成人睾丸间质细胞的培养和鉴定 被引量：15

1

作者 孙祥宙 邓春华 +1 位作者 郭海彬 刘建中 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2005年第5期356-358,共3页

目的寻求一种有效的体外分离、纯化成人睾丸间质细胞的方法。方法利用4个梯度(60%、34%、26%、21%)的Percoll液分离、纯化成人睾丸间质细胞。对分离的细胞进行细胞学观察、锥虫蓝染色、3β羟基类固醇脱氢酶(3βHSD)染色、分泌睾酮能力... 目的寻求一种有效的体外分离、纯化成人睾丸间质细胞的方法。方法利用4个梯度(60%、34%、26%、21%)的Percoll液分离、纯化成人睾丸间质细胞。对分离的细胞进行细胞学观察、锥虫蓝染色、3β羟基类固醇脱氢酶(3βHSD)染色、分泌睾酮能力和绒毛膜促性腺激素(hCG)对分离睾丸间质细胞的作用等检测。结果通过该方法能够获得高纯度(>90%)的成人睾丸间质细胞,并通过上述实验检测证实分离、纯化的睾丸间质细胞有良好的分泌睾酮能力。结论采用该方法对成人睾丸间质细胞进行初步的分离和纯化是简单有效的。 展开更多

关键词 睾丸间质细胞 percoll液 分离 纯化 成年人

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密度梯度离心法同时分离新生大鼠原代心肌细胞与成纤维细胞 被引量：8

2

作者 陈希 许瑞 +2 位作者 蒋易楠 祝伟娜 王耀辉 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期423-430,共8页

本文旨在探讨一种改良的同时分离新生大鼠原代心肌细胞和成纤维细胞的方法,以建立良好的原代心肌细胞及成纤维细胞研究模型。无菌状态下取Wistar乳鼠(出生不超过2天)心室,用II型胶原酶消化,控制消化时间及次数、搅拌速度、离心次数和速... 本文旨在探讨一种改良的同时分离新生大鼠原代心肌细胞和成纤维细胞的方法,以建立良好的原代心肌细胞及成纤维细胞研究模型。无菌状态下取Wistar乳鼠(出生不超过2天)心室,用II型胶原酶消化,控制消化时间及次数、搅拌速度、离心次数和速度等,结合Percoll密度梯度离心法分离心肌细胞及成纤维细胞,进行体外培养,观察细胞形态,继而用0.2%台盼蓝染色检测细胞存活率,免疫荧光染色法检测心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin I,c Tn I)、波形蛋白(Vimentin)及α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达,分别用于鉴定心肌细胞和成纤维细胞纯度。结果显示,本方法5次分离的心肌细胞平均存活率达92%,纯度达95%以上,细胞生长状态良好,可见贴壁自发搏动;成纤维细胞平均存活率达96%,纯度达94%。本方法能同时获得新生大鼠原代心肌细胞和成纤维细胞,具有很高的产量、存活率及纯度,且操作简便,耗时短,重复性好,是一种较为理想的原代细胞分离、培养方法,可满足各种后续实验要求。 展开更多

关键词 心肌细胞 成纤维细胞 原代培养:新生大鼠 percoll分离

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采用Percoll法分离、纯化鲫肝细胞 被引量：6

3

作者 张高峰 郭彤 +1 位作者 魏华 马珂 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期208-214,共7页

以Ⅳ型胶原酶消化法分离鲫(Carassius auratus)肝细胞,然后将其分成2组,一组不再经过进一步处理(即对照组);另一组再用Percoll液密度梯度离心纯化肝细胞(即实验组),然后将2组细胞接种于DMEM/F12培养基中培养10 d。在倒置显微镜下观察2... 以Ⅳ型胶原酶消化法分离鲫(Carassius auratus)肝细胞,然后将其分成2组,一组不再经过进一步处理(即对照组);另一组再用Percoll液密度梯度离心纯化肝细胞(即实验组),然后将2组细胞接种于DMEM/F12培养基中培养10 d。在倒置显微镜下观察2组肝细胞的形态并绘制细胞生长曲线;采用台盼蓝染色法比较2组肝细胞的存活率;通过HE染色法在光镜下检测肝细胞的纯度;采用MTT比色法测定2组肝细胞的增殖率;收集肝细胞培养上清液检测白蛋白、尿素以及乳酸脱氢酶的水平以检测2组肝细胞功能。结果表明,对照组鲫肝细胞存活率为80.6%,纯度为83.2%;实验组肝细胞存活率和纯度明显高于对照组(P<0.05),分别为94.2%和95.1%。实验中发现,从开始接种到大部分肝细胞贴壁生长,实验组比对照组肝细胞的增殖明显加快(P<0.05)。白蛋白分泌功能、尿素合成能力及乳酸脱氢酶检测结果表明,实验组培养上清液中白蛋白分泌量、尿素合成能力明显高于对照组(P<0.05);而乳酸脱氢酶含量明显低于对照组(P<0.05)。结论认为,用Percoll梯度液分离纯化肝细胞,可提高肝实质细胞纯度和活力,适合体外原代培养。 展开更多

关键词 鲫 肝细胞 分离 纯化 percoll法

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小鼠肝脏淋巴细胞几种分离方法的比较 被引量：3

4

作者 孔晓明 金齐力 +4 位作者 韦莉 王婷 范伟 朱翔 刘勇 《蚌埠医学院学报》 CAS 2013年第8期1052-1055,共4页

目的:通过比较几种肝脏淋巴细胞分离方法得到的总淋巴细胞、T细胞、自然杀伤T细胞(NKT cells)及自然杀伤细胞(NK细胞)的比例和细胞绝对数,明确各种方法的适用范围。方法:按照析因设计,将不放血(A法)、摘眼球放血(B法)、体循环灌流(C法)... 目的:通过比较几种肝脏淋巴细胞分离方法得到的总淋巴细胞、T细胞、自然杀伤T细胞(NKT cells)及自然杀伤细胞(NK细胞)的比例和细胞绝对数,明确各种方法的适用范围。方法:按照析因设计,将不放血(A法)、摘眼球放血(B法)、体循环灌流(C法)、摘眼球结合体循环灌流(B法+C法)4种肝脏预处理方法和单浓度离心法(Ⅰ法)、非连续密度梯度离心法(Ⅱ法)2种Percoll分离方法进行全面组合,共获得8种组合条件,分离小鼠肝脏淋巴细胞,用流式细胞术检测各类型细胞比例。结果:肝脏预处理方法中B法+C法获得淋巴细胞比例最高,A法获得淋巴细胞绝对数最高,B法获得的NKT细胞和NK细胞比例和细胞绝对数均最高;Ⅱ法获得的淋巴细胞、T细胞、NKT细胞和NK细胞比例和细胞绝对数均高于Ⅰ法。对于NKT细胞比例和NK细胞绝对数,肝脏预处理方法和Percoll浓度之间有交互作用(P<0.01和P<0.05),其他均无交互作用(P>0.05)。结论:采用摘眼球放血结合体循环灌流法,结合Percoll非连续密度梯度法(33%+70%),可获得较高数量和比例的固有免疫细胞,有助于对肝脏固有免疫细胞如NKT细胞、NK细胞等的研究。 展开更多

关键词 细胞分离 肝脏淋巴细胞 分离方法 percoll 析因分析

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原代大鼠肝细胞分离与纯化方法 被引量：2

5

作者 戴虹 何贵清 +3 位作者 黄学惠 陈一晖 王超秀 李武 《昆明医学院学报》 2011年第7期22-25,共4页

目的探讨改良、简化肝细胞的灌注、分离方法,以提高细胞产量,降低制作成本.方法对传统的两步原位胶原酶灌流法进行改进,改变灌注方式,分离的大鼠肝细胞采用三次低速离心,台盼兰染色检测活率,并与Percoll梯度离心纯化法进行比较.结果大... 目的探讨改良、简化肝细胞的灌注、分离方法,以提高细胞产量,降低制作成本.方法对传统的两步原位胶原酶灌流法进行改进,改变灌注方式,分离的大鼠肝细胞采用三次低速离心,台盼兰染色检测活率,并与Percoll梯度离心纯化法进行比较.结果大鼠肝细胞经低速离心后,活率仅(48.38±6.97)%.三次离心后再经Percoll梯度离心纯化后活率为(92.63±2.50)%,纯度>95%,纯化前后活率比较差异有显著性(P<0.01).结论该方法要求设备简单、容易操作,细胞产量、活率及纯度高. 展开更多

关键词 肝细胞 分离 Ⅳ型胶原酶 percoll

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大鼠生精细胞分离方法的研究 被引量：9

6

作者 檀大羡 王植柔 +3 位作者 李莲军 刘锋 卢晟盛 卢克焕 《中国计划生育学杂志》 北大核心 2005年第4期234-236,共3页

目的:建立一种简单、有效的哺乳动物睾丸生精细胞分离方法。方法:采用研磨-Percoll法、单一酶-研磨-Percoll法、组合酶法制备成熟期前大鼠睾丸生精细胞,分析比较其细胞总数、分离所需时间和细胞纯度,以及检测细胞培养前后的存活率。结果... 目的:建立一种简单、有效的哺乳动物睾丸生精细胞分离方法。方法:采用研磨-Percoll法、单一酶-研磨-Percoll法、组合酶法制备成熟期前大鼠睾丸生精细胞,分析比较其细胞总数、分离所需时间和细胞纯度,以及检测细胞培养前后的存活率。结果:组合酶法得到的睾丸生精细胞总数最多、分离所需时间最短;获得的细胞含杂质最少、细胞存活率最高;细胞培养48h后的存活率高,与其他两种分离方法比较有显著性差异(P<0.05)。结论:用组合酶法能在较短时间内获得数量较多的、比较纯化和存活率较高的生精细胞。 展开更多

关键词 细胞分离方法 大鼠 percoll法 睾丸生精细胞 细胞总数 细胞培养 细胞存活率 显著性差异 动物睾丸 酶法制备 分析比较 方法比较 成熟期 时间 组合酶 研磨

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Percoll离心结合免疫磁珠分选的方法从外周血分离单核细胞 被引量：6

7

作者 肖剑梅 何韦韦 +2 位作者 王昊亮 万星 邓国宏 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期454-460,共7页

目的探讨采用Percoll密度梯度离心结合免疫磁珠分选从人外周血富集白细胞层中分离提纯单核细胞的方法。方法采用Ficoll密度梯度离心分离淋巴细胞得到外周血单个核细胞,Percoll密度梯度离心从外周血单个核细胞中富集单核细胞,免疫磁珠阴... 目的探讨采用Percoll密度梯度离心结合免疫磁珠分选从人外周血富集白细胞层中分离提纯单核细胞的方法。方法采用Ficoll密度梯度离心分离淋巴细胞得到外周血单个核细胞,Percoll密度梯度离心从外周血单个核细胞中富集单核细胞,免疫磁珠阴性分选纯化单核细胞。流式细胞术检测细胞CD14和CD16的表达,分析单核细胞分离纯度。M-CSF诱导单核细胞分化为巨噬细胞。IFN-γ诱导巨噬细胞促炎性分化后,流式细胞术分析共刺激分子及HLA-DR的表达,RT-qPCR检测其细胞因子表达。结果Percoll分离结合免疫磁珠阴性分选分离出纯度为93.1%±1.5%的单核细胞。分离出的单核细胞呈煎蛋形,能成功分化为体积大、黏附力强、且呈纺锤状的巨噬细胞。与对照组相比,巨噬细胞在IFN-γ刺激下促炎性分化后,共刺激分子及HLA-DR表达显著上调,TNF-α、IL-6、CXCL10和CXCL11 mRNA表达也均显著上调。结论Percoll密度梯度离心结合免疫磁珠阴性分选能分离出高纯度且具有功能活性的单核细胞。 展开更多

关键词 percoll 免疫磁珠分选 单核细胞 巨噬细胞 分离

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Percoll分离法结合免疫磁珠法分离提纯人外周血中性粒细胞方法的建立 被引量：4

8

作者 郑小莉 罗波 +2 位作者 梅志强 李申 刘佳佳 《现代医药卫生》 2011年第18期2723-2724,共2页

目的:探讨采用Percoll分离法结合免疫磁珠负性筛选法分离人外周血中性粒细胞的可行性。方法:采用台盼蓝染色观察活力,流式细胞仪检测荧光标记的CD62L表达阳性率。结果:分选后CD62L表达阳性细胞纯度达(95.5±2.2)%,细胞活力为(98.8&#... 目的:探讨采用Percoll分离法结合免疫磁珠负性筛选法分离人外周血中性粒细胞的可行性。方法:采用台盼蓝染色观察活力,流式细胞仪检测荧光标记的CD62L表达阳性率。结果:分选后CD62L表达阳性细胞纯度达(95.5±2.2)%,细胞活力为(98.8±2.7)%。结论:Percoll分离法结合免疫磁珠负性筛选法分选系统提纯人外周血中性粒细胞,细胞纯度高并对细胞的生物活性无明显影响,是一种更加有效的人外周血中性粒细胞分离提纯方法。 展开更多

关键词 percoll分离法 免疫磁珠法 人外周血中性粒细胞 分离提纯

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栽培草莓叶绿体分离与cpDNA的提取方法 被引量：2

9

作者 程慧 陈宝玉 +2 位作者 张燕 陈莹 乔玉山 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期2496-2501,共6页

以栽培草莓‘红颊’(Fragaria×ananassa Duch.‘Benihoppe’)新鲜幼嫩叶片为材料,利用高盐-低pH的缓冲液结合Percoll密度梯度离心分离纯化叶绿体,再用SDS-蛋白酶K法提取叶绿体DNA(cpDNA)。经荧光显微镜、琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增检... 以栽培草莓‘红颊’(Fragaria×ananassa Duch.‘Benihoppe’)新鲜幼嫩叶片为材料,利用高盐-低pH的缓冲液结合Percoll密度梯度离心分离纯化叶绿体,再用SDS-蛋白酶K法提取叶绿体DNA(cpDNA)。经荧光显微镜、琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增检测,结果表明:该方法分离的草莓叶绿体完整性高,叶绿体DNA质量好,纯度高,能够满足后续基因组测序等实验的基本要求,为草莓属及其他草本植物cpDNA的提取提供参考。 展开更多

关键词 草莓 叶绿体分离 叶绿体DNA提取 高盐低pH percoll密度梯度

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用percoll密度梯度离心法快速分离提纯大鼠再生肝细胞

10

作者 张贵生 《菏泽师专学报》 1999年第4期53-55,共3页

报导一种分离和纯化大鼠再生肝细胞的新方法——percoll密度梯度离心法。本方法快速稳定,而且便于提纯和体外培养,细胞成活力高。

关键词 percoll密度梯度离心 分离 提纯 再生肝细胞

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Percoll等密度梯度离心法分离利什曼原虫细胞核

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作者 张建文 李靖炎 《Zoological Research》 CAS CSCD 1989年第3期207-212,共6页

分离纯化锥虫类原生动物细胞核存在着许多困难,阻碍了人们对这类单细胞生物的细胞核在各方面作进一步研究。本文提出一个从破碎细胞开始的分离核的完整程序。采用起始密度为1.083的Percoll工作液作等密度梯度离心,获得了纯度较高的利什... 分离纯化锥虫类原生动物细胞核存在着许多困难,阻碍了人们对这类单细胞生物的细胞核在各方面作进一步研究。本文提出一个从破碎细胞开始的分离核的完整程序。采用起始密度为1.083的Percoll工作液作等密度梯度离心,获得了纯度较高的利什曼原虫(Leishmania gerbilli)细胞核。经测定,L.gerbilli细胞核在Percoll中的浮力密度为1.048—1.051。 展开更多

关键词 密度梯度离心 利什曼原虫 细胞核

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