猪α干扰素表达蛋白ab的抗病毒效果研究

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作者 陆辉 朱善元 +2 位作者 左伟勇 洪伟鸣 吴双 《安徽农业科学》 CAS 2012年第3期1509-1510,1522,共3页

[目的]探索猪α干扰素表达蛋白ab的抗病毒效果。[方法]通过测定猪α干扰素(PoIFN-α)表达的融合蛋白ab对接种水泡性口炎病毒(VSV)的牛肾细胞(MDBK)保护作用的效价,来研究其抗病毒效果。通过中和试验,测定保护50%细胞不产生病变所需PoIFN... [目的]探索猪α干扰素表达蛋白ab的抗病毒效果。[方法]通过测定猪α干扰素(PoIFN-α)表达的融合蛋白ab对接种水泡性口炎病毒(VSV)的牛肾细胞(MDBK)保护作用的效价,来研究其抗病毒效果。通过中和试验,测定保护50%细胞不产生病变所需PoIFN-α表达的融合蛋白ab的稀释度。[结果]PoIFN-α表达的融合蛋白ab具有显著的抗病毒作用,稀释度1∶4.9的2.0μg/ml ab蛋白溶液即可保护50%细胞不产生细胞病变。[结论]猪重组α干扰素具有高活性、纯度高、无毒副作用、无药物残留等特点,其研制与开发对猪生产实践和疾病防治具有重要意义。 展开更多

关键词 PoIFN-α 水泡性口炎病毒 牛肾细胞 融合蛋白ab 中和试验 效价

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RAGE、Hsp90AB1、TXNIP在非小细胞肺癌患者中的表达及与淋巴结转移的相关性 被引量：4

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作者 王莹琼 陈建欧 +2 位作者 应晓媚 李小菲 林鹏 《广东医学》 CAS 2022年第4期407-411,共5页

目的研究晚期糖基化终末产物受体(RAGE)、热休克蛋白90AB1(Hsp90AB1)、硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者中的表达及与淋巴结转移的相关性。方法选取55例行肺癌根治术切除的NSCLC标本(NSCLC组),选取同时期在病理... 目的研究晚期糖基化终末产物受体(RAGE)、热休克蛋白90AB1(Hsp90AB1)、硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者中的表达及与淋巴结转移的相关性。方法选取55例行肺癌根治术切除的NSCLC标本(NSCLC组),选取同时期在病理科保存的正常组织标本36例(正常组)。免疫组化染色观察RAGE、Hsp90AB1的表达,实时荧光定量PCR检测TXNIP基因表达。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析RAGE、Hsp90AB1、TXNIP对NSCLC的诊断价值。结果正常组RAGE阳性、TXNIP基因表达高于NSCLC组鳞癌、腺癌,Hsp90AB1阳性表达低于NSCLC组鳞癌、腺癌(P<0.05)。低分化、有淋巴结转移、Ⅲ~Ⅳ期患者Hsp90AB1阳性表达高于中-高分化、无淋巴结转移、Ⅰ~Ⅱ期患者,低分化、有淋巴结转移、Ⅲ~Ⅳ期患者RAGE阳性、TXNIP基因表达低于中-高分化、无淋巴结转移、Ⅰ~Ⅱ期患者(P<0.05)。RAGE、Hsp90AB1、TXNIP三者联合对NSCLC诊断的敏感度、准确度高于三项单一检测,差异有统计学意义(P<0.05)。结论RAGE、Hsp90AB1、TXNIP在NSCLC中表达异常,三者与NSCLC患者淋巴结转移具有相关性,参与疾病发展,三者联合检查对NSCLC诊断价值较高。 展开更多

关键词 晚期糖基化终末产物受体 热休克蛋白90ab1 硫氧还蛋白相互作用蛋白 非小细胞肺癌

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HSP90AB1与IBV S1蛋白互作调节病毒吸附的研究

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作者 张焕东 方承秀 +3 位作者 林翠 董伟仁 周继勇 廖敏 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期983-990,共8页

前期的免疫沉淀和质谱鉴定分析表明,HSP90AB1是禽传染性支气管炎病毒(IBV)S1蛋白的潜在互作宿主蛋白。本研究在此基础上探讨HSP90AB1与IBV S1蛋白的相互作用及其对IBV吸附宿主细胞的影响。免疫共沉淀试验显示,宿主HSP90AB1蛋白可与多种... 前期的免疫沉淀和质谱鉴定分析表明,HSP90AB1是禽传染性支气管炎病毒(IBV)S1蛋白的潜在互作宿主蛋白。本研究在此基础上探讨HSP90AB1与IBV S1蛋白的相互作用及其对IBV吸附宿主细胞的影响。免疫共沉淀试验显示,宿主HSP90AB1蛋白可与多种IBV毒株的S1蛋白发生互作,Gst-pull-down试验证明,HSP90AB1与M41株S1蛋白的互作属于直接互作。进一步的免疫沉淀试验表明,细胞膜HSP90AB1与内源性S1蛋白同样具有互作关系。进一步研究发现过表达HSP90AB1会促进IBV Beaudette对Vero细胞的吸附,而敲低HSP90AB1则抑制病毒吸附H1299细胞;使用商品化的HSP90AB1家兔单克隆抗体预处理Vero细胞则抑制了病毒的吸附;用HSP90AB1蛋白阻断结合位点使病毒吸附细胞的能力显著降低。以上结果表明,HSP90AB1对IBV吸附细胞具有正调节作用,其可能是IBV入侵细胞的一个关键宿主因子。 展开更多

关键词 禽传染性支气管炎病毒 热休克蛋白HSP90ab1 S1蛋白 病毒吸附

原文传递

口蹄疫病毒3AB试剂盒的检测及比较 被引量：2

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作者 潘洁 陈波 +3 位作者 邢继兰 饶忠 徐泉兴 尤永进 《上海农业学报》 CSCD 2006年第2期20-23,共4页

以重组口蹄疫病毒非结构蛋白3AB为检测抗原,研制了口蹄疫病毒非结构蛋白ELISA检测试剂盒,该试剂盒可用于判定被检动物是否感染口蹄疫病毒。重组口蹄疫病毒非结构蛋白3AB作为检测抗原包被酶标板反应孔,以辣根过氧化物酶标记的重组蛋白A/... 以重组口蹄疫病毒非结构蛋白3AB为检测抗原,研制了口蹄疫病毒非结构蛋白ELISA检测试剂盒,该试剂盒可用于判定被检动物是否感染口蹄疫病毒。重组口蹄疫病毒非结构蛋白3AB作为检测抗原包被酶标板反应孔,以辣根过氧化物酶标记的重组蛋白A/G作为第二抗体,建立了抗非结构蛋白抗体检测的方法。结果表明,在1 746份免疫猪血清中,3AB-ELISA对免疫猪血清的特异性为98.68%;在1 077份健康非免疫猪血清中,3AB-ELISA对健康非免疫猪血清的特异性为98.68%;在36份人工感染猪血清中,3AB-ELISA对阳性检出率为100%。而牛的特异性的各项指标和阳性检出率分别为94.04%,97.96%和100%。猪/牛口蹄疫病毒非结构蛋白酶联免疫吸附试验检测试剂盒与国外同类试剂盒比较,阳性检出率高出12.5个百分点。 展开更多

关键词 非结构蛋白3ab 试剂盒 检测

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苏云金芽胞杆菌cry2Ab、cry9Ea基因的表达及活性分析 被引量：4

5

作者 李玉红 李海涛 +3 位作者 高继国 赵世源 张春鸽 赵灿 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期100-105,共6页

旨在为农业害虫防治提供更多的苏云金芽胞杆菌基因资源,从中国吉林市龙潭山土壤样品中分离得到野生菌株命名为Bt LTS-7,扫描电镜显示该菌株产生晶体形状为双锥体和正方体,聚丙烯酰胺凝胶电泳显示该菌株产生130 kD和71 kD的晶体蛋白,通过... 旨在为农业害虫防治提供更多的苏云金芽胞杆菌基因资源,从中国吉林市龙潭山土壤样品中分离得到野生菌株命名为Bt LTS-7,扫描电镜显示该菌株产生晶体形状为双锥体和正方体,聚丙烯酰胺凝胶电泳显示该菌株产生130 kD和71 kD的晶体蛋白,通过PCR鉴定出该菌株中含有cry2Ab和cry9Ea基因,并成功克隆到了这两个新基因,并被Bt国际命名委员会正式命名为cry2Ab28和cry9Ea9,将两个基因分别在大肠杆菌Rosetta(DE3)中表达,并进一步对其表达蛋白进行杀虫活性测定。结果显示,Cry2Ab28蛋白对棉铃虫(Helicoverpa armigera)初孵幼虫具有杀虫活性,LC50为32.45μg/mL。Cry9Ea9蛋白对小菜蛾初孵幼虫(Plutella xylostella)具有较高杀虫活性,LC50为0.77μg/mL。 展开更多

关键词 苏云金芽胞杆菌 杀虫晶体蛋白 cry2ab基因 cry9Ea基因 生物活性

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转基因水稻表达的Bt毒蛋白CryⅠ Ab溶液构象的研究 被引量：3

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作者 吴志平 舒庆尧 +3 位作者 龚利琴 余红 叶恭银 陈子元 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2002年第6期1081-1085,共5页

用荧光光谱法研究了毒蛋白 Cry Ab在溶液中的构象 .结果表明 ,p H值增大时 ,毒蛋白的荧光强度也增大 ,至 p H=1 1时荧光强度已达最大值 ;甲醇、乙醇及异丙醇等有机溶剂引起毒蛋白荧光发射波长蓝移和荧光强度增大 ,至有机溶剂的浓度超过... 用荧光光谱法研究了毒蛋白 Cry Ab在溶液中的构象 .结果表明 ,p H值增大时 ,毒蛋白的荧光强度也增大 ,至 p H=1 1时荧光强度已达最大值 ;甲醇、乙醇及异丙醇等有机溶剂引起毒蛋白荧光发射波长蓝移和荧光强度增大 ,至有机溶剂的浓度超过某一阈值后荧光发射波长不再蓝移 ;丙酮能完全猝灭毒蛋白Cry Ab的荧光 ,丙烯酰胺能猝灭 Cry Ab86%的荧光 ,而 KI对毒蛋白的荧光无猝灭作用 ,由此推断 Cry 展开更多

关键词 溶液构象 转基因水稻 Bt 毒蛋白CryIab 苏云金杆菌 荧光法 微生物杀虫剂 基因表达

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热休克蛋白HSP90AB1对猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的影响 被引量：1

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作者 谢丰玉 康磊 +9 位作者 陈梦莉 郑家杨 李宗杰 李蓓蓓 邵东华 邱亚峰 魏建超 马志永 刘珂 黎满香 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2022年第12期128-135,共8页

旨在研究宿主热休克蛋白HSP90AB1对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)复制的影响。选用对PRRSV易感的MARC-145细胞系,探究过表达和干扰HSP90AB1对病毒复制的影响,利用激光共聚焦免疫荧光和免疫共沉淀验证HSP90AB1与PRRSV的非结构蛋白NSP2... 旨在研究宿主热休克蛋白HSP90AB1对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)复制的影响。选用对PRRSV易感的MARC-145细胞系,探究过表达和干扰HSP90AB1对病毒复制的影响,利用激光共聚焦免疫荧光和免疫共沉淀验证HSP90AB1与PRRSV的非结构蛋白NSP2作用关系,利用双荧光素酶试验探究HSP90AB1和NSP2对NF-kB活性的影响。结果表明,过表达HSP90AB1后显著抑制病毒的复制,干扰HSP90AB1的表达后促进病毒的复制;免疫共沉淀结果和激光共聚焦免疫荧光说明,HSP90AB1和NSP2存在相互作用;双荧光素酶报告试验表明HSP90AB1能逆转NSP2对NF-κB活性的抑制作用。综上,HSP90AB1可能通过与PRRSV NSP2相互作用,拮抗NSP2对NF-kB活性的抑制来抑制病毒的复制和感染。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 热休克蛋白HSP90ab1 非结构蛋白2 病毒复制

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口蹄疫病毒非结构蛋白3AB单克隆抗体的制备及其对应表位区分析 被引量：1

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作者 刘丹丹 高明春 +6 位作者 宋军 宋鸽 曹永生 张润祥 李爽 于力 王君伟 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期733-737,共5页

为鉴定口蹄疫病毒(FMDV)的非结构蛋白3AB的抗原表位,本研究以原核表达并纯化的FMDV 3AB重组蛋白免疫BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA进行筛选,获得6株能够稳定分泌抗3AB蛋白特异性单克隆抗体(MAb)的杂... 为鉴定口蹄疫病毒(FMDV)的非结构蛋白3AB的抗原表位,本研究以原核表达并纯化的FMDV 3AB重组蛋白免疫BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA进行筛选,获得6株能够稳定分泌抗3AB蛋白特异性单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞。这6株MAbs亚类鉴定均为IgG1型,轻链均为κ链。间接免疫荧光试验结果表明,这6株MAbs均能够识别FMDV 3AB蛋白。采用制备的MAb对分段表达的3AB蛋白进行western blot分析,结合位点分别位于3AB的第aa 55～aa 70、aa 64～aa 79、aa 130～aa 145区段。该结果为进一步探索3AB蛋白的结构和功能以及建立诊断方法奠定了基础。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 非结构蛋白3ab 单克隆抗体 抗原表位区

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Hsp90AB1在狂犬病病毒复制过程中的功能初探 被引量：1

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作者 许运斌 孙玉章 +4 位作者 刘娟 颜焰 高兴红 罗果 王欢 《动物医学进展》 北大核心 2018年第6期1-5,共5页

为了探究宿主蛋白Hsp90AB1在狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)复制过程中的功能,以RABV疫苗毒株HEP-Flury感染鼠神经瘤母细胞N2a为模型,分析Hsp90AB1对RABV复制的影响。采用RNA干扰的方式,发现Hsp90AB1基因敲降后可影响病毒基因的转录及... 为了探究宿主蛋白Hsp90AB1在狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)复制过程中的功能,以RABV疫苗毒株HEP-Flury感染鼠神经瘤母细胞N2a为模型,分析Hsp90AB1对RABV复制的影响。采用RNA干扰的方式,发现Hsp90AB1基因敲降后可影响病毒基因的转录及其表达,而未影响病毒的反基因组水平以及病毒感染力,表明Hsp90AB1在转录或蛋白表达水平上影响RABV的复制。由此初步发现Hsp90AB1在RABV复制过程中的作用方式,为继续深入研究Hsp90AB1在RABV感染过程中的作用机制提供了基础数据。 展开更多

关键词 热休克蛋白90ab1 狂犬病病毒 复制 功能

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人热休克蛋白90AB1基因克隆、原核表达、中试发酵及纯化

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作者 刘凯胜 王绍祥 +3 位作者 刘忠 张嘉萱 张庶民 王一飞 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期120-125,134,共7页

通过克隆人热休克蛋白90AB1基因(Hsp90AB1),构建其原核表达载体pET28a(+)-hHsp90AB1,表达纯化获得目的蛋白,为hHsp90靶向药物筛选奠定基础。提取宫颈癌HeLa细胞总RNA,并经RT-PCR获得hHsp90AB1-cDNA。以hH-sp90AB1-cDNA为模板进行PCR体... 通过克隆人热休克蛋白90AB1基因(Hsp90AB1),构建其原核表达载体pET28a(+)-hHsp90AB1,表达纯化获得目的蛋白,为hHsp90靶向药物筛选奠定基础。提取宫颈癌HeLa细胞总RNA,并经RT-PCR获得hHsp90AB1-cDNA。以hH-sp90AB1-cDNA为模板进行PCR体外扩增,胶回收纯化hHsp90AB1。将hHsp90AB1及pET-28a(+)质粒经NdeⅠ和SalⅠ双酶切、胶回收纯化酶切片段后,体外连接酶切片段,使其定向重组,再将重组DNA转化DH5α,经复苏后,在含卡那霉素的LB固体养基上筛选出阳性克隆。挑取LB固体培养基上的单菌落经酶切及测序鉴定,证实为阳性克隆,即pET28a-hHsp90AB1体外重组成功,命名为pET28a(+)-hHsp90AB1。重组质粒转化Rosetta(DE3)菌株,IPTG诱导表达,并对表达条件优化,以及通过SDSA-PAGE和Western blotting分析均表明Hsp90AB1蛋白得到了正确的表达,且表达产物以可溶性形式存在,优化条件下蛋白表达量约占菌体总蛋白13%。接种到18 L发酵罐中试发酵,表达产物经Ni-NTA凝胶亲和层析,蛋白纯度达到98%。 展开更多

关键词 热休克蛋白90ab1(Hsp90β) 克隆 原核表达 中试发酵 纯化

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基于质谱检测转基因生物外源蛋白质的消化稳定性

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作者 毛劼 孙兴 +5 位作者 程娟献 王心正 赵永强 王红霞 何昆 夏晴 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第19期64-69,共6页

基于无标记定量质谱检测技术建立了一种新的转基因生物外源蛋白质消化稳定性评价方法。以牛β-乳球蛋白、牛血清白蛋白和大豆胰蛋白酶抑制剂为标准蛋白质,经模拟人体胃/肠消化液消化后进行凝胶电泳分离,切取目标蛋白质条带进行酶切,提... 基于无标记定量质谱检测技术建立了一种新的转基因生物外源蛋白质消化稳定性评价方法。以牛β-乳球蛋白、牛血清白蛋白和大豆胰蛋白酶抑制剂为标准蛋白质,经模拟人体胃/肠消化液消化后进行凝胶电泳分离,切取目标蛋白质条带进行酶切,提取肽段进行纳升液相色谱-电喷雾串联质谱分析。基于Mascot数据库检索鉴定目标蛋白质。计算各消化时间点蛋白质匹配肽段数与消化前蛋白质匹配肽段数的比值,当比值≤0.50时判断为目标蛋白质在该时间段内已消化。将此方法应用于转基因抗虫水稻"华恢1号"外源蛋白Cry1Ab/1Ac的消化稳定性分析,结果显示在模拟胃液中消化2 min时,比值下降到0.50以下,在模拟肠液中消化15 s后比值下降到0.50以下,表明该蛋白在胃/肠消化液中具有消化不稳定性。 展开更多

关键词 转基因生物 消化稳定性 质谱 外源蛋白Cry1ab/1Ac 无标记定量

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