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结核分枝杆菌RD1蛋白PE35干扰宿主细胞的IL-1β通信 被引量:1
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作者 冯婧 喻晓雯 《微生物学免疫学进展》 CAS 2022年第1期15-21,共7页
目的 结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis, MTB)PE35(Rv3872)是PE/PPE家族的成员,在多种压力条件下会下调表达。分析其在宿主天然免疫反应中的作用,为结核病的防治提供新思路。方法 将PE35通过脂质体转染进鼠巨噬细胞RAW264.7中,... 目的 结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis, MTB)PE35(Rv3872)是PE/PPE家族的成员,在多种压力条件下会下调表达。分析其在宿主天然免疫反应中的作用,为结核病的防治提供新思路。方法 将PE35通过脂质体转染进鼠巨噬细胞RAW264.7中,在用脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)刺激细胞后,通过RT-PCR和ELISA检测巨噬细胞中细胞因子的表达、Western blot检测巨噬细胞中炎性小体的表达和相关信号通路蛋白的磷酸化状态,探索PE35干扰的信号通路。结果 PE35在RAW264.7细胞中减弱了LPS诱导的白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)的产生和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide binding oligomerization domain like receptors 3, NLRP3)炎性小体的激活(P均<0.05)。PE35降低Akt和IκB-α蛋白的磷酸化(P均<0.05),从而抑制PI3K/Akt和核因子κB(nuclear factor kappa-B, NF-κB)信号通路的活化。结论 PE35通过减弱PI3K/Akt和NF-κB的信号传导来抑制NLRP3激活,从而降低了LPS诱导的巨噬细胞中IL-1β的产生。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 pe35 白细胞介素-1Β 核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎性小体 磷脂酰肌醇3-激酶/Akt丝氨酸/苏氨酸激酶 核因子ΚB
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结核分枝杆菌抗原PE35和PPE68基因多态性的初步研究 被引量:1
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作者 仇艳 蒋毅 +2 位作者 刘海灿 李马超 万康林 《疾病监测》 CAS 2015年第7期539-545,共7页
目的为研究结核分枝杆菌RD1区编码PE/PPE蛋白家族中的PE 35和PPE 68基因的多态性,并评估其基因多态性对免疫识别的影响。方法笔者从本实验室保存的来自国内不同地区的2346株结核分枝杆菌复合群临床分离株中,选取代表不同Spoligotyping... 目的为研究结核分枝杆菌RD1区编码PE/PPE蛋白家族中的PE 35和PPE 68基因的多态性,并评估其基因多态性对免疫识别的影响。方法笔者从本实验室保存的来自国内不同地区的2346株结核分枝杆菌复合群临床分离株中,选取代表不同Spoligotyping类型的161株临床分离结核分枝杆菌菌株,基因扩增后进行序列比对,比较其在T细胞抗原表位的差异。结果在161株菌株中,23株显示有PE 35基因多态性,8株有PPE 68基因多态性。在PE 35基因中,除了菌株JL06018的突变外的其余突变都导致其T细胞抗原表位的改变。PPE 68基因中,62个T细胞表位中有58个(占93.5%)发生了改变。非北京家族PE 35基因的突变率明显高于北京家族(P<0.05),而PPE 68基因突变虽是非北京家族高于北京家族,但差异无统计学意义。结论 PE 35和PPE 68的编码基因存在明显的多态性,并很有可能导致蛋白功能的明显改变。此外,这2个蛋白的人类T细胞表位是高度可变的,提示这2种蛋白可能通过参与分化选择来逃避宿主免疫。北京家族可能比非北京家族更容易被宿主T细胞识别,进而更容易传播。 展开更多
关键词 多态性 结核分枝杆菌 pe 35 Ppe 68
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结核分枝杆菌PE35在大肠杆菌中的可溶性表达及产物纯化 被引量:1
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作者 熊志红 朱琰 +2 位作者 孙昌文 庄玉辉 程小星 《临床肺科杂志》 2010年第12期1709-1711,共3页
目的利用大肠杆菌表达系统大量获得重组的结核分枝杆菌PE35蛋白,并初步评估其在结核病血清学诊断方面的价值。方法用聚合酶链反应(PCR)方法从结核分枝杆菌H37Rv全基因组中获得PE35基因克隆到pET24b中,转化BL21(DE3)构建大肠杆菌表达株;... 目的利用大肠杆菌表达系统大量获得重组的结核分枝杆菌PE35蛋白,并初步评估其在结核病血清学诊断方面的价值。方法用聚合酶链反应(PCR)方法从结核分枝杆菌H37Rv全基因组中获得PE35基因克隆到pET24b中,转化BL21(DE3)构建大肠杆菌表达株;聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定重组蛋白及其表达方式;使用Ni-sepharose纯化蛋白;Western-blot检测结核病人血清的抗结核抗体。结果酶切鉴定和DNA序列分析显示构建了正确的pET-PE35原核表达载体,并能在大肠杆菌BL21(DE3)中可溶性地表达分子量大小相符的重组蛋白。纯化后的蛋白纯度达到90%以上,能与结核病人血清抗体结合。结论成功地构建了pET-PE35原核表达载体,并获得较纯的重组PE35蛋白,此蛋白能检测结核病人血清抗体。为探讨PE35蛋白在结核病的基础研究与诊断运用奠定了基础。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 pe35 可溶性表达 纯化
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Evolution of PE35 and PPE68 Gene Families in Mycobacterium: Roles of Horizontal Gene Transfer and Evolutionary Constraints
4
作者 Ashay Bavishi Lin Lin +1 位作者 Madhusudan Choudhary Todd P. Primm 《Journal of Tuberculosis Research》 2014年第4期181-198,共18页
Mycobacterium is a genus of bacteria with over a hundred non-pathogenic and pathogenic species, best recognized for certain members known to cause diseases such as tuberculosis and leprosy. Two novel protein families ... Mycobacterium is a genus of bacteria with over a hundred non-pathogenic and pathogenic species, best recognized for certain members known to cause diseases such as tuberculosis and leprosy. Two novel protein families important in the pathogenesis of Mycobacterium species are the PE and PPE families. These two protein families affect the antigenic profiles, disturbing host immunity. To better understand the origin and evolution of these gene families and the differences in their composition between pathogenic and non-pathogenic strains, several bioinformatic analyses were conducted both among Mycobacterium and closely related species that contain PE35 and PPE68 gene homologs. The methods included protein homology searches (BLASTP), horizontal gene transfer analysis (IslandViewer), phylogenetic analysis, gene cluster analysis and structural and functional constraints. Results revealed that PE and PPE gene homologs were not only limited to Mycobacterium, but also existed in three other non-mycobacterial genera, Rhodococcus, Tsukamurella and Segniliparus, and were possibly initially acquired from non-mycobacterial microorganisms by multiple horizontal gene transfers. Results also demonstrated that PE and PPE genes were more diverse and more rapidly evolving in pathogenic Mycobacterium as compared with non-pathogenic Mycobacterium and other non-mycobacterial species. These findings possibly shed light on the diverse functions and origins of the PE/PPE proteins among these organisms. 展开更多
关键词 pe35 Ppe68 HORIZONTAL GENE TRANSFER MYCOBACTERIUM
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结核分枝杆菌PE35基因真核表达载体的构建及其表达
5
作者 熊志红 李仁德 +2 位作者 杨丽萍 朱琰 程小星 《中国预防医学杂志》 CAS 2011年第12期995-997,共3页
目的获得带FLAG标签的结核分枝杆菌PE35的真核表达载体,并在293T细胞中检测其表达。方法用PCR方法从质粒上获得PE35基因全长,克隆到pCDNA3-FLAG真核表达载体上;用脂质体介导的基因瞬时转染法,将构建正确的表达载体转染293T细胞;Western-... 目的获得带FLAG标签的结核分枝杆菌PE35的真核表达载体,并在293T细胞中检测其表达。方法用PCR方法从质粒上获得PE35基因全长,克隆到pCDNA3-FLAG真核表达载体上;用脂质体介导的基因瞬时转染法,将构建正确的表达载体转染293T细胞;Western-blot法检测细胞中的FLAG融合蛋白的表达。结果酶切鉴定和DNA序列分析显示构建了正确的FLAG-PE35真核表达载体,并能在真核细胞中表达相对分子量大小相符的重组蛋白。结论成功构建了FLAG-PE35真核表达载体,并在真核细胞中得到表达。为研究PE35蛋白在结核分枝杆菌中的功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 pe35 真核表达
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与结核分枝杆菌PE25/PPE41和PE35/PPE68相互作用的宿主蛋白的筛选 被引量:1
6
作者 李田田 陈利苹 刘思国 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期504-507,共4页
为筛选与结核分枝杆菌(MTB)的PE25/PPE41和PE35/PPE68两对异源二聚体相互作用的宿主蛋白,本研究以这两对异源二聚体为诱饵蛋白筛选与其相互作用的宿主蛋白。首先将PCR扩增的PE25/PPE41或PE35/PPE68基因串联克隆于改造的pc DNA3.1(+)中(... 为筛选与结核分枝杆菌(MTB)的PE25/PPE41和PE35/PPE68两对异源二聚体相互作用的宿主蛋白,本研究以这两对异源二聚体为诱饵蛋白筛选与其相互作用的宿主蛋白。首先将PCR扩增的PE25/PPE41或PE35/PPE68基因串联克隆于改造的pc DNA3.1(+)中(在5'端引入了以编码烟草蚀纹病毒蛋白酶切位点的序列连接的ZZ和Flag标签序列),构建诱饵重组质粒pcDNA-PE25-PPE41和pc DNA-PE35-PPE68。分别将构建的诱饵重组质粒转染293T细胞后提取细胞总蛋白,经ZZ和Flag标签蛋白两步串联亲和层析钓取宿主蛋白,SDS-PAGE电泳分离后切取差异蛋白胶条进行质谱分析,结果显示,PE25/PPE41鉴定到15个差异蛋白,PE35/PPE68鉴定到29个差异蛋白,并分别挑选了与PE25/PPE41和PE35/PPE68相互作用的3个和7个差异蛋白,为进一步验证与PE25/PPE41和PE35/PPE68直接作用的宿主蛋白及研究其生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 pe25/Ppe41 pe35/Ppe68 宿主互作蛋白 串联亲和纯化
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优化密码子提高EGF-PE35KDEL表达量
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作者 李树民 李俊植 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2005年第2期107-108,110,共3页
目的 提高EGF- PE35KDEL融合蛋白的表达量。方法 设计合成含优化密码子的EGF序列 ,定向克隆于pET2- 8a- EGF PE35KDEL的NcoⅠ和NdeⅠ位点 ,构建表达质粒pET2 8a pBEGF PE35KDEL。将两种表达质粒转化至BL2 1中 ,经IPTG诱导 ,比较表达... 目的 提高EGF- PE35KDEL融合蛋白的表达量。方法 设计合成含优化密码子的EGF序列 ,定向克隆于pET2- 8a- EGF PE35KDEL的NcoⅠ和NdeⅠ位点 ,构建表达质粒pET2 8a pBEGF PE35KDEL。将两种表达质粒转化至BL2 1中 ,经IPTG诱导 ,比较表达量。结果 优化密码子的EGF- PE35KDEL表达量要高于未优化的EGF -PE35KDEL。结论 优化密码子能促进EGF -PE35KDEL的表达。 展开更多
关键词 BEGF pe ET 表达质粒 表达量 密码子 诱导 定向克隆 方法设计 融合蛋白
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结核分枝杆菌H37Rv株PE_PGRS35蛋白的表达、纯化及其生物信息学分析 被引量:2
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作者 袁美丽 王楚彤 +3 位作者 李敏英 李柏青 许涛 汪洪涛 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期32-38,共7页
目的克隆结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)PE_PGRS35基因,构建pET28a-PE_PGRS35重组表达载体,异源表达并纯化MTB H37Rv的PE_PGRS35蛋白,经生物信息学分析后,探讨抗MTB新型靶点。方法PCR扩增PE_PGRS35编码基因,利用重组克... 目的克隆结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)PE_PGRS35基因,构建pET28a-PE_PGRS35重组表达载体,异源表达并纯化MTB H37Rv的PE_PGRS35蛋白,经生物信息学分析后,探讨抗MTB新型靶点。方法PCR扩增PE_PGRS35编码基因,利用重组克隆技术,构建表达载体pET28a-PE_PGRS35,测序鉴定成功后转化至大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)中,加入异丙基-β-D半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达。用Ni柱亲和层析纯化PE_PGRS35蛋白,并对其进行生物信息学分析。结果经测序证明pET28a-PE_PGRS35表达载体构建正确,表达的PE_PGRS35蛋白相对分子质量约53000,主要以包涵体形式存在,纯度达90%。生物信息学分析表明,PE_PGRS35蛋白为酸性不稳定性蛋白,主要二级结构为β-折叠和无规则卷曲,无跨膜区,推测为膜外蛋白,有39个磷酸化位点和2个保守结构域,有Rv1769、PPE8、PPE64、PPE54、PPE24、PPE16、PPE35、PPE6、PPE28、PE2共10个蛋白与PE_PGRS35蛋白相互作用。结论成功获得高纯度的PE_PGRS35蛋白,为进一步开发抗MTB药物新型靶点提供了参考。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 pe_PGRS35蛋白 原核表达 生物信息学分析
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结核分枝杆菌NrdF1、PE_PGRS35、Rv1985c和Rv1986的原核表达及检测牛结核病抗体之应用 被引量:1
9
作者 孙林 刘艳 +3 位作者 闵晨雨 胡亚辰 陈祥 焦新安 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期782-786,共5页
目的在大肠杆菌中表达结核分枝杆菌RD2区域的NrdF1、PE_PGRS35、Rv1985c和Rv1986蛋白,并评价诊断牛结核病中的应用潜能。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,PCR扩增nrdF1,pe_pgrs35,rv1985c和rv1986基因,并将其克隆到表达载体中,... 目的在大肠杆菌中表达结核分枝杆菌RD2区域的NrdF1、PE_PGRS35、Rv1985c和Rv1986蛋白,并评价诊断牛结核病中的应用潜能。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,PCR扩增nrdF1,pe_pgrs35,rv1985c和rv1986基因,并将其克隆到表达载体中,重组表达质粒转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导目的蛋白表达,镍柱亲和纯化重组蛋白,SDS-PAGE和Western blotting试验鉴定目的蛋白的表达及其反应原性。以纯化的重组蛋白作为包被抗原,通过ELISA方法测定牛血清中特异性抗体,以之评价这些蛋白用于牛结核病抗体检测的价值。结果成功表达了NrdF1、PE_PGRS35、Rv1985c和Rv1986蛋白,相对分子质量为42ku、63ku、46ku和41ku,对表达产物进行镍柱亲和纯化,获得了纯度较高的融合蛋白。重组蛋白均能与抗HIS单抗发生特异反应,表现出良好的反应原性。通过间接ELISA方法检测牛血清中特异性抗体,阳性检出率分别为7.35%、22.06%、16.18%和16.18%。结论结核分枝杆菌原核表达的NrdF1、PE_PGRS35、Rv1985c和Rv1986蛋白具有用作牛结核病血清学诊断试剂的潜能。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 NrdF1 pe_PGRS35 Rv1986 原核表达 牛结核病 血清学诊断 NrdF1 pe_PGRS35 Rv1986
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