N糖基化抑制对脑胶质瘤细胞株SWO-38 N-GSLs合成的影响

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作者 张健 张积仁 汪森明 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期321-324,共4页

目的　探讨N糖基化抑制对肿瘤细胞中性鞘糖脂 (N GSLs)合成的影响。方法　以衣霉素 (Tunicamycin)为N 糖基化抑制剂 ,观察其对胶质瘤细胞株SWO 38糖蛋白及N GSLs合成的影响。结果　当衣霉素浓度≥ 5ug ml,作用时间≥ 8小时 ,它可以在体... 目的　探讨N糖基化抑制对肿瘤细胞中性鞘糖脂 (N GSLs)合成的影响。方法　以衣霉素 (Tunicamycin)为N 糖基化抑制剂 ,观察其对胶质瘤细胞株SWO 38糖蛋白及N GSLs合成的影响。结果　当衣霉素浓度≥ 5ug ml,作用时间≥ 8小时 ,它可以在体外选择性地抑制N糖蛋白的合成 ,同时也抑制N GSLs的合成 ,而对N GSLs单一组分的相对百分含量无明显影响。结论　N 糖基化抑制剂在抑制细胞N糖蛋白合成的同时 ,对细胞N GSLs的合成也有抑制作用。 展开更多

关键词 n糖基化抑制 n糖蛋白 中性鞘糖脂 脑胶质瘤

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新型核壳型亲水聚合物-硅胶杂化填料的合成及其在蛋白质N-糖链富集中的应用 被引量：2

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作者 白海红 范超 +5 位作者 沈丙权 田芳 邓玉林 潘一廷 秦伟捷 钱小红 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期221-227,共7页

蛋白质的N-糖基化修饰与多种重要的生理、病理进程密切相关,是多种重大疾病诊断标志物研究的热点。由于糖蛋白本身多是低丰度表达的蛋白质,且糖链结构具有高度微不均一性,这使得蛋白质糖基化修饰的分析具有一定的挑战。本研究利用表面引... 蛋白质的N-糖基化修饰与多种重要的生理、病理进程密切相关,是多种重大疾病诊断标志物研究的热点。由于糖蛋白本身多是低丰度表达的蛋白质,且糖链结构具有高度微不均一性,这使得蛋白质糖基化修饰的分析具有一定的挑战。本研究利用表面引发-原子转移自由基聚合(SI-ATRP)法,以带有双键的氨基葡萄糖为单体(GMAG),成功制备了新型核壳型亲水聚合物-硅胶杂化填料(pGMAG-SiO2)。由于在硅胶表面引入致密的亲水聚合物层,该填料不仅保持了硅胶良好的机械强度,而且显著提高了其亲水性,因此非常适合作为亲水填料用于蛋白质的N-糖链富集。以麦芽七糖和鸡卵清蛋白的N-糖链为研究对象,考察了该填料对N-糖链的富集效果,并将该杂化填料成功用于人血浆中糖蛋白N-糖链的富集检测,共鉴定了47种糖型。以上结果表明,pGMAG-SiO2填料对N-糖链具有较高的亲和性,可以用于N-糖链的高覆盖率鉴定。 展开更多

关键词 表面引发-原子转移自由基聚合反应 核壳型硅胶填料 n-糖链 n-糖基化蛋白质

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基于血浆外泌体糖蛋白质组特征谱的脑胶质瘤药物靶标蛋白筛选研究 被引量：2

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作者 白海红 刘龙 +1 位作者 漆璐 王兴河 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第24期3981-3983,共3页

目的基于脑胶质瘤患者和健康志愿者血浆外泌体中N-糖基化蛋白质的表达差异,筛选潜在的药物靶标蛋白。方法分别取3名脑胶质瘤患者和3名健康志愿者的混合血浆并提取外泌体。基于肼化学法富集上述血浆外泌体中的N-糖基化蛋白质并对其进行... 目的基于脑胶质瘤患者和健康志愿者血浆外泌体中N-糖基化蛋白质的表达差异,筛选潜在的药物靶标蛋白。方法分别取3名脑胶质瘤患者和3名健康志愿者的混合血浆并提取外泌体。基于肼化学法富集上述血浆外泌体中的N-糖基化蛋白质并对其进行质谱鉴定。比较脑胶质瘤患者和健康志愿者血浆外泌体N-糖基化蛋白质的表达差异,并确定潜在的药物靶标蛋白。结果脑胶质瘤患者和健康志愿者血浆外泌体中共有44个N-糖基化位点的表达量存在差异,归属于39个N-糖基化蛋白质。其中,7个N-糖基化蛋白质为潜在的药物靶标蛋白。结论脑胶质瘤患者血浆外泌体表达的N-糖基化蛋白质中含有潜在的药物靶标蛋白,为新药筛选及先导化合物开发与设计等奠定分子基础。 展开更多

关键词 n-糖基化蛋白质 脑胶质瘤 药物靶标蛋白

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大肠埃希菌CLM37菌株Lpp基因敲除及胞外表达N-糖基化重组蛋白研究 被引量：1

4

作者 阮瑶 王力凡 +3 位作者 郭龙华 付鑫 丁宁 胡学军 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1306-1311,共6页

目的·构建外膜脂蛋白Lpp(Braun's lipoprotein)基因缺失的大肠埃希菌菌株,在该菌株中进行大肠埃希菌胞外生产N-糖基化重组蛋白研究。方法·利用Red同源重组系统,敲除大肠埃希菌CLM37基因组上的外膜脂蛋白Lpp基因;通过绘制... 目的·构建外膜脂蛋白Lpp(Braun's lipoprotein)基因缺失的大肠埃希菌菌株,在该菌株中进行大肠埃希菌胞外生产N-糖基化重组蛋白研究。方法·利用Red同源重组系统,敲除大肠埃希菌CLM37基因组上的外膜脂蛋白Lpp基因;通过绘制生长曲线,研究Lpp基因缺失后对大肠埃希菌生长状态的影响。将受体蛋白表达载体pIG6-rFn3-Gly和空肠弯曲杆菌来源的N-糖基化基因簇载体pACYCpgl共转化大肠埃希菌CLM37?Lpp,研究大肠埃希菌胞外生产N-糖基化重组蛋白情况。结果·获得了Lpp基因缺失的大肠埃希菌菌株CLM37?Lpp,并在该菌株中成功实现了胞外生产N-糖基化重组蛋白rFn3-Gly;相比于菌株CLM37,大肠埃希菌CLM37?Lpp胞外生产重组蛋白rFn3-Gly的总量约提升了4倍,糖基化效率约提高了6倍。结论·成功构建大肠埃希菌菌株CLM37?Lpp并实现了胞外生产N-糖基化重组蛋白r Fn3-Gly,提高了糖蛋白产量及糖基化效率。 展开更多

关键词 Lpp基因 大肠埃希菌CLM37 n-糖基化蛋白

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基于质谱的N-糖蛋白分析进展

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作者 田志新 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期662-673,共12页

N-连接糖基化是蛋白质上常见的翻译后修饰,在修饰位点上具有跟其他小分子修饰(如甲基化、乙酰化、磷酸化)同样的宏观不均一性,也就是蛋白质氨基酸序列上具有多个潜在的修饰位点。但相对于小分子修饰单一的结构,N-糖基化修饰具有来自不... N-连接糖基化是蛋白质上常见的翻译后修饰,在修饰位点上具有跟其他小分子修饰(如甲基化、乙酰化、磷酸化)同样的宏观不均一性,也就是蛋白质氨基酸序列上具有多个潜在的修饰位点。但相对于小分子修饰单一的结构,N-糖基化修饰具有来自不同单糖组成,序列结构、链接结构、异头异构,立体构象等多个结构维度的数以万计的结构。这使得N-糖基化在修饰位点上具有额外的微观不均一性,也就是说同一个N-糖基化位点可以以一定的化学计量比修饰不同的糖链。N-糖基化修饰以位点和结构特异的方式调控N-糖蛋白的结构和功能,疾病条件下差异表达的N-糖基化需通过位点和结构特异的定量分析来表征。本文主要介绍最新发展水平的基于质谱的位点和结构特异定量N-糖蛋白质组学及在生物医学中的应用。 展开更多

关键词 n-糖蛋白 糖基化位点 糖链结构 定性 定量

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人尿液外泌体N-糖基化蛋白质的鉴定、生物学功能分析及临床应用

6

作者 白海红 张宝英 王兴河 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期1511-1513,共3页

目的分析人尿液外泌体中N-糖基化蛋白质的组成及生物学功能,并探讨与之关联的临床应用。方法取6例健康志愿者的尿液并提取外泌体。基于亲水相互作用色谱法富集上述尿液外泌体中的N-糖基化蛋白质并对其进行质谱鉴定。基因本体法对本研究... 目的分析人尿液外泌体中N-糖基化蛋白质的组成及生物学功能,并探讨与之关联的临床应用。方法取6例健康志愿者的尿液并提取外泌体。基于亲水相互作用色谱法富集上述尿液外泌体中的N-糖基化蛋白质并对其进行质谱鉴定。基因本体法对本研究中鉴定的N-糖基化蛋白质进行生物学功能分析。在此基础上,探讨其临床意义及应用前景。结果健康志愿者尿液外泌体中共鉴定到398个N-糖基化位点,归属于230个N-糖基化蛋白质。这些N-糖基化蛋白质参与多个重要的生物学过程。其中,94个N-糖基化蛋白质与疾病关联。结论人尿液外泌体表达的N-糖基化蛋白质具有重要的生物学功能,并且与临床疾病的发生发展具有相关性,有望为疾病诊断、监测、治疗及新药研发等奠定分子基础。 展开更多

关键词 n-糖基化蛋白质 外泌体 亲水相互作用色谱

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基于肼化学富集法分析人血浆外泌体中的N-糖基化蛋白质

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作者 白海红 王兴河 车津晶 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2019年第3期216-223,共8页

目的对人血浆外泌体中N-糖基化蛋白质的组成和功能进行分析。方法通过超速离心法分离获得健康人血浆外泌体,超声处理获得外泌体蛋白,胰蛋白酶将蛋白酶解为肽段。肼化学法分离富集血浆外泌体中的N-糖基化肽段,液相色谱及高分辨质谱对其... 目的对人血浆外泌体中N-糖基化蛋白质的组成和功能进行分析。方法通过超速离心法分离获得健康人血浆外泌体,超声处理获得外泌体蛋白,胰蛋白酶将蛋白酶解为肽段。肼化学法分离富集血浆外泌体中的N-糖基化肽段,液相色谱及高分辨质谱对其进行鉴定,基因本体法对鉴定的N-糖基化蛋白质的生物学功能进行分析。结果获得的外泌体具有外泌体典型的茶托样双层膜结构,形态完整,大小均匀,直径分布在100 nm左右。在1 mL健康人血浆外泌体中共鉴定到252个N-糖基化修饰位点,归属于131个N-糖基化蛋白质。可能在丝氨酸型内肽酶活性、丝氨酸型内肽酶活性抑制及钙离子结合等生命过程中发挥重要作用。其中,67个N-糖基化蛋白质与疾病的发生发展密切相关。结论本研究在人血浆外泌体中共鉴定到131个N-糖基化蛋白质。它们可能参与关键的生命活动及疾病的发生发展。 展开更多

关键词 n-糖基化蛋白质 血浆外泌体 肼化学富集

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利用亲水富集策略分析人血浆中N-糖基化蛋白及N-糖类型 被引量：5

8

作者 马成 潘一廷 +3 位作者 张琪 王继峰 钱小红 应万涛 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1057-1063,共7页

蛋白质的N-糖基化是最重要的翻译后修饰之一,许多已知的血浆肿瘤诊断标志物及治疗靶标都是N-糖基化蛋白。针对血浆的糖蛋白质组研究有利于发现新的蛋白标志物。然而,血浆蛋白质浓度分布的动态范围非常宽,且同一位点上的糖链存在微观不... 蛋白质的N-糖基化是最重要的翻译后修饰之一,许多已知的血浆肿瘤诊断标志物及治疗靶标都是N-糖基化蛋白。针对血浆的糖蛋白质组研究有利于发现新的蛋白标志物。然而,血浆蛋白质浓度分布的动态范围非常宽,且同一位点上的糖链存在微观不均一性,影响了血浆中糖蛋白的鉴定效率。本文利用亲水材料ZIC-HILIC制备亲水富集柱分别对人血浆中的N-糖链和N-糖肽进行富集,并结合碱性反相色谱进行肽段的预分离和高准确度质谱分析,最终在健康人的血浆中鉴定到了299个糖基化蛋白、637个糖基化位点,并识别出31种不同的糖型。在这些鉴定到的糖基化位点中,新发现有107个N-糖基化位点(占总位点数的16.8%)。本方法操作简单,可以有效富集N-糖肽和N-糖,为在血浆中寻找糖蛋白和糖链生物标志物提供了可靠的手段。 展开更多

关键词 超滤辅助样品制备 亲水相互作用色谱 反相色谱 n-糖基化蛋白 n-糖

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小整联蛋白结合配体N端联结糖蛋白家族在硬组织发育中的调控作用

9

作者 徐思为 李蕙 刘磊 《国际口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期505-512,共8页

硬组织发育是生物机体发育过程中的重要组成部分,小整联蛋白结合配体N端联结糖蛋白家族在硬组织发育过程中发挥重要的调控作用,如:促进干细胞的成牙本质分化或成骨分化,调控成牙本质细胞或成骨细胞的基因表达等。编码小整联蛋白结合配体... 硬组织发育是生物机体发育过程中的重要组成部分,小整联蛋白结合配体N端联结糖蛋白家族在硬组织发育过程中发挥重要的调控作用,如:促进干细胞的成牙本质分化或成骨分化,调控成牙本质细胞或成骨细胞的基因表达等。编码小整联蛋白结合配体N端联结糖蛋白家族的基因发生突变可引起硬组织矿化异常,导致如低血磷性佝偻病、牙本质发育不全等多种疾病。近年来,学者们对该蛋白家族在硬组织发育中的调控作用开展了深入研究,揭示了该蛋白家族的主要分子调控机制,加深了对其作用及机制的认知。因此,本文对小整联蛋白结合配体N端联结糖蛋白家族在生物硬组织发育中的调控作用及其机制的研究进展进行总结和综述。 展开更多

关键词 小整联蛋白结合配体n端联结糖蛋白家族 硬组织 生物矿化

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小整联蛋白结合配体N-连结糖蛋白家族成员在牙发育中的作用 被引量：2

10

作者 侯超 李纾 《国际口腔医学杂志》 CAS 2011年第4期412-415,共4页

小整联蛋白结合配体N-连结糖蛋白家族是一组主要在牙和骨组织中表达的蛋白质,其基因具有通用的外显子内含子结构,影响细胞的增殖和分化。目前已知其包括骨桥蛋白、骨涎蛋白、牙本质基质蛋白-1、牙本质涎磷蛋白、细胞外基质磷酸糖蛋白和... 小整联蛋白结合配体N-连结糖蛋白家族是一组主要在牙和骨组织中表达的蛋白质,其基因具有通用的外显子内含子结构,影响细胞的增殖和分化。目前已知其包括骨桥蛋白、骨涎蛋白、牙本质基质蛋白-1、牙本质涎磷蛋白、细胞外基质磷酸糖蛋白和釉蛋白等6个成员,本文就其在牙发育过程中的作用作一综述。 展开更多

关键词 小整联蛋白结合配体n-连结糖蛋白家族 牙本质涎磷蛋白 牙本质基质蛋白 骨桥蛋白 骨涎蛋白 细胞外基质磷酸糖蛋白 釉蛋白

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利用大肠杆菌生产N-糖蛋白和糖蛋白疫苗的研究进展 被引量：1

11

作者 马中瑞 韩东雷 +2 位作者 赵骏菲 陈梦琳 陈敏 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期92-98,共7页

近年来,随着对空肠弯曲杆菌蛋白N-糖基化修饰系统的研究不断深入,通过关键酶PglB和外源载体蛋白的导入等,此系统在大肠杆菌中的重建成功完成。目前,已能初步利用大肠杆菌生产多种N-糖蛋白。此技术为糖蛋白疫苗的生产开辟了新的途径。此... 近年来,随着对空肠弯曲杆菌蛋白N-糖基化修饰系统的研究不断深入,通过关键酶PglB和外源载体蛋白的导入等,此系统在大肠杆菌中的重建成功完成。目前,已能初步利用大肠杆菌生产多种N-糖蛋白。此技术为糖蛋白疫苗的生产开辟了新的途径。此外,通过关键酶表达量的提高和糖基化位点和序列的选择等措施,大肠杆菌蛋白N-糖基化系统的糖基化效率有了进一步提高,同时改善N-糖蛋白的免疫效果的研究亦取得较大进展。这些都为大规模生产糖蛋白疫苗提供了保障。 展开更多

关键词 n-糖蛋白 糖蛋白疫苗PglB 空肠弯曲杆菌 大肠杆菌 糖基化效率 免疫效果

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基质金属蛋白酶在牙本质龋中的作用

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作者 张思宇 吴红崑 《国际口腔医学杂志》 CAS 2008年第S1期46-49,共4页

基质金属蛋白酶(MMPs)是一类蛋白水解酶,在体内可水解细胞外基质成分。在牙本质龋发生的过程中,致龋菌释放的酸使pH值下降,来自于唾液和牙本质的MMPs被激活,当唾液缓冲系统使pH值恢复中性后,MMPs可水解脱矿的牙本质。基质金属蛋白酶抑... 基质金属蛋白酶(MMPs)是一类蛋白水解酶,在体内可水解细胞外基质成分。在牙本质龋发生的过程中,致龋菌释放的酸使pH值下降,来自于唾液和牙本质的MMPs被激活,当唾液缓冲系统使pH值恢复中性后,MMPs可水解脱矿的牙本质。基质金属蛋白酶抑制剂如MMPs组织特异性抑制剂及从天然来源的物质中提取出的某些成分可有效抑制MMPs活性。本文就MMPs生物学特性、在牙本质龋中的作用以及其抑制剂的研究进展作一综述。 展开更多

关键词 基质金属蛋白酶 牙本质龋 小整合素结合配体n端联结糖蛋白 基质金属蛋白酶抑制剂

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