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一株鸡副粘病毒的分子特性研究 被引量：45
1
作者 严维巍 王永坤 +4 位作者 周继宏 田慧芳 朱国强 李玉峰 庄国宏 《扬州大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 2000年第1期27-31,共5页
应用 RT-PCR技术对新城疫病毒 ( NDV) Y98株的 F基因重要功能区片段扩增后进行序列测定 ,并与多株已报导的 NDV参考株相应片段进行序列比较 ,经遗传基因进化树分析后 ,首次报道了基因
关键词 鸡 新城疫 副粘病毒 分子特征 ndv
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呼伦贝尔草原对全球变暖的响应 被引量：37
2
作者 马玉玲 余卫红 方修琦 《干旱区地理》 CSCD 北大核心 2004年第1期29-34,共6页
近百年来 ,尤其近 2 0年 ,全球气候显著变暖 ,已导致植物物候与生产力在过去 2 0年中发生显著变化。遥感方法是研究植被对全球变暖的响应的一种非常有效的方式 ,利用NOAA/AVHRR数据 ,结合地面气象数据 ,研究近 2 0年来中国东北地区呼伦... 近百年来 ,尤其近 2 0年 ,全球气候显著变暖 ,已导致植物物候与生产力在过去 2 0年中发生显著变化。遥感方法是研究植被对全球变暖的响应的一种非常有效的方式 ,利用NOAA/AVHRR数据 ,结合地面气象数据 ,研究近 2 0年来中国东北地区呼伦贝尔草原NDVI与温度、降水变化的相互关系 ,认识呼伦贝尔草原对气候变化的响应特征。研究结果表明 :(1)呼伦贝尔草原地区近 2 0年温度变化明显 ,高于全球平均增温幅度。 (2 )生长季 (4～ 10月 )NDVI有较明显上升 ,线性拟合分析表明 ,所选 4个区域近 2 0年生长季NDVI平均值上升了 2 .2 %。 (3)NDVI的增加主要在 1988年前后 ,在草原东部后一阶段 (1988～ 1999)比前一阶段 (1982～ 1987)NDVI平均值增加了 7.8%。(4 )呼伦贝尔草原对全球变暖响应显著。NDVI与气温 ,尤其与春季相关性显著。 展开更多
关键词 草原 全球变暖 ndv 温度 降水 气象资料 东北地区
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新城疫病毒F48E9株及东北地区流行株F基因遗传变异分析 被引量：21
3
作者 曹殿军 苑纯秀 +3 位作者 郭鑫 闵平 孔宪刚 卢景良 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期117-120,共4页
采用异硫氰酸胍 /酚 /氯仿抽提一步法 ,提取新城疫病毒 ( NDV) F4 8E9株及 2个东北地区分离株 DB3、DB5基因组 RNA,并以其为模板经反转录合成 F基因 c DNA第 1链 ,再利用 PCR技术分段扩增出 F基因的c DNA。F4 8E9、DB3和 DB5株 F基因的 ... 采用异硫氰酸胍 /酚 /氯仿抽提一步法 ,提取新城疫病毒 ( NDV) F4 8E9株及 2个东北地区分离株 DB3、DB5基因组 RNA,并以其为模板经反转录合成 F基因 c DNA第 1链 ,再利用 PCR技术分段扩增出 F基因的c DNA。F4 8E9、DB3和 DB5株 F基因的 c DNA经酶切修饰后 ,插入 p UC1 9的多克隆位点中 ,转化感受态 E.coli DH5α。经相对分子质量比较、酶切分析及 PCR等鉴定方法筛选出 F4 8E9、DB3和 DB5株 F基因的阳性克隆。然后采用 Sanger′s双脱氧末端终止法对阳性重组子进行核苷酸序列测定 ,证实分别获得了 F4 8E9、DB3和 DB5株 F基因的全长 c DNA。利用 DNASIS及 MEGA分析软件 ,将上述 3个毒株的 F基因序列与基他 1 1株有代表性的 NDV的相应序列进行比较分析 ,并绘制了 1 4株 NDV F基因的系统发育进化树。结果表明 ,F4 8E9和 DB3株在核苷酸序列上相对独立于 Toyoda等所分的 A、B、C组 ,单独成为一组 ;DB5株与B1 Hitchner株同属 B组 ,说明它们具有较高的同源性。同时也证明我国有不同基因型的毒株在流行。从进化的角度来看 ,NDV各毒株间确实存在遗传变异 ,但 展开更多
关键词 ndv F基因 克隆 序列分析 系统发育进化树
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应用多重反转录-聚合酶链反应检测鸡新城疫病毒和传染性支气管炎病毒的研究 被引量：30
4
作者 谢芝勋 庞耀珊 +1 位作者 谢志勤 邓显文 《中国预防兽医学报》 CSCD 2000年第2期126-130,共5页
本文建立了一种同时检测NDV和IBV二种病原体的多重PCR技术。根据NDV和IBV的基因文库 ,设计了两对分别与NDV和IBV某段基因序列互补的引物 ,用这两对引物对同一样品中NDV和IBVRNA模板进行多重RT_PCR扩增 ,结果均同时得到了两条特异性的大... 本文建立了一种同时检测NDV和IBV二种病原体的多重PCR技术。根据NDV和IBV的基因文库 ,设计了两对分别与NDV和IBV某段基因序列互补的引物 ,用这两对引物对同一样品中NDV和IBVRNA模板进行多重RT_PCR扩增 ,结果均同时得到了两条特异性的大小与实验设计相符的 31 0bp(NDV)和 1 72 0bp(IBV)多重的RT_PCR扩增带 ,而对其他 6种禽病病原的PCR扩增结果均为阴性 ;敏感性测定结果表明 ,该多重RT_PCR技术能同时检出 1 0pg的NDV和 1 0 0pg的IBVRNA模板。 展开更多
关键词 IBV ndv 多重PCR技术 病原检测
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新城疫病毒F48E9株病毒糖蛋白的功能分析 被引量：7
5
作者 曹殿军 刘明 +2 位作者 王莉林 张莹 卢景良 《中国兽医学报》 CAS CSCD 1996年第6期534-539,共6页
对抗新城疫病毒（ＮＤＶ）ＨＮ和Ｆ糖蛋白的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的生物学活性，应用ＥＬＩＳＡ、ＨＩ、ＨＬＩ、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ等进行了分析，结果证明，ＮＤＶＦ４８Ｅ９株ＨＮ蛋白除有ＨＡ和ＮＡ功能区外，还有一个促进（... 对抗新城疫病毒（ＮＤＶ）ＨＮ和Ｆ糖蛋白的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的生物学活性，应用ＥＬＩＳＡ、ＨＩ、ＨＬＩ、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ等进行了分析，结果证明，ＮＤＶＦ４８Ｅ９株ＨＮ蛋白除有ＨＡ和ＮＡ功能区外，还有一个促进（启动）融合的功能区。此外，还筛选到４株ＮＤＶ强毒株特异性ＭｃＡｂ。 展开更多
关键词 新城疫病毒 糖蛋白 单克隆抗体 功能分析
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鸡新城疫病毒强弱毒株RT-PCR鉴别诊断方法 被引量：16
6
作者 曹殿军 刘培欣 +1 位作者 闫丽辉 孙建宏 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第6期415-417,共3页
本研究通过对大量不同毒力NDVF基因核苷酸序列分析 ,根据毒力和序列间的相关规律 ,分别设计合成了两组引物 ,建立了一个可以迅速鉴别NDV强、弱毒株的RT_PCR方法 ,对强毒株可扩增出 133bp的特异性片段和 36 2bp的通用片段 ,弱毒株可以扩... 本研究通过对大量不同毒力NDVF基因核苷酸序列分析 ,根据毒力和序列间的相关规律 ,分别设计合成了两组引物 ,建立了一个可以迅速鉴别NDV强、弱毒株的RT_PCR方法 ,对强毒株可扩增出 133bp的特异性片段和 36 2bp的通用片段 ,弱毒株可以扩增出 2 5 2bp的特异性片段和 36 2bp的通用片段。只需一个RT_PCR反应 ,整个实验过程可在 5小时内完成。敏感性测定结果表明该方法的最低检出量不低于 5 0 0pg的NDVRNA。为了增加方法的实用性 。 展开更多
关键词 新城疫病毒 融合蛋白基因 RT-PCR
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金银花、山银花绿原酸类提取物体外抗NDV作用研究 被引量：28
7
作者 王林青 张红英 +2 位作者 崔保安 李文增 李坤陶 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2011年第19期277-282,共6页
为研究比较价格差异较大的金银花和山银花的体外抗病毒作用,分别提取金银花和山银花绿原酸类活性成分,利用Vero细胞体外培养系统,通过观察细胞病变效应(CPE),并用MTT法检测细胞活性来评价和比较金银花和山银花绿原酸类提取物体外抑制新... 为研究比较价格差异较大的金银花和山银花的体外抗病毒作用,分别提取金银花和山银花绿原酸类活性成分,利用Vero细胞体外培养系统,通过观察细胞病变效应(CPE),并用MTT法检测细胞活性来评价和比较金银花和山银花绿原酸类提取物体外抑制新城疫病毒(NDV)对细胞的感染作用。结果表明:在安全浓度范围内,金银花和山银花绿原酸类提取物均具有显著的抗病毒作用,体外对NDV分别具有明显的阻断作用、抑制作用和中和作用,且两者之间的抗病毒效果差异不显著。本试验为价格相对便宜的山银花在一定领域部分代替金银花提供了实验依据。 展开更多
关键词 金银花 山银花 新城疫病毒 绿原酸类 VERO
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35株不同来源的新城疫病毒(NDV)分离株F-糖蛋白基因序列测定和基因型 被引量：20
8
作者 尹燕博 龚振华 +5 位作者 孙承英 王娟 刘俊辉 刘键 刘煜 黄存艳 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期124-127,共4页
采用病毒分离试验、鸡胚平均死亡时间毒力试验、RT- PCR和 F-糖蛋白基因序列测定及基因分析 ,对 1996～2 0 0 0年从国内不同地区多种禽类中分离到的新城疫病毒 (NDV)分离毒株进行了研究 ,绘制了基因树。毒力试验结果表明 ,其中有 32株... 采用病毒分离试验、鸡胚平均死亡时间毒力试验、RT- PCR和 F-糖蛋白基因序列测定及基因分析 ,对 1996～2 0 0 0年从国内不同地区多种禽类中分离到的新城疫病毒 (NDV)分离毒株进行了研究 ,绘制了基因树。毒力试验结果表明 ,其中有 32株为强毒株 ,有 3株为中等毒力株。DNA序列分析和基因树结果表明 ,这 35株 NDV分为 4个类群 ,其中 2 7株为基因 型 (主要流行毒株 ) ,3株为基因 型 ,4株为基因 型 ,1株为基因 型。结果提示 ,我国新城疫感染来源是一个值得关注的问题。 展开更多
关键词 F-糖蛋白 基因序列 基因型 新城疫病毒 毒力试验 RT-PCR
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检测NDV特异性IgG、IgM、IgA的间接ELISA方法的建立 被引量：12
9
作者 孙建宏 曹殿军 +3 位作者 刘培欣 闫丽辉 孔宪刚 刘宝全 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期23-25,共3页
本试验以新城疫病毒 (NDV)感染的鸡胚尿囊液经差速离心 ,庶糖密度梯度离心提纯的NDV为包被抗原 ,以纯化的鸡IgG、IgM及IgA免疫兔 ,制备辣根过氧化物酶标记的兔抗鸡IgG、IgM及IgA ,分别建立了检测NDV特异性IgG、IgM、IgA的间接ELISA方法 ... 本试验以新城疫病毒 (NDV)感染的鸡胚尿囊液经差速离心 ,庶糖密度梯度离心提纯的NDV为包被抗原 ,以纯化的鸡IgG、IgM及IgA免疫兔 ,制备辣根过氧化物酶标记的兔抗鸡IgG、IgM及IgA ,分别建立了检测NDV特异性IgG、IgM、IgA的间接ELISA方法 ,抗原最适包被量为 1.34μg/孔。酶标兔抗鸡IgG、IgM、IgA的最佳稀释度分别为 1∶40 0 ,1∶40 0 ,1∶10 0 ;血清样品检测IgG时 ,最适工作浓度为 1∶40 0 ,检测IgM时为 1∶5 0。该方法具有特异性强、灵敏度度、快速简便等优点 ,适合于对各类新城疫特异性抗体的动态监测和大批检测 。 展开更多
关键词 新城疫病毒 IgG IGM IGA 间接ELISA 检测方法
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鸡新城疫病毒HN基因亚单位疫苗诱导免疫保护的实验研究 被引量：12
10
作者 丁壮 金宁一 +3 位作者 王兴龙 米志强 夏志平 王承宇 《动物医学进展》 CSCD 2002年第1期49-51,共3页
实验分别将应用Ｂａｃ　ｔｏ　Ｂａｃ系统表达的新城疫病毒四平株和长春株血凝素－神经氨酸酶基因（ＨＮ基因）蛋白的重组杆状病毒感染Ｓｆ－９昆虫细胞后，２８　℃培养７２　ｈ后，洗涤、收集昆虫细胞，离心浓缩，－２０　℃冻融３次... 实验分别将应用Ｂａｃ　ｔｏ　Ｂａｃ系统表达的新城疫病毒四平株和长春株血凝素－神经氨酸酶基因（ＨＮ基因）蛋白的重组杆状病毒感染Ｓｆ－９昆虫细胞后，２８　℃培养７２　ｈ后，洗涤、收集昆虫细胞，离心浓缩，－２０　℃冻融３次。用ＨＡ－ＨＩ实验和ＨＮ单抗中和试验测定表达产物的活性。将表达的重组蛋白作为亚单位疫苗免疫鸡。用间接ＥＬＩＳＡ和ＨＩ试验测定鸡体内抗体效价。免疫后第１５　ｄ用国家标准强毒ＮＤＶ　Ｆ４８Ｅ８攻毒，统计免疫保护率。结果表明，表达的ＮＤＶ　ＨＮ重组蛋白能够诱导鸡体产生抗ＮＤＶ　特异性ＩｇＧ抗体和ＨＩ抗体。实验Ⅰ组（四平株）雏鸡保护率为６５％，实验Ⅱ组（长春株）雏鸡保护率为１００％。 展开更多
关键词 新城疫病毒 鸡 HN重组蛋白 亚单位疫苗 免疫保护率
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NDV La Sota、V4疫苗免疫鸡及免疫攻毒鸡的主要特异性血清抗体动态变化规律比较 被引量：12
11
作者 孙建宏 曹殿军 +4 位作者 刘培欣 闫丽辉 陈杰 曲鲁江 刘宝全 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期199-202,共4页
本研究应用间接ELISA方法对新城疫LaSota和V4疫苗免疫SPF鸡及免疫后攻毒SPF鸡的血清中新城疫病毒(NDV)特异性HI抗体、IgM和IgG抗体水平的动态变化进行了检测。结果表明 ,V4较LaSota疫苗免疫鸡HI抗体提前 3天左右出现 ,但除高峰期 (1周左... 本研究应用间接ELISA方法对新城疫LaSota和V4疫苗免疫SPF鸡及免疫后攻毒SPF鸡的血清中新城疫病毒(NDV)特异性HI抗体、IgM和IgG抗体水平的动态变化进行了检测。结果表明 ,V4较LaSota疫苗免疫鸡HI抗体提前 3天左右出现 ,但除高峰期 (1周左右 )外 ,其HI抗体水平均低于LaSota免疫鸡。LaSota疫苗免疫鸡血清中NDV特异性IgM和IgG抗体水平高于V4免疫鸡 ,IgG抗体高峰较V4免疫鸡提前约 2周出现 ,攻毒后 ,LaSota免疫鸡血清中特异性IgG和IgG回忆应答显著 ,而V4免疫鸡IgM和IgG回忆应答不明显。 展开更多
关键词 新城疫 血清抗体 疫苗 免疫鸡 攻毒鸡
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一步法多重RT—PCR检测新城疫、禽流感、传染性支气管炎病毒试验的研究 被引量：11
12
作者 赵建梅 魏荣 +3 位作者 王志亮 孟良玉 郑东霞 赵云玲 《中国动物检疫》 CAS 2003年第1期22-24,共3页
为了提高检测鸡肉中新城疫病毒 (Newcastlediseasevirus,NDV)、禽流感病毒 (Avianinfluenzavirus,AIV)、传染性支气管炎病毒 (Avianinfectiousbronchitisvirus,IBV)的效率和敏感性 ,利用引物设计软件PrimerPrimer5.0设计了NDV的F基因片... 为了提高检测鸡肉中新城疫病毒 (Newcastlediseasevirus,NDV)、禽流感病毒 (Avianinfluenzavirus,AIV)、传染性支气管炎病毒 (Avianinfectiousbronchitisvirus,IBV)的效率和敏感性 ,利用引物设计软件PrimerPrimer5.0设计了NDV的F基因片段、AIV的M基因片段、IBV的M基因片段的引物。在以前一步法RT—PCR扩增各种病毒RNA的基础上 ,进行了两种病毒和三种病毒的一步法多重RT—PCR的试验。结果确定了两种病毒的一步法多重RT—PCR的试验条件 ,三种病毒的一步法多重RT—PCR的试验条件基本确立。本试验初步建立了检测NDV、AIV。 展开更多
关键词 传染性支气管炎 病毒 新城疫 禽流感 一步法多重RT-PCR ndv AIV IBV 病原检测 鸡
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一株基因Ⅶ型新城疫病毒的分离及分子鉴定 被引量：15
13
作者 刘华雷 王永坤 +3 位作者 朱国强 严维巍 田慧芳 周继宏 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期216-218,共3页
从一起新城疫暴发的病例中分离出 1株新城疫病毒 (NDV) ,命名为铜山分离株 (TS)。运用 RT- PCR技术 ,克隆了该分离株 F基因的重要功能片段 (约 0 .5 kb) ,并进行了序列测定。序列分析表明 ,TS分离株在 F蛋白裂解位点的氨基酸顺序为 1 1 ... 从一起新城疫暴发的病例中分离出 1株新城疫病毒 (NDV) ,命名为铜山分离株 (TS)。运用 RT- PCR技术 ,克隆了该分离株 F基因的重要功能片段 (约 0 .5 kb) ,并进行了序列测定。序列分析表明 ,TS分离株在 F蛋白裂解位点的氨基酸顺序为 1 1 2 - R- R- Q- K- R- F1 1 7,与 NDV强毒株特征相符 ,且具有 10 1处的 K(赖氨酸 )和 12 1处 V(缬氨酸 ) 2个特征性氨基酸 ,与基因 型 展开更多
关键词 新城疫病毒 RT-PCR Ⅶ型基因 病毒分离 分子鉴定
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应用三重聚合酶链反应同时检测NDV、IBV、MG的研究 被引量：18
14
作者 谢芝勋 谢志勤 +2 位作者 庞耀珊 刘加波 邓显文 《中国动物检疫》 CAS 2000年第11期20-22,共3页
本文建立了一种同时检测ＮＤＶ、ＩＢＶ和ＭＧ三种病原体的三重ＰＣＲ技术。根据ＮＤＶ、ＩＢＶ和ＭＧ的基因文库，设计了三对分别与ＮＤＶ、ＩＢＶ和ＭＧ某段基因序列互补的引物，用这三对引物对同一样品中的ＮＤＶ、 ＩＢＶ、 ＭＧ核... 本文建立了一种同时检测ＮＤＶ、ＩＢＶ和ＭＧ三种病原体的三重ＰＣＲ技术。根据ＮＤＶ、ＩＢＶ和ＭＧ的基因文库，设计了三对分别与ＮＤＶ、ＩＢＶ和ＭＧ某段基因序列互补的引物，用这三对引物对同一样品中的ＮＤＶ、 ＩＢＶ、 ＭＧ核酸模板进行多重 ＰＣＲ扩增，结果均同时得到了三条特异性大小与实验设计相符的３１０ ｂｐ（ＮＤＶ）、１７２０ ｂｐ（ＩＢＶ）和７３２ ｂｐ（ＭＧ）多重ＰＣＲ扩增带，而对其他６种禽病病原的ＰＣＲ扩增结果均为阴性；敏感性测定结果表明，该多重 ＰＣＲ技术能检出 １０ ｐｇ的 ＩＢＶ、１ｐｇ的 ＮＤＶ ＲＮＡ模板和 １ｐｇ的 ＭＧ ＤＮＡ模板。 展开更多
关键词 鸡 传染病 ndv IBV MG PCR 病原检测
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新城疫病毒pIRHN核酸疫苗构建和表达及对肿瘤细胞的影响 被引量：10
15
作者 龚伟 葛涛 +5 位作者 王宏伟 罗琴芳 孙大辉 李萍 金宁一 薛立娟 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期338-340,共3页
目的：研究NDV HN基因抗肿瘤作用及其可能机制。方法：以 pIRES1neo为表达载体构建了 NDV HN基因的pIRHN核酸疫苗，在体外转染HeLa细胞，用间接免疫荧光和Western blot检测pIRHN在真核细胞中表达状况，用荧光显微镜、DNA琼脂糖电泳及TU... 目的：研究NDV HN基因抗肿瘤作用及其可能机制。方法：以 pIRES1neo为表达载体构建了 NDV HN基因的pIRHN核酸疫苗，在体外转染HeLa细胞，用间接免疫荧光和Western blot检测pIRHN在真核细胞中表达状况，用荧光显微镜、DNA琼脂糖电泳及TUNEL染色等方法，检测HN基因导致细胞死亡的类型；用3，5-二羟基甲苯法测定HeLa细胞唾液酸含量的变化。结果：pIRHN 转染HeLa细胞后，能够在真核细胞中表达，能促进肿瘤细胞死亡，其死亡方式主要以诱导细胞凋亡为主，pIRHN使 HeLa细胞唾液酸含量减少。结论：用 NDV HN基因所构建的核酸疫苗能够在真核细胞中高效表达，表达的 HN蛋白主要位于胞膜，胞浆中亦有 HN蛋白表达；pIRHN具有抗肿瘤作用，可能通过其表达产物与肿瘤细胞唾液酸受体的相互作用，发挥其抗肿瘤作用。本实验为迸一步阐明NDV抗肿瘤作用机制提供了理论依据。 展开更多
关键词 唾液酸 ndv HN基因 基因疫苗 抗肿瘤作用 HeLa细胞 pIRHN 肿瘤免疫学
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应用逆转录套式PCR检测新城疫病毒核酸 被引量：12
16
作者 黄庚明 辛朝安 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期295-299,共5页
选择NDV融合蛋白保守的编码区域 ,设计并合成了一对外引物和一对内引物 ,建立并优化了检测新城疫病毒核酸的逆转录套式PCR法 ,通过检测NDV感染的实验室病料和临床病料。结果表明 ,逆转录套式PCR法最低能鉴别出约 0 .3pg的NDVRNA ,攻毒后... 选择NDV融合蛋白保守的编码区域 ,设计并合成了一对外引物和一对内引物 ,建立并优化了检测新城疫病毒核酸的逆转录套式PCR法 ,通过检测NDV感染的实验室病料和临床病料。结果表明 ,逆转录套式PCR法最低能鉴别出约 0 .3pg的NDVRNA ,攻毒后第 8天还能从非免疫鸡和SPF鸡泄殖腔拭子中检出NDV ,第 8天非免疫鸡泄殖腔拭子中NDV的最大检出率为 5 / 10 ,第 8天SPF鸡泄殖腔拭子中NDV的最大检出率为 6/ 10。对非免疫鸡和SPF鸡的泄殖腔中NDV最佳检出时间均在攻毒后第 5天。逆转录套式PCR方法对临床样品中NDV的最大检出率为 6/ 7。经核酸杂交验证 ,该法具有很高的特异性和敏感性 ,也比较简便快速 ,为从分子水平探讨NDV的发病机理、临床早期快速诊断提供了新的研究手段。 展开更多
关键词 新城疫病毒 融合蛋白基因 逆转录套式PCR 检测 病毒核酸
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鸡α干扰素基因的克隆、原核表达及抗病毒效果研究 被引量：17
17
作者 韦琴 彭贵青 +4 位作者 金梅林 朱裕东 周红波 郭红燕 陈焕春 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期737-743,共7页
通过PCR从三黄肉鸡的肝脏基因组中扩增了鸡α干扰素(ChIFN-α)全长基因。序列分析表明ChIFN-α基因全长582bp,亚克隆其成熟蛋白编码基因(489bp),利用基因重组技术构建了E.coli/pET-28a(+)-IFNα,使IFN-α置于pET-28a的T7启动子下游并同6... 通过PCR从三黄肉鸡的肝脏基因组中扩增了鸡α干扰素(ChIFN-α)全长基因。序列分析表明ChIFN-α基因全长582bp,亚克隆其成熟蛋白编码基因(489bp),利用基因重组技术构建了E.coli/pET-28a(+)-IFNα,使IFN-α置于pET-28a的T7启动子下游并同6×His(多聚组氨酸标签)-Tag融合。经酶切鉴定,DNA测序证实重组质粒构建正确;将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE,Western-blot分析证实表达出22kD左右的融合蛋白,表达的蛋白以不溶性的包涵体形式存在并且具有良好的免疫学活性。提纯的包涵体纯度可达70%以上,用镍亲和层析方法纯化蛋白则可达到95%。经透析复性后的蛋白在鸡胚成纤维细胞上能够抑制H9N2禽流感病毒的复制。鸡胚试验中重组干扰素抗病毒效果好在H9N2禽流感病毒攻毒组中,能保护鸡胚并使其孵出率达到100%的重组干扰素最小蛋白含量为2μg;重组干扰素对新城疫病毒复制也有一定的抑制能力,延迟该病毒复制时间为12h至48h;雏鸡试验表明重组干扰素也能较好地抵抗H9N2禽流感病毒对雏鸡的感染。两组试验均表明,亲和层析纯化蛋白是包涵体蛋白活性的20倍左右。 展开更多
关键词 ChIFN-α基因 抗病毒效果 H9N2禽流感病毒 新城疫病毒
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免疫鸡群感染新城疫强毒后的排毒规律 被引量：12
18
作者 文其乙 吴艳涛 +5 位作者 刘秀梵 张如宽 焦新安 吴长新 彭大新 高崧 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期15-17,共3页
将经过２次新城疫（ＮＤ）基础免疫的ＳＰＦ鸡，随机分成５组，每组８只，在６０日龄时分别用Ｆ４８Ｅ８、Ｔｅｘａｓ、Ｈｅｒｔ３３ＮＤ强毒和Ｌａｓｏｔａ弱毒经口腔接种０．２５ｍＬ／只，１２ｈ后采取泄殖腔棉拭，利用ＮＤ强毒快速... 将经过２次新城疫（ＮＤ）基础免疫的ＳＰＦ鸡，随机分成５组，每组８只，在６０日龄时分别用Ｆ４８Ｅ８、Ｔｅｘａｓ、Ｈｅｒｔ３３ＮＤ强毒和Ｌａｓｏｔａ弱毒经口腔接种０．２５ｍＬ／只，１２ｈ后采取泄殖腔棉拭，利用ＮＤ强毒快速诊断试剂盒进行排毒的动态监测，并在攻毒前期、中期、后期测定各试验组ＳＰＦ鸡的ＨＩ效价。试验第３天开始排毒，２０ｄ结束，其间在６～７ｄ和１１～１３ｄ出现２次排毒高峰。ＨＩ抗体在初期先是降低１个滴度，后期开始升高而且离散度不断增大。 展开更多
关键词 新城疫病毒感染 排毒规律 诊断试剂盒 ELISA 鸡
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新城疫病毒F_(48)E_(9)株HN基因的克隆与酶切分析 被引量：10
19
作者 曹殿军 刘春丽 +2 位作者 王莉林 张莹 卢景良 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第4期326-330,共5页
为深入探讨新城疫病毒（ＮＤＶ）的结构与功能的关系，扩增和克隆了Ｆ４８Ｅ９株ＮＤＶ的ＨＮ基因。首先以提取的Ｆ４８Ｅ９株ＮＤＶ基因组ＲＮＡ为模板逆转录合成第一链ｃＤＮＡ，然后用ＨＮ基因特异性引物作ＰＣＲ扩增ＨＮｃＤＮＡ，... 为深入探讨新城疫病毒（ＮＤＶ）的结构与功能的关系，扩增和克隆了Ｆ４８Ｅ９株ＮＤＶ的ＨＮ基因。首先以提取的Ｆ４８Ｅ９株ＮＤＶ基因组ＲＮＡ为模板逆转录合成第一链ｃＤＮＡ，然后用ＨＮ基因特异性引物作ＰＣＲ扩增ＨＮｃＤＮＡ，结果得到１条分子量约１．８ｋｂ的ＤＮＡ带，与ＮＤＶＨＮ基因的大小一致。Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交进一步证实其为ＨＮ特异性ｃＤＮＡ。随后采用平端连接法将其克隆到ｐＳＶ·Ｓｐｏｒｔｌ质粒中，应用限制性内切酶ＥｃｏＲＩ、ＳｃａⅠ、ＭｌｕⅠ、ＡｐａⅠ、ＰｓｔⅠ、和ＳｍａⅠ对ＮＤＶＦ４８Ｅ９株ＨＮｃＤＮＡ重组质粒作单酶或双酶切，结果表明，ＮＤＶＦ４８Ｅ９株ＨＮ基因较ＨｉｔｃｈｎｅｒＢ１株的ＨＮ基因缺少１个ＭｌｕⅠ位点（７０５ｂｐ左右），多１个ＰｓｔⅠ位点（８０２ｂｐ左右）。 展开更多
关键词 新城疫病毒 HN基因 克隆与鉴定
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NDV长春株和四平株HN/F核酸疫苗的构建及表达 被引量：7
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作者 龚伟 金宁一 +4 位作者 薛立娟 罗琴芳 孙大辉 葛涛 李萍 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期105-107,共3页
将新城疫病毒 (NDV)长春株和四平株 HN插入 p IRES1多克隆位点 (Eco R )中 ,构建成核酸表达疫苗 p IRc HN和 p IRs HN,然后切除 p IRc HN和 p IRs HN的新霉素基因 ,将长春株和四平株 F基因分别插入其中 ,构建成 p IRc HNF和 p IRs HNF,... 将新城疫病毒 (NDV)长春株和四平株 HN插入 p IRES1多克隆位点 (Eco R )中 ,构建成核酸表达疫苗 p IRc HN和 p IRs HN,然后切除 p IRc HN和 p IRs HN的新霉素基因 ,将长春株和四平株 F基因分别插入其中 ,构建成 p IRc HNF和 p IRs HNF,而后分别转染 Hela细胞。经血凝效价测定、Western blot分析 ,弱毒株构建的核酸疫苗的血凝活性比强毒株高 1个数量级 ,Hela细胞表达的 HN蛋白量以 p IRc HN最高 ,p IRs HN次之 ,p IRc HNF和 p IRs HNF较低。将重组疫苗转染 Hela细胞 ,用兔抗鸡 Ig Y进行间接免疫荧光试验 ,结果 ,在细胞膜和细胞浆中观察到了特异性的黄绿色荧光 ,证明表达产物具有特异性。 展开更多
关键词 ndv HN基因 F基因 核酸疫苗 新城疫病毒
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