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杂交瘤细胞培养的优化 被引量:9
1
作者 张元兴 方宏勋 容秉培 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第3期326-331,共6页
根据杂交瘤细胞培养中单克隆抗体生产的动力学原理,采用灌注培养方式、添加醋酸钾和丰富营养物培养的途径,对反应器放大培养过程进行了优化。每天灌注1/2反应器工作体积,与分批培养相比,细胞密度由45×105/ml提高... 根据杂交瘤细胞培养中单克隆抗体生产的动力学原理,采用灌注培养方式、添加醋酸钾和丰富营养物培养的途径,对反应器放大培养过程进行了优化。每天灌注1/2反应器工作体积,与分批培养相比,细胞密度由45×105/ml提高到11×105/ml,单抗浓度由19mg/L提高到28mg/L;添加1g/L醋酸钾,细胞密度基本保持不变,但单抗浓度增加到38μg/ml;用丰富营养物培养后,细胞密度和单抗浓度分别进一步提高到42×105/ml和94mg/L。抗B型红细胞单抗的血凝滴度,由分批培养的1:32,最终提高到1:256。 展开更多
关键词 杂交瘤 细胞培养 醋酸钾 灌注培养
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连续灌流培养杂交瘤细胞生产单克隆抗体 被引量:8
2
作者 米力 李玲 +2 位作者 冯强 余晓玲 陈志南 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期360-364,共5页
Hybridoma cells were cultured by continuous perfusion in Fibra-Cel of 5L packed-bed bioreactor for 22 days in low serum or serum-free media.The corresponded amino acids were fed and serum concentration was decreased b... Hybridoma cells were cultured by continuous perfusion in Fibra-Cel of 5L packed-bed bioreactor for 22 days in low serum or serum-free media.The corresponded amino acids were fed and serum concentration was decreased by analyzing glucose concentration, oxygen uptake rate, secretary antibody amount and amino acids concentration in culture supernatant. Comparing with continuous perfusion culture that amino acids were not fed, antibody amunt of production was increased about 2~3 times. The inoculated cell density was 2.5×10 5 cells/mL,while the final cell density was 8.79×10 8cells/mL. Antibody production was reached 295mg/L/d at average level, and the highest level was reached 532mg/L/d.These results provided a primary mode of enlarge culture for monoclonal antibody industrilization. 展开更多
关键词 连续灌流培养 杂交瘤细胞 单克隆抗体
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微载体灌注培养制备Vero细胞狂犬病疫苗 被引量:8
3
作者 乐威 叶林柏 +1 位作者 张捷 刘静 《中国病毒学》 CSCD 2004年第4期373-375,共3页
本文研究在生物反应器中用微载体连续灌注培养Vero细胞生产狂犬病毒制备技术.在5L体积的生物反应器中,加入含10g/L微载体的199培养基,接种Vero细胞至细胞浓度达到1×105/mL,培养7d后细胞可生长至6~7×106/mL,然后以感染复数(M... 本文研究在生物反应器中用微载体连续灌注培养Vero细胞生产狂犬病毒制备技术.在5L体积的生物反应器中,加入含10g/L微载体的199培养基,接种Vero细胞至细胞浓度达到1×105/mL,培养7d后细胞可生长至6~7×106/mL,然后以感染复数(MOI)为0.01接种狂犬病毒VaG株,接毒后24h开始收获,连续收获12d左右,收获的病毒滴度范围在6.0~8.5log LD50/mL,收获的病毒原液经浓缩、灭活和纯化等步骤制备成疫苗,各项质量指标均达到<中国生物制品规程>2000年版要求.实验表明,用生物反应器微载体灌注培养制备人用Vero细胞狂犬病疫苗小试工艺可行. 展开更多
关键词 狂犬病 疫苗 灌注培养 反应器 微载体
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Vero细胞的生长代谢特征及动力学模型构建
4
作者 平玲 顾朝剑 +4 位作者 吴易梅 张立敏 陈溢娟 杨净思 沈武玲 《生物技术》 CAS 2024年第4期448-453,共6页
[目的]解决Vero细胞在大规模高密度培养过程中营养物质耗尽,代谢产物积累导致细胞生长受限的问题。[方法]固定床生物反应器培养Vero细胞,通过换液培养和灌流培养两种方式比较细胞增殖、营养物质的消耗、代谢产物的生成,基于Logistic方程... [目的]解决Vero细胞在大规模高密度培养过程中营养物质耗尽,代谢产物积累导致细胞生长受限的问题。[方法]固定床生物反应器培养Vero细胞,通过换液培养和灌流培养两种方式比较细胞增殖、营养物质的消耗、代谢产物的生成,基于Logistic方程、Luedeking-Piret方程建立动力学模型,并根据实际检测数据,应用Origin软件进行非线性拟合。[结果]换液培养和灌流培养两种培养方式培养Vero细胞,两种培养方式达到的最大细胞密度分别是4.35×10^(6)/mL和4.34×10^(6)/mL,在对数生长期,细胞的生长速率分别是0.54 d^(-1)和0.67 d^(-1),葡萄糖的最大消耗量分别是14.95 g/d和17.1 g/d,谷氨酰胺的最大消耗量分别是2.725 g/d和3.7 g/d;Origin软件进行非线性拟合,得到的建模参数通过验证两种培养方式的细胞生长模型预测值与实验值拟合度较高。[结论]大规模培养Vero细胞,利用灌流培养的细胞生长速率较快,对营养物质的利用率较高,是理想的细胞培养方式;所建立的代谢动力学模型能较好的反应细胞在生长过程中的反应动力学过程。 展开更多
关键词 VERO细胞 换液培养 灌流培养 代谢物消耗 代谢物生成 ORIGIN软件 非线性拟合 动力学模型
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基于中空纤维的灌流培养细胞截留技术的研究
5
作者 徐聪 贾辉 +5 位作者 秦卿雯 韩永良 白静娜 李雯 安子韩 王捷 《膜科学与技术》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期185-192,共8页
近年来由于生物制药行业对于蛋白产品需求的日益增加,连续型细胞培养工艺的灌流培养模式越来越受到重视.为了维持生物反应器中较高的细胞数量和生产力,收获纯度较高的蛋白产品,需要一种良好的分离装置来保留生物反应器中的细胞.本文在... 近年来由于生物制药行业对于蛋白产品需求的日益增加,连续型细胞培养工艺的灌流培养模式越来越受到重视.为了维持生物反应器中较高的细胞数量和生产力,收获纯度较高的蛋白产品,需要一种良好的分离装置来保留生物反应器中的细胞.本文在比较不同类型的细胞截留技术的基础上,总结了中空纤维过滤技术操作条件温和、通量大、过滤精度高且应用广泛的优势.为了缓解中空纤维过滤过程中存在的膜污染问题,延长膜组件寿命,本文还分析了灌流培养常用的中空纤维膜材质、孔径大小、组件内径、长度及填充密度等设计因素,讨论了不同的切向流过滤操作参数对膜组件的影响,以期为灌流培养工艺领域中细胞分离用中空纤维膜组件的设计与优化提供理论依据. 展开更多
关键词 灌流培养 中空纤维膜组件 细胞截留 切向流过滤 组件优化
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基于同轴流技术的肝组织生物3D打印研究 被引量:6
6
作者 杜显彬 徐铭恩 +1 位作者 王玲 周永勇 《中国生物医学工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期731-738,共8页
生物三维打印为医疗领域提供全新的技术可能,可广泛应用于制造人工组织和器官。人工组织的功能和尺寸大小受限于组织的血管化,可利用同轴流挤出系统制造封装肝细胞的中空细丝,结合生物3D打印系统,叠层制造含微通道网络的肝组织。首先搭... 生物三维打印为医疗领域提供全新的技术可能,可广泛应用于制造人工组织和器官。人工组织的功能和尺寸大小受限于组织的血管化,可利用同轴流挤出系统制造封装肝细胞的中空细丝,结合生物3D打印系统,叠层制造含微通道网络的肝组织。首先搭建集成化的同轴流生物3D打印系统,研究材料挤出速率、材料浓度等参数对中空细丝尺寸及出丝速度的影响;然后以肝细胞株C3A为材料,打印含多层管网机构的仿生肝组织;最后,对含微通道的肝组织进行分组培养,利用细胞活死染色法检测第24、48、72 h肝细胞在灌流组和非灌流组中的细胞存活率。实验表明,同轴流3D打印的组织,中空细丝之间有效融合,支架内部的立体微通道网络完整;打印过程对肝细胞损伤较小,中空细丝中的肝细胞存活率达90%以上;灌流组和非灌流组在培养72 h后,细胞存活率有显著的差异,证明对微通道灌流可以促进组织内部的物质交换,提高微通道周围肝细胞的存活率。研究提出打印方法和灌流系统,为人工组织的血管化以及培养方式提供全新的思路。 展开更多
关键词 生物三维打印 微通道网络 灌流培养
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生物反应器培养Vero细胞制备Ⅱ型肾综合征出血热灭活疫苗 被引量:5
7
作者 王卜勇 陈道芳 +6 位作者 张行 周伟伟 方斌奇 章文彬 杨文韬 李强 胡利平 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2017年第6期655-657,663,共4页
目的在生物反应器中用微载体连续灌流培养Vero细胞,制备Ⅱ型肾综合征出血热灭活疫苗。方法在50 L体积的生物反应器中,加入含10 g/L微载体的DMEM培养基,接种Vero细胞,当细胞密度约达5×10~6个/ml时,感染肾综合征出血热(hemorrhagic f... 目的在生物反应器中用微载体连续灌流培养Vero细胞,制备Ⅱ型肾综合征出血热灭活疫苗。方法在50 L体积的生物反应器中,加入含10 g/L微载体的DMEM培养基,接种Vero细胞,当细胞密度约达5×10~6个/ml时,感染肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome,HFRS)毒种,接毒后72 h开始收获,连续收获17 d,收获的病毒原液经浓缩、灭活、Sepharose 4FF凝胶层析纯化后制备疫苗,检测病毒滴度、抗原含量及残余牛血清白蛋白、DNA、宿主蛋白含量,并接种新西兰家兔,检测疫苗效力。结果确定最佳Vero细胞接种浓度为1×10~5个/ml,病毒最佳MOI为0.015。利用优化后的培养条件收获的病毒滴度在6.5~8.0 log CCID_(50)/ml,且各项检测指标均符合《中国药典》三部(2010版)相关规定。结论用生物反应器微载体灌流培养制备Ⅱ型肾综合征出血热灭活疫苗的小试工艺可行。 展开更多
关键词 生物反应器 灌流培养 VERO细胞 Ⅱ型肾综合征出血热灭活疫苗
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狂犬病毒单克隆抗体CHO细胞灌流培养中细胞特异性灌流速率的研究
8
作者 宋兰兰 安晨 +5 位作者 汪艳艳 郭岚 张祺 唐金舟 马树奇 陈继军 《微生物学免疫学进展》 CAS 2023年第2期41-45,共5页
目的 研究灌流培养中,不同的细胞特异性灌流速率(cell specific perfusion rate, CSPR)对狂犬病毒单克隆抗体CHO细胞生长及抗体蛋白表达的影响,摸索适合本细胞株灌流培养的CSPR。方法 在标号为CSPR 1~5[CSPR1;0.02 nL/(细胞·d)、CS... 目的 研究灌流培养中,不同的细胞特异性灌流速率(cell specific perfusion rate, CSPR)对狂犬病毒单克隆抗体CHO细胞生长及抗体蛋白表达的影响,摸索适合本细胞株灌流培养的CSPR。方法 在标号为CSPR 1~5[CSPR1;0.02 nL/(细胞·d)、CSPR2:0.03 nL/(细胞·d)、CSPR3:0.04 nL/(细胞·d)、CSPR4:0.05 nL/(细胞·d)、CSPR5:0.06 nL/(细胞·d),每组3个重复]的15个TPP管中按100万个/mL的初始密度接种相同的CHO种子细胞;摇床中,以转速225 r/min、CO_(2)浓度5.0%、湿度80%和温度37℃的条件培养细胞;以后每天取细胞样品,分别检测活细胞密度(viable cell density, VCD)、细胞活率、葡萄糖浓度、乳酸浓度和渗透压。接种3 d起,每天分别从CSPR 1~5的各管中,按0.02~0.06 nL/(细胞·d)的CSPR计算所需要更换的细胞悬液体积,将各管中的细胞悬液离心,取出相应体积的上清并补入相同体积的新鲜培养液重悬细胞后,继续培养。如细胞悬液中的葡萄糖质量浓度≤3 g/L时,用300 g/L的葡萄糖补至8 g/L。CHO细胞培养约19 d时,结束实验。根据CHO细胞生长、细胞代谢、抗体蛋白滴度(titer)、收获液总体积和抗体蛋白总收量,确定适合本细胞生长和表达的CSPR。结果 在CSPR 1~2[0.02~0.03 nL/(细胞·d)]的条件下灌流培养时,最高VCD分别为1 059万个/mL、1 298万个/mL,细胞活率在培养中后期下降较快,抗体蛋白总收量分别为98 mg和112 mg。CSPR3~5[0.04~0.06 nL/(细胞·d)]条件下的最高VCD分别为1 422万个/mL、1 523万个/mL和1538万个/mL,细胞活率维持较好,抗体蛋白总收量分别为119 mg、120 mg和107 mg。结论 当CSPR为0.04~0.05 nL/(细胞·d)时,细胞生长和抗体蛋白表达情况较好,为适合本细胞株灌流培养的CSPR。 展开更多
关键词 狂犬病毒单克隆抗体 CHO细胞 灌流培养 细胞特异性灌流速率 细胞生长 蛋白表达
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动物细胞灌注培养系统流程及其应用 被引量:4
9
作者 颜旭 顾承真 +1 位作者 张志强 洪厚胜 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第4期125-128,共4页
近年来,动物细胞培养技术在生物制药领域成为最受关注的热点之一,灌注培养技术广泛应用于动物细胞高密度培养,推动了现代生物医药产业的发展。通过对动物细胞代谢分析引出灌注培养优势特点,再介绍常规灌注培养系统组成结构,对其核心装... 近年来,动物细胞培养技术在生物制药领域成为最受关注的热点之一,灌注培养技术广泛应用于动物细胞高密度培养,推动了现代生物医药产业的发展。通过对动物细胞代谢分析引出灌注培养优势特点,再介绍常规灌注培养系统组成结构,对其核心装置细胞培养罐和截留装置进行综述。其中重点分析了适用于动物细胞悬浮培养灌注系统的流程原理及灌注速率控制方法,Elephant Ear桨的性能研究以及旋转过滤器的结构设计。总结近年来国内外文献关于灌注培养在组织工程、疫苗和单克隆抗体方面的应用。最后指出研究灌注系统存在的难点,展望了灌注培养系统的应用前景。 展开更多
关键词 动物细胞 灌注系统 灌注培养 应用
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哺乳动物细胞灌流培养工艺开发与优化 被引量:4
10
作者 张琼琼 方明月 +1 位作者 栗军杰 曹荣月 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期1041-1050,共10页
近年来生物药市场需求量激增,高产量、高质量、低成本的哺乳动物细胞灌流培养工艺顺势成为工业界和学术界普遍关注的热点。文中围绕灌流培养工艺特有的操作环节及工艺优化应着重关注的细节展开论述,综述了近年来在灌流培养工艺开发和优... 近年来生物药市场需求量激增,高产量、高质量、低成本的哺乳动物细胞灌流培养工艺顺势成为工业界和学术界普遍关注的热点。文中围绕灌流培养工艺特有的操作环节及工艺优化应着重关注的细节展开论述,综述了近年来在灌流培养工艺开发和优化上取得的进步和提出的策略,以期为哺乳动物细胞灌流培养技术的开发提供参考。 展开更多
关键词 灌流培养 单细胞灌流速率 中空纤维柱 滤膜堵塞
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可显压力的细胞灌注培养装置的设计及其性能测试 被引量:2
11
作者 曾造 宋伟 周建威 《贵州师范大学学报(自然科学版)》 CAS 2009年第2期58-61,共4页
目的一套可显压力的细胞灌注培养装置的设计并测试其性能。方法:设计、制作一套细胞灌注培养装置,然后测定其流量、压力、恒温效果、无菌效果并进行细胞的初步培养观察。结果:正常灌注时,本装置温度恒定,流量、压力可控,系统连续运转5... 目的一套可显压力的细胞灌注培养装置的设计并测试其性能。方法:设计、制作一套细胞灌注培养装置,然后测定其流量、压力、恒温效果、无菌效果并进行细胞的初步培养观察。结果:正常灌注时,本装置温度恒定,流量、压力可控,系统连续运转5天培养液中无细菌生长,初步培养结果表明,乳腺癌细胞在该装置中可获得较好的培养效果。 展开更多
关键词 灌注 灌注培养 核磁共振 灌注培养装置
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WAVE^(TM)生物反应器灌注培养生产种子细胞的开发和应用 被引量:4
12
作者 杨建军 隋礼丽 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期358-367,共10页
近年来,国内中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary,CHO)生产罐的培养规模已达上千升,国外已达上万升,最终的生产罐前需要多级摇瓶、种子罐进行种子细胞扩增,扩增效率较低,严重影响了抗体、融合蛋白等生物制品的生产效率。文中利用WAV... 近年来,国内中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary,CHO)生产罐的培养规模已达上千升,国外已达上万升,最终的生产罐前需要多级摇瓶、种子罐进行种子细胞扩增,扩增效率较低,严重影响了抗体、融合蛋白等生物制品的生产效率。文中利用WAVETM波浪式生物反应器,通过灌注培养的方法,成功地实现了种子细胞的高效扩增。WAVETM波浪式生物反应器灌注培养方法制备种子细胞,CHO细胞密度高达2.28×107cells/mL时仍处于指数生长期且细胞活力大于95%,以此细胞作为种子细胞,4×105cells/mL接种于另一个WAVETM生物反应器进行流加培养,最大活细胞密度仍可达1.73×107cells/mL。通过此种扩增方式,1台WAVETM20/50即可为1 000 L或2 000 L的生产罐提供种子细胞,种子细胞的扩增倍数(Split ratio)可以达到1∶50~1∶100倍,与传统不锈钢罐种子细胞扩增倍数1∶2~1∶10相比,可以显著减少2~3级种子罐,种子细胞的扩增时间减少7~9 d,极大地提高生产效率。 展开更多
关键词 WAVETM波浪式生物反应器 灌注培养 种子罐
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30L生物反应器培养重组CHO细胞生产重组人组织型纤溶酶原激活剂 被引量:4
13
作者 梅建国 沈志强 庄金秋 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2010年第4期428-430,共3页
目的应用30L填充床生物反应器培养重组CHO细胞生产重组人组织型纤溶酶原激活剂(rht-PA)。方法将表达rht-PA的CHO细胞株用含10%胎牛血清的IMDM复苏并放大培养,接种至30L生物反应器中,并采用BiocommandPlus软件系统实时监控。先用含血清... 目的应用30L填充床生物反应器培养重组CHO细胞生产重组人组织型纤溶酶原激活剂(rht-PA)。方法将表达rht-PA的CHO细胞株用含10%胎牛血清的IMDM复苏并放大培养,接种至30L生物反应器中,并采用BiocommandPlus软件系统实时监控。先用含血清的培养基生长培养,再更换为无血清培养基进行表达培养。在整个培养过程中,采用灌流培养方式,每日采样测定培养上清中葡萄糖浓度,隔日测定rht-PA的表达水平及生物学活性。采用Lysine-Sepharose4B和Zn2+-Sepharose4B两步亲和层析法纯化rht-PA,并检测纯化产物的比活、产率及纯度。结果整个培养过程持续51d,包括生长培养6d,表达培养45d,平均日灌流量为46.7L,最高达60L,共收获表达培养液约2100L;rht-PA的平均表达水平为15.15mg/L,最高可达19.25mg/L,生物学活性平均约为8000IU/ml;表达培养至第13天时,葡萄糖消耗量达最高水平(15.97g/L·d);纯化的rht-PA比活达6×105IU/mg,产率为63%,纯度达99%以上。结论应用30L填充床生物反应器可实现重组CHO细胞的长时间连续培养及产物rht-PA的高效表达。 展开更多
关键词 人组织型纤溶酶原激活剂 重组CHO细胞 生物反应器 灌流培养
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微载体灌注培养Marc-145细胞制备猪繁殖与呼吸综合征疫苗 被引量:4
14
作者 杨雷 李伟 +5 位作者 漆世华 秦红刚 韩兴 谢红玲 温文生 吴玉石 《中国兽药杂志》 2013年第2期7-10,共4页
对在生物反应器中用微载体连续灌注培养Marc-145细胞生产猪繁殖与呼吸综合征病毒的制备技术进行了研究。在14 L体积的生物反应器中,加入含10 g/L微载体的细胞培养基DMEM,接种Marc-145细胞至细胞浓度为1×105/mL,培养4 d后细胞可生长... 对在生物反应器中用微载体连续灌注培养Marc-145细胞生产猪繁殖与呼吸综合征病毒的制备技术进行了研究。在14 L体积的生物反应器中,加入含10 g/L微载体的细胞培养基DMEM,接种Marc-145细胞至细胞浓度为1×105/mL,培养4 d后细胞可生长至5~7×106/mL,然后以感染复数(MOI)为0.01接种PRRSV PC株病毒,接毒后36 h开始收获,连续收获3 d左右,收获的病毒滴度范围在106.0~107.3TCID50/mL之间,将收获的病毒液加入适量的保护剂,经冷冻干燥制备成疫苗,无菌、支原体等项目的检验均合格,3批疫苗的免疫保护率均为5/5。实验表明,用生物反应器微载体灌注培养Marc-145细胞制备PRRS疫苗工艺可行。 展开更多
关键词 微载体 灌注培养 猪繁殖与呼吸综合征疫苗
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高渗胁迫和灌流培养策略提高HEK 293细胞生产重组腺病毒载体产量
15
作者 张卓曦 白仲虎 +2 位作者 刘光胤 聂简琪 杨艳坤 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期3364-3378,共15页
由于各种疾病在全球范围内的肆虐,国际市场对重组腺病毒载体(adenoviralvector,Adv)疫苗的需求量急剧增加,而工艺研究是解决这一问题的有效手段之一。在细胞接毒前施加高渗胁迫可以提高分批培养模式下的Adv产量,新兴的灌流培养也可以显... 由于各种疾病在全球范围内的肆虐,国际市场对重组腺病毒载体(adenoviralvector,Adv)疫苗的需求量急剧增加,而工艺研究是解决这一问题的有效手段之一。在细胞接毒前施加高渗胁迫可以提高分批培养模式下的Adv产量,新兴的灌流培养也可以显著提高Adv的产量。将高渗胁迫工艺与灌流培养相结合,有望进一步提升高细胞密度生产过程中的Adv产量。本研究利用摇瓶结合拟灌流培养作为生物反应器灌流培养的缩小模型,使用渗透压为300–405 mOsm的培养基研究了高渗胁迫对细胞生长和Adv生产的影响。结果显示,在细胞生长阶段使用370mOsm的高渗透压培养基,在病毒生产阶段使用300 mOsm的等渗透压培养基的灌流培养工艺有效地提高了Adv的产量。进一步研究发现这可能归因于病毒复制后期HSP70蛋白的表达量增加。将这种工艺放大至生物反应器中,Adv的产量达到3.2×10^(10)IFU/mL,是传统灌流培养工艺的3倍。本研究首次将高渗胁迫工艺与灌流培养相结合的策略应用于HEK 293细胞生产Adv,同时揭示了高渗胁迫工艺增产Adv的可能原因,为HEK 293细胞生产其他类型Adv的工艺优化提供了借鉴。 展开更多
关键词 高渗胁迫 灌流培养 HEK 293细胞 腺病毒载体
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哺乳动物细胞灌流培养工艺研究进展 被引量:3
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作者 苏爽 金永杰 +2 位作者 黄瑞晶 李剑 徐寒梅 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期105-110,共6页
当前生物制药领域,由于成本压力、市场需求急剧波动以及生物仿制药的竞争日益激烈,现有的生物制造技术受到诸多挑战,生物技术公司越来越倾向于开发灵活、高效的创新型生产制造工艺。灌流培养作为当前哺乳动物细胞培养的重要工艺之一,不... 当前生物制药领域,由于成本压力、市场需求急剧波动以及生物仿制药的竞争日益激烈,现有的生物制造技术受到诸多挑战,生物技术公司越来越倾向于开发灵活、高效的创新型生产制造工艺。灌流培养作为当前哺乳动物细胞培养的重要工艺之一,不仅可以通过不断移出副产物和添加营养物来提供有利于细胞的稳定环境,以解决蛋白质量不稳定或者表达量偏低等问题,还可以通过提高单位体积产率来优化产能利用率并提高生产效率。通过系统介绍灌流培养用于哺乳动物细胞培养的研究进展,为其进一步开发与应用提供参考。 展开更多
关键词 灌流培养 哺乳动物细胞 培养工艺 连续性工艺
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欧洲型PRRSV、PCV2重组痘病毒疫苗灌注式生物反应器培养工艺的建立 被引量:3
17
作者 韩继成 马海彬 +8 位作者 郭海宁 靖杰 张萍 孙文超 解长占 南福龙 崔卓栋 鲁会军 金宁一 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2016年第11期961-963,968,共4页
目的利用微载体-生物反应器技术培养乳仓鼠肾细胞,接种重组痘病毒rVTT-ORF2-EUO3O5,建立规模化制备欧洲型PRRSV、PCV2重组痘病毒疫苗的灌注式生产工艺。方法利用2L体积灌注式生物反应器培养BHK细胞,设定培养参数为温度37℃、溶氧度(DO)... 目的利用微载体-生物反应器技术培养乳仓鼠肾细胞,接种重组痘病毒rVTT-ORF2-EUO3O5,建立规模化制备欧洲型PRRSV、PCV2重组痘病毒疫苗的灌注式生产工艺。方法利用2L体积灌注式生物反应器培养BHK细胞,设定培养参数为温度37℃、溶氧度(DO)为60%,转速为80r/min,pH值为7.3。当90%微载体表面贴满BHK细胞时以0.1MOI的感染剂量接种重组痘病毒rVTT-ORF2-EUO3O5,设定感染参数为温度35℃、DO为50%、转速为50r/min,pH值为7.1,继续培养观察。结果在采用灌注式生物反应器技术制备重组痘病毒过程中的细胞培养阶段,细胞培养96h可获得1.587×1010个细胞数,细胞增殖39.67倍;在病毒增殖阶段,微载体上细胞完全脱落时的病毒滴度为2.12×109 PFU/ml。结论成功建立了欧洲型PRRSV、PCV2重组痘苗病毒灌注式生产工艺,为规模化制备重组痘病毒疫苗提供了技术参数。 展开更多
关键词 欧洲型PRRSV PCV2 重组痘苗病毒 生物反应器 灌注式生产工艺
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微流控芯片细胞灌流培养技术及其应用研究进展 被引量:2
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作者 王文甲 彭钊 +3 位作者 吕雪飞 邓玉林 李晓琼 徐建栋 《载人航天》 CSCD 北大核心 2021年第5期646-654,共9页
细胞培养是开展细胞生物学、生物医学及药物筛选、细胞分析等研究的重要方法。与静态培养相比,细胞的灌流培养能够持续提供营养并清除废物,有利于保持相对稳定的培养条件,受到研究者广泛关注。具有小型化、集成性、高度自动化等特点的... 细胞培养是开展细胞生物学、生物医学及药物筛选、细胞分析等研究的重要方法。与静态培养相比,细胞的灌流培养能够持续提供营养并清除废物,有利于保持相对稳定的培养条件,受到研究者广泛关注。具有小型化、集成性、高度自动化等特点的微流控芯片与细胞灌流培养系统的耦合,可以大大拓展宏观尺度的灌流和微观尺度的细胞培养能力。在系统介绍微流控细胞灌流培养芯片的设计与加工、细胞操作等基础之上,综述了近年来微流控芯片细胞灌流培养技术的应用及面临的挑战,讨论了微流控芯片细胞灌流培养技术在空间生命科学及航天医学等领域中的潜在应用前景。 展开更多
关键词 细胞培养 灌流培养 微流控芯片 空间生命科学
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氮、磷浓度对灌注搅拌式光生物反应器连续培养海带配子体细胞的影响 被引量:2
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作者 赵锐 陈思晔 +1 位作者 张宝红 齐瀚实 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期91-95,共5页
用搅拌式灌注光生物反应器对海带(Laminaria japonica)配子体细胞进行了连续培养,并研究了氮、磷两种营养元素对反应器培养海带配子体细胞的影响,首次定量描述了不同的恒定氮、磷浓度对配子体细胞生长的长期影响.研究结果表明,在培养液... 用搅拌式灌注光生物反应器对海带(Laminaria japonica)配子体细胞进行了连续培养,并研究了氮、磷两种营养元素对反应器培养海带配子体细胞的影响,首次定量描述了不同的恒定氮、磷浓度对配子体细胞生长的长期影响.研究结果表明,在培养液氮、磷摩尔浓度比固定在16:1,NO3-维持浓度达到0.412 mmol/L时,细胞在氮、磷稳定期的比生长速率达到最大值0.118 d-1,而NO3-稳定浓度达到约2.50 mmol/L时,细胞的生长开始明显受到抑制,在抑制阀值下,建立的Monod数学模型较精确地描述了细胞生长速率和氮、磷稳定浓度之间的关系.实验结果为大型海藻细胞或组织的光生物反应器培养提供了理论依据. 展开更多
关键词 光生物反应器 灌注培养 海带 配子体细胞
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三维培养条件下流体剪切力对人真皮成纤维细胞成骨分化的影响 被引量:2
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作者 张维 谭燃景 +6 位作者 唐辉 邱伟明 杨桂红 温旭红 闫洪涛 杨亚东 伍津津 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1416-1421,共6页
目的通过准静态平面流场灌注系统,探讨不同流体剪切力对三维培养条件下人真皮成纤维细胞增殖和成骨分化的影响。方法将人真皮成纤维细胞按2×105/m L密度接种于胶原水凝胶支架中,同时设置低流速处理组(low flow velocity treatment ... 目的通过准静态平面流场灌注系统,探讨不同流体剪切力对三维培养条件下人真皮成纤维细胞增殖和成骨分化的影响。方法将人真皮成纤维细胞按2×105/m L密度接种于胶原水凝胶支架中,同时设置低流速处理组(low flow velocity treatment group,LFV组)和高流速处理组(high flow velocity treatment group,HFV组)与三维静态培养的对照组(control group)进行比较。第3、6天和9天对各实验组进行HE染色并计数细胞;全程每隔3天测1次培养基中葡萄糖的消耗量;第21天行茜素红染色观察各组诱导矿化情况,同时采用FQ-PCR定量测定ALP和BMP-2基因的表达。结果 3组细胞均增殖明显,第6、9天LFV组细胞增殖最多,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);实验周期内各组培养基的葡萄糖含量均呈下降趋势,但组间比较差异无统计学意义;第21天茜素红染色3组均呈阳性,矿化结节面积大小统计显示HFV组最大,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);ALP和BMP-2基因表达量分别为LFV组:(1.780±0.233)/(2.788±0.241);HFV组:(2.262±0.306)/(4.576±0.253);对照组:(1.147±0.215)/(0.354±0.063),组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论流体剪切力能促进人真皮成纤维细胞的增殖和成骨分化,且流体剪切力较小时有利于细胞增殖,而较大时会在一定程度抑制细胞增殖。 展开更多
关键词 人真皮成纤维细胞 灌注培养 流体剪切力 三维支架 成骨分化
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