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高致病性PRRSV的分离及其Nsp2和ORF5基因的序列分析 被引量:29
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作者 马静云 李浩波 +4 位作者 王玲玲 何晓明 王连想 谢青梅 毕英佐 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期650-657,共8页
从广东省不同地区疑似高致病性猪生殖与呼吸综合征病料中分离出能引起Marc-145细胞病变的病毒,经RT-PCR检测,确定分离物中存在美洲型猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),将此细胞病毒液命名为GDBl,用其感染回归5头40日龄健康仔猪,采... 从广东省不同地区疑似高致病性猪生殖与呼吸综合征病料中分离出能引起Marc-145细胞病变的病毒,经RT-PCR检测,确定分离物中存在美洲型猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),将此细胞病毒液命名为GDBl,用其感染回归5头40日龄健康仔猪,采集发病及死亡猪组织,重新用Marc-145细胞进行病毒分离,将再次分离到的病毒命名为GDB1F。对GDB1、GDBIF的Nsp2、ORF5基因序列进行测定分析。结果表明,单独感染猪2/2发病死亡,同居感染的3头猪全部发病,2头死亡;感染后2~4d所有感染猪均出现体温升高。死亡猪表现为严重的出血性、间质性肺炎,肢体远端皮表出血。序列分析结果表明,GDB1和GDB1F株的Nsp2基因与国内高致病性PRRSV分离株JXA1、HN2Nsp2、HNXT1、HNyz、HUB2、HUN1的同源性很高,达98.4%~99.0%。GDB1和GDB1F株的ORF5基因存在部分突变,没有缺失,与国内高致病性PRRSV分离株JXA1、HUB2、JX0612、GDZC1的同源性高达97.5%~99.8%。 展开更多
关键词 高致病性猪生殖与呼吸综合征病毒 分离 nsp2基因 ORF5基因 序列分析
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江苏省猪高热病病例主要继发感染病毒的多重PCR检测 被引量:24
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作者 叶俊平 盛瑜 +2 位作者 朱丽娜 高崧 刘秀梵 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1029-1034,共6页
应用建立的2个多重PCR方法,对2005~2006年收集于江苏省的211份猪高热病疑似病料进行了检测。结果,PRRSV阳性率为51.2%,PCV2阳性率为44.1%,CSFV阳性率为10.4%,PPV阳性率为3.9%,PRV阳性率为2.4%。2005年病料中PCV2阳性率... 应用建立的2个多重PCR方法,对2005~2006年收集于江苏省的211份猪高热病疑似病料进行了检测。结果,PRRSV阳性率为51.2%,PCV2阳性率为44.1%,CSFV阳性率为10.4%,PPV阳性率为3.9%,PRV阳性率为2.4%。2005年病料中PCV2阳性率为21.2%,2006年为73.2%;2005年PRRSV阳性率为38.1%,2006年为67.7%。2006年猪高热病疫情比2005年严重,PCV2和PRRSV可能在其中发挥了协同致病作用。对10个PRRSV分离株ORF5基因和Nsp2基因进行的测序表明,2006年分离株Nsp2基因中有连续87个碱基的缺失。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪圆环病毒2 猪细小病毒 猪瘟病毒 猪伪狂犬病病毒 猪高热病 多重PCR ORF5基因 nsp2基因
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2014~2015年河南地区PRRSV的分子检测及NSP2、ORF5基因变异分析 被引量:18
3
作者 郭天准 常洪涛 +7 位作者 崔丹丹 王新港 周峰 赵军 杨霞 李永涛 陈陆 王川庆 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期298-307,共10页
为了解河南地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株的分子特征及变异情况,本研究对2014~2015年河南各地118个养殖场的250份PRRS疑似病料进行RT-PCR检测,并对PRRSV阳性样品的NSP2和ORF5基因进行测序及变异分析。结果显示,PRRSV阳... 为了解河南地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株的分子特征及变异情况,本研究对2014~2015年河南各地118个养殖场的250份PRRS疑似病料进行RT-PCR检测,并对PRRSV阳性样品的NSP2和ORF5基因进行测序及变异分析。结果显示,PRRSV阳性样品共58份,阳性率为23.2%;扩增得到29个NSP2基因序列和31个ORF5基因序列;遗传进化分析表明,河南地区PRRSV流行毒株主要为美洲型毒株,其中14株与高致病性PRRSV(HP-PRRSV)高度同源,其余15株与美洲毒株NADC30高度同源,且该类毒株的nsp2蛋白存在131个氨基酸的不连续缺失,与国内及韩国报道的新变异毒株具有相似的缺失特征。与2012~2013年河南地区PRRSV分子流行病学调查结果相比,2014~2015年河南地区PRRSV流行株主要以HP-PRRSV和NADC30-Like毒株为主,尤其是后者在流行毒株中所占比例急剧上升,并且PRRSV流行毒株的NSP2和ORF5基因均发生很大变异,提示有必要对PRRSV的流行和变异进行持续监测,并对其致病性等进行深入研究,从而为新型疫苗及抗病毒药物的研发提供科学的参考依据。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 nsp2基因 ORF5基因 NADC30株 变异分析
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广西“猪高热综合征”主要病原调查及PRRSV Nsp2基因变异分析 被引量:17
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作者 王仕荣 向晖 +9 位作者 吴健敏 王仰杰 梁安莉 覃绍敏 黄红梅 陈凤莲 马玲 谢彬 邵帅 袁书智 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期249-253,共5页
收集广西境内39个市(县)137个不同规模猪场及农村散养户146份病料,经检测发现广西"猪高热综合征"主要病原以PRRSV变异株(NSP2基因缺失)为主,检出率高达59.59%,其次为PCV占41.78%,CSFV占4041%,SIV占10.27%,PRV、HPS均占2.05%... 收集广西境内39个市(县)137个不同规模猪场及农村散养户146份病料,经检测发现广西"猪高热综合征"主要病原以PRRSV变异株(NSP2基因缺失)为主,检出率高达59.59%,其次为PCV占41.78%,CSFV占4041%,SIV占10.27%,PRV、HPS均占2.05%。将来自广西不同地区的15株PRRSV变异株(包括1株经典株)与国内外参考毒株部分Nsp2序列进行同源性比较,结果发现广西PRRSV变异株Nsp2序列之间同源性为83.3%~100%,与国内其他变异株同源性为83.2%~98.6%。这些毒株与国内其他变异株有完全一致的缺失特征。广西PRRSV变异株可分为2个亚群,亚群Ⅰ主要以桂西北地区毒株组成,亚群Ⅱ主要以桂东南地区毒株组成。所有的广西PRRSV流行株与国内其他毒株一样均属于美洲型。调查结果显示,广西"猪高热综合征"主要病原PRRSV变异株与PCV、CSFV等其他病原菌混合感染十分严重。其中,二重感染、三重感染分别高达42.53%和22.99%。 展开更多
关键词 高致病性猪蓝耳病 检测 nsp2基因 变异分析
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中国部分地区2005-2007年猪繁殖与呼吸综合征病毒分离株ORF5基因和Nsp2基因遗传变异分析 被引量:15
5
作者 薛青红 张彦明 +4 位作者 刘湘涛 郎洪武 邹敏 高金源 邓永 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期1805-1812,共8页
【目的】为分析2005-2007年间中国部分省区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株的分子生物学特征,了解其遗传演化规律,查明中国目前PRRSV流行毒株现状。【方法】应用病毒分离方法从中国4个省份在2005-2007年间采集的81份疑似蓝耳病... 【目的】为分析2005-2007年间中国部分省区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株的分子生物学特征,了解其遗传演化规律,查明中国目前PRRSV流行毒株现状。【方法】应用病毒分离方法从中国4个省份在2005-2007年间采集的81份疑似蓝耳病病料中分离到36株猪繁殖与呼吸综合征病毒,应用RT-PCR方法对36株PRRSV现地分离株的ORF5基因和Nsp2基因进行扩增和序列分析。【结果】36株现地分离株均属于美洲型PRRSV,ORF5基因全长均为603bp,未发现有基因缺失或插入,编码约200个氨基酸,分离株推导氨基酸序列变异主要发生在9~39位;36个分离株中有15株PRRSVNsp2基因全长为2940bp,21株PRRSVNsp2基因全长为2850bp;发生Nsp2缺失的PRRSV在Nsp2基因第481位、532~560位发生了不连续缺失,共缺失30个氨基酸。与GeneBank中收录的14个PRRSVORF5、Nsp2基因进行核苷酸及氨基酸序列比较和分析,系统进化关系显示,除B02-2005株可能与疫苗株有关外,多数现地分离株与Ch-1a株遗传距离较近,不同年份分离到的毒株与早期PRRSV分离株的同源性逐年降低。【结论】根据氨基酸变异情况对PRRSV现地分离株进行亚群聚类分析,发现36株现地分离株分别归属于以VR-2332为代表的4亚群,以BJ-4为代表的1亚群和以Ch-1a为代表的2亚群。进化关系表明PRRSVORF5、Nsp2基因及其推导的氨基酸序列均发生了较大变异,不同地区PRRSV分离株的遗传关系存在交叉现象,地域特征不明显。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 病毒分离 ORF5基因 nsp2基因 遗传变异
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PRRSV经典与高致病性毒株RT-PCR鉴别检测方法的建立 被引量:12
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作者 肖跃强 管宇 +4 位作者 唐娜 魏凤 杨慧 曲光刚 沈志强 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期873-877,共5页
根据GenBank登录的经典与高致病性PRRSVNsp2序列,设计了1对引物,所扩增的序列包含高致病性毒株缺失部分,用于区分经典与高致病性毒株,并对扩增条件进行了优化。结果表明,应用该方法,能从经典与高致病性PRRSV基因组中分别扩增出573,483b... 根据GenBank登录的经典与高致病性PRRSVNsp2序列,设计了1对引物,所扩增的序列包含高致病性毒株缺失部分,用于区分经典与高致病性毒株,并对扩增条件进行了优化。结果表明,应用该方法,能从经典与高致病性PRRSV基因组中分别扩增出573,483bp的特异性片段,病毒基因组混合后能够同时扩增;并可以检测出1.8TCID50/100μL经典毒株及0.6TCID50/100μL高致病毒株的病毒RNA;对CSFV,JPV,PEDV,TGEV,RV,PPV,PRV,PCV-2等常见猪病毒病病原的鉴别诊断均为阴性;对分离的8株PRRSV进行检测,3株为经典毒株,5株为高致病毒株;对采集的59份确诊病料进行了检测,21份为经典毒株感染,38份为高致病毒株感染。本研究建立的RT-PCR诊断方法,具有特异、灵敏、快速等特点,可用于区分PRRSV经典与高致病毒株。 展开更多
关键词 PRRSV nsp2基因 RT-PCR
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2021年~2022年山东部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒的遗传进化分析 被引量:9
7
作者 吕硕林 于海丽 +5 位作者 王彬 时建皓 单虎 马清霞 张传美 杨海燕 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期1207-1215,1222,共10页
为了解山东部分地区PRRSV的分子流行及遗传进化情况,本研究对2021年~2022年采自山东部分地区的214份疑似PRRSV感染猪的临床样品通过RT-PCR检测,并经PCR扩增PRRSV阳性样品的ORF5基因和Nsp2基因,采用MegAlign和MEGA X软件对这两个基因进... 为了解山东部分地区PRRSV的分子流行及遗传进化情况,本研究对2021年~2022年采自山东部分地区的214份疑似PRRSV感染猪的临床样品通过RT-PCR检测,并经PCR扩增PRRSV阳性样品的ORF5基因和Nsp2基因,采用MegAlign和MEGA X软件对这两个基因进行同源性、遗传进化及其编码的关键氨基酸位点突变及分析。结果显示,214份临床样品中检出51份PRRSV阳性样品,检出率为23.83%。表明山东部分地区PRRSV的感染较为严重。经PCR扩增并测序得到26条ORF5基因序列和20条Nsp2基因序列。26条ORF5基因序列之间的同源性为98.7%~77.8%,与6株PRRSV参考株(经典株VR2332、Ch-1a、疫苗株JXA1、QYYZ及流行株NADC30、NADC34)相应基因序列的同源性在80.1%~98.7%,其中210412等17株PRRSV ORF5基因序列与NADC30株ORF5基因序列的同源性为80.1%~91.9%;进化树结果显示,26条ORF5基因分布于4个谱系中,分别为Lineage1 (220406等22株PRRSV ORF5基因)、Lineage3 (220714和211111株)、Sub Lineage8.7 (HP-PRRSV-Like)(210806株)、Sub Lineage5.1(VR2332-Like)(210629株)谱系;20条Nsp2基因主要分布于3个谱系中,其中220110等13株PRRSV Nsp2基因位于Sub Lineage1.8 (NADC30-Like)谱系,210629株位于Lineage5谱系,与VR2332株遗传距离较近;220714等6株PRRSV Nsp2基因位于Lineage8谱系。上述结果表明,山东部分地区流行的主要为PRRSV NADC30株,属于PRRSV-2,且流行的PRRSV的谱系较复杂,主要以Lineage1、Lineage8及Sub Lineage1.8谱系为主。关键氨基酸位点变异分析结果显示,仅Sub Lineage1.8谱系中的211221和220109株GP5氨基酸序列表现为强毒株特征R^(13)及R^(151);210806株与RespPRRS MLV均为A^(137);除210806株在非中和表位(aa180~aa197)处的变化较为活跃外,其余GP5氨基酸序列与参考株GP5氨基酸序列的变异特征基本一致;在T细胞表位(aa117~aa131)中,Sub Lineage1.8谱系中的多数流行株(包括本研究中的211110等12株)均出现L^(120)S、L^(120)F或I^(125)F、I^(125)L变异。210629株 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 遗传进化 ORF5基因 nsp2基因
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PRRSV山西株ORF5和Nsp2基因序列分析 被引量:8
8
作者 姚敬明 刘文俊 +7 位作者 罗甜甜 吴忻 王娟萍 孟帆 韩一超 樊振华 米瑞娟 詹海杰 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期1-5,共5页
采用RT-PCR方法对2009—2011年山西省分离的5株猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的ORF5和Nsp2(2503~3269nt)基因进行克隆和测序,并对其基因序列和推导的氨基酸序列与国内外毒... 采用RT-PCR方法对2009—2011年山西省分离的5株猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的ORF5和Nsp2(2503~3269nt)基因进行克隆和测序,并对其基因序列和推导的氨基酸序列与国内外毒株进行了同源性分析。序列分析结果显示,5株分离株Nsp2基因与国内分离的PRRSV变异株(JXA1、HuN、HUN4、HUB1)的序列同源性最高,为96.8%~98.2%,且缺失位置一致,均存在2个位点30个氨基酸缺失;ORF5基因大小为603bp,编码200个氨基酸,第13、151位均为具有强毒特性的精氨酸(R),137位为丝氨酸(S),表明这5株均为野毒株,与国内分离的PRRSV变异株(JXA1、HuN、HUN4、HUB1)毒株的序列同源性最高,为96.5%~98.0%。结果表明,山西省内目前流行的PRRSV为Nsp2缺失30个氨基酸的变异毒株。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5基因 nsp2基因 变异分析
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广西高致病性PRRSV Nsp2基因的克隆、序列分析和抗原表位预测 被引量:6
9
作者 谢丽基 谢芝勋 +4 位作者 刘加波 庞耀珊 谢志勤 邓显文 唐小飞 《动物医学进展》 CSCD 2008年第1期1-4,共4页
根据猪繁殖与吸吸综合征病毒(PRRSV)VR2332 Nsp2基因序列合成特异性引物,对广西分离的高致病性PRRSV进行RT-PCR扩增,将扩增出的796bp片段插入pMD18-T载体中进行序列测定和分析,并用DNA Star软件对Nsp2基因推导的氨基酸序列进行了... 根据猪繁殖与吸吸综合征病毒(PRRSV)VR2332 Nsp2基因序列合成特异性引物,对广西分离的高致病性PRRSV进行RT-PCR扩增,将扩增出的796bp片段插入pMD18-T载体中进行序列测定和分析,并用DNA Star软件对Nsp2基因推导的氨基酸序列进行了表位分析。结果显示,广西3个县、市的PRRSV分离株Nsp2基因第483位和第532位~第560位氨基酸发生缺失,核苷酸序列之间的同源性为97.0%~97.49/6,推导编码的氨基酸序列之间的同源性为93.6%~94.7%;与PRRSV VR2332株、MLV株和CH-1a株核苷酸之间的同源性分别为79.0%~79.2%、78.8%~78.9%和88.2%~89.3%;氨基酸之间的同源性分别为59.4%~60.2%、59.4%~60.2%和70.9%~81.6%,表明广西3个县、市的PRRSV分离株Nsp2基因与VR2332株、MLV株和CH-1a株比较变异较大。表位分析表明,由于博白株的Nsp2基因的第532位~560位氨基酸的缺失,与VR2332株比较,其亲水性、抗原指数均发生了大的变化。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 nsp2基因 克隆 序列分析
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山东及周边部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒的变异与遗传演化分析 被引量:6
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作者 胡栋 徐煜琳 +8 位作者 朱迎春 赵情 王亭亭 庞恒 李传刚 于江 常维山 吴家强 彭军 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1249-1260,共12页
为了解中国山东及周边部分地区自2017年以来猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行株的分子流行病学特征、基因组变化规律,作者收集来自山东省、河南省和江苏省的部分猪场采集及送检的疑似PRRS症状猪组织样品70份,利用RT-PCR方法对其进行PR... 为了解中国山东及周边部分地区自2017年以来猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行株的分子流行病学特征、基因组变化规律,作者收集来自山东省、河南省和江苏省的部分猪场采集及送检的疑似PRRS症状猪组织样品70份,利用RT-PCR方法对其进行PRRSV检测。对部分阳性病料中PRRSV的基因重组、决定中国高致病性PRRSV(HP-PRRSV)致病性和复制力的Nsp9第561、586和592位氨基酸等进行分析,以探明该区域PRRSV的遗传演化规律。结果显示,PRRSV检出率为55.7%,从上述样品筛选11株PRRSV分离株。Nsp2序列分析显示,与经典美洲毒株VR-2332相比,7株PRRSV分离株的Nsp2蛋白分别在第481及533-561位发生了30个氨基酸的不连续缺失,这与我国自2006年以来流行的HP-PRRSV的缺失特征相同;2株PRRSV分离株的Nsp2蛋白在481、533-561及595-597位发生了三个部位的共33个不连续氨基酸的缺失;2株PRRSV分离株的Nsp2蛋白在475-518及533-561位出现了两个部位的共73个不连续氨基酸的缺失。该研究中PRRSV分离毒株的Nsp2基因已发生了明显的新型缺失。采用基因重组分析软件RDP4分析显示,以上后4株新型缺失株存在较大的基因重组,且重组部位和重组片段数量不相同;4株病毒均以高致病性毒株JXA1作为重组的主要亲本毒株,多数重组变化集中在Nsp2蛋白区域,在其他非结构蛋白和次要蛋白区域也可见部分重组变化。另外,Nsp9第561、586和592位氨基酸变异分析显示,该4株病毒在上述三个氨基酸位点与中国HP-PRRSV相符。本研究为深入探索PRRSV的遗传变异规律及相关生物学特性研究积累了数据。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 nsp2基因 nsp9基因 新型缺失 基因重组
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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5和Nsp2基因变异分析 被引量:7
11
作者 邓碧亮 顾万军 +2 位作者 黄毓茂 廖明 张桂红 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第2期96-100,共5页
采用RT-PCR方法对2006-2007年华南地区部分省份的疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)阳性病料进行克隆和测序,获得13个Nsp2基因的部分序列片段和14个ORF5基因片段。序列分析结果表明,所获得的13个Nsp2基因序列中均有2个区域存在明显缺失,核... 采用RT-PCR方法对2006-2007年华南地区部分省份的疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)阳性病料进行克隆和测序,获得13个Nsp2基因的部分序列片段和14个ORF5基因片段。序列分析结果表明,所获得的13个Nsp2基因序列中均有2个区域存在明显缺失,核苷酸的同源性为96.9%~99.1%,与中国代表毒株CH-1a、美洲株代表毒株VR-2332的核苷酸序列同源性分别为85.1%~86.4%和67.2%~68.9%,与疫苗株MLV的同源性在67.6%~68.9%之间,而与欧洲株代表株LV的同源性在54.1%~55.9%之间;获得的14个ORF5基因序列不存在缺失现象,核苷酸的相似性为同源性为98.8%~99.7%,推导编码氨基酸同源性为96.5%~99%。与国内毒株相比,核苷酸同源性为85.2%~100%,氨基酸同源性为84.6%~99%;与中国代表毒株CH-1a、美洲型代表毒株VR-2332的核苷酸序列同源性分别在94.4%~95.2%和86.7%~87.9%之间,与疫苗株MLV的同源性在86.4%~87.6%之间,而与欧洲型代表株LV的同源性在54.1%~55.7%之间,推导编码的氨基酸序列同源性则分别在91.5%~93.5%,86.6%~88.6%,85.6%~87.6%,54.7%~56.2%之间。结果表明所获得序列的流行毒株均属于美洲型,进一步分析发现这些毒株可能均起源于同一个毒株,通过猪运输流通等途径在全国范围流行扩散。 展开更多
关键词 高致病性猪繁殖与呼吸综合征 nsp2基因 ORF5基因 变异
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高致病性蓝耳病毒与低致病性蓝耳病毒RT-PCR检测方法 被引量:7
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作者 顾海洋 左文斌 +3 位作者 贺艳艳 潘辉 刘书东 李莲瑞 《塔里木大学学报》 2011年第1期20-24,共5页
将高致病性蓝耳病和低致病性蓝耳病病毒接种于Marc145细胞培养并观察细胞病变情况,将有细胞病变的病毒进行连续传代培养。根据高致病性蓝耳病与低致病性蓝耳病在NSP2基因上有87 bp连续缺失,从NCBI上下载7对高致病性蓝耳病保守序列设计... 将高致病性蓝耳病和低致病性蓝耳病病毒接种于Marc145细胞培养并观察细胞病变情况,将有细胞病变的病毒进行连续传代培养。根据高致病性蓝耳病与低致病性蓝耳病在NSP2基因上有87 bp连续缺失,从NCBI上下载7对高致病性蓝耳病保守序列设计一对引物。通过RT-PCR方法进行检测证明实验室所保存的这两株毒株分别为高致病性蓝耳病和低致病性蓝耳病,并且建立了高致病性蓝耳病与低致病性蓝耳病的检测方法。 展开更多
关键词 蓝耳病 nsp2基因 RT-PCR
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PRRSV普通株与变异株鉴别诊断RT-PCR方法的建立与临床应用 被引量:7
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作者 周丹 郭万柱 +3 位作者 漆信桥 韩国全 徐志文 朱玲 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期367-370,377,共5页
通过对GenBank已公布猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)普通株与变异株Nsp2基因序列进行比对分析,设计合成3条引物,建立一步鉴别诊断普通株与变异株PRRSV的RT-PCR检测方法。结果表明,PCR扩增获得的普通株片段大小为267bp,变异株片段大小为1... 通过对GenBank已公布猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)普通株与变异株Nsp2基因序列进行比对分析,设计合成3条引物,建立一步鉴别诊断普通株与变异株PRRSV的RT-PCR检测方法。结果表明,PCR扩增获得的普通株片段大小为267bp,变异株片段大小为180bp。敏感性试验结果表明该方法具有较高的敏感性,能检测到含量为1.5pg的核酸含量;特异性结果表明该方法在同等条件下检测PRV、CSFV、PCV-2、JEV、CPV、TGEV、SIV均为阴性。对2009-2010年送检的100份临床样品进行检测,结果检出26份变异PRRSV,8份普通PRRSV,阳性率为34%;与ELISA抗体检测试剂盒比较,多检出4份阳性样品。表明建立的鉴别诊断PRRSV的RT-PCR检测方法具有敏感性高、特异性强、重复性好的特点,适用于临床针对PRRSV的检测。 展开更多
关键词 PRRSV nsp2基因 RT-PCR
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四川省猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学调查 被引量:6
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作者 蔡雨函 杨雪 +5 位作者 徐志文 郭万柱 周远成 吴云飞 杨文宇 朱玲 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期195-200,共6页
为了解2012-2013年四川省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株的遗传变异背景和分子流行病学情况,对PRRSV阳性病料中的Nsp2、ORF5基因进行RT-PCR扩增和序列测定,所获得的序列分别与美洲型代表株(VR2332)、欧洲型代表株(LV)、标准毒... 为了解2012-2013年四川省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株的遗传变异背景和分子流行病学情况,对PRRSV阳性病料中的Nsp2、ORF5基因进行RT-PCR扩增和序列测定,所获得的序列分别与美洲型代表株(VR2332)、欧洲型代表株(LV)、标准毒株和变异毒株进行相似性分析。结果本研究成功获得8条Nsp2基因序列和17条ORF5基因序列,序列分析表明所有PRRSV流行毒株均属于美洲型,其中8株Nsp2基因序列与标准毒株和变异毒株的核苷酸相似性分别为75.2%~88.6%和94.8%~97.1%,推导的氨基酸相似性分别为58.7%~79.2%和92.8%~94.8%;17株ORF5基因序列与标准毒株和变异毒株的核苷酸相似性分别为90.1%~96.6%和95.6%~99.4%,推导的氨基酸相似性为77.2%~93.0%和88.0%~96.8%;与标准毒株相比,8株Nsp2基因有30个不连续氨基酸缺失,17株ORF5基因序列有点突变。从遗传进化分析看,所有流行毒株均属于PRRSV亚群Ⅲ。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 nsp2基因 ORF5基因 遗传变异
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1株猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因缺失毒株的基因组特征与演化分析 被引量:6
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作者 付向晶 王丹阳 +9 位作者 王兴龙 张渭东 宋祥军 刘阳坤 唐文雅 慕国辉 刘海金 贺生芳 杜恩岐 杨增岐 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1773-1779,共7页
为了解陕西猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的变异情况,对发病猪场进行PRRSV分离,采用RT-PCR方法对分离株NSP2基因和ORF5基因分别进行扩增,测序后进行序列分析。结果显示:得到1株PRRSV,命名为HZ1007株,属于美洲型;其NSP2 481位和533... 为了解陕西猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的变异情况,对发病猪场进行PRRSV分离,采用RT-PCR方法对分离株NSP2基因和ORF5基因分别进行扩增,测序后进行序列分析。结果显示:得到1株PRRSV,命名为HZ1007株,属于美洲型;其NSP2 481位和533—561位存在30个氨基酸的不连续缺失,与高致病性PRRSV分子特征相似;GP5 85—95位氨基酸处出现了11个氨基酸的连续缺失;系统进化分析发现HZ1007与国内高致病性代表毒株HUN4、JXwn06、SY0608等亲缘关系较近,且与HUN4株相似性最高,为97.4%。本研究发现了GP5缺失型PRRSV,这在国内外尚属首例,且HZ1007株与高致病性PRRSV亲缘关系较近,在系统进化分析树上与高致病性毒株同属一个分支,其可能是高致病毒株新的变异型,其致病性和生物学特性需进一步研究分析。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 nsp2基因 GP5基因缺失 序列分析
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PRRSV分离株Nsp2基因和ORF5基因的遗传变异分析 被引量:5
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作者 王剑非 孙建全 +6 位作者 张金强 迟小伟 刘杰 丛晓燕 时建立 李俊 吴家强 《家畜生态学报》 2011年第1期48-53,共6页
为了解山东省PRRSV流行毒株的遗传变异情况和分子流行病学背景,对2007~2009年分离到的14株山东省内的PRRSV流行毒株进行了Nsp2和ORF5基因序列的测定和分析。结果显示,与参考毒株JXA1相比,14株PRRSV Nsp2与ORF5基因的核苷酸同源性分别达... 为了解山东省PRRSV流行毒株的遗传变异情况和分子流行病学背景,对2007~2009年分离到的14株山东省内的PRRSV流行毒株进行了Nsp2和ORF5基因序列的测定和分析。结果显示,与参考毒株JXA1相比,14株PRRSV Nsp2与ORF5基因的核苷酸同源性分别达到96.1%~99.8%和98.0%~99.8%,氨基酸序列同源性分别达到92.9%~100%和97.5%~99.5%。序列分析结果表明,14株毒株在Nsp2蛋白内部均存在编码30个氨基酸的碱基对的不连续缺失;ORF5基因编码的GP5蛋白不存在缺失,但存在点突变。遗传进化分析表明,07年分离毒株JQ与参考毒株JXA1亲缘关系很近;09年分离的12株PRRSV,2株仍与国内2006~2007年间的分离株在同一分支,9株已经处在不同分支,1株单独处在一个分支。2007~2009年山东地区流行的PRRSV分离株具有年度特征,无明显的地域特征。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 分离 nsp2基因 ORF5基因 变异分析
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2007-2009年部分猪群PRRSV ORF5和Nsp2基因的克隆与序列分析 被引量:6
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作者 邹敏 吴发兴 +7 位作者 王福军 李金积 冯阳 刘蕾 李明义 陈克正 范根成 李晓成 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2010年第10期7-14,共8页
【目的】了解2007-2009年部分猪群中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)株的遗传演化规律。【方法】按常规方法,从2007-2009年收集的疑似蓝耳病猪群组织样品中分离PRRSV,应用RT-PCR方法,对分离的10株PRRSV的ORF5和Nsp2基因进行扩增,测序后... 【目的】了解2007-2009年部分猪群中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)株的遗传演化规律。【方法】按常规方法,从2007-2009年收集的疑似蓝耳病猪群组织样品中分离PRRSV,应用RT-PCR方法,对分离的10株PRRSV的ORF5和Nsp2基因进行扩增,测序后与19个PRRSV参考毒株的ORF5、Nsp2基因进行核苷酸、氨基酸序列比较及遗传进化分析。【结果】分离到的SDWF5、SDCX1、LN3、LN8、LN12、SD2、SD5、SD14、ZB1、ZB2共10株PRRSV均属于美洲型PRRSV变异株,其ORF5基因全长均为603bp,编码约200个氨基酸,其推导氨基酸序列变异主要发生在9~39位;SDWF5、SDCX1、LN3、LN12、SD2、SD5、SD14、ZB2等8个分离株的Nsp2基因全长为2845bp,编码950个氨基酸,与代表毒株VR-2332相比,8个分离株在Nsp2基因推导氨基酸序列的480和532~560位发生了不连续的30个氨基酸缺失。与19个PRRSV参考毒株的ORF5、Nsp2序列进行比较后发现,10个分离株的ORF5、Nsp2基因核苷酸序列及其推导氨基酸序列均发生了较大变异。遗传进化分析发现,10个分离株与以CH-1a为代表的国内流行毒株处于同一分支,与JXA1等变异毒株的遗传距离较近。【结论】来源于不同猪群的10个PRRSV分离株的遗传关系存在交叉,没有明显的地域特征,但可能具有相同的始祖Ch-1a。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株 ORF5基因 nsp2基因 遗传变异
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2006—2012年鲁豫冀地区15株猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及ORF5/Nsp2基因的遗传变异分析 被引量:6
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作者 唐娜 管宇 +10 位作者 魏凤 王金良 曲光刚 肖跃强 李峰 谢金文 张松林 张倩 于新友 沈志强 柳增善 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第10期26-32,共7页
为研究鲁豫冀地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的遗传变异情况,对2006—2012年来自3省区发病猪场的42份样品进行PRRSV分离鉴定,并进行了生物学特性研究和PCR鉴定,结果显示先后... 为研究鲁豫冀地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的遗传变异情况,对2006—2012年来自3省区发病猪场的42份样品进行PRRSV分离鉴定,并进行了生物学特性研究和PCR鉴定,结果显示先后分离到15株PRRSV。分别采用RT-PCR扩增其ORF5基因和部分Nsp2基因并测序,与GenBank中68个ORF5序列和40个Nsp2序列的推导氨基酸序列进行比对,遗传变异分析结果表明,15株分离株均属于美洲型毒株,其中13个毒株Nsp2基因推导的氨基酸序列均存在氨基酸的不连续缺失,其ORF5基因推导的氨基酸序列与JXA1株有较高的同源性(95.5%~97.5%);SDDY2007株与疫苗株RespPRRS MLV和VR2332株亲缘关系相近,处于同一个亚群中;而HN25-2009分离株Nsp2基因推导的氨基酸序列有30个氨基酸的特征性缺失,其ORF5基因推导的氨基酸序列的遗传进化分析结果显示该分离株处于VR2332所在亚群(氨基酸同源性97.5%),具有一定特殊性。本试验结果表明,2006—2012年高致病性PRRSV是鲁豫冀地区的优势流行毒株,且存在疫苗毒株,3省区流行毒株间有一定遗传差异,但无明显地域特征。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 分离 遗传变异 ORF5基因 nsp2基因
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猪繁殖与呼吸综合征病毒GD-ZQ变异株的分离及遗传变异分析 被引量:5
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作者 高诗敏 王敏功 +2 位作者 邓瑞林 姚晓辉 王林川 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第5期121-125,共5页
用RT-PCR方法从某猪场病猪体内分离到1株猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV),命名为PRRSV GD-ZQ株,可致Marc-145细胞病变。细胞分离培育病毒至增殖性能稳定后,分别扩增分离病毒的Nsp2... 用RT-PCR方法从某猪场病猪体内分离到1株猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV),命名为PRRSV GD-ZQ株,可致Marc-145细胞病变。细胞分离培育病毒至增殖性能稳定后,分别扩增分离病毒的Nsp2、ORF3、ORF5基因并测序,绘制进化树比较分析遗传进化。结果显示分离毒株的Nsp2、ORF3、ORF5基因序列与美洲型VR-2332、CH-1a等毒株核苷酸序列相似性在89.0%~95.8%之间,与欧洲毒株LV的相似性在48.2%~49.3%之间,遗传进化分析显示该毒株与CH-1a株处于同一分支,分离毒株的Nsp2序列与以HEB1为代表的PRRSV变异株相似性在98.3%~99.4%之间。该病毒在细胞盲传5代能产生稳定规律细胞病变(CPE),且第5代病毒TCID50达10-5.6/0.1 mL。进化分析结果显示GD-ZQ分离株是PRRSV变异株,具有"高热病"PRRSV毒株的变异特点,为了解PRRSV在时间上和分子水平上的遗传变异规律、变异幅度和变异范围奠定基础。 展开更多
关键词 PRRSV GD-ZQ变异株 遗传变异分析 nsp2基因 ORF3基因 ORF5基因
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1株基因重组猪繁殖与呼吸综合征病毒的新型变异和遗传进化分析 被引量:5
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作者 胡栋 朱迎春 +6 位作者 赵情 庞恒 李传刚 王亭亭 常维山 彭军 吴家强 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期213-223,共11页
对山东省某地区初诊为猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproduction and respiatory syndrome,PRRS)的猪病料采用RT-PCR进行鉴定,获得1株PRRSV并命名为SD18。对该分离株的第2代细胞培养毒株进行全基因组测序,与其他参考毒株比较同源性并构... 对山东省某地区初诊为猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproduction and respiatory syndrome,PRRS)的猪病料采用RT-PCR进行鉴定,获得1株PRRSV并命名为SD18。对该分离株的第2代细胞培养毒株进行全基因组测序,与其他参考毒株比较同源性并构建遗传进化树。结果显示,SD18毒株属于美洲型高致病性PRRSV变异株,该毒株Nsp2基因具有31个不连续的氨基酸缺失,已明显区别于以JXA1、HUN4、TJ株等为代表的30个不连续缺失高致病性分离株,其中第830位氨基酸位点是最新发现的缺失氨基酸。同时,该毒株的ORF3基因第17位插入1个丝氨酸(S),而ORF5基因编码的第13位和第151位氨基酸均为具有强毒特性的精氨酸(R),第137位则插入了具有野毒特性的丝氨酸(S),这4个氨基酸位点也表现出不同于以往高致病性毒株变异的特征。采用基因重组分析软件RDP4分析表明,该新型缺失株的多个部位发生了基因重组;SD18毒株病毒以美洲经典毒株VR2332作为重组的主要亲本毒株,疫苗株JXA1-R和新型毒株NADC30-like提供重组片段,多数重组变化集中在Nsp2蛋白区域,在非结构蛋白和次要蛋白区域也可见部分重组变化。本研究为深入探索PRRSV的遗传变异规律及相关生物学特性研究积累了数据。综合分析表明,山东地区SD18分离株Nsp2、GP3、GP5相应氨基酸均出现了较大变异,特别是Nsp2出现一个新的氨基酸缺失,可能是该毒株形成了一个新的独立变异分支的重要原因;这些变异也提示该分离毒株在病毒编码蛋白及其免疫原性等方面出现了较大变化。该病毒株的成功分离鉴定与遗传进化分析为PRRSV衍化及流行病学调查积累了最新数据,也为预防控制该病提供参考。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 变异毒株 遗传衍化 nsp2基因 基因重组
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