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水蛭抗凝血活性成分的研究 被引量:46
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作者 钟山 杨得坡 崔征 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第23期2781-2784,共4页
目的:研究水蛭的抗凝血成分。方法:以血浆复钙时间为指标,应用Sephadex DEAE A-50阴离子交换树脂色谱、Sephadex G-25和Sephadex LH-20凝胶过滤色谱及反相高压液相色谱技术分离纯化。结果:得到3个抗凝血活性多肽,其中化合物1,2在自然条... 目的:研究水蛭的抗凝血成分。方法:以血浆复钙时间为指标,应用Sephadex DEAE A-50阴离子交换树脂色谱、Sephadex G-25和Sephadex LH-20凝胶过滤色谱及反相高压液相色谱技术分离纯化。结果:得到3个抗凝血活性多肽,其中化合物1,2在自然条件下互相转化,它们的相对分子质量分别为7 100和5 531;采用HPLC及SDS-PAGE鉴定了化合物3的纯度,采用MALDI-TOF-MS法测定出其相对分子质量为8 608,并测定了其氨基酸组成。结论:推测化合物3为首次分离得到的抗凝血多肽,命名为蚂蟥多肽(whitmanin)。 展开更多
关键词 蚂蟥 maldi-tof-ms 蚂蟥多肽
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基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱在沙门菌检测和鉴定分型中的应用研究 被引量:44
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作者 王晔茹 崔生辉 李凤琴 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期685-689,共5页
目的利用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对从门诊腹泻病人粪便分离的88株沙门菌进行检测分型。方法利用优化的MALDI-TOF-MS实验条件对沙门菌进行检测和鉴定分型,并与血清学分型、耐药分型和PFGE分型结果进行比较。结... 目的利用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对从门诊腹泻病人粪便分离的88株沙门菌进行检测分型。方法利用优化的MALDI-TOF-MS实验条件对沙门菌进行检测和鉴定分型,并与血清学分型、耐药分型和PFGE分型结果进行比较。结果在反映亲缘关系的差异水平值为100时,88株沙门菌被分为15个MALDI-TOF-MS型别。MALDI-TOF-MS分型结合耐药表型分型,可以将88株沙门菌分成44个亚型;MALDI-TOF-MS分型结合血清学分型,可以将88株菌分成46个亚型。MALDI-TOF-MS分型结合PFGE分型,可以将88株菌分成64个亚型。说明MALDI-TOF-MS在沙门菌分型中具有很好的分型能力。结论MALDI-TOF-MS方法在检测与鉴定食源性病原菌中具有稳定、重复性好的特点,可成为食源性致病细菌分析鉴定的重要工具。 展开更多
关键词 基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱 食源性致病菌 检测 鉴定
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考马斯亮蓝染色双向电泳凝胶胶内酶切方法的改进 被引量:27
3
作者 廖翔 应天翼 +4 位作者 王恒樑 王杰 魏开华 黄留玉 黄培堂 《生物技术通讯》 CAS 2003年第6期509-511,共3页
介绍一种简便高效的从考马斯亮蓝染色的双向电泳凝胶切取蛋白质点,通过胶内酶切制备基质辅助激光解吸 电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)样品的方法。该方法操作简便,样品的质谱鉴定结果经网上数据库检索检出率 可高达80%以上,适于我国... 介绍一种简便高效的从考马斯亮蓝染色的双向电泳凝胶切取蛋白质点,通过胶内酶切制备基质辅助激光解吸 电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)样品的方法。该方法操作简便,样品的质谱鉴定结果经网上数据库检索检出率 可高达80%以上,适于我国目前小规模蛋白质组学研究的国情,便于推广应用。 展开更多
关键词 双向电泳 考马斯亮蓝 胶内酶切 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱
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小麦质核互作型雄性不育系及其保持系花药差异蛋白质组学分析 被引量:28
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作者 陈蕊红 叶景秀 +5 位作者 张改生 王俊生 牛娜 马守才 赵继新 朱建楚 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第4期431-440,共10页
为了能从蛋白质水平揭示小麦细胞质雄性不育的分子遗传机制,采用IEF/SDS-PAGE双向凝胶电泳技术,对小麦质核互作型雄性不育系(S)-1376A及其保持系(A)-1376B在花药发育的单核期、二核期蛋白质进行了差异蛋白质组学研究,经考马斯亮蓝染色,... 为了能从蛋白质水平揭示小麦细胞质雄性不育的分子遗传机制,采用IEF/SDS-PAGE双向凝胶电泳技术,对小麦质核互作型雄性不育系(S)-1376A及其保持系(A)-1376B在花药发育的单核期、二核期蛋白质进行了差异蛋白质组学研究,经考马斯亮蓝染色,得到了重复性较好的双向电泳图谱.PDQuest软件在分子质量9.0~100.0ku、等电点4~7线性范围内,可识别约610个蛋白质点,对28个差异表达的蛋白质点采用基质辅助激光解吸分离飞行时间质谱进行肽指纹图谱分析,并利用Mascot软件在NCBInr数据库搜索,鉴定出12个差异表达蛋白,其中5个差异表达蛋白可能与雄性不育有关,分别是泛素结合酶E2、甘氨酸富集蛋白、抗坏血酸过氧化物酶、假定半胱氨酸蛋白酶抑制剂及1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶小链克隆512,它们参与了物质能量代谢、细胞程序化死亡及花发育调控等过程,推测不育系(S)-1376A雄性不育性可能与这些生理生化代谢有关.研究结果为揭示雄性不育机理提供了理论依据. 展开更多
关键词 小麦 质核互作型雄性不育 差异蛋白质组学 双向凝胶电泳 基质辅助激光解吸飞行时间质谱
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生物质谱技术在糖蛋白结构分析中的应用 被引量:6
5
作者 蔡耘 钱小红 《生物技术通讯》 CAS 2002年第5期404-407,共4页
生物质谱包括基质辅助激光解吸附飞行时间质谱及电喷雾质谱被广泛应用于生物样品如多肽、蛋白质及核酸的分析,由于这种具有软电离方式的质谱具有极高的灵敏度及准确度,目前也被成功地用于糖蛋白的结构分析,与普通的化学方法相比,质谱法... 生物质谱包括基质辅助激光解吸附飞行时间质谱及电喷雾质谱被广泛应用于生物样品如多肽、蛋白质及核酸的分析,由于这种具有软电离方式的质谱具有极高的灵敏度及准确度,目前也被成功地用于糖蛋白的结构分析,与普通的化学方法相比,质谱法快速、简单,结合网上数据库检索、凝集素亲和提取、二维凝胶电泳以及靶上直接酶切等新方法,可以提供糖蛋白的一级结构乃至高级结构的信息。 展开更多
关键词 生物质谱技术 糖蛋白 结构分析 应用 基质辅助激光解吸附飞行时间质谱 电喷雾质谱
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复合纤维素膜固定化胰蛋白酶反应器及其应用于蛋白质酶解 被引量:17
6
作者 姜泓海 邹汉法 +2 位作者 汪海林 倪坚毅 张强 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2000年第5期702-706,共5页
合成了甲基丙烯酸缩水甘油酯-纤维素复合膜,并以此膜为基质共价键合固定化胰蛋白酶,以N-苯甲酰-L-精氨酰乙酯(BAEE)为底物,应用高效液相色谱系统测定了酶固定化膜柱的催化反应特性.研究结果表明:温度、pH值、离子强... 合成了甲基丙烯酸缩水甘油酯-纤维素复合膜,并以此膜为基质共价键合固定化胰蛋白酶,以N-苯甲酰-L-精氨酰乙酯(BAEE)为底物,应用高效液相色谱系统测定了酶固定化膜柱的催化反应特性.研究结果表明:温度、pH值、离子强度、有机溶剂及蛋白变性剂等都对固定化酶的活力有一定的影响.在最适条件下,固定化胰蛋白酶的活力为 17 800 U/g干膜,蛋白载量为 3. 6 mg/g(≈0. 15 μmol/g)干膜,活性回收率达到 52%.固定化酶表现出较高的使用和储藏稳定性,在40℃下,水解BAEE底物24 h活力无显著变化.固定化酶膜柱在4 ℃冷藏保存 100 d仍保存 90%以上的水解活力.固定化酶反应器被应用于蛋白质酶解的肽谱实验. 展开更多
关键词 复合纤维素膜 固定化胰蛋白酶反应器 蛋白质
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多糖化学结构解析研究进展 被引量:26
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作者 刘贺 张红运 +5 位作者 杨立娜 王胜男 李君 朱力杰 朱丹实 何余堂 《渤海大学学报(自然科学版)》 CAS 2018年第2期97-106,共10页
多糖作为自然界中含量丰富的生物大分子,其不同的化学结构会影响其生物学活性.由于多糖结构复杂使其解析起来十分繁琐和困难,多糖的深入研究受到限制.因此,文中介绍了天然产物多糖初级结构和高级结构的研究方法,同时对毛细管电泳-质谱... 多糖作为自然界中含量丰富的生物大分子,其不同的化学结构会影响其生物学活性.由于多糖结构复杂使其解析起来十分繁琐和困难,多糖的深入研究受到限制.因此,文中介绍了天然产物多糖初级结构和高级结构的研究方法,同时对毛细管电泳-质谱联用技术(CEMS)、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱联用技术(MALDI-TOF-MS)、二维核磁共振技术(~1H-~1H COSY、HSQC、HMBC)、分子模拟技术等最新检测手段在多糖化学结构解析中的应用进行综述.这些技术可以方便快捷的提供多糖组成、链接顺序等一级结构信息,同时也可以表征多糖的空间构象,成为解析多糖结构、探究多糖结构-功能关系不可或缺的工具. 展开更多
关键词 多糖 结构 毛细管电泳-质谱 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱联用 二维核磁共振 分子模拟技术
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沙门氏菌MALDI-TOF-MS检测方法的建立 被引量:26
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作者 战晓微 傅俊范 +2 位作者 郑秋月 王长文 曹际娟 《现代食品科技》 EI CAS 2011年第5期595-597,514,共4页
建立利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对食品中沙门氏菌的快速检测方法。从食品中分离出可疑沙门氏菌,利用不同培养基分离纯化,通过MALDI-TOF-MS法进行鉴定,并与其他检测方法比较。MALDI-TOF-MS对野生沙门氏菌株的... 建立利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对食品中沙门氏菌的快速检测方法。从食品中分离出可疑沙门氏菌,利用不同培养基分离纯化,通过MALDI-TOF-MS法进行鉴定,并与其他检测方法比较。MALDI-TOF-MS对野生沙门氏菌株的鉴定结果与传统鉴定结果一致,说明本试验建立的方法对于沙门氏菌的鉴定准确性较高。MALDI-TOF-MS方法检测食品中沙门氏菌快速准确且操作简单,可发展成为食品检验沙门氏菌的重要辅助工具。 展开更多
关键词 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪 沙门氏菌 鉴定
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大豆质核互作雄性不育系NJCMS2A及其保持系的花药蛋白质组比较研究 被引量:24
9
作者 曾维英 杨守萍 +1 位作者 喻德跃 盖钧镒 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1637-1643,共7页
大豆质核互作雄性不育系NJCMS2A是以栽培大豆组合(N8855×N1628)F2不育株为母本,以N1628为父本,通过连续回交选育而成的,N1628(或NJCMS2B)为其同型保持系。对NJCMS2A和NJCMS2B的二胞花粉期花药进行蛋白质组比较分析,获得重复性好的... 大豆质核互作雄性不育系NJCMS2A是以栽培大豆组合(N8855×N1628)F2不育株为母本,以N1628为父本,通过连续回交选育而成的,N1628(或NJCMS2B)为其同型保持系。对NJCMS2A和NJCMS2B的二胞花粉期花药进行蛋白质组比较分析,获得重复性好的双向电泳图谱,在分子量18.4~116.0kD、等电点4~7线性范围内,检测到约217个蛋白点,其中差异表达蛋白点25个,包括在NJCMS2A中出现而在NJCMS2B中缺失的蛋白点13个,在NJCMS2A中缺失而在NJCMS2B中出现的蛋白点10个,另有2个蛋白点的表达量在NJCMS2B中比在NJCMS2A中明显增强。利用基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术对差异表达蛋白进行分析,获得肽质量指纹图谱,用Mascot软件搜索NCBInr数据库,鉴定出14个差异表达蛋白,其中10个在NJCMS2A中出现而在NJCMS2B中缺失和4个在NJCMS2A中缺失而在NJCMS2B中出现。对热激蛋白22kD、半胱氨酸蛋白酶、V型H+-ATP酶A亚基、MADS盒蛋白和淀粉分支酶等主要差异蛋白进行功能分析,推测不育系NJCMS2A雄性不育性可能与能量代谢紊乱、细胞程序化死亡(PCD)、淀粉合成受抑制和花器官发育调节基因作用失控等有关。 展开更多
关键词 大豆 质核互作雄性不育 花药 蛋白质组 双向凝胶电泳 基质辅助激光解吸飞行时间质谱
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MALDI-TOF质谱技术分析与鉴定病原细菌研究 被引量:20
10
作者 其布勒哈斯 田世民 +3 位作者 邹明强 贺银凤 陈艳 赵贵明 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期416-426,共11页
基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术分析供试细菌并获得其蛋白质图谱,确定了与质谱分析有关的最佳培养条件和样品前处理方法,建立了应用MALDI-TOF-MS鉴定细菌的方法。通过对供试的不同细菌属、种和亚种的12株植物... 基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术分析供试细菌并获得其蛋白质图谱,确定了与质谱分析有关的最佳培养条件和样品前处理方法,建立了应用MALDI-TOF-MS鉴定细菌的方法。通过对供试的不同细菌属、种和亚种的12株植物病原细菌全细胞分析后的质谱图结果表明,根据特异性或不同的质量离子峰,MALDI-TOF-MS能进行在细菌属、种、亚种和菌株水平上的区分和鉴定。该方法准确、灵敏度高,且分析过程简单快速,具有广泛的开发和应用意义。 展开更多
关键词 malditof ms 细菌 质量指纹图谱 鉴定
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大豆质核互作雄性不育系NJCMS1A及其保持系的花药差异蛋白质组学研究 被引量:22
11
作者 曾维英 杨守萍 +1 位作者 盖钧镒 喻德跃 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期2679-2687,共9页
【目的】对大豆质核互作雄性不育系NJCMS1A及其同型保持系NJCMS1B的二胞花粉期花药进行差异蛋白质组学研究,探讨大豆质核互作雄性不育的分子机制。【方法】采用双向凝胶电泳技术对其蛋白质进行分离,凝胶用考马斯亮蓝染色,使用PDQuest软... 【目的】对大豆质核互作雄性不育系NJCMS1A及其同型保持系NJCMS1B的二胞花粉期花药进行差异蛋白质组学研究,探讨大豆质核互作雄性不育的分子机制。【方法】采用双向凝胶电泳技术对其蛋白质进行分离,凝胶用考马斯亮蓝染色,使用PDQuest软件分析蛋白质图谱,利用基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术对差异表达蛋白进行质谱分析,获得肽质量指纹图谱,用Profound和Mascot软件搜索NCBInr数据库,初步鉴定差异表达蛋白并分析其功能。【结果】在分子量18.4~116.0kD、等电点4~7线性范围内,检测到约212个蛋白点,差异表达蛋白点24个。其中10个在NJCMS1A中出现而在NJCMS1B中缺失,12个在NJCMS1A中缺失而在NJCMS1B中出现,2个表达量在NJCMS1B中比在NJCMS1A中明显增强。鉴定出11个差异表达蛋白,其中7个在NJCMS1A中出现而在NJCMS1B中缺失,4个在NJCMS1A中缺失而在NJCMS1B中出现。【结论】对主要差异表达蛋白如ACC氧化酶、半胱氨酸蛋白酶、V型H+-ATP酶A亚基、MADS盒蛋白、淀粉分枝酶和UDP-葡萄糖焦磷酸化酶等进行功能分析,推测不育系NJCMS1A雄性不育性可能与能量代谢紊乱、细胞程序化死亡(PCD)、乙烯过度合成、淀粉合成受抑制和花器官发育调节基因作用失控等有关。 展开更多
关键词 大豆 质核互作雄性不育 差异蛋白质组学 双向凝胶电泳 基质辅助激光解吸飞行时间质谱
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沙门氏菌MALDI-TOF-MS蛋白质指纹图谱分析方法的研究 被引量:22
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作者 陈秀金 尹红红 +1 位作者 匡华 胥传来 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1189-1197,共9页
以沙门氏菌标准菌株(Salmonella enterica DSM 17058 T)为研究对象,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对其进行蛋白质指纹图谱分析,进而得到正确的鉴定结果。为了获得重现性良好的质谱图,对沙门氏菌的最佳培养基、最适... 以沙门氏菌标准菌株(Salmonella enterica DSM 17058 T)为研究对象,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对其进行蛋白质指纹图谱分析,进而得到正确的鉴定结果。为了获得重现性良好的质谱图,对沙门氏菌的最佳培养基、最适培养时间以及样品前处理方法进行了优化,从而确立沙门氏菌MALDI-TOF-MS蛋白质指纹图谱标准分析方法。结果表明:乙醇/甲酸处理法所得图谱中的特征峰多,包含更多的蛋白标志物,所得图谱基线平滑,噪音少,信噪比高,是最佳的样品处理方法。以营养丰富的哥伦比亚琼脂为培养基,在24 h时即可达到强峰值信号,质谱图重现性良好,鉴定结果准确,并且相比于其它3种培养基所需培养时间短。 展开更多
关键词 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 沙门氏菌 鉴定 影响因素
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小麦BNS雄性不育系及其转换系花药差异蛋白鉴定与分析 被引量:19
13
作者 李友勇 茹振钢 +1 位作者 苏晴 付庆云 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1540-1550,共11页
BNS是一个新发现的温敏核型小麦雄性不育系,它有良好的不育性和转换性,被认为在小麦杂种优势利用上有重要价值。为探讨BNS的不育机制,以不育系及其转换系的单核早期、单核晚期到二核期花药为材料,用2-DE和MALDI-TOF-MS方法分离鉴定2个... BNS是一个新发现的温敏核型小麦雄性不育系,它有良好的不育性和转换性,被认为在小麦杂种优势利用上有重要价值。为探讨BNS的不育机制,以不育系及其转换系的单核早期、单核晚期到二核期花药为材料,用2-DE和MALDI-TOF-MS方法分离鉴定2个系的差异蛋白。结果发现,在转换系中,ATP合酶α和β亚基、胞质苹果酸脱氢酶、线粒体醛脱氢酶亚基、Rubisco亚基等呼吸、光合能量代谢蛋白表达丰富,但在不育系中这些蛋白缺失或下调。在不育系中还分离出山梨醇脱氢酶、组蛋白H2B.2、Harpin诱导子1、延伸因子TU等非小麦正常代谢蛋白。根据这些差异蛋白的功能,推测ATP合酶α、β亚基蛋白最可能是BNS不育的源头蛋白,它的表达可能受其上游的温度感应子调控。BNS的温度感应子隐性突变后转录启动温度阈值上调,在较低温下,α、β亚基基因不表达或表达量小,导致ATP合酶数量减少,继而影响ATP合成。ATP数量减少,使小孢子ATP供应短缺,进一步影响到小孢子的发育,使代谢异常,花粉败育。 展开更多
关键词 BNS小麦雄性不育 花药差异蛋白 双向凝胶电泳 maldi-tofms ATP合酶
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水蛭不同工艺提取物抗凝与纤溶活性比较及酶解物组成分析 被引量:19
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作者 李濯冰 赵韶华 +2 位作者 王玉蓉 王智勇 张玉杰 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期42-45,共4页
目的:比较水蛭不同提取工艺的抗凝溶栓作用;初步确定水蛭酶解产物的化学成分组成。方法:通过活化部分凝血活酶时间(APTT)试验及纤维蛋白平板试验,比较水蛭胃蛋白酶酶解、胰蛋白酶酶解、仿生酶解、醇提、水煎提取物的体外抗凝与纤溶活性... 目的:比较水蛭不同提取工艺的抗凝溶栓作用;初步确定水蛭酶解产物的化学成分组成。方法:通过活化部分凝血活酶时间(APTT)试验及纤维蛋白平板试验,比较水蛭胃蛋白酶酶解、胰蛋白酶酶解、仿生酶解、醇提、水煎提取物的体外抗凝与纤溶活性差异。采用Sephadex G-100凝胶柱色谱法对优选提取物进行进一步分离纯化,并采用MALDI-TOF-质谱法对其组成进行分析。结果:与生理盐水组比较,在相同的剂量下,水蛭胃蛋白酶酶解物可明显延长大鼠APTT,并具有较强的纤溶作用,其余几种提取物的作用不明显。胃蛋白酶酶解物经Sephadex G-100凝胶柱色谱分离纯化的活性部位经MALDI-TOF-质谱法检测为分子量在700~3 200之间的一组寡肽。结论:胃蛋白酶酶解是水蛭较为理想的提取方法,其有效部位的组成为寡肽。 展开更多
关键词 水蛭 酶解 抗凝 纤溶 凝胶柱色谱 malditofms 寡肽
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中药饮片耐热菌微生物类群的分析 被引量:19
15
作者 甘永琦 农浚 +3 位作者 樊兰艳 零文超 朱斌 张涛 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期2274-2281,共8页
探索污染中药饮片的耐热菌微生物组成和多样性特征。以9个品种中药饮片为研究对象,采用MALDI-TOF-MS蛋白质指纹图谱技术和Illumina Miseq的16S rRNA宏基因组高通量测序技术对样品的耐热菌微生物群落进行分析。茎类饮片(鸡血藤、通草、... 探索污染中药饮片的耐热菌微生物组成和多样性特征。以9个品种中药饮片为研究对象,采用MALDI-TOF-MS蛋白质指纹图谱技术和Illumina Miseq的16S rRNA宏基因组高通量测序技术对样品的耐热菌微生物群落进行分析。茎类饮片(鸡血藤、通草、小通草)的污染菌检出率最高,种类最多;而果实类饮片(南五味子)检出率最低,污染菌种类最少;根类饮片中,广山药和熟地黄的污染菌检出率和种类偏低。耐热菌微生物类群以芽胞杆菌科和类芽孢杆菌科为主;其中检出率最高的菌属为芽孢杆菌属,还包括短小芽孢杆菌属、类芽孢杆菌属、土壤芽胞杆菌属,高通量测序注释的其他菌属为肠杆菌属、短波单胞菌属、明串珠菌属、甲基杆菌属、脱氯单胞菌、泛菌属、克雷伯菌属和欧文氏菌属等。中药饮片的耐热菌微生物群落潜在危害因子,应完善其微生物限度标准,严格控制产品中的致病菌,加强中药饮片在生产和流通环节的监督管理。 展开更多
关键词 中药饮片 耐热菌微生物多样性 maldi-tof-ms ILLUMINA Miseq 高通量测序 16S rRNA 芽孢杆菌属 蜡样芽孢杆菌
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Bacterial flora concurrent with Helicobacter pylori in the stomach of patients with upper gastrointestinal diseases 被引量:20
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作者 Yuan Hu Li-Hua He Di Xiao Guo-Dong Liu Yi-Xin Gu Xiao-Xia Tao Jian-Zhong Zhang 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2012年第11期1257-1261,共5页
AIM: To investigate the non-He/icobacterpy/ori (H. pylori) bacterial flora concurrent with H. pylori infection.METHODS: A total of 103 gastric biopsy specimens from H. pylori positive patients were selected for ba... AIM: To investigate the non-He/icobacterpy/ori (H. pylori) bacterial flora concurrent with H. pylori infection.METHODS: A total of 103 gastric biopsy specimens from H. pylori positive patients were selected for bacterial culture. All the non-H, pylori bacterial isolates were identified by matrix assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS).RESULTS: A total of 201 non-H, pyiori bacterial isolates were cultivated from 67 (65.0%) of the 103 gastric samples, including 153 isolates identified successfully at species level and 48 at genus level by MALDI-TOF MS. The dominant species were Streptococcus, Neisseria, Rothla and Staphylococcus, which differed fromthe predominantly acid resistant species reported previously in healthy volunteers. The prevalence of non-H. pylori bacteria was higher in non-ulcer dyspepsia group than in gastric ulcer group (100% vs 42.9%, P 〈 0.001). Six bacterial species with urease activity (Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus warneri, Staphylococcus capitis, Staphylococcus aureus, Brevibacteriurn spp. and Klebsiella pneumoniae) were also isolated.CONCLUSION: There is a high prevalence of the non-H, pylori bacteria concurrent with H. pylori infection, and the non-H, pylori bacteria may also play important as-yet-undiscovered roles in the pathogenesis of stomach disorders. 展开更多
关键词 Non-Helicobacter pylori' Bacterial flora Gastrointestinal diseases Matrix-assisted laser desorp-tion ionization time-of-flight mass spectrometry
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甘草酸人工抗原的合成鉴定及免疫原性分析 被引量:19
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作者 蔡碧双 邵幼岩 +1 位作者 林纪昀 徐金森 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 2008年第1期19-22,共4页
目的制备中药甘草的活性成分甘草酸(GA)的人工抗原及抗血清,为制备GA的单克隆抗体、并建立快速检测GA的酶联免疫吸附测定(ELISA)提供技术基础。方法将GA与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)偶联起来制得完全抗原后,经基质辅助激光解吸飞行时间... 目的制备中药甘草的活性成分甘草酸(GA)的人工抗原及抗血清,为制备GA的单克隆抗体、并建立快速检测GA的酶联免疫吸附测定(ELISA)提供技术基础。方法将GA与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)偶联起来制得完全抗原后,经基质辅助激光解吸飞行时间质谱鉴定其相对分子质量,用此抗原免疫BALB/c小鼠,制备抗血清,并通过间接ELISA法和竞争ELISA法检测其抗体效价和特异性。结果合成的人工抗原GA-BSA中GA与BSA的结合比约为7∶1;免疫小鼠得到特异针对GA的多抗血清,GA抗体的效价为1∶8000。结论成功地合成了GA的人工抗原,且该抗原有较好的免疫原性,可应用于建立GA的免疫分析方法。 展开更多
关键词 甘草酸 基质辅助激光解吸飞行时间质谱 酶联免疫吸附测定
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杀雄剂SQ-1诱导小麦雄性不育花粉粒差异蛋白质组学研究 被引量:18
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作者 叶景秀 张改生 +6 位作者 王书平 陈蕊红 王俊生 牛娜 马守才 李红霞 朱建楚 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期949-957,共9页
采用固相pH梯度/SDS-PAGE双向凝胶电泳对经杀雄剂SQ-1处理和未处理的小麦(Triticum aestivum)成熟期花粉总蛋白质进行了分离,银染显色,获得了分辨率和重复性较好的双向电泳图谱.通过PDQuest 2DE图像软件的分析,在等电点4~7之间可识别35... 采用固相pH梯度/SDS-PAGE双向凝胶电泳对经杀雄剂SQ-1处理和未处理的小麦(Triticum aestivum)成熟期花粉总蛋白质进行了分离,银染显色,获得了分辨率和重复性较好的双向电泳图谱.通过PDQuest 2DE图像软件的分析,在等电点4~7之间可识别350个以上较为清晰的蛋白质点,其中差异表达明显的蛋白质点数为21个.将11个差异点采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱进行了肽质量指纹图谱分析,采用Mascot软件在Swiss-prot数据库查询,鉴定出了7个蛋白质,它们分别是液泡转化酶、动力蛋白轻链TCTEX-1、锰超氧化物歧化酶、果糖-1,6-二磷酸醛缩酶、抗坏血酸过氧化物酶、凝集素蛋白激酶和一种未知功能的蛋白.对已知蛋白的功能进行分析,推测杀雄剂SQ-1诱导小麦雄性不育可能与能量代谢失衡、淀粉合成受抑制、活性氧积累、细胞凋亡以及花器官发育调节基因作用失控等有关. 展开更多
关键词 小麦 杀雄剂SQ-1 花粉粒 差异蛋白质组学 双向电泳 基质辅助激光解吸飞行时间质谱
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南美白对虾人工感染细菌后肝胰脏中主要变化蛋白的研究 被引量:13
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作者 章跃陵 卓奕明 +2 位作者 朱永飞 王三英 黄通旺 《水产科学》 CAS 北大核心 2005年第6期19-23,共5页
以采自汕头的南美白对虾为研究对象,运用病原菌人工感染、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析(MALDI-TOF/MS)、生物信息学和免疫印迹(Western-blot ting)等现代分子生物学方法,探索和... 以采自汕头的南美白对虾为研究对象,运用病原菌人工感染、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析(MALDI-TOF/MS)、生物信息学和免疫印迹(Western-blot ting)等现代分子生物学方法,探索和鉴定对虾感染后肝胰脏中的主要变化蛋白。结果表明,南美白对虾人工感染溶藻酸弧菌6h之后,实验组和对照组肝胰脏的SDS-PAGE图谱出现12条明显差异条带,其中分子量分别为75kDa(命名为p75)和73kDa(命名为p73)的两种蛋白变化最为明显,进一步研究显示,p75和p73分别为血蓝蛋白的两个不同的亚基。提示,肝胰脏中的血蓝蛋白可能在对虾抗感染免疫中发挥重要的作用。 展开更多
关键词 南美白对虾 人工感染 免疫印迹 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 血蓝蛋白
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杀雄剂SQ-1诱导小麦生理型雄性不育小花完整叶绿体差异蛋白质的鉴定 被引量:15
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作者 王书平 张改生 +8 位作者 叶景秀 李莉 宋瑜龙 王亮明 代军军 张龙雨 牛娜 马守才 朱建楚 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期854-861,共8页
为了在蛋白质水平揭示小麦雄性不育的分子遗传机制,以小麦经杀雄剂SQ-1诱导的生理型雄性不育系,以及对应正常可育系所构建的等生理差异系为试材,应用差速离心和蔗糖密度梯度离心,首先分离出供试材料小花的完整叶绿体,制备蛋白样品后采... 为了在蛋白质水平揭示小麦雄性不育的分子遗传机制,以小麦经杀雄剂SQ-1诱导的生理型雄性不育系,以及对应正常可育系所构建的等生理差异系为试材,应用差速离心和蔗糖密度梯度离心,首先分离出供试材料小花的完整叶绿体,制备蛋白样品后采用固相IEF/SDS-PAGE双向凝胶电泳技术对完整叶绿体蛋白质进行了分离、银染,得到了重复性较好的双向电泳图谱.PDQuest2DE软件分析识别出约150个较为清晰的蛋白质点,采用MALDI-TOF鉴定出的6个差异表达蛋白质分别是:PAP-fibrillin、ATRABB1A、底物同源结构域蛋白/RhoGAP结构域蛋白、铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)、R2R3-MYB转录因子及1个假定蛋白质.生物信息学功能分析暗示,这些蛋白直接参与了花药内激素调节、蛋白质转运、蛋白质互作、活性氧积累及花药的发育,表明SQ-1诱导的小麦生理型雄性不育其败育机理可能就与这些生理代谢过程的变异直接相关. 展开更多
关键词 小麦 杀雄剂SQ-1 生理型雄性不育 完整叶绿体 差异蛋白质组学 2D-PAGE maldi-tof-ms
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