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鱼腥藻PCC7120藻红蓝蛋白操纵子A、E和F基因的克隆、表达和活性分析 被引量：3
1
作者 孙亚楠 武栋 +1 位作者 周明 赵开弘 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期275-278,共4页
通过PCR技术从鱼腥藻PCC712 0总DNA中扩增藻红蓝蛋白A基因 (pecA)、E基因 (pecE)、F基因 (pecF) ,将pecA、pecE、pecF分别克隆于pBluescript,然后将pecA、pecE、pecF基因分别插入表达载体pET30a进行高效表达。pecA表达产物藻红蓝蛋白α... 通过PCR技术从鱼腥藻PCC712 0总DNA中扩增藻红蓝蛋白A基因 (pecA)、E基因 (pecE)、F基因 (pecF) ,将pecA、pecE、pecF分别克隆于pBluescript,然后将pecA、pecE、pecF基因分别插入表达载体pET30a进行高效表达。pecA表达产物藻红蓝蛋白α亚基脱辅基蛋白PecA与藻蓝胆素PCB在pecE/pecF表达产物裂合异构酶PecE/PecF催化下进行体外重组 ,产物经提纯后 ,用紫外可见吸收光谱和荧光光谱检测 ,结果表明生成的色素藻胆蛋白具有藻红蓝蛋白α 亚基所特有的光谱性质和可逆光致变色性质。 展开更多
关键词 鱼腥藻 PCC7120 藻红蓝蛋白 操纵子 基因 克隆 表达 体外重组 裂合异构酶
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藻红蓝蛋白连接/异构酶重组体系 被引量：3
2
作者 周明 王鲁 +1 位作者 郑雷 赵开弘 《华中科技大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第8期114-116,共3页
把层理鞭枝藻藻红蓝蛋白操纵子A ,E和F基因分别克隆在表达载体pET30中 ,转入大肠杆菌表达了相应蛋白质 .利用 pET30载体表达的蛋白质具有 6个连续组氨酸亲和标记 ,用Ni2 + 螯合亲和层析柱提纯了表达的蛋白质 .用这些纯化的蛋白质建立了... 把层理鞭枝藻藻红蓝蛋白操纵子A ,E和F基因分别克隆在表达载体pET30中 ,转入大肠杆菌表达了相应蛋白质 .利用 pET30载体表达的蛋白质具有 6个连续组氨酸亲和标记 ,用Ni2 + 螯合亲和层析柱提纯了表达的蛋白质 .用这些纯化的蛋白质建立了藻红蓝蛋白α亚基体外重组系统 ,从而证明藻红蓝蛋白操纵子E和F基因编码层理鞭枝藻藻红蓝蛋白为连接 展开更多
关键词 藻红蓝蛋白 连接/异构酶 层理鞭枝藻 表达 重组
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藻红蓝蛋白裂合异构酶对几种脱辅基藻胆蛋白的催化作用 被引量：2
3
作者 朱菁萍 周明 +2 位作者 赵开弘 曾志雄 周宜开 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期703-708,共6页
PecE PecF是层理鞭枝藻藻红蓝蛋白α亚基 (α PEC)生物合成的裂合异构酶。以 4种脱辅基藻胆蛋白为底物 ,初步研究了PecE PecF对底物蛋白的催化专一性。结果表明 ,PecE PecF可催化藻蓝胆素 (PCB)与高度同源的层理鞭枝藻不同亚种的α PEC... PecE PecF是层理鞭枝藻藻红蓝蛋白α亚基 (α PEC)生物合成的裂合异构酶。以 4种脱辅基藻胆蛋白为底物 ,初步研究了PecE PecF对底物蛋白的催化专一性。结果表明 ,PecE PecF可催化藻蓝胆素 (PCB)与高度同源的层理鞭枝藻不同亚种的α PEC脱辅基蛋白的体外重组 ,也可催化经 12 8位Trp定点突变到Phe而得到的α PEC脱辅基蛋白的体外重组 ,但PecE PecF对PCB与藻蓝蛋白α亚基 (α CPC)脱辅基蛋白的体外重组无催化作用。α PEC脱辅基蛋白的重组不受表面活性剂TritonX 10 0的影响 ,而TritonX 10 0可改进PCB与α 展开更多
关键词 藻红蓝蛋白裂合异构酶 脱辅基藻胆蛋白 催化作用
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藻红蓝蛋白α-亚基体外重组体系的优化 被引量：2
4
作者 周明 武栋 赵开弘 《华中师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期494-497,共4页
对我们建立的藻红蓝蛋白α-亚基体外重组体系进行了优化.实验表明:让表达的不具有组氨酸亲和标记的藻红蓝蛋白α-亚基连接/异构酶E亚基(简称PecE)与具有组氨酸亲和标记的藻红蓝蛋白α-亚基连接/异构酶F亚基(简称Histag-PecF)共同变性再... 对我们建立的藻红蓝蛋白α-亚基体外重组体系进行了优化.实验表明:让表达的不具有组氨酸亲和标记的藻红蓝蛋白α-亚基连接/异构酶E亚基(简称PecE)与具有组氨酸亲和标记的藻红蓝蛋白α-亚基连接/异构酶F亚基(简称Histag-PecF)共同变性再复性,然后通过Ni2+金属鳌合亲和层析提纯PecE/Histag-PecF复合物,该PecE/Histag-PecF具有更好的催化活性. 展开更多
关键词 α-亚基 体外重组体系 藻红蓝蛋白 连接/异构酶 基因重组 藻类植物 色素蛋白
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可逆光致变色的藻红蓝蛋白α亚基分子设计 被引量：1
5
作者 邓明刚 王菲 +1 位作者 周明 赵开弘 《华中科技大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第8期110-113,共4页
从层理鞭枝藻藻红蓝蛋白α亚基基因表达质粒pGEMD pecA出发 ,通过酶切、削平或补齐粘末端及重新环合等技术 ,使其后的阅读框发生移码突变 ,从而得到C 端缺失 2 4个和 36个氨基酸的两个缺失突变体pGEMD pecA C2 4和 pGEMD pecA C36 .用PC... 从层理鞭枝藻藻红蓝蛋白α亚基基因表达质粒pGEMD pecA出发 ,通过酶切、削平或补齐粘末端及重新环合等技术 ,使其后的阅读框发生移码突变 ,从而得到C 端缺失 2 4个和 36个氨基酸的两个缺失突变体pGEMD pecA C2 4和 pGEMD pecA C36 .用PCR技术将已突变的基因片段转入表达载体 pET30中 ,得到pET30 pecA C2 4和 pET30 pecA C36 ,获得高效表达 .利用PCR技术从 pGEMD pecA中扩增出N 端缺失 2 0个和 32个氨基酸 pecA的突变基因片段 ,并克隆于表达载体 pET30中 ,得到pET30 pecA N2 0和 pET30 pecA N32 ,获得高效表达 .两个C 端缺失突变的脱辅基蛋白无论有或无藻红蓝蛋白连接 /异构酶催化 ,均不能与藻蓝胆素共价偶联 .两个N 端缺失突变脱辅基蛋白均能在藻红蓝蛋白连接 /异构酶催化下与藻蓝胆素共价偶联 。 展开更多
关键词 藻红蓝蛋白α亚基 分子设计 重组 层理鞭枝藻 连接/异构酶
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藻红蓝蛋白裂合/异构酶E基因的C端缺失突变
6
作者 周明 马聪 赵开弘 《武汉理工大学学报》 CAS CSCD 2003年第4期35-37,共3页
采用 PCR技术 ,扩增藻红蓝蛋白裂合 /异构酶 E基因 (pec E)部分 DNA片段 ,从而获得 pec E基因 C端缺失 6 9bp的 DNA片段 (pec Ec) ,该 pec Ec大小为 70 5 bp。把 pec Ec插入 p Bluescript的多克隆位点得到重组质粒 p Blu- pec Ec,经DNA... 采用 PCR技术 ,扩增藻红蓝蛋白裂合 /异构酶 E基因 (pec E)部分 DNA片段 ,从而获得 pec E基因 C端缺失 6 9bp的 DNA片段 (pec Ec) ,该 pec Ec大小为 70 5 bp。把 pec Ec插入 p Bluescript的多克隆位点得到重组质粒 p Blu- pec Ec,经DNA序列测定证实诱变成功。然后将 pec Ec亚克隆于表达载体 p ET30 ,酶切鉴定 pec Ec已正确插入到该表达载体中(p ET- pec Ec)。将表达质粒 p ET- pec Ec转化 Ecoli BL2 1(DE3) ,细胞经 IPTG诱导 ,获得了高效表达 ,表达蛋白质的分子量为 30 k D。 展开更多
关键词 藻红蓝蛋白裂合/异构酶 基因克隆 基因表达
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