胰岛β细胞株INS-1和MIN6有关糖毒性的比较研究 被引量：3

1

作者 王威 张丹 +3 位作者 陈颖 曹翠萍 韩玲玲 刘国良 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第13期1940-1942,共3页

目的探讨INS-1和MIN6细胞株在有关糖毒性研究的不同表型。方法胰岛素瘤细胞株INS-1和MIN-6分别在含5和25mM糖浓度的无血浆培养基中孵育24h。MTT法测定细胞活性,细胞凋亡通过annexinV-PI双染,流式细胞仪检测分析。结果 INS-1细胞在高糖... 目的探讨INS-1和MIN6细胞株在有关糖毒性研究的不同表型。方法胰岛素瘤细胞株INS-1和MIN-6分别在含5和25mM糖浓度的无血浆培养基中孵育24h。MTT法测定细胞活性,细胞凋亡通过annexinV-PI双染,流式细胞仪检测分析。结果 INS-1细胞在高糖条件下细胞活性明显降低,细胞凋亡率、死亡率明显增加,而MIN6细胞在高糖环境下细胞活性增加,凋亡率下降,死亡率无明显变化。结论 MIN6细胞比INS-1细胞能耐受更高的糖毒性。 展开更多

关键词 胰岛Β细胞 INS-1 细胞 min6细胞 糖毒性

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高糖条件下胰岛13细胞株MIN-β细胞对视网膜色素上皮细胞的保护作用

2

作者 谢佩玉 松仓诚 +3 位作者 藤井绩 赵基恩 筱原诚 张晓梅 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期132-135,共4页

背景糖尿病视网膜病变（DR）与高糖所致的视网膜色素上皮（RPE）细胞的氧化损伤密切相关，近年来人们广泛地致力于保护RPE细胞的研究。目的研究胰岛B细胞株MIN-6细胞对RPE细胞高糖损伤的保护作用。方法将RPE细胞体外培养4d，待贴壁生长... 背景糖尿病视网膜病变（DR）与高糖所致的视网膜色素上皮（RPE）细胞的氧化损伤密切相关，近年来人们广泛地致力于保护RPE细胞的研究。目的研究胰岛B细胞株MIN-6细胞对RPE细胞高糖损伤的保护作用。方法将RPE细胞体外培养4d，待贴壁生长良好后分为正常对照组、高糖对照组和MIN-6细胞共培养组，ABC法鉴定RPE细胞。用含5mmol／L葡萄糖的RPE细胞培养液进行培养作为正常对照组，高糖对照组用含30mmol／L葡萄糖的培养液进行培养，MIN-6细胞共培养组为含5×10^4个MTN-6细胞以及30mmol／L葡萄糖的培养液进行培养。各组继续培养24h后，应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测量高糖对已贴壁生长良好的RPE细胞的损伤作用以及MIN一6细胞对RPE细胞高糖损伤的保护作用。结果ABC法鉴定RPE细胞可见95％以上呈棕色着色，为阳性细胞。各组继续培养24h后，正常对照组、高糖对照组和MIN-6细胞共培养组RPE细胞的吸光度（A_540）值差异有统计学意义（F=19．94，P〈0．01），正常对照组的A。值为0．44±0．02，高糖对照组为0．30±0．01，差异有统计学意义（t=6．85，P〈0．01）；MIN-6细胞共培养组的A。值为0．41±0．01，与高糖对照组的0．30±0．叭比较，差异有统计学意义（t=5．62，P〈0．01）。正常对照组RPE细胞的生存率为（97．5±3．3）％，高糖对照组为（68．2±4．5）％，差异有统计学意义（t=11．30，P〈0．01）。结论高糖导致贴壁生长良好的RPE细胞损伤，MIN-6细胞可以明显保护高糖所致的RPE细胞损伤。 展开更多

关键词 高糖 min-6细胞 视网膜色素上皮细胞

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胰腺特异性表达Hes1基因的构建及体外表达

3

作者 魏静 杨希祥 +4 位作者 石宁宁 宋小凤 冯冲 潘登科 臧荣鑫 《西北民族大学学报（自然科学版）》 2015年第2期16-20,共5页

为了探究胰腺的发育机制,以及制备胰腺缺陷型的小型猪模型,构建了特异性表达载体,开展了相关载体构建及体外验证研究.本研究以小鼠PDX1启动子为特异性启动元件,构建胰腺特异性启动小鼠Hes1基因的表达载体PDX1-Hes1,载体转染MIN-6胰岛β... 为了探究胰腺的发育机制,以及制备胰腺缺陷型的小型猪模型,构建了特异性表达载体,开展了相关载体构建及体外验证研究.本研究以小鼠PDX1启动子为特异性启动元件,构建胰腺特异性启动小鼠Hes1基因的表达载体PDX1-Hes1,载体转染MIN-6胰岛β细胞、猪耳成纤维细胞及猪肾细胞,培养48h后,通过qRT-PCR、Western Blot检测.结果显示:Hes1在MIN-6胰岛β细胞中的RNA水平和蛋白水平均高效表达,而在非胰腺细胞猪耳成纤维细胞及猪肾细胞中均不表达.试验表明:胰岛特异性表达载体PDX1-Hes1的成功获得,为构建相关基因在胰腺中特异性表达的载体提供参考,为后续制备胰腺缺陷型的小型猪提供了条件. 展开更多

关键词 胰腺特异性表达 min-6胰岛β细胞 体外验证

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猪胰岛素启动子调控EGFP表达载体的优化及体外验证

4

作者 于淑珍 冯冲 +2 位作者 石宁宁 宋小凤 潘登科 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2014年第6期34-39,I0005,共7页

目的获得猪胰岛素启动子调控外源基因的高效表达载体,为制备转基因猪胰岛特异性表达目的基因奠定基础。方法利用猪胰岛素启动子(PIP,包含5'调控区、第一外显子、第一内含子及第二外显子ATG前的序列共1.5 kb)构建表达载体,连接PIP和E... 目的获得猪胰岛素启动子调控外源基因的高效表达载体,为制备转基因猪胰岛特异性表达目的基因奠定基础。方法利用猪胰岛素启动子(PIP,包含5'调控区、第一外显子、第一内含子及第二外显子ATG前的序列共1.5 kb)构建表达载体,连接PIP和EGFP的酶切位点HindⅢ设计在起始密码子前,命名为PIP-Hind IIIEGFP。鉴于酶切位点的插入位置可能会影响外源基因的表达效率,对载体进行了优化:将Hind III酶切位点删除,实现PIP和EGFP无缝连接,载体命名PIP-EGFP;将第一内含子3'端的内含子剪接受体位点(splicing acceptor site,SA)突变为Hind III内切酶识别位点,命名为PIP-SA(M)-EGFP。三种载体分别电转染小鼠胰岛素瘤β细胞株MIN-6细胞、猪耳成纤维细胞以及猪肾细胞,48 h后通过荧光强度、流式分析、RT-PCR及Western blot检测,验证载体的表达效率。结果转染细胞后,三种载体都仅在MIN-6胰岛β细胞表达绿色荧光。RT-PCR及其产物测序结果显示三种载体的胰岛素启动子第一内含子的剪切存在差异:载体PIP-Hind III-EGFP和PIP-EGFP的内含子存在剪切和不剪切两种情况,剪切不稳定;载体PIP-SA(M)-EGFP的SA位点突变后内含子不剪切,流式细胞及Western blot检测显示,与另外两种载体相比,该载体目的蛋白的表达量最高。结论通过突变胰岛素启动子第一内含子的3'端的剪接受体位点,成功获得了胰岛β细胞的高效表达载体,可用于制备胰岛特异表达外源基因的转基因猪。 展开更多

关键词 胰岛素启动子PIP 特异性表达 小鼠胰岛素瘤β细胞株min-6细胞 EGFP 五指山小型猪

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黄芪多糖对MIN6细胞增殖、凋亡及胰岛素分泌的影响 被引量：11

5

作者 李琳 刘瑜 +5 位作者 刘屏 李春霖 胡园 谷昭燕 马丽超 苗新宇 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第21期2139-2142,共4页

目的:研究不同浓度黄芪多糖(Astragalus polysaccharide,APS)对胰岛MIN6细胞的增殖活性、细胞凋亡及胰岛分泌功能的影响。方法:用不同浓度APS(0,10,100和1 000μg.mL-1)干预MIN6细胞48 h,采用MTT法测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋... 目的:研究不同浓度黄芪多糖(Astragalus polysaccharide,APS)对胰岛MIN6细胞的增殖活性、细胞凋亡及胰岛分泌功能的影响。方法:用不同浓度APS(0,10,100和1 000μg.mL-1)干预MIN6细胞48 h,采用MTT法测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡,分别用3和30 mmol.L-1葡萄糖刺激各组MIN6细胞,胰岛素放免试剂盒检测胰岛素分泌功能。结果:与对照组(0μg.mL-1)比较,100μg.mL-1 APS组MIN6细胞增殖活性升高(P<0.05);10和100μg.mL-1 APS组MIN6细胞凋亡率有下降趋势,而1 000μg.mL-1 APS组MIN6细胞凋亡率明显增加(P<0.05);10和100μg.mL-1 APS组MIN6细胞胰岛素分泌功能显著增强(P<0.05),而1 000μg.mL-1 APS组MIN6细胞胰岛素分泌功能有下降趋势。结论:10和100μg.mL-1 APS使MIN6细胞增殖活性升高、细胞凋亡率下降以及胰岛素分泌功能升高;1 000μg.mL-1 APS使MIN6细胞增殖活性下降、细胞凋亡率升高及胰岛素分泌功能下降。 展开更多

关键词 黄芪多糖 min6细胞 增殖 凋亡 胰岛素分泌

原文传递

马尾松花粉酯化多糖对MIN6细胞胰岛素分泌和[Ca^(2+)]_i的影响 被引量：6

6

作者 刘月冉 冯潍 耿越 《药物生物技术》 CAS 2013年第2期137-140,共4页

探讨马尾松花粉硫酸酯化多糖对MIN6细胞胰岛素分泌和[Ca2+]i的作用。选取60%乙醇沉淀的马尾松花粉多糖(PPM60),氯磺酸-吡啶法得到硫酸酯化物(SPPM60);检测PPM60及SPPM60刺激后MIN6细胞胰岛素分泌量和[Ca2+]i的变化。观察钙离子抑制剂维... 探讨马尾松花粉硫酸酯化多糖对MIN6细胞胰岛素分泌和[Ca2+]i的作用。选取60%乙醇沉淀的马尾松花粉多糖(PPM60),氯磺酸-吡啶法得到硫酸酯化物(SPPM60);检测PPM60及SPPM60刺激后MIN6细胞胰岛素分泌量和[Ca2+]i的变化。观察钙离子抑制剂维拉帕米和低分子肝素的影响。PPM60对MIN6细胞胰岛素分泌几乎没有影响,SPPM60能显著促进胰岛素的分泌和[Ca2+]i升高(P<0.05)。维拉帕米和低分子肝素钠均可以降低SPPM60引起的胰岛素分泌增加,但差异不显著。同样两者均可显著性降低SPPM60引起的[Ca2+]i的升高(P<0.05)。维拉帕米可以明显抑制3.6 mg/mL葡萄糖的促胰岛素分泌(P<0.05)和升高[Ca2+]i的作用(P<0.01)。SPPM60可以单独促进胰岛素的分泌,其作用机制与葡萄糖刺激胰岛素分泌(GSIS)有一定相似性,但同时存在其他的信号通路。 展开更多

关键词 马尾松 花粉 酯化多糖 min6细胞 胰岛素 [CA2+]I

原文传递

半夏泻心汤对糖尿病胰岛β细胞凋亡的影响 被引量：5

7

作者 杜立娟 孙敏 +10 位作者 王凡 史丽伟 左舒颖 李晓文 杨亚男 张美珍 张月颖 郭赫 徐翔 韩旭 倪青 《辽宁中医杂志》 CAS 2020年第4期156-159,I0002,共5页

目的探索基于调和胃肠法的半夏泻心汤对糖尿病MIN6胰岛β细胞凋亡的影响。方法MIN6胰岛β细胞正常培养后,MTT法测定半夏泻心汤适宜的预处理浓度及时间和TBHP适宜的造模浓度及时间后,采用不同浓度的半夏泻心汤和对照药预处理细胞12 h后T... 目的探索基于调和胃肠法的半夏泻心汤对糖尿病MIN6胰岛β细胞凋亡的影响。方法MIN6胰岛β细胞正常培养后,MTT法测定半夏泻心汤适宜的预处理浓度及时间和TBHP适宜的造模浓度及时间后,采用不同浓度的半夏泻心汤和对照药预处理细胞12 h后TBHP建立细胞凋亡模型,进行细胞分组,分为模型组(TBHP组)、对照组(control组)、半夏泻心汤不同预处理浓度组(BXXXT组)和对照药(LI组)预处理组。分别采用MTT、Hoechst33342、TUNEL种方法测定各组细胞的凋亡,Westernblot法检测各组细胞Caspase-3的表达。结果半夏泻心汤适宜的预处理时间及浓度是0.25mg/mL、0.5 mg/mL、1 mg/mL干预12 h;TBHP适宜的造模浓度及时间是400μM干预4 h;3种方法均提示半夏泻心汤中(P<0.05)、高剂量(P<0.05)组均可抑制MIN6细胞的凋亡;半夏泻心汤高剂量组可上调Caspase-3的表达(P<0.05)。结论半夏泻心汤可抑制TBHP诱导的MIN6胰岛β细胞的凋亡,其可能是通过调节Caspase-3的表达实现的,这为临床治疗糖尿病提供了依据。 展开更多

关键词 半夏泻心汤 细胞凋亡 min6细胞 TBHP CASPASE-3

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维生素D对过氧化氢诱导MIN6细胞凋亡的保护作用 被引量：4

8

作者 胡聪 吴颛 +3 位作者 李亚林 朱高路 曹朝晖 胡小波 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期198-203,共6页

目的探讨维生素D(vitamin D,VitD)对过氧化氢(hydrogen peroxide,H 2O 2)诱导小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞凋亡的保护作用及机制。方法VitD预处理后,用H 2O 2处理MIN6细胞,分别运用CCK-8法、Hoechst 33258荧光染色法、流式细胞术检测MIN6... 目的探讨维生素D(vitamin D,VitD)对过氧化氢(hydrogen peroxide,H 2O 2)诱导小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞凋亡的保护作用及机制。方法VitD预处理后,用H 2O 2处理MIN6细胞,分别运用CCK-8法、Hoechst 33258荧光染色法、流式细胞术检测MIN6细胞增殖、形态及凋亡百分率。Western blot检测增殖与凋亡相关基因Bax、Bcl-2、Caspase-3以及Cleaved caspase-3的表达。结果H 2O 2呈时间和剂量依赖性抑制MIN6细胞增殖,诱导细胞凋亡,降低Bcl-2表达、增加Bax及Cleaved caspase-3表达,Bcl-2/Bax比值降低,Cleaved caspase-3/caspase-3比值增加;当用VitD预处理后,Bcl-2表达增加,Bax、Cleaved caspase-3表达降低,Bcl-2/Bax比值增加,Cleaved caspase-3/caspase-3比值降低,MIN6细胞活力增加。结论VitD预处理后,通过增加抗凋亡Bcl-2表达,降低促凋亡Bax和Cleaved caspase-3表达,减少由H 2O 2诱导的小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞凋亡。 展开更多

关键词 维生素D 过氧化氢 细胞增殖 细胞形态 细胞凋亡 min6细胞

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柚皮素对高糖模型MIN6细胞的增殖和胰岛素分泌的影响 被引量：4

9

作者 王元 曾凯宏 +4 位作者 邓波 余雪梅 周雪 宋怡 黄璐娇 《重庆医学》 CAS 2020年第17期2844-2848,共5页

目的观察不同浓度柚皮素对高浓度葡萄糖(简称“高糖”)模型MIN6细胞增殖活性和胰岛素分泌的影响,以进一步探讨柚皮素对高糖环境下胰岛β细胞胰岛素分泌的分子机制。方法用高糖培养基培养MIN6细胞建立高糖损伤模型,分别用不同浓度(0、25... 目的观察不同浓度柚皮素对高浓度葡萄糖(简称“高糖”)模型MIN6细胞增殖活性和胰岛素分泌的影响,以进一步探讨柚皮素对高糖环境下胰岛β细胞胰岛素分泌的分子机制。方法用高糖培养基培养MIN6细胞建立高糖损伤模型,分别用不同浓度(0、25、50、100μg/mL)的柚皮素对模型细胞进行干预,用噻唑蓝(MTT)检测细胞的增殖活性,ELISA检测胰岛素释放能力。结果3个浓度(25、50、100μg/mL)的柚皮素干预均可恢复高糖模型MIN6细胞的增殖活力,可抑制高糖模型MIN6细胞胰岛素分泌能力下降,并且柚皮素浓度为50μg/mL时效果最明显(P<0.01)。结论柚皮素可能作为保护胰岛β细胞功能的潜在降糖药物被临床使用。 展开更多

关键词 柚皮素 细胞增殖 胰岛素分泌 min6细胞 高糖模型

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阿托伐他汀诱导的MIN6细胞铁死亡及相关机制研究

10

作者 魏倩影 陈欣 +3 位作者 秦瑶 李雨潇 秦璐 张梅 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2024年第8期1044-1050,共7页

目的:探讨阿托伐他汀(atorvastatin,Ator)是否可诱导小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞发生铁死亡,并探讨其可能的作用机制。方法:将MIN6细胞分为对照组、Ator组、Ator+凋亡抑制剂(Z-VAD-FMK)组、Ator+坏死抑制剂(necrostatin-1,Nec-1)组和Ator... 目的:探讨阿托伐他汀(atorvastatin,Ator)是否可诱导小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞发生铁死亡,并探讨其可能的作用机制。方法:将MIN6细胞分为对照组、Ator组、Ator+凋亡抑制剂(Z-VAD-FMK)组、Ator+坏死抑制剂(necrostatin-1,Nec-1)组和Ator+铁死亡抑制剂(ferrostatin-1,Fer-1)组。采用CCK-8法检测细胞活力;透射电镜观察细胞超微结构;荧光显微镜观察活性氧(reactive oxygen species,ROS)和Fe^(2+)水平;酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)和还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量;实时荧光定量PCR法(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)检测凋亡基因半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)、坏死基因受体结合丝氨酸苏氨酸激酶3(receptor-interacting serine threonine kinase 3,Ripk3)、铁死亡相关基因长链酯酰辅酶A合成酶4(acyl-coA synthetase long-chain family member 4,Acsl4)、前列腺素内过氧化物合酶2(prostaglandin-endoperoxide synthase 2,Ptgs2)和谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,Gpx4)的mRNA表达水平;Western blot检测4-羟基壬烯醛(4-hydroxynonenal,4-HNE)和GPX4的蛋白表达水平。结果:与Ator组相比,Ator+Z-VAD-FMK组和Ator+Fer-1组细胞存活率更高(P均<0.01)。透射电镜下Ator组细胞可见凋亡、铁死亡和自噬相关的形态学特征。与对照组相比,Ator组细胞Fe^(2+)相对荧光强度、MDA水平和ROS相对水平均升高,GSH含量下降;caspase-3、Acsl4、Ptgs2的mRNA及4-HNE的蛋白表达增加(P均<0.05),GPX4的mRNA和蛋白表达减少(P<0.05)。与Ator组相比,Ator+Fer-1组Fe^(2+)相对荧光强度、MDA水平和ROS相对水平均下降,GSH含量上升;Acsl4的mRNA表达减少,Gpx4的mRNA表达增加(P均<0.05);4-HNE的蛋白表达减少而GPX4的蛋白表达增加,但差异无统计学意义。结论:Ator可能通过抑制甲羟戊酸途径下调GPX4表达,诱导MIN6细胞发生铁死亡。 展开更多

关键词 阿托伐他汀 铁死亡 新发糖尿病 min6细胞

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灵芝提取物及其含药血清对胰岛β细胞的影响 被引量：3

11

作者 张强 杨宏杰 +1 位作者 何燕铭 张曾 《海南医学》 CAS 2018年第9期1188-1191,共4页

目的研究灵芝提取物灵芝蛋白多糖(FYGL)对胰岛β细胞是否有保护作用。方法 (1)配置不同浓度的FYGL(0.01 mg/m L、0.05 mg/m L、0.1 mg/m L),培养min6细胞株,接种于96孔版,细胞贴壁后加入上述不同剂量FYGL干预72 h,XTT法检测各组细胞活性... 目的研究灵芝提取物灵芝蛋白多糖(FYGL)对胰岛β细胞是否有保护作用。方法 (1)配置不同浓度的FYGL(0.01 mg/m L、0.05 mg/m L、0.1 mg/m L),培养min6细胞株,接种于96孔版,细胞贴壁后加入上述不同剂量FYGL干预72 h,XTT法检测各组细胞活性;(2)中药血清药理学方法制备大鼠含药血清。15只健康SPF级Wistar雄性大鼠,随机分成五组,分别为对照组(磷酸盐缓冲液)、西格列汀2 mg/kg组、FYGL低剂量组(75 mg/kg)、FYGL中剂量组(250 mg/kg)、FYGL高剂量组(450 mg/kg),每组3只,连续10 d灌胃给药后处死取血清,同组3只血清合并备后续实验用;同上方法培养min6细胞株,加入含有10%上述含药血清的DMEM培养液干预72 h,XTT法检测各组细胞活性;(3)同上方法培养min6细胞株,加入不同浓度(50μmol/L、100μmol/L、250μmol/L、500μmol/L)棕榈酸(PA)作用72 h,XTT法检测各组细胞活性;(4)同上方法培养min6细胞株,加入400μmol/L棕榈酸(PA)及10%上述含药血清的DMEM培养液共同干预72 h,XTT法检测各组细胞活性。结果 (1)与对照组[(100±5.62)%]相比,FYGL呈剂量依赖性促进min6细胞增殖[(131.14±12.53)%、(174.48±17.09)%、(259.28±9.51%)%],差异均有显著统计学意义(P<0.01);(2)与对照组[(100±10.14)%]相比,西格列汀及FYGL含药血清呈剂量依赖性促进min6细胞增殖[(119.27±5.27)%、(112.5±24.15)%、(125.65±1.52)%、(133.98±9.95)%],西格列汀及中高剂量FYGL组比较差异均有显著统计学意义(P<0.01);(3)与对照组[(100±9.26)%]相比,250μmol/L及500μmol/L PA可诱导min6细胞凋亡[(75.64±7.74)%、(53.63±9.61)%],差异均有显著统计学意义(P<0.01);(4)与对照组相比,400μmol/L PA可明显促进min6细胞凋亡[(100±5.76)%vs(56.89±1.86)%],差异有显著统计学意义(P<0.01);与PBS血清组相比,西格列汀含药血清组及FYGL含药血清组可抑制PA导致的min6细胞凋亡,且以FYGL 250 mg/kg作用最显著[(56.89±1.86%)vs(88.53±24.84)%],差异均有统计学意义(P<0.01)。� 展开更多

关键词 2型糖尿病 灵芝提取物FYGL min6细胞 细胞凋亡

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Wnt3a对小鼠beta细胞株增殖的影响 被引量：1

12

作者 张晶晶 刘伏友 《实用预防医学》 CAS 2009年第6期1735-1737,共3页

目的分析wnt3a蛋白对小鼠胰腺beta细胞株增殖的影响。方法培养MIN6细胞株,并用不同浓度的wnt3a蛋白或者相同浓度wnt3a蛋白在不同时间点刺激MIN6细胞,用Western blot的方法检测MIN6细胞内的信号分子改变。培养MIN6细胞株,并用wnt3a蛋白刺... 目的分析wnt3a蛋白对小鼠胰腺beta细胞株增殖的影响。方法培养MIN6细胞株,并用不同浓度的wnt3a蛋白或者相同浓度wnt3a蛋白在不同时间点刺激MIN6细胞,用Western blot的方法检测MIN6细胞内的信号分子改变。培养MIN6细胞株,并用wnt3a蛋白刺激,分别在第0、1、2、3、4 d分裂并数细胞个数,比较有wnt3a刺激组与无wnt3a刺激组细胞个数有无区别。结果不同浓度wnt3a刺激,对于MIN6细胞内beta-catenin以及Pitx2的表达有影响,当wnt3a浓度为1:8时,beta-catenin以及Pitx2的表达最高。用1:8的wnt3a蛋白浓度刺激MIN6细胞,分别设置0 min、10 min、30 min、1 h、3 h、6 h、12 h、24 h、48 h。结果显示6 h时,beta-catenin表达量最高。比较控制组与wnt3a刺激组细胞增殖的区别,wnt3a蛋白刺激组细胞增殖程度明显高于控制组。结论wnt3a可以促进胰腺beta细胞的增殖,表明wnt信号通路对于胰腺beta细胞有重要的调控作用。 展开更多

关键词 wnt3a蛋白 胰腺beta细胞株 min6细胞 细胞增殖

原文传递

生长分化因子11对高糖诱导MIN6细胞损伤的保护作用及机制研究 被引量：2

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作者 李欢 向光大 +5 位作者 梅稳 张佳佳 朱彪 刘敏 向林 董靖 《中华糖尿病杂志》 CAS CSCD 2017年第7期450-456,共7页

目的 探讨生长分化因子11（GDF-11）对高糖诱导的小鼠胰岛素瘤细胞系MIN6细胞凋亡的影响及可能机制.方法 在体外不同葡萄糖浓度下培养MIN6细胞,分别加入重组GDF-11蛋白（rGDF-11）、转化生长因子β（TGF-β）受体Ⅰ抑制剂SB431542及磷... 目的 探讨生长分化因子11（GDF-11）对高糖诱导的小鼠胰岛素瘤细胞系MIN6细胞凋亡的影响及可能机制.方法 在体外不同葡萄糖浓度下培养MIN6细胞,分别加入重组GDF-11蛋白（rGDF-11）、转化生长因子β（TGF-β）受体Ⅰ抑制剂SB431542及磷脂酰肌醇？3？激酶（PI3K）抑制剂LY294002等干预因素.根据实验目的及干预因素不同将细胞随机分组为：正常对照组、正常对照组＋GDF-11组、高糖组、高糖＋GDF-11组、高糖＋GDF-11＋LY492002组、高糖＋GDF-11＋SB431542组.采用膜联蛋白V？异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染法检测细胞凋亡率,Western blotting法检测细胞内B淋巴细胞瘤2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、活性半胱天冬酶3（Cleaved-caspase3）等凋亡相关蛋白以及蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）、叉头转录因子1（FoxO1）、磷酸化FoxO1（p-FoxO1）、核糖体S6蛋白激酶1（S6k1）、磷酸化S6k1（p-S6k1）水平.免疫荧光染色法检测MIN6细胞磷酸化Smad2（p-Smad2）、磷酸化Smad3（p-Smad3）表达水平.多组间比较选用单因素方差分析,组间多重比较用最小显著差异t检验.结果 高糖可明显降低Bcl-2/Bax比例,升高凋亡关键酶Cleaved-caspase3表达,细胞凋亡率增加（分别为0.39±0.03比3.82±0.26、0.83±0.04比0.17±0.02、26.1%±3.0%比7.9%±0.8%,t=23.12、-27.60、-10.11,均P〈0.01）.而重组GDF-11蛋白干预可上调Bcl-2/Bax比例,减少Cleaved-caspase3表达,抑制细胞凋亡（t=-44.110、19.530、6.535,P〈0.01）.SB431542或LY294002与MIN6细胞共培养后rGDF-11的抗凋亡作用均明显减弱（均P〈0.05）.高糖显著降低p-Smad2水平（荧光强度表示）,升高p-Smad3水平（t=4.830、5.760,均P〈0.01）.rGDF-11预处理可恢复细胞内p-Smad2水平,而SB431542明显抑制rGDF-11诱导的MIN6细胞p-Smad2蛋白表达的增加（t=5.55、3.04,均P〈0.05）.高糖可明显减少p-Akt、p-S6k1、p-FoxO1水平,而rGDF-11预处理后p-Akt、p-FoxO1水 展开更多

关键词 生长分化因子11 高糖 min6细胞 凋亡

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印楝素对min6细胞增殖及胰岛素分泌的影响 被引量：2

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作者 张玲 王得华 +1 位作者 马义 徐汉虹 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期25-29,共5页

【目的】研究印楝素对min6细胞增殖、葡萄糖摄取及胰岛素分泌的影响,并探讨其作用机制。【方法】不同浓度印楝素处理min6细胞48 h,检测细胞增殖量。在5.5和25.0 mmol·L^(-1)葡萄糖条件下,检测印楝素处理细胞的葡萄糖摄取水平,胰岛... 【目的】研究印楝素对min6细胞增殖、葡萄糖摄取及胰岛素分泌的影响,并探讨其作用机制。【方法】不同浓度印楝素处理min6细胞48 h,检测细胞增殖量。在5.5和25.0 mmol·L^(-1)葡萄糖条件下,检测印楝素处理细胞的葡萄糖摄取水平,胰岛素ELISA检测试剂盒检测细胞胰岛素的分泌。【结果】与对照组相比,在5.5和25.0mmol·L^(-1)葡萄糖条件下,印楝素均表现促进细胞增殖活性。印楝素处理下,与25.0 mmol·L^(-1)葡萄糖条件相比,5.5 mmol·L^(-1)葡萄糖表现出更显著地促进葡萄糖摄取和胰岛素分泌的作用。【结论】印楝素可能通过调控葡萄糖水平影响胰岛素的分泌。 展开更多

关键词 印楝素 min6细胞 细胞增殖 胰岛素分泌 ELISA检测

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高盐抑制Min6细胞胰岛素分泌功能及其机制研究 被引量：2

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作者 陆文杰 沈甫明 《中南药学》 CAS 2018年第5期629-632,共4页

目的研究高盐环境能否影响胰岛Min6细胞的分泌功能,并探讨其可能机制。方法以50mmol·L^(-1)浓度高盐刺激Min6细胞,用酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定Min6细胞胰岛素分泌功能,细胞活性检测试剂盒(cck8)检测Min6细胞增殖活性,Annexin ... 目的研究高盐环境能否影响胰岛Min6细胞的分泌功能,并探讨其可能机制。方法以50mmol·L^(-1)浓度高盐刺激Min6细胞,用酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定Min6细胞胰岛素分泌功能,细胞活性检测试剂盒(cck8)检测Min6细胞增殖活性,Annexin V FITC/PI流式细胞术检测Min6细胞凋亡百分比,Western blot检测Min6细胞内B细胞淋巴瘤-2(bcl-2)蛋白的表达。结果与同渗透压甘露醇(100 mmol·L^(-1))相比,高盐环境(50 mmol·L^(-1))能抑制Min6细胞胰岛素的分泌,降低Min6细胞增殖活性,诱导Min6细胞凋亡,抑制细胞内bcl-2蛋白的表达。结论高盐环境减少胰岛Min6细胞胰岛素分泌,作用机制可能与细胞增殖活性降低、凋亡增加有关。 展开更多

关键词 min6细胞 高盐 胰岛素分泌 增殖 凋亡

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盘龙参化学成分研究 被引量：1

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作者 于蕾 赵目聪 +5 位作者 董琳 黄兹宝 姬敏 曹明玉 刘辰鹏 张小坡 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2023年第13期4089-4095,共7页

目的研究盘龙参Spiranthessinensis根的化学成分。方法采用95%乙醇回流提取,石油醚萃取获得萃取物,运用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱和半制备高效液相色谱等方法进行分离制备,采用波谱学方法鉴定化合物结构。采用计算电子圆二色谱法(ECD)判... 目的研究盘龙参Spiranthessinensis根的化学成分。方法采用95%乙醇回流提取,石油醚萃取获得萃取物,运用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱和半制备高效液相色谱等方法进行分离制备,采用波谱学方法鉴定化合物结构。采用计算电子圆二色谱法(ECD)判定新化合物的绝对构型。体外考察化合物对棕榈酸诱导MIN6细胞损伤后的细胞活力影响。结果从盘龙参根乙醇提取物石油醚萃取部位中分离得到11个化合物,分别鉴定为(R)-2’-(2,4-二甲氧基-8-{4’-羟基-5’,6’-二甲基-四氢呋喃[7,8]}-9,10-二氢菲)(1)、红门兰酚(2)、spiranthesphenanthreneA(3)、2-methoxy-4,7-dihydroxy-6-isopentenyl-9,10-dihydrophenanthrene(4)、3,5-二羟基-4’,7-二甲氧基黄酮(5)、樱花素(6)、5-羟基-3,7,3’,4’-四甲氧基黄酮(7)、5-hydroxy-4’-[(2-isopentenyl)oxy]-3,7,3’-trimeoxyflavone(8)、hydroxydihydro-bovolide(9)、原儿茶醛(10)、β-谷甾醇(11)。活性测试结果显示化合物1(0.39~25μmol/L)或11(12.5~50μmol/L)与棕榈酸共同处理后的各组细胞增殖活力均明显增强。结论化合物1为新的二氢菲类化合物,命名为盘龙参醇A;化合物6~7、9~10为首次从绶草属中分离得到;化合物1和11能够拮抗棕榈酸对MIN6细胞的损伤作用,促进细胞的生长和增殖。 展开更多

关键词 盘龙参 二氢菲类 min6细胞活力 盘龙参醇A 樱花素 5-羟基-3 7 3’ 4’-四甲氧基黄酮

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津力达颗粒对高糖作用下MIN6细胞的保护作用研究 被引量：1

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作者 陈伟 王之旸 +2 位作者 付友娟 刘子微 乐岭 《华南国防医学杂志》 CAS 2022年第8期594-598,共5页

目的 探讨津力达颗粒对高糖作用下MIN6细胞功能的影响。方法 根据不同培养条件将MIN6细胞分为空白组、100 mg/L津力达组、200 mg/L津力达组、400 mg/L津力达组,分别在磷酸盐缓冲溶液(phosphate buffered saline, PBS)、含100 mg/L津力... 目的 探讨津力达颗粒对高糖作用下MIN6细胞功能的影响。方法 根据不同培养条件将MIN6细胞分为空白组、100 mg/L津力达组、200 mg/L津力达组、400 mg/L津力达组,分别在磷酸盐缓冲溶液(phosphate buffered saline, PBS)、含100 mg/L津力达溶液,含200 mg/L津力达溶液,含400 mg/L津力达溶液中培养,培养48 h后,再分别加入浓度为2.8、16.7 mmol/L的葡萄糖KRBH(Krebs-Ringer bicarbonate HEPES)缓冲液中孵育0.5 h。根据不同培养条件将MIN6细胞分为NG组(5.5 mmol/L葡萄糖)、NG+津力达组(5.5 mmol/L葡萄糖+200 mg/L津力达)、HG组(25 mmol/L葡萄糖)、HG+津力达组(25 mmol/L葡萄糖+200 mg/L津力达),培养48 h。体外建立小鼠胰岛微血管内皮细胞与MIN6共培养模型,按正糖(N)、高糖(H)不同干预和加用津力达(J)分为N1+N6组、N1+J+N6组、N1+H6组、N1+J+H6组、H1+N6组、H1+J+N6组、H1+H6组、H1+J+H6组。收集各组细胞及上清测定胰岛素(insulin, INS)水平。结果 16.7 mmol/L葡萄糖刺激时,空白组、100 mg/L津力达组和200 mg/L津力达组细胞内及上清中INS水平随津力达浓度升高逐渐增高(P均<0.05)。相同浓度津力达条件下,16.7 mmol/L较2.8 mmol/L葡萄糖刺激时各组细胞内及上清INS水平均上升(P均<0.05)。HG组较NG组细胞及上清INS水平降低(P均<0.001),HG+津力达组较HG组INS水平升高(P均<0.001)。N1+H6、H1+N6、H1+H6组较N1+N6组的细胞内和上清INS水平均降低(P均<0.05)。高糖加入津力达的各共培养组细胞内及上清INS水平均较对应未加入组升高(P均<0.001)。结论 高糖刺激时,津力达在一定范围内呈浓度依赖性促进β细胞合成和分泌INS,而低糖时无此作用。持续高糖环境下津力达既可直接促进β细胞INS的合成和分泌,还能通过调节胰岛微血管内皮细胞改善β细胞功能。 展开更多

关键词 津力达颗粒 min6细胞 胰岛Β细胞 胰岛微血管内皮细胞 胰岛素

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小干扰质粒干扰肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源物A对小鼠胰岛β细胞增殖及胰岛素基因表达的影响 被引量：1

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作者 杨梅 陈诺琦 +1 位作者 郑舒静 陈锦凤 《中国糖尿病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期552-557,共6页

目的探讨肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源物A(MafA)对胰岛β细胞增殖及胰岛素基因表达的影响。方法采用RT-PCR和Western blot分别测Ma。fA mRNA和蛋白的表达,筛选最佳小干扰质粒(siRNA),分为转染对照组(Cy3组)、阴性对照组(Scramble组)、阳性... 目的探讨肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源物A(MafA)对胰岛β细胞增殖及胰岛素基因表达的影响。方法采用RT-PCR和Western blot分别测Ma。fA mRNA和蛋白的表达,筛选最佳小干扰质粒(siRNA),分为转染对照组(Cy3组)、阴性对照组(Scramble组)、阳性对照组(siβ-actin组)及实验组(即siMafA-1、siMafA-2和siMafA-3组)。按不同葡萄糖浓度分为5.6 mmol/L、10 mmol/L、25 mmol/L。根据不同葡萄糖浓度是否加入siRNA分为未加siRNA的对照组:A_0组5.6 mmol/L、B_0组10 mmol/L、C_0组25 mmol/L;加入siRNA的实验组:A_1组5.6 mmol/L、B_1组10 mmol/L、C_1组25 mmol/L。测MafA基因沉默后MIN6细胞增殖、胰岛素(Insulin)-1和Insulin-2 mRNA表达、MafA蛋白表达及上清液胰岛素浓度的变化。结果siMafA-2组干扰效果最好。C_1组MafA蛋白表达较C_0组下降(P<0.05);MIN6细胞增殖、Insulin-2 mRNA表达和上清液胰岛素浓度均降低(P<0.05)。A_1组与A_0组比较,MafA蛋白表达比较,差异无统计学意义(P>0.05);MIN6细胞增殖、Insulin-2 mRNA表达和上清液胰岛素浓度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。不同糖浓度各亚组与对照组Insulin-1 mRNA表达比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论siRNA-2组是理想的siRNA。MafA下调可抑制小鼠胰岛β细胞增殖。MafA下调可抑制小鼠Insulin2 mRNA表达和胰岛素分泌。 展开更多

关键词 min6细胞 肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源物A 胰岛素基因

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雷帕霉素衍生物对胰岛的毒性研究 被引量：1

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作者 张娟 付嘉钊 +4 位作者 王路敏 李艳萍 江红 夏俊杰 齐忠权 《实用器官移植电子杂志》 2018年第2期103-107,共5页

目的探讨雷帕霉素及其衍生物依维莫司、地磷莫司、佐他莫司对胰岛的毒性作用。方法采用小鼠胰岛素瘤细胞(MIN6)作为体外研究胰岛细胞的对象,分别在含有依维莫司、地磷莫司、佐他莫司的培养基中孵育MIN6细胞48小时,通过Brdu检测细胞增殖... 目的探讨雷帕霉素及其衍生物依维莫司、地磷莫司、佐他莫司对胰岛的毒性作用。方法采用小鼠胰岛素瘤细胞(MIN6)作为体外研究胰岛细胞的对象,分别在含有依维莫司、地磷莫司、佐他莫司的培养基中孵育MIN6细胞48小时,通过Brdu检测细胞增殖、CCK8检测细胞活力、PI检测细胞周期、流式细胞术检测细胞凋亡以及ELISA检测细胞分泌胰岛素功能,观察3种雷帕霉素衍生物对MIN6细胞的影响。结果我们发现3种雷帕霉素衍生物均会对MIN6细胞的增殖和活力产生抑制作用。在细胞周期和凋亡实验中,与阴性对照组比较,3种衍生物对MIN6细胞的影响呈现抑制G1期向S期转变的趋势和促进细胞凋亡的趋势,但差异没有统计学意义。另外,3种衍生物与雷帕霉素一样,均可减少MIN6细胞分泌胰岛素,差异具有统计学意义。结论雷帕霉素及其衍生物依维莫司、地磷莫司、佐他莫司均对胰岛产生一定毒性。 展开更多

关键词 雷帕霉素 依维莫司 地磷莫司 佐他莫司 min6细胞 毒性

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罗格列酮对胰岛MIN6细胞趋化因子配体2表达的影响 被引量：1

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作者 姜宏卫 崔巧丽 +1 位作者 王洁 马瑜瑾 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第13期1539-1542,共4页

目的研究罗格列酮对胰岛MIN6细胞趋化因子配体2(CCL2)表达的影响与潜在机制。方法细胞分为5组:正常对照组,正常MIN6细胞不做任何处理;模型组,用LPS 10 mg·L^(-1)刺激MIN6细胞12 h;实验组,用罗格列酮20μmol·L^(-1)预处理12 h... 目的研究罗格列酮对胰岛MIN6细胞趋化因子配体2(CCL2)表达的影响与潜在机制。方法细胞分为5组:正常对照组,正常MIN6细胞不做任何处理;模型组,用LPS 10 mg·L^(-1)刺激MIN6细胞12 h;实验组,用罗格列酮20μmol·L^(-1)预处理12 h后,加LPS 10 mg·L^(-1)刺激MIN6细胞12 h;阴性对照组(siRNA-NC),MIN6细胞预先转染siRNA-NC,再用罗格列酮20μmol·L^(-1)预处理12 h后,加LPS 10 mg·L^(-1)刺激细胞12 h;PPAR-γsiRNA组,MIN6细胞预先转染PPAR-γsiRNA,再用罗格列酮20μmol·L^(-1)预处理12 h后,加LPS10 mg·L^(-1)刺激细胞12 h。以逆转录PCR法(RT-PCR)检测CCL2、胰岛素mRNA表达,以免疫印迹法检测CCL2、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)、磷酸化κ基因结合核因子(p-NF-κB)蛋白表达。结果经LPS刺激MIN6细胞后,正常对照组、模型组与实验组的CCL2 mRNA表达量分别是2.27±0.15,8.83±0.55,4.00±0.40,胰岛素mRNA表达量分别是2.47±0.12,0.63±0.03,1.63±0.24,正常对照组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.001);实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.001)。与siRNA-NC组相比较,PPAR-γsiRNA组PPAR-γ蛋白水平下降,而CCL2、p-ERK、p-NF-κB的蛋白水平增加。说明敲低PPAR-γ可促进p-ERK、p-NF-κB活性,增加MIN6细胞分泌CCL2。结论罗格列酮可抑制LPS诱导胰岛MIN6细胞趋化因子CCL2表达,其可能与PPAR-γ信号通路有关。 展开更多

关键词 罗格列酮 min6细胞 趋化因子配体2 过氧化物酶体增殖物激活受体Γ

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