摘要
目的探讨M3型乙酰胆碱受体（M3R）对心脏成纤维细胞α-平滑肌肌动蛋白（IX-SMA）的表达影响及其机制。方法体外分离培养大鼠心脏成纤维细胞，Western blot法测定仅．SMA、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38）、磷酸化p38（p-p38）和Ras相关c3肉毒素底物1（Racl）的表达；谷胱甘肽巯基转移酶沉淀实验（GSTPull．down）法检测Racl的活性。结果乙酰胆碱（1．0×10-7、1．0×10-1、1．0×10-5mol／L，2h）呈浓度依赖性促进α-SMA的表达上调（P〈0．05），M3R特异性阻断剂4-二苯乙酰氧基-N-甲基-哌啶（4-DAMP）抑制乙酰胆碱（Ach）介导的α--SMA表达上调（1．432±0．093比2．534±0．241，P〈0．05）；M3R促进p-p38表达上调（171％，P〈0．05），p38特异性抑制剂SB203580抑制M3R介导的α-SMA表达上调（1.614±0．128比2．873±0．193，P〈0．05）；M3R活化Racl（182％，P〈0．05），Racl特异性抑制剂NSC23766抑制M3R介导的p-p38表达上调（1．301±0．154比1．821±0．113，P〈0．05）。结论M3R通过激活Rael-p38信号通路促进心脏成纤维细胞α-SMA的表达。
Objective To investigate the effects of M3 muscarinic acetylcholine receptor （M3R） on alpha smooth muscle aetin （α- - SMA） expression and the related mechanisms. Methods In cultured cardiac fibroblasts, Western blotting analysis was used to examine the protein levels ofα- SMA, p38 mito- gen - activated protein kinases （ p38 ）, phosphorylated p3g （ p - p38 ） and Ras - related C3 botulinum tox- in substrate 1 （ Rael ）. Racl activity was examined by GST Pull - down assays. Results M3R agonist acetyeholine （ 1.0×10-7、1.0×10-1、1.0×10-5mol/L,2h） promotedα- SMA expression in euhured cardiac fibroblasts （ P 〈 0. 05 ）, and the effect was attenuated by M3R selective antagonist 4 - diphenylace- toxy- N - methylpiperidine methiodide （4 - DAMP, 1. 432 ± 0. 093 vs. 2. 534 ± 0. 241 ,P 〈 0. 05 ）. Fur- thermore, the up- regulation of α-SMA expression by M3R appeared to be mediated by an upregulation in phosphorylation of p38 （171% , P 〈 0. 05 ）. In addition, M3R enhanced Rael activity （182% , P 〈 0.05） and Racl antagonist NSC23766 inhibited M3R-induced p- p38 upregulation （1. 301 ±0. 154 vs. 1. 821 ± 0. 113 ,P 〈 0. 05 ）. Conclusion These results suggest that M3R up -regulates α-SMA expres- sion in cardiac fibroblasts via Racl -p38 signaling pathway.
出处
《中华实验外科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第8期1950-1952,共3页
Chinese Journal of Experimental Surgery
基金
国家自然科学基金（81300685）
