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一种改进的大鼠大脑皮质星形胶质细胞的培养方法 被引量：7
1
作者 丁娟 丁敬宾 +4 位作者 马小虎 关立锋 杨慧莹 王志军 刘娟 《神经解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第3期349-353,共5页
目的:改进大鼠大脑皮质星形胶质细胞的培养方法,从而获取高纯度星形胶质细胞用于神经科学研究。方法:新生大鼠(2~3日龄),75%酒精消毒后断头,于冰上取大脑皮质置于冰冷的D-Hanks液中,去除脑膜和血管,剪碎后用0.25%胰酶消化并分离细胞,以1... 目的:改进大鼠大脑皮质星形胶质细胞的培养方法,从而获取高纯度星形胶质细胞用于神经科学研究。方法:新生大鼠(2~3日龄),75%酒精消毒后断头,于冰上取大脑皮质置于冰冷的D-Hanks液中,去除脑膜和血管,剪碎后用0.25%胰酶消化并分离细胞,以1×10~5/ml的密度接种于预铺0.015%多聚赖氨酸的细胞瓶中培养。细胞纯化采用"差速贴壁法"、"梯度血清法"和"十字手摇法",以获取高纯度星形胶质细胞。通过星形胶质细胞特异性表达蛋白即胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)行免疫细胞荧光染色来鉴定细胞纯度。结果:星形胶质细胞纯度大于98%,可多次传代,细胞增殖快,且生长良好。结论:改进的原代星形胶质细胞培养方法,操作简单,细胞纯度高,能满足各种神经科学研究中对高纯度星形胶质细胞培养的实验要求,适宜推广。 展开更多
关键词 原代培养 星形胶质细胞 细胞纯化
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人子宫肌瘤细胞原代培养方法的比较研究 被引量：7
2
作者 韩虹娟 李冬华 +5 位作者 钱睿亚 许昕 黄玉华 倪婧 张武芳 耿建国 《中国妇幼保健》 CAS 北大核心 2014年第22期3656-3659,共4页
目的:比较体外培养人子宫肌瘤细胞组织块法和胶原酶消化法的优缺点,探索子宫肌瘤细胞原代培养的最佳方法,为在子宫肌瘤生理和病理等方面的研究提供一种更有效、简便的细胞培养技术。方法:采用组织块法和胶原酶消化法对人子宫肌瘤组织进... 目的:比较体外培养人子宫肌瘤细胞组织块法和胶原酶消化法的优缺点,探索子宫肌瘤细胞原代培养的最佳方法,为在子宫肌瘤生理和病理等方面的研究提供一种更有效、简便的细胞培养技术。方法:采用组织块法和胶原酶消化法对人子宫肌瘤组织进行体外培养,运用光学倒置显微镜、HE染色观察细胞生物学特性,免疫荧光法进行细胞鉴定。结果:倒置显微镜及HE染色观察两种细胞的形态均多成梭形,平滑肌肌动蛋白免疫荧光染色均呈阳性。结论:组织块培养法与胶原酶消化法作为人子宫肌瘤细胞体外培养的两种方法,均可成功建立子宫肌瘤细胞有限细胞系。通过比较发现,消化法虽相较于组织块法方法稍复杂,但具有短期内可获得大量细胞且细胞纯度较高的优势。 展开更多
关键词 子宫肌瘤 原代培养 组织块法 消化法
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三种桃砧木茎尖培养技术的研究 被引量：5
3
作者 马常念 张慧琴 +3 位作者 肖金平 张琛 石志军 谢鸣 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第3期503-508,共6页
以砧选1号、东溪小仙桃、毛桃茎尖为试验材料进行组织培养,研究不同消毒处理、基本培养基、植物激素的种类和浓度对桃砧木茎尖初代、继代和生根培养的影响。结果表明:初代培养中最适宜消毒方法为75%酒精30 s和0.1%升汞(HgCl2)3 min,植... 以砧选1号、东溪小仙桃、毛桃茎尖为试验材料进行组织培养,研究不同消毒处理、基本培养基、植物激素的种类和浓度对桃砧木茎尖初代、继代和生根培养的影响。结果表明:初代培养中最适宜消毒方法为75%酒精30 s和0.1%升汞(HgCl2)3 min,植株下部外植体成活率较高;MS(6-BA 0.5 mg·L-1,IBA 0.2 mg·L-1)为东溪小仙桃和砧选1号最佳初代培养基,成活率分别为73.33%和76.67%;适合毛桃和砧选1号的继代培养基为MS(6-BA 1.5 mg·L-1,IBA 0.2 mg·L-1),适合东溪小仙桃的继代培养基MS(6-BA 2.0 mg·L-1,IBA 0.5 mg·L-1);1/2MS基本培养基对嫩梢生根诱导效果最好,适宜毛桃和砧选1号的生根培养基为1/2MS(IBA 1.0 mg·L-1),适宜东溪小仙桃的为1/2MS(IBA 0.5 mg·L-1)。 展开更多
关键词 桃 砧木 茎尖培养 初代培养
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一种大鼠主动脉内皮细胞分离培养的改良方法 被引量：4
4
作者 季政 郭航远 +2 位作者 池菊芳 刘龙斌 彭放 《医学研究杂志》 2012年第9期67-71,共5页
目的探索一套原代培养大鼠主动脉内皮细胞(RAEC)简单实用的方法体系。方法 SD大鼠两只,无菌环境下分离胸腹主动脉,清除脂肪、结缔组织。显微剪剪开主动脉,内膜面向下贴附于少量Ⅰ型胶原酶上消化60min。离心收集内皮细胞置于1%明胶包被... 目的探索一套原代培养大鼠主动脉内皮细胞(RAEC)简单实用的方法体系。方法 SD大鼠两只,无菌环境下分离胸腹主动脉,清除脂肪、结缔组织。显微剪剪开主动脉,内膜面向下贴附于少量Ⅰ型胶原酶上消化60min。离心收集内皮细胞置于1%明胶包被的六孔板,加入20%胎牛血清的M199中培养。3～4天后换液更换内皮细胞培养基(ECM)培养。当细胞长满约90%底面积时,玻璃探针机械剔除成纤维样细胞后传代。倒置显微镜和抗Ⅷ因子抗体对细胞分别做形态学和免疫细胞化学鉴定。结果原代培养3～4天时,少量细胞开始贴壁并分裂生长。更换ECM后细胞增殖迅速,培养8～10天时可见细胞长满90%左右的底面积,呈典型的"铺路石"或"鹅卵石"征。免疫细胞化学鉴定表明在分离培养的内皮细胞中有特定Ⅷ因子表达。原代周期8～10天,传代周期3～4天,经纯化传代后纯度接近100%。传至第6代仍未见细胞分裂增殖活性下降。结论本实验体系培养RAEC简单有效,重复性良好。获得细胞数量多、纯度高,有利于实验人员掌握。 展开更多
关键词 大鼠 主动脉 内皮细胞 原代培养
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猫肠上皮细胞的原代培养及cDNA文库的构建 被引量：2
5
作者 刘烨 赵桂华 +5 位作者 尹昆 王洪法 肖婷 刘功振 仲维霞 崔勇 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期464-467,474,共5页
目的建立猫肠上皮细胞(Intestinal epithelial cells,IECs)培养体系,构建其酵母双杂交cDNA文库,为筛选弓形虫毒性因子在终末宿主的互作蛋白奠定基础。方法分别采用组织块法以及低浓度胶原蛋白酶Ⅺ和中性蛋白酶Ⅰ联合消化法进行猫IECs的... 目的建立猫肠上皮细胞(Intestinal epithelial cells,IECs)培养体系,构建其酵母双杂交cDNA文库,为筛选弓形虫毒性因子在终末宿主的互作蛋白奠定基础。方法分别采用组织块法以及低浓度胶原蛋白酶Ⅺ和中性蛋白酶Ⅰ联合消化法进行猫IECs的原代培养,通过形态学观察及细胞免疫组织化学方法鉴定后提取mRNA,运用SMART技术合成cDNA第一链,以LD-PCR扩增获得双链cDNA(ds cDNA),通过同源重组方法在酵母菌株Y187中构建猫IECs的cDNA文库,计算文库的容量,以酵母菌液PCR检测插入片段的大小分布。结果两种培养方法效果表明酶联合消化法更为有效。本研究建立了连续培养猫IECs体系,培养出高纯度的猫IECs,用其构建的cDNA文库容量为1.1×10~6,滴度为2.8×10~9cfu/ml,插入片段大小在0.5~2.0 kb之间。结论培养的原代猫IECs构建的cDNA文库符合酵母双杂交筛选互作因子标准,这为筛选弓形虫终末宿主的毒性因子互作蛋白奠定了基础。 展开更多
关键词 弓形虫 肠上皮细胞 猫 原代培养 酵母双杂交 CDNA文库
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耳蜗螺旋神经节细胞的培养及重组腺病毒在细胞中的表达 被引量：1
6
作者 池君 宋武战 +4 位作者 范泉水 张学渊 冯子良 刘丹 游建军 《西南国防医药》 CAS 2013年第4期349-351,共3页
目的建立哺乳动物耳蜗螺旋神经节细胞(SGNs)体外培养的细胞模型,研究携带有外源性神经生长因子(NGF)的重组腺病毒在离体培养SGNs中的表达特性。方法出生3 d健康SD大鼠10只,无菌条件下分离并培养耳蜗螺旋神经节细胞,应用抗神经微丝蛋白... 目的建立哺乳动物耳蜗螺旋神经节细胞(SGNs)体外培养的细胞模型,研究携带有外源性神经生长因子(NGF)的重组腺病毒在离体培养SGNs中的表达特性。方法出生3 d健康SD大鼠10只,无菌条件下分离并培养耳蜗螺旋神经节细胞,应用抗神经微丝蛋白单克隆抗体NF-200行细胞免疫化学鉴定。培养72 h后,以绿色荧光蛋白为报告蛋白的重组腺病毒转染SGNs,培养第7 d观察绿色荧光蛋白在细胞中的表达。结果体外培养的SGNs细胞形态正常,胞体成圆形或椭圆形,突起细长并相互交织,NF-200在胞体染色阳性。病毒转染后,胞质和突起均有绿色荧光蛋白的表达。结论分离培养的螺旋神经节细胞在体外条件下生长良好,形态正常,细胞数量和存活时间能满足体外实验的需求。重组腺病毒成功转染螺旋神经节细胞。 展开更多
关键词 耳蜗 螺旋神经节 原代培养 腺病毒 神经生长因子
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柴胡皂苷-d对乙醇损伤原代培养大鼠肝细胞的保护作用及其机制研究 被引量：20
7
作者 李素婷 姜凌雪 +1 位作者 周晓慧 杨鹤梅 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期2752-2753,共2页
目的研究柴胡皂苷-d(SS-d)对乙醇损伤大鼠原代培养肝细胞保护的作用和机制。方法采用胰蛋白酶消化、分离大鼠肝细胞进行原代培养,乙醇体外诱导肝细胞损伤,以不同浓度的SS-d对肝细胞保护,检测培养液中丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性和肝细胞... 目的研究柴胡皂苷-d(SS-d)对乙醇损伤大鼠原代培养肝细胞保护的作用和机制。方法采用胰蛋白酶消化、分离大鼠肝细胞进行原代培养,乙醇体外诱导肝细胞损伤,以不同浓度的SS-d对肝细胞保护,检测培养液中丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性和肝细胞内丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的活性,MTT法检测肝细胞存活率。结果SS-d(1.0,2.0,3.0mg.L-1)明显改善肝细胞存活率,抑制乙醇引起的ALT活性的升高,对肝细胞中MDA含量升高和GSH-px活性降低均有明显的抑制作用。结论SS-d对乙醇损伤大鼠肝细胞有保护作用,其机制可能与SS-d清除自由基、抑制质脂过氧化作用有关。 展开更多
关键词 乙醇 肝细胞 原代培养 柴胡皂苷-D 保护作用 机制
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原代培养多形性胶质母细胞瘤的增殖与放射敏感性 被引量：2
8
作者 陶胜忠 易伟 +3 位作者 艾文兵 王煜 雷霆 薛德麟 《中华神经外科疾病研究杂志》 CAS 2005年第4期306-308,共3页
目的探讨多形性胶质母细胞瘤的增殖活性与放射敏感性,为临床治疗提供参考。方法观察了5例原代培养的多形性胶质母细胞瘤的形态学变化并绘制生长曲线。采用免疫组化链酶亲合素-生物素-过氧化物酶复合物法(SABC)检测增殖细胞核抗原(PCNA)... 目的探讨多形性胶质母细胞瘤的增殖活性与放射敏感性,为临床治疗提供参考。方法观察了5例原代培养的多形性胶质母细胞瘤的形态学变化并绘制生长曲线。采用免疫组化链酶亲合素-生物素-过氧化物酶复合物法(SABC)检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,并用四唑盐比色法(MTT)检测原代培养多形性胶质母细胞瘤以60Co2Gy放射剂量照射后的存活分数。结果5例原代培养的多形性胶质母细胞瘤细胞形态多样,生长曲线和增殖活性各不相同,放射敏感性也存在明显差异。结论多形性胶质母细胞瘤存在不同放射敏感性的细胞群,放射治疗应体现个体化原则。 展开更多
关键词 多形性胶质母细胞瘤 原代培养 放射敏感性 生长曲线 增殖细胞核抗原
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