目的:筛选糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)肾阴虚证敏感的血浆分子标志物,探究糖尿病肾病肾阴虚证的生物学基础及其发病机制。方法:收集24例早期DN肾阴虚患者(DN阴虚证组)的血浆和24例正常人群血浆(NC组),应用同位素标记的相对和...目的:筛选糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)肾阴虚证敏感的血浆分子标志物,探究糖尿病肾病肾阴虚证的生物学基础及其发病机制。方法:收集24例早期DN肾阴虚患者(DN阴虚证组)的血浆和24例正常人群血浆(NC组),应用同位素标记的相对和绝对定量(isobaric tag for relative and absolute quan-tification,iTRAQ)标记的二维液相色谱串联质谱(two-dimensional liquid chromatography-tandem mass spectrometry,2DLC-MS/MS)方法检测血浆蛋白质,利用基因本体论(Gene Ontology,GO)、京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)及蛋白质互作网络等方法筛选血浆差异蛋白,采用Western blot对筛选出来的蛋白进行验证。结果:与NC组比较,DN阴虚证组中共鉴定出37个差异蛋白质(差异倍数>2,P<0.05),包括20个上调蛋白和17个下调蛋白。这些蛋白主要涉及胆固醇代谢、补体及凝血级联反应、脂肪消化吸收等与心血管疾病有明显关系的通路。进一步验证发现HP和FGG蛋白表达高于NC组,载脂蛋白AI表达低于NC组(P<0.05),Western blot结果与iTRAQ质谱结果具有一致性。结论:iTRAQ结合2DLC-MS/MS技术可以有效筛选出DN肾阴虚证中差异的蛋白,本研究鉴定的37种蛋白有可能为DN的早期诊断和中医证型研究提供潜在分子标志物。展开更多
文摘目的:筛选糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)肾阴虚证敏感的血浆分子标志物,探究糖尿病肾病肾阴虚证的生物学基础及其发病机制。方法:收集24例早期DN肾阴虚患者(DN阴虚证组)的血浆和24例正常人群血浆(NC组),应用同位素标记的相对和绝对定量(isobaric tag for relative and absolute quan-tification,iTRAQ)标记的二维液相色谱串联质谱(two-dimensional liquid chromatography-tandem mass spectrometry,2DLC-MS/MS)方法检测血浆蛋白质,利用基因本体论(Gene Ontology,GO)、京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)及蛋白质互作网络等方法筛选血浆差异蛋白,采用Western blot对筛选出来的蛋白进行验证。结果:与NC组比较,DN阴虚证组中共鉴定出37个差异蛋白质(差异倍数>2,P<0.05),包括20个上调蛋白和17个下调蛋白。这些蛋白主要涉及胆固醇代谢、补体及凝血级联反应、脂肪消化吸收等与心血管疾病有明显关系的通路。进一步验证发现HP和FGG蛋白表达高于NC组,载脂蛋白AI表达低于NC组(P<0.05),Western blot结果与iTRAQ质谱结果具有一致性。结论:iTRAQ结合2DLC-MS/MS技术可以有效筛选出DN肾阴虚证中差异的蛋白,本研究鉴定的37种蛋白有可能为DN的早期诊断和中医证型研究提供潜在分子标志物。
