的蛋白激酶C受体1(RACK1)和ras相关C3肉毒菌毒物底物1(rac1)的影响。方法体外培养大鼠PMVEC:①LPS量效组:0、... 目的探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路对脂多糖(LPS)诱导大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)表达活化的蛋白激酶C受体1(RACK1)和ras相关C3肉毒菌毒物底物1(rac1)的影响。方法体外培养大鼠PMVEC:①LPS量效组:0、1、5、10 mg/L LPS与大鼠PMVEC孵育12 h;②LPS时效组:10 mg/L LPS与PMVEC孵育0、3、6、8、12、24 h;③IGF-1时效组:100 ng/ml IGF-1与PMVEC孵育0、3、6、8、12、24 h;④LPS+LY294002组:100 ng/ml LY294002预孵育PMVEC 1 h后加入10 mg/L LPS继续孵育12 h,设空白组、LPS组和LY294002组为对照。所有干预结束后Western blot法检测RACK1、rac1及p-Akt蛋白表达。结果①LPS量效组:RACK1、rac1及p-Akt蛋白表达量均呈浓度依赖性增加,各蛋白组组内比较差异均有统计学意义:(F=120.455,P<0.001)、(F=165.813,P<0.001)及(F=309.346,P<0.001)。②LPS时效组:RACK1和rac1蛋白表达呈时间依赖性增加,LPS刺激24 h后达最高,各蛋白组组内比较差异均有统计学意义:(F=454.034,P<0.001)和(F=423.630,P<0.001);p-Akt表达自3 h(0.460±0.089)上调,12 h达最高(2.022±0.244),24 h(1.264±0.074)仍高于0 h(0.237±0.063),组间比较差异有统计学意义(F=137.726,P<0.001)。③IGF-1时效组:IGF-1诱导PMVEC表达RACK1、rac1及p-Akt呈时间依赖性增加,各组组间比较差异有统计学意义(F=188.293,P<0.001)、(F=115.071,P<0.001)及(F=60.175,P<0.001)。④LY294002干预组:LPS+LY294002作用PMVEC后:RACK1蛋白表达量较LPS组下调[(0.732±0.137)vs(1.498±0.167),P<0.001];rac1蛋白表达量较LPS组下调[(0.758±0.084)vs(1.384±0.170),P<0.001];p-Akt蛋白表达量较LPS组下调[(0.492±0.148)vs(1.106±0.219),P<0.001]。结论 PI3K/Akt信号通路通过干预RACK1和rac1表达,参与LPS致PMVEC损伤。 展开更多

关键词 肺微血管内皮细胞 活化的蛋白激酶c受体1 ras相关c3肉毒菌毒物底物1 磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶 急性呼吸窘迫综合征

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Ras相关的C3肉毒素底物1蛋白在胃癌组织中的表达和分布以及与胃癌进展的关系 被引量：4

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作者 苏龙 续薇 +5 位作者 闫光志 罗薇 王英丽 陈爽 张阳 刘立华 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期676-680,共5页

目的观察胃癌组织中Ras相关的c3肉毒素底物1（Racl）蛋白的表达和分布，探讨Racl蛋白的定位与胃癌进展之间的关系。方法采用免疫组化染色法检测48例胃癌患者肿瘤组织和癌旁组织中Racl蛋白的表达和分布，采用实时荧光PCR法检测48例胃癌... 目的观察胃癌组织中Ras相关的c3肉毒素底物1（Racl）蛋白的表达和分布，探讨Racl蛋白的定位与胃癌进展之间的关系。方法采用免疫组化染色法检测48例胃癌患者肿瘤组织和癌旁组织中Racl蛋白的表达和分布，采用实时荧光PCR法检测48例胃癌组织中T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1（Tiaral）和RaclmRNA的表达水平。结果48例胃癌组织中，Racl蛋白阳性表达38例（79．2％），其中31例（64．6％）定位于细胞核。48例癌旁组织中，Racl蛋白阳性表达9例（18．8％），全部定位于细胞质。Racl蛋白在胃癌和癌旁组织中的阳性表达率差异有统计学意义（u=6．43，P〈0．01），Racl蛋白在胃癌和癌旁组织中的核定位率差异亦有统计学意义（χ2=45．795，P〈0．001）。实时荧光PCR检测结果显示，Racl蛋白核定位胃癌组织中Racl和Tiaml mRNA的阳性表达率和中位数均明显高于Racl蛋白非核定位组（均P〈0．05）。Racl蛋白的细胞核定位与胃癌的分化程度、T分期以及局部淋巴结转移相关。结论在多数胃癌组织中，Racl蛋白定位于细胞核，Racl蛋白的核定位可能是Tiaml／Racl信号通路异常活化的表现，也可能预示着胃癌侵袭能力的增强。 展开更多

关键词 ras相关的c3肉毒素底物1 免疫组织化学 聚合酶链反应 胃肿瘤 细胞核

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miR-7a-5p负调控Rac1表达参与HepG2细胞胰岛素抵抗

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作者 汪丽娟 黄琛 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1037-1042,共6页

目的:探讨软脂酸诱导胰岛素抵抗的HepG2细胞中微小RNA-7a-5p(microRNA-7a-5p,miR-7a-5p)是否通过调控Ras相关C3肉毒毒素底物1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1,Rac1)表达参与细胞胰岛素抵抗。方法:应用生物信息学分析预测... 目的:探讨软脂酸诱导胰岛素抵抗的HepG2细胞中微小RNA-7a-5p(microRNA-7a-5p,miR-7a-5p)是否通过调控Ras相关C3肉毒毒素底物1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1,Rac1)表达参与细胞胰岛素抵抗。方法:应用生物信息学分析预测其下游靶分子,构建含Rac13'端非翻译区的野生型及突变型hsa-Rac1萤光素酶报告质粒,与miR-7a-5p表达慢病毒或对照空载慢病毒共转染293T细胞,检测萤光素酶活性。HepG2细胞分为软脂酸诱导的胰岛素抵抗组和正常对照组,RT-qPCR分析两组细胞miR-RNA-7a-5p的表达,Western blot分析下游靶分子蛋白的表达。HepG2细胞分为干扰慢病毒转染组和对照慢病毒转染组,转染之后,软脂酸诱导两组细胞胰岛素抵抗,分析两组HepG2细胞中脂质堆积及葡萄糖消耗情况。结果:生物信息学预测Rac1为miR-7a-5p下游分子。野生型hsa-Rac1萤光素酶报告质粒与miR-7a-5p表达慢病毒共转染后,萤光素酶较对照组显著降低(P<0.05)。胰岛素抵抗的HepG2与对照细胞组相比,miR-7a-5p表达显著下调(P<0.05),Rac1蛋白表达显著上调(P<0.05)。较对照相比,Rac1 mRNA的表达抑制增加了胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗(P<0.05),降低了胞质内脂质堆积(P<0.05)。结论:miR-7a-5p的一个潜在靶点是Rac1。miR-7a-5p通过负调节Rac1表达参与软脂酸诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗。 展开更多

关键词 胰岛素抵抗 微小RNA-7a-5p ras相关c3肉毒毒素底物1 HEPG2细胞

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胃癌组织中RAC1的表达变化与临床病理特征及预后的关系 被引量：1

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作者 李影 黄幼生 +1 位作者 解娜 翁阳 《山东医药》 CAS 2022年第19期1-6,共6页

目的探讨胃癌组织中RAC1的表达变化与临床病理特征及预后的关系。方法从癌症基因组图谱(TCGA)下载RNA表达谱和胃癌患者的临床数据,纳入胃癌样本386份,其中配对样本27对,分析RAC1 mRNA的表达与患者临床病理特征及预后的关系。收集62份胃... 目的探讨胃癌组织中RAC1的表达变化与临床病理特征及预后的关系。方法从癌症基因组图谱(TCGA)下载RNA表达谱和胃癌患者的临床数据,纳入胃癌样本386份,其中配对样本27对,分析RAC1 mRNA的表达与患者临床病理特征及预后的关系。收集62份胃癌及其配对正常胃黏膜石蜡标本,制备组织芯片;购买组织芯片1张,包含90份胃癌及其配对的癌旁正常胃黏膜组织样本。用RNAscope技术检测芯片中RAC1 mRNA表达,用免疫组化法检测胃癌及其配对正常胃黏膜组织活性RAC1(RAC1-GTP)蛋白表达,分析RAC1 mRNA及RAC1-GTP蛋白表达与患者临床病理特征、预后的关系。结果TCGA数据库中胃癌组织中RAC1 mRNA相对表达量高于癌旁正常胃黏膜组织(P<0.05),RAC1 mRNA表达变化与胃癌发病部位、浸润深度有关(P均<0.05),与生存期无关(P>0.05)。胃癌组织中RAC1 mRNA高表达率高于癌旁正常胃黏膜组织(P<0.05),RAC1 mRNA的表达变化与患者性别、年龄及肿瘤发生部位、最大径、分化程度、浸润深度、病理分期、脉管侵犯、淋巴结转移均无关(P均>0.05)。胃癌组织中RAC1-GTP蛋白高表达率高于癌旁正常胃黏膜组织(P<0.05),RAC1-GTP蛋白表达变化与胃癌浸润深度、病理分期、脉管侵犯、淋巴结转移有关(P均<0.05)。RAC1-GTP蛋白低表达、高表达患者的中位生存期分别为80、20个月,二者比较差异有统计学意义(P<0.05)。单因素分析显示,胃癌患者预后与肿瘤分化程度、浸润深度、病理分期、脉管侵犯、淋巴结转移及RAC1-GTP蛋白表达有关(P均<0.05);多因素Cox回归分析显示,肿瘤病理分期高、RAC1-GTP蛋白高表达是胃癌预后不良的独立风险因素(P均<0.05)。结论胃癌组织中RAC1 mRNA及RAC1-GTP高表达,RAC1-GTP可能参与胃癌进展,影响患者预后。 展开更多

关键词 胃癌 ras相关的c3肉毒素底物1 活性ras相关的c3肉毒素底物1

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miR-101对结直肠癌细胞放疗敏感性的影响及机制探讨 被引量：3

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作者 刘燕 刘钧 +4 位作者 何欣蓉 陈筱莉 蹇顺海 张超 李学农 《山东医药》 CAS 2018年第18期1-4,共4页

目的观察miR-101对结直肠癌细胞放疗敏感性的影响,并探讨其分子机制。方法取结直肠癌细胞株SW620、SW480,稳定过表达miR-101细胞株SW620(miR101-SW620)及其阴性对照GV209-SW620,瞬时沉默miR-101表达细胞株SW480(SW480-miR101)及其阴性对... 目的观察miR-101对结直肠癌细胞放疗敏感性的影响,并探讨其分子机制。方法取结直肠癌细胞株SW620、SW480,稳定过表达miR-101细胞株SW620(miR101-SW620)及其阴性对照GV209-SW620,瞬时沉默miR-101表达细胞株SW480(SW480-miR101)及其阴性对照SW480-NC,采用Western blotting法检测细胞中miR-101靶基因Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac1)及其下游关键蛋白细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)、人Ras同源基因家族成员A(Rho A)。取SW620、GV209-SW620、miR101-SW620细胞,分别给予0、2、4、6、8 Gy射线处理24 h;Western blotting法检测DNA损伤标志性蛋白γ-H2AX、细胞凋亡标志蛋白Caspase-3判断细胞放疗敏感性变化,同时检测细胞Rac1、Cdc42、Rho A蛋白。结果与SW620、GV209-SW620细胞比较,miR101-SW620细胞Rac1、Cdc42、Rho A蛋白表达降低(P均﹤0.05);与SW480、SW480-NC细胞比较,SW480-miR101细胞Rac1、Cdc42、Rho A蛋白表达均增高(P均﹤0.05)。随着照射剂量增加,结直肠癌细胞γ-H2AX、Caspase-3表达均增高,而Rac1、Rho A、Cdc42蛋白表达均降低(P均﹤0.05);与同等照射剂量下SW620、GV209-SW620细胞比较,miR101-SW620细胞γ-H2AX、Caspase-3蛋白表达均增高,而Rac1、Rho A、Cdc42蛋白表达均降低(P均﹤0.05)。结论 miR-101可能通过调控Rac1/Cdc42/Rho A信号通路增强结直肠癌细胞对放疗的敏感性。 展开更多

关键词 结直肠癌 放射治疗 微小核糖核酸-101 ras相关的c3肉毒素底物1 细胞分裂周期蛋白42 人ras同源基因家族成员A

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M3型乙酰胆碱受体对心脏成纤维细胞α-平滑肌肌动蛋白的表达及机制 被引量：3

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作者 焦周阳 吴静 +4 位作者 刘超 文冰 付国伟 杜心灵 赵文增 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1950-1952,共3页

目的探讨M3型乙酰胆碱受体（M3R）对心脏成纤维细胞α-平滑肌肌动蛋白（IX-SMA）的表达影响及其机制。方法体外分离培养大鼠心脏成纤维细胞，Western blot法测定仅．SMA、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38）、磷酸化p38（p-p38）和Ras相关c3... 目的探讨M3型乙酰胆碱受体（M3R）对心脏成纤维细胞α-平滑肌肌动蛋白（IX-SMA）的表达影响及其机制。方法体外分离培养大鼠心脏成纤维细胞，Western blot法测定仅．SMA、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38）、磷酸化p38（p-p38）和Ras相关c3肉毒素底物1（Racl）的表达；谷胱甘肽巯基转移酶沉淀实验（GSTPull．down）法检测Racl的活性。结果乙酰胆碱（1．0×10-7、1．0×10-1、1．0×10-5mol／L，2h）呈浓度依赖性促进α-SMA的表达上调（P〈0．05），M3R特异性阻断剂4-二苯乙酰氧基-N-甲基-哌啶（4-DAMP）抑制乙酰胆碱（Ach）介导的α--SMA表达上调（1．432±0．093比2．534±0．241，P〈0．05）；M3R促进p-p38表达上调（171％，P〈0．05），p38特异性抑制剂SB203580抑制M3R介导的α-SMA表达上调（1.614±0．128比2．873±0．193，P〈0．05）；M3R活化Racl（182％，P〈0．05），Racl特异性抑制剂NSC23766抑制M3R介导的p-p38表达上调（1．301±0．154比1．821±0．113，P〈0．05）。结论M3R通过激活Rael-p38信号通路促进心脏成纤维细胞α-SMA的表达。 展开更多

关键词 M3型乙酰胆碱受体 Α-平滑肌肌动蛋白 P38丝裂原活化蛋白激酶 ras相关c3肉毒素底物1

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Rac1和NF-κBp65的表达与非小细胞肺癌转移及预后的关系 被引量：3

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作者 姚培宇 张逊 +3 位作者 徐美林 王菁 韩洪利 徐医军 《天津医药》 CAS 北大核心 2013年第6期556-560,共5页

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac1)和核转录因子(NF)-κBp65的表达及其临床意义。方法采用免疫组化Super Pic TureTM Polymer二步法,检测112例石蜡包埋的NSCLC组织及112例相同患者石蜡包埋的正常余肺组织Rac1... 目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac1)和核转录因子(NF)-κBp65的表达及其临床意义。方法采用免疫组化Super Pic TureTM Polymer二步法,检测112例石蜡包埋的NSCLC组织及112例相同患者石蜡包埋的正常余肺组织Rac1和NF-κBp65的表达。结果 NSCLC组织中Rac1及NF-κBp65的表达明显高于正常余肺组织,且两者的表达强度在NSCLC组织中呈正相关(r=0.549,P<0.001)。在肿瘤不同分化程度、TNM分期及淋巴结转移情况的NSCLC患者的Rac1的表达强度差异有统计学意义;在不同TNM分期及淋巴结转移情况的NSCLC患者的NF-κBp65的表达强度差异有统计学意义;而在低分化、高分期及有淋巴结转移的NSCLC患者组织中,2种指标协同表达的现象更容易出现,且差异有统计学意义(P<0.05)。Rac1高表达组的3年生存率(35.29%)低于低表达组(79.07%);NF-κBp65高表达组的3年生存率(40.28%)低于低表达组(74.36%);Rac1与NF-κBp65共同高表达组的3年生存率(37.70%)低于仅1种蛋白高表达(61.11%)及共同低表达者(81.25%)。Rac1和NF-κBp65共同高表达及淋巴结转移是预后的不良因素(P<0.05)。结论在NSCLC组织中,Rac1和NF-κBp65的表达呈现较好的相关性,检测两者的表达会对NSCLC患者的临床病理学特征及预后起一定的提示作用。 展开更多

关键词 NF—κB 癌 非小细胞肺 免疫组织化学 预后 Kaplan—Meiers评估 ras相关的c3肉毒素底物1

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miRNA-15b对人脑胶质瘤细胞侵袭能力的抑制作用 被引量：3

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作者 孙关 许进 +2 位作者 聂德康 郭俊 李民 《江苏医药》 CAS 2016年第9期997-999,共3页

目的观察微小RNA-15b(miRNA-15b)对人脑胶质瘤细胞株U87细胞侵袭能力的影响。方法体外培养U87细胞,分为空白对照组、阴性对照组和miRNA-15b寡聚核苷酸拟似物处理组(miRNA-15b组)。实时荧光定量PCR检测miRNA-15b表达水平,Transwell小室... 目的观察微小RNA-15b(miRNA-15b)对人脑胶质瘤细胞株U87细胞侵袭能力的影响。方法体外培养U87细胞,分为空白对照组、阴性对照组和miRNA-15b寡聚核苷酸拟似物处理组(miRNA-15b组)。实时荧光定量PCR检测miRNA-15b表达水平,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,Western blot实验检测细胞侵袭相关蛋白Ras相关C3内毒素底物1(Rac1)和Rac3表达水平。结果脂质体转染U87细胞48h后,miRNA-15b组细胞miRNA-15b相对表达量高于阴性对照组和空白对照组(18.47±2.31vs.12.75±1.98和11.22±1.32)(P<0.05);miRNA-15b组细胞穿过人工基底膜数少于阴性对照组和空白对照组[(11.0±1.8)个vs.(34.0±5.1)个和(32.0±4.8)个](P<0.05);miRNA-15b组U87细胞中Rac1和Rac3蛋白表达水平较阴性对照组和空白对照组下降(P<0.05)。结论 miRNA-15b可通过下调Rac1和Rac3蛋白表达抑制U87细胞的侵袭能力。 展开更多

关键词 微小核糖核酸15b 胶质瘤 ras相关c3内毒素底物1

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Rac1与肿瘤发生发展关系的研究进展 被引量：3

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作者 朱包良 汤海博 +1 位作者 栾绍斋 蔡建明 《医学综述》 2020年第16期3190-3195,3200,共7页

Ras相关C3肉毒毒素亚基1(Rac1)是Ras超家族Rho亚族Rho GTP酶的经典成员,生理状态下与细胞的多种生理生化活动密切相关。目前越来越多的证据表明,Rac1活性和表达异常与肿瘤发生、存活、转移、抗凋亡、耐药性等肿瘤特性密切相关。因基因... Ras相关C3肉毒毒素亚基1(Rac1)是Ras超家族Rho亚族Rho GTP酶的经典成员,生理状态下与细胞的多种生理生化活动密切相关。目前越来越多的证据表明,Rac1活性和表达异常与肿瘤发生、存活、转移、抗凋亡、耐药性等肿瘤特性密切相关。因基因突变或其他因素导致的Rac1活性上升或表达增加,可促进肿瘤的发生、发展和转移、侵袭,导致患者预后不良。然而,体外实验发现,使用特异性抑制剂或基因剔除技术等抑制Rac1活性或者降低其表达,可以抑制肿瘤的侵袭、转移等恶性行为。临床上部分抗肿瘤药物也是通过抑制Rac1达到抗肿瘤目的。 展开更多

关键词 肿瘤 ras相关c3肉毒毒素亚基1 Rho GTP酶

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四君子汤含药血清通过抑制RhoA/Rac1/Cdc42通路影响卵巢癌细胞的上皮间质转化 被引量：2

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作者 李凡 张学林 +2 位作者 冯静茹 郝洁 周蕾 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2021年第8期29-37,共9页

目的探索四君子汤含药血清对卵巢癌细胞增殖迁移、侵袭及上皮间质化的影响,并初步研究其作用机理。方法体外培养人卵巢癌细胞(SKOV3)和人卵巢上皮细胞,随机分为空白对照组、舒尼替尼组、四君子汤Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组。噻唑蓝法检测各组SKOV... 目的探索四君子汤含药血清对卵巢癌细胞增殖迁移、侵袭及上皮间质化的影响,并初步研究其作用机理。方法体外培养人卵巢癌细胞(SKOV3)和人卵巢上皮细胞,随机分为空白对照组、舒尼替尼组、四君子汤Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组。噻唑蓝法检测各组SKOV3细胞和人卵巢上皮细胞增殖变化情况;划痕实验和侵袭(transwell)实验检测各组SKOV3细胞迁移和侵袭能力;蛋白免疫印迹分析法检测各组SKOV3细胞上皮型钙粘蛋白(Ecadherin)、神经性钙黏附蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、Ras同源基因家族成员A(RhoA)、Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac1)和细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)蛋白表达情况;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组SKOV3细胞RhoA、Rac1和Cdc42 mRNA表达变化。结果各组人卵巢上皮细胞存活率差异无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组相比,舒尼替尼组SKOV3细胞存活率、划痕愈合率、侵袭数量、N-cadherin、Vimentin蛋白、RhoA、Rac1、Cdc42 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著升高(P<0.05)。四君子汤Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组SKOV3细胞存活率、划痕愈合率、侵袭数量、N-cadherin、Vimentin蛋白、RhoA、Rac1、Cdc42 mRNA和蛋白表达依次降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达依次升高(P<0.05),呈剂量依赖性。四君子汤Ⅲ组上述指标和舒尼替尼组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论四君子汤含药血清能够抑制人卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质化,可能与RhoA/Rac1/Cdc42信号通路激活受阻相关。 展开更多

关键词 四君子汤含药血清 人卵巢癌细胞 ras同源基因家族成员A ras相关的c3肉毒素底物1 细胞分裂周期蛋白42 上皮间质化

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荧光定量RT-PCR检测Rac1 mRNA基因及其与胃癌转移的关系 被引量：2

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作者 高丹丹 续薇 +2 位作者 刘力华 张明威 罗微 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期502-506,共5页

目的 探讨肿瘤转移相关基因Rac1水平与胃癌转移的相关性,并评价分析Rac1 mRNA基因在胃癌转移和区分胃良、恶性病变中的价值.方法 用荧光定量RT-PCR TaqMan探针技术,选择Rac1基因目的 片段,与pET-20b（＋）载体连接构建重组质粒,建立Rac1... 目的 探讨肿瘤转移相关基因Rac1水平与胃癌转移的相关性,并评价分析Rac1 mRNA基因在胃癌转移和区分胃良、恶性病变中的价值.方法 用荧光定量RT-PCR TaqMan探针技术,选择Rac1基因目的 片段,与pET-20b（＋）载体连接构建重组质粒,建立Rac1 mRNA荧光定量RTPCR标准曲线,并用于检测52份胃癌、癌旁组织及12份胃良性病变组织标本中Rac1 mRNA的含量,分析评价其与胃癌转移的关系.结果 胃癌组织中Rac1 mRNA表达阳性率和含量为100.0%,7.41×103 （3.50×105 ～4.36×106）拷贝/μl,癌旁组织为46.2%,0（0～1.73×104）拷贝/μl,良性病变组织为33.3%,0（0～3.55×103）拷贝/μl,3组间阳性率和Rac1 mRNA含量水平差异均有统计学意义（x2=43.16,x2k-w=64.19,P均＜ 0.01）.当ROC曲线确定荧光定量RT-PCR检测Rac1含量的最佳临界值为1.73×104 拷贝/μl时,诊断胃癌组织标本的敏感度为88.5%,特异度为100.0%;当最佳临界值为7.49×103 拷贝/μl时,诊断胃癌是否发生淋巴结转移的敏感度为57.9%,特异度为78.6%.结论 荧光定量RT-PCR检测Rac1 mRNA对鉴别胃良、恶性病变及评价胃癌转移均有参考价值. 展开更多

关键词 胃肿瘤 肿瘤转移 ras相关的c3肉毒素底物1 逆转录聚合酶链反应

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长链非编码RNA AURKAPS1通过上调RAC1活化细胞外信号调节激酶信号通路促进肝癌进展的机制研究

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作者 赵静 樊洁净 +2 位作者 冯娟娟 郑守华 李建华 《中华实验外科杂志》 CAS 北大核心 2022年第10期1864-1868,共5页

目的探讨AURKAPS1在肝癌细胞中的表达、功能和分子机制,为肝癌的防治提供新思路。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术对肝癌细胞系和正常肝脏上皮细胞进行检测;将肝癌细胞系随机分为空白组,AURKAPS1组、RAC1组和AURKAPS1+RAC1组... 目的探讨AURKAPS1在肝癌细胞中的表达、功能和分子机制,为肝癌的防治提供新思路。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术对肝癌细胞系和正常肝脏上皮细胞进行检测;将肝癌细胞系随机分为空白组,AURKAPS1组、RAC1组和AURKAPS1+RAC1组,其中空白组表示肝癌细胞不进行任何干预,AURKAPS1组中的肝癌细胞仅接受AURKAPS1干预,RAC1组为转染RAC1的肝癌细胞,AURKAPS1+RAC1组表示同时转染AURKAPS1和RAC1,采用实时荧光定量PCR技术检测4组细胞中RAC1的表达;采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法、流式细胞术和Transwell转移法检测肿瘤细胞的增殖、凋亡和迁移能力;蛋白质免疫印迹法测定各组细胞中细胞外信号调节激酶(ERK)和RAC1蛋白表达;间接免疫荧光检测细胞中ERK的表达。组间独立样本采用t检验,多组间进行F检验、LSD检验。结果肝癌组织中RAC1 mRNA的表达量(0.98±0.08)显著高于正常人肝上皮细胞组织(0.72±0.03),差异有统计学意义(t=30.431,P<0.05);AURKAPS1组(1.03±0.10)、RAC1组(1.05±0.09)及AURKAPS1+RAC1组(1.16±0.07)的RAC1 mRNA的表达量均高于空白组(1.16±0.07),AURKAPS1+RAC1组的RAC1 mRNA表达量也显著高于分别转染AURKAPS1、RAC1的肝癌细胞组,差异有统计学意义(F=5.991,P<0.05);CCK-8法检测肝癌细胞的增殖,随着时间的增加,除空白组,其余3组的吸光度(A)_(450)值均增加,96 h后AURKAPS1+RAC1组的A_(450)值显著高于RAC1组及AURKAPS1组(F_(0 h)=2.941,F_(24 h)=26.454,F_(48 h)=104.60,F_(72 h)=319.555,F_(96 h)=564.65)P<0.05;AURKAPS1组[(5.89±3.82)%]、RAC1组[(5.81±3.85)%]及AURKAPS1+RAC1组[(4.23±4.15)%]的总凋亡率均低于空白组[(6.75±3.36)%],且AURKAPS1+RAC1组的总凋亡率显著低于RAC1、AURKAPS1组,F=77.369,P<0.05;AURKAPS1组(131.24±9.25)、RAC1组(129.87±9.41)及AURKAPS1+RAC1组(153.62±7.48)的穿膜细胞数均高于空白组(117.64±10.53),且AURKAPS1+RAC1组的穿膜细胞数显著高于RAC1组及AURKAPS1组(F=91.118,P<0.05);Western blo 展开更多

关键词 长链非编码RNA AURKAPS1 ras相关的c3肉毒杆菌毒素底物1 细胞外信号调节激酶信号通路 肝癌细胞 实时荧光定量聚合酶链反应

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