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盘羊肺炎支原体感染PCR检测方法的建立与初步应用 被引量：7
1
作者 冷青文 李志远 +4 位作者 屈勇刚 鲁海富 金云云 王静梅 剡根强 《兽类学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期312-316,共5页
羊支原体性肺炎,是由支原体引起的一类高度接触性传染病,又称羊传染性胸膜肺炎（Infections pleuropneumonia of sheep and goats）,临床症状主要表现为高热、咳嗽、消瘦、
关键词 盘羊 PCR 绵羊肺炎支原体
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绵羊肺炎支原体GH3-3株在改良KM2培养基中的增殖情况 被引量：5
2
作者 许健 储岳峰 +5 位作者 赵萍 高鹏程 贺英 张莹 剡根强 逯忠新 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第11期46-48,共3页
绵羊肺炎支原体GH3-3MoGH3-3株是我国绵羊支原体肺炎灭活疫苗制苗菌株。为研究MoGH3-3株在改良KM2培养基中的生长及繁殖特性,利用活菌计数方法对其在不同培养阶段的生长滴度(颜色变化单位)进行测定,并绘制生长曲线。结果表明,传代稳定的... 绵羊肺炎支原体GH3-3MoGH3-3株是我国绵羊支原体肺炎灭活疫苗制苗菌株。为研究MoGH3-3株在改良KM2培养基中的生长及繁殖特性,利用活菌计数方法对其在不同培养阶段的生长滴度(颜色变化单位)进行测定,并绘制生长曲线。结果表明,传代稳定的MoGH3-3株在改良KM2培养基中培养12h开始进入对数生长期,培养72h进入稳定期,培养120h时进入衰亡期。本研究可为绵羊肺炎支原体培养特性研究和疫苗生产工艺研究提供参考数据。 展开更多
关键词 绵羊肺炎支原体 moGH3-3株 增殖
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3种定量检测绵羊肺炎支原体方法的比较 被引量：2
3
作者 何曼莉 费磊 +1 位作者 岳华 汤承 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第3期177-180,共4页
本研究采用改良Thiaucourt’s培养基培养绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipleuneniae,MO)临床分离株SC01,收集不同时间的培养物,分别用颜色变化单位(CCU)法、浊度法及实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法进行定量,并绘制MO生长动态曲线。CC... 本研究采用改良Thiaucourt’s培养基培养绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipleuneniae,MO)临床分离株SC01,收集不同时间的培养物,分别用颜色变化单位(CCU)法、浊度法及实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法进行定量,并绘制MO生长动态曲线。CCU检测结果显示,接种后0～4h为SC01的迟缓期,4～16h为对数生长期,lg CCU/mL最高达到10.7000±0.4700,16～20h为稳定期,20h以后进入衰亡期;浊度法定量检测结果显示,SC01培养物经过5倍浓缩后的D420nm随着培养时间延长逐渐上升,2h时为0.0028±0.0002,4～12hD420nm增加较缓慢,而12～24h增加最快,24h最高达到0.8609±0.0045,以后则趋于稳定;Real-time PCR法检测结果显示,SC01的拷贝数随着培养时间延长平稳上升,2h时lg拷贝/mL为4.5889±0.0048,在30h时lg拷贝/mL达到7.6165±0.1089。相关性分析结果表明,在迟缓期和对数生长期,CCU法与Real-time PCR法、CCU法与浊度法、Real-time PCR法与浊度法对MO的定量检测结果高度相关,相关系数分别为0.967、0.720和0.849,而Real-time PCR法和浊度法对MO的定量检测结果则在2～30h内均高度相关,相关系数为0.912。经对检测所需时间及精确度等方面综合比较,本研究认为Real-time PCR法具有快速、准确及易标准化等特点,可以取代CCU法和浊度法用于MO的定量。 展开更多
关键词 绵羊肺炎支原体 颜色变化单位 浊度 实时荧光定量PCR
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绵羊肺炎支原体p74基因重组单核细胞增生李斯特菌的构建及其免疫原性分析 被引量：2
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作者 卢海亭 乔军 +6 位作者 孟庆玲 彭叶龙 陈诚 田路路 贡莎莎 才学鹏 陈创夫 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2017年第8期7-14,22,共9页
【目的】构建绵羊肺炎支原体(MO)p74基因重组单核细胞增生李斯特菌(LM)并分析其免疫原性,为研发MO重组活疫苗奠定基础。【方法】采用PCR方法从LM-SB5株基因组中扩增出rli60基因的上、下游同源片段a和b,从质粒pET-32a(+)-p74中扩增出MOp7... 【目的】构建绵羊肺炎支原体(MO)p74基因重组单核细胞增生李斯特菌(LM)并分析其免疫原性,为研发MO重组活疫苗奠定基础。【方法】采用PCR方法从LM-SB5株基因组中扩增出rli60基因的上、下游同源片段a和b,从质粒pET-32a(+)-p74中扩增出MOp74目的基因片段,利用重叠延伸PCR方法(SOE-PCR)将扩增的3个片段融合成ap74b基因片段,克隆入pMD19-T载体中进行测序鉴定。将ap74b片段从pMD19-T载体上切下亚克隆入pKSV7穿梭载体,构建pKSV7-ap74b重组穿梭质粒,电转化至LM-SB5株感受态细胞,用氯霉素和高温双重压力筛选得到重组菌LM-Δrli60-ap74b。并通过SDS-PAGE及Western blot分析重组菌P74蛋白的表达情况,通过小鼠免疫试验检测其免疫原性。【结果】成功扩增出了rli60基因的上下游同源片段a、b及p74目的片段,采用SOEPCR方法获得融合片段ap74b,并成功亚克隆于穿梭质粒pKSV7中。对重组菌PCR鉴定结果表明,外源基因MO p74定点整合于LM基因组中。体外稳定性检验表明,p74基因能在LM基因组中稳定存在。SDS-PAGE结果表明,重组菌LM-Δrli60-ap74b可表达蛋白分子质量约为17ku重组蛋白;Western blot分析表明,表达的重组蛋白能与MO阳性血清发生特异性免疫反应。小鼠免疫试验表明,重组菌LM-Δrli60-ap74b菌液可诱导机体产生抗MO特异性抗体,证实该重组菌具有一定的免疫原性,重组菌能诱导机体产生1∶8~1∶16的抗体效价。【结论】获得了具有免疫原性的绵羊肺炎支原体p74基因重组单核细胞增生李斯特菌。 展开更多
关键词 绵羊肺炎支原体 单核细胞增生李斯特菌 p74基因 同源重组
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