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川芎嗪对人小细胞肺癌H446细胞的增殖抑制作用 被引量:24
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作者 张会军 阎蕴力 +3 位作者 张朱欣 李建科 刘金锋 王运仓 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 2003年第6期452-454,共3页
目的 观察中药川芎的提取物川芎嗪对人小细胞肺癌H4 4 6细胞的增殖抑制作用。方法 用MTT法、吖啶橙 /溴乙啶 (AO/EB)双荧光染色法、流式细胞术及扫描电镜观察川芎嗪对体外培养的人小细胞肺癌H4 4 6细胞存活率的影响、检测凋亡、分析... 目的 观察中药川芎的提取物川芎嗪对人小细胞肺癌H4 4 6细胞的增殖抑制作用。方法 用MTT法、吖啶橙 /溴乙啶 (AO/EB)双荧光染色法、流式细胞术及扫描电镜观察川芎嗪对体外培养的人小细胞肺癌H4 4 6细胞存活率的影响、检测凋亡、分析其对细胞形态学及细胞周期的影响。结果 川芎嗪对小细胞肺癌H4 4 6细胞有增殖抑制作用 ,细胞形态学发生变化 ,如细胞体积缩小、细胞质空泡化、细胞核碎裂 ;川芎嗪可诱导H4 4 6细胞凋亡并使细胞生长停滞在S期 ,抑制细胞有丝分裂及DNA合成。结论川芎嗪对小细胞肺癌H4 4 6细胞具有增殖抑制作用 ,呈浓度相关性 ,川芎嗪可诱导H4 4 6细胞凋亡 ,其机制可能与其导致细胞S期阻滞有关。 展开更多
关键词 川芎嗪 小细胞肺癌 h446细胞 增殖抑制作用
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槲皮素对人小细胞肺癌H446细胞增殖和凋亡的影响 被引量:13
2
作者 刘涛 张雅雅 +1 位作者 许英艺 包传恩 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期169-174,共6页
目的:观察槲皮素(Quercetin)对人小细胞肺癌H446细胞凋亡的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法:MTT法检测20、40、80、160、200μmol/L槲皮素对H446细胞增殖的抑制作用,共聚焦显微镜观察100、200μmol/L槲皮素处理48 h对H446细胞增... 目的:观察槲皮素(Quercetin)对人小细胞肺癌H446细胞凋亡的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法:MTT法检测20、40、80、160、200μmol/L槲皮素对H446细胞增殖的抑制作用,共聚焦显微镜观察100、200μmol/L槲皮素处理48 h对H446细胞增殖的影响,流式细胞术检测槲皮素对H446细胞凋亡和细胞周期的影响,Western blotting检测槲皮素对H446细胞内P53、Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。结果:槲皮素对H446细胞的增殖抑制具有显著的剂量和时间依赖性(P<0.05),在12、24、48及72 h四个时间点,槲皮素作用于H446细胞的IC50值分别为(172.2±2.6)、(102.4±5.3)、(68.6±2.7)及(48.8±1.9)μmol/L。槲皮素处理后,随着H446细胞密度的降低,细胞核部分皱缩并裂解为凋亡小体,其对H446细胞的促凋亡作用呈现出显著的剂量依赖性,40μmol/L组H446细胞的凋亡率即显著高于对照组[(8.3±0.4)%vs(4.0±0.5)%;P<0.01],当药物浓度达到200μmol/L时凋亡率达到最高。槲皮素能将H446细胞周期特异性地阻滞于G2/M期。与对照组相比,200μmol/L槲皮素处理组P53[(4.98±0.91)vs(0.68±0.26),P<0.01]和Bax蛋白[(4.26±0.23)vs(0.89±0.29),P<0.01]表达显著升高,Bcl-2蛋白表达[(0.36±0.06)vs(8.23±1.65),P<0.01]显著下降。结论:槲皮素能够抑制H446细胞的增殖并促进其凋亡,其机制可能与调控Bax、p53和Bcl-2等细胞凋亡相关蛋白有关。 展开更多
关键词 小细胞肺癌 h446细胞 槲皮素 凋亡 增殖 BAX P53 BCL-2
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葛根粗提物、葛根素对肺癌H446细胞增殖的抑制作用及其机制 被引量:10
3
作者 韩萍 裴兰英 +3 位作者 李娟 张蕾 张洪权 许东 《山东医药》 CAS 北大核心 2008年第15期7-9,共3页
目的观察葛根粗提物(CP)和葛根素纯品(SP)对小细胞肺癌H446细胞增殖的影响,并探讨其机制。方法用含不同浓度的SP和CP培养H446细胞,用MTT法检测细胞生长抑制率。用流式细胞术检测细胞周期和凋亡率、细胞免疫化学技术检测Bcl-2和Bax蛋白... 目的观察葛根粗提物(CP)和葛根素纯品(SP)对小细胞肺癌H446细胞增殖的影响,并探讨其机制。方法用含不同浓度的SP和CP培养H446细胞,用MTT法检测细胞生长抑制率。用流式细胞术检测细胞周期和凋亡率、细胞免疫化学技术检测Bcl-2和Bax蛋白。另设空白对照组和溶剂对照组。结果CP作用72h的半数抑制浓度(IC50)为435μg/ml,SP为1403μg/ml。此浓度作用72h,细胞凋亡率分别为14.71%和2.61%,两组相比P<0.05;G0/G1期细胞构成比分别为79.20%和72.20%,G2/M期细胞构成比分别为8.94%和10.50%,与对照组相比P均<0.05;CP作用于H446细胞后,细胞内Bcl-2蛋白表达量降低,Bax的蛋白表达量增加,与对照组相比P均<0.05。结论SP和CP对小细胞肺癌H446细胞具有增殖抑制作用,呈浓度相关性;SP和CP可诱导细胞凋亡且CP强于SP,其机制可能与阻滞细胞周期于G0/G1期、上调Bax表达、下调Bcl-2表达有关。 展开更多
关键词 葛根素 肺肿瘤 小细胞肺癌 h446细胞 细胞凋亡
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Akt通路在热化疗联合诱导人小细胞肺癌细胞凋亡中的作用 被引量:8
4
作者 王琳 刘新奎 师秀琴 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第4期429-433,共5页
背景与目的:Akt通路是细胞内一条重要的信号通路,与细胞生长、凋亡密切相关,本研究旨在探讨Akt通路在热化疗诱导人小细胞肺癌细胞凋亡中的作用,进而探讨热疗抑制肺部肿瘤细胞增殖可能的机制。方法:参考临床常用剂量,采用43℃加热联合120... 背景与目的:Akt通路是细胞内一条重要的信号通路,与细胞生长、凋亡密切相关,本研究旨在探讨Akt通路在热化疗诱导人小细胞肺癌细胞凋亡中的作用,进而探讨热疗抑制肺部肿瘤细胞增殖可能的机制。方法:参考临床常用剂量,采用43℃加热联合120μg/L紫杉醇(热化联合组)、43℃加热联合120μg/L紫杉醇并加入1μmol/LAkt特异抑制剂Wortmannin(Wortmannin组)、43℃加热联合120μg/L紫杉醇并加入30μmol/L活性氧(reactive oxygen species,ROS)特异抑制剂NAC(NAC组)、单纯使用120μg/L紫杉醇(单纯化疗组)处理H446细胞,以未处理的H446细胞作为对照组,应用噻唑蓝比色法(MTT法)检测各处理方式下细胞增殖率,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,荧光法检测细胞内ROS,通过蛋白免疫印迹法(Westernblot)检测Akt磷酸化水平和caspase-3的表达,采用SPSS13.0统计软件对数据进行统计分析。结果:热化联合组细胞增殖率(59.83±3.36)%低于对照组(100.00±0.00)%和单纯化疗组(69.16±2.95)%(P<0.05);热化联合组的细胞凋亡率最高(27.59±5.47)%(P<0.05);热化联合组的ROS表达增高(102.14±18.34)(P<0.05),NAC可抑制其表达(28.01±1.19),Wortmannin对其无影响(99.87±8.35);Akt磷酸化水平在热化联合组降低(0.69±0.03)(P<0.05),Wortmannin可抑制其磷酸化(0.00±0.00),NAC使其磷酸化水平升高(1.05±0.29)(P<0.05);热化联合组的caspase-3表达(1.07±0.08)高于其他各组(P<0.05)。结论:热化疗联合应用可以明显抑制H446细胞的生长,这种抑制作用可能是通过诱导ROS的产生,继而抑制Akt通路活化,并通过caspase途径导致细胞凋亡。 展开更多
关键词 AKT通路 热疗 肺肿瘤 h446细胞 凋亡
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葛根素对人小细胞肺癌H446细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制研究 被引量:7
5
作者 张蕾 李娟 +1 位作者 王彦平 韩萍 《中国实用医药》 2009年第34期17-19,共3页
目的观察葛根素对人小细胞肺癌H446细胞增殖与凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法采用MTT比色法和流式细胞术检测葛根素对H446细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用;免疫组化法检测葛根素对PCNA、Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。结果40、80μg... 目的观察葛根素对人小细胞肺癌H446细胞增殖与凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法采用MTT比色法和流式细胞术检测葛根素对H446细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用;免疫组化法检测葛根素对PCNA、Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。结果40、80μg/ml浓度的葛根素体外作用24、48h,对H446细胞有促增殖作用,在160~640μg/ml浓度范围内,葛根素能够抑制H446细胞的生长,并呈现良好的剂量依赖和时间依赖关系。435μg/ml的葛根素可以诱导H446细胞凋亡。检测葛根素对PCNA、Bax和Bcl-2蛋白表达的影响显示葛根素能够下调PCNA和Bcl-2蛋白的表达,上调Bax蛋白的表达。结论在一定浓度范围内,葛根素可能通过下调PCNA和Bcl-2蛋白的表达,上调Bax蛋白的表达而诱导H446细胞凋亡。 展开更多
关键词 葛根素 h446细胞 细胞增殖 细胞凋亡 PCNA BAX BCL-2
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JNK通路及HSP70在热化疗抑制人小细胞肺癌细胞生长中的作用 被引量:6
6
作者 王琳 高姗 +2 位作者 张瑞芳 吴卫东 吴逸明 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期142-145,共4页
目的:研究热化疗对小细胞肺癌生长的影响及其可能的机制。方法:参考临床常用剂量,采用43℃加热联合120μg/L紫杉醇(热化联合组)、43℃加热联合120μg/L紫杉醇及20μmol/LJNK特异抑制剂SP600125(热化联合+SP600125组)、单纯43℃加热(单... 目的:研究热化疗对小细胞肺癌生长的影响及其可能的机制。方法:参考临床常用剂量,采用43℃加热联合120μg/L紫杉醇(热化联合组)、43℃加热联合120μg/L紫杉醇及20μmol/LJNK特异抑制剂SP600125(热化联合+SP600125组)、单纯43℃加热(单纯热疗组)、单纯使用120μg/L紫杉醇(单纯化疗组)处理H446细胞,以未处理的H446细胞作对照。应用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测各处理方式下细胞增殖率的变化,通过Western印迹法检测JNK、磷酸化JNK(p-JNK)和HSP70的表达并对数据进行统计学分析。结果:热化联合组细胞增殖率低于对照组、单纯化疗、单纯热疗及热化联合+SP600125组(P<0.05);p-JNK表达水平在热化联合组中表达明显增高(P<0.05),但SP600125可抑制其表达,使热化联合+SP600125组细胞的增殖率相应增高(P<0.05);HSP70在热化联合组的表达低于单纯热疗组(P<0.05),细胞增殖率也发生了相应变化。结论:热疗可以明显增加紫杉醇对H446细胞生长的抑制作用,且这种作用可能是通过激活JNK信号转导通路或抑制HSP70的表达完成的。 展开更多
关键词 肺肿瘤 h446细胞 JNK丝裂原活化蛋白激酶类 热休克蛋白质70 温热疗法 药物疗法 细胞增殖
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Ghrelin在小细胞肺癌组织及H446细胞中的表达及其沉默对癌细胞凋亡的影响 被引量:4
7
作者 赵鹏 张卉 苏海川 《现代医学》 2017年第2期204-210,共7页
目的:探讨小细胞肺癌(SCLC)组织和H446细胞中生长激素释放肽(Ghrelin)的表达及Ghrelin沉默对细胞凋亡的影响及作用机制。方法:Ghrelin水平在SCLC和癌旁正常组织中以免疫组织化学法检测,在H446细胞中以RT-PCR和Western blot法检测,在细... 目的:探讨小细胞肺癌(SCLC)组织和H446细胞中生长激素释放肽(Ghrelin)的表达及Ghrelin沉默对细胞凋亡的影响及作用机制。方法:Ghrelin水平在SCLC和癌旁正常组织中以免疫组织化学法检测,在H446细胞中以RT-PCR和Western blot法检测,在细胞培养上清液中以ELISA法检测。Ghrelin以siRNA干扰法沉默,沉默效果以RT-PCR法验证;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测active-caspase-3及Bcl-2水平;RT-PCR检测miR-21水平;MTT法测定细胞活力;脂质体转染法实现miR-21过表达。结果:Ghrelin在SCLC组织中表达明显高于癌旁正常组织,在H446细胞及其培养上清中表达显著高于BEAS-2B细胞。Ghrelin沉默后,H446细胞凋亡率显著高于其他组,伴随active-caspase-3水平增高及Bcl-2水平下降,同时细胞活力下降,且miR-21水平显著低于其它组;H446细胞经GHS-R拮抗剂或抗体处理后,miR-21水平在Ghrelin基因/GHS-R共抑制细胞中达到最低,表明Ghrelin是通过识别GHS-R受体来调控miR-21水平的;此外,miR-21过表达能够逆转Ghrelin沉默诱导的细胞凋亡率增加及凋亡相关蛋白表达的变化。结论:Ghrelin在SCLC中表达显著升高,且Ghrelin沉默能够通过抑制miR-21表达促进SCLC细胞凋亡。 展开更多
关键词 GhRELIN 小细胞肺癌 h446细胞 细胞凋亡 MICRORNA-21
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热化疗联合作用抑制人小细胞肺癌细胞增殖的机制 被引量:3
8
作者 王琳 吴拥军 刘新奎 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期1-4,共4页
目的研究热化疗联合作用对肺部肿瘤细胞生长的抑制及其可能的机制。方法参考临床常用剂量,采用43℃加热联合120μg/L紫杉醇、43℃加热联合120μg/L紫杉醇及20μmol/LJNK特异抑制剂SP600125以及单纯使用120μg/L紫杉醇处理H446细胞,以未... 目的研究热化疗联合作用对肺部肿瘤细胞生长的抑制及其可能的机制。方法参考临床常用剂量,采用43℃加热联合120μg/L紫杉醇、43℃加热联合120μg/L紫杉醇及20μmol/LJNK特异抑制剂SP600125以及单纯使用120μg/L紫杉醇处理H446细胞,以未处理的H446细胞作对照。应用噻唑蓝比色法检测各处理方式下细胞增殖率的变化,通过蛋白免疫印迹法检测JNK磷酸化水平和Caspase-3表达的变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,运用SPSS13.0对数据进行统计分析。结果热化联合组细胞增殖率最低(P<0.05);JNK磷酸化水平在热化联合组中表达明显增高(P<0.05),SP600125可抑制其磷酸化(P<0.05);热化联合组的Caspase-3增高(P<0.05),SP600125使其表达减少(P<0.05);热化联合组细胞凋亡率增加(P<0.05),SP600125组细胞凋亡率减少(P<0.05)。结论热化疗联合应用可以明显增加紫杉醇对H446细胞生长的抑制作用,且这种抑制作用可能是通过激活JNK信号转导通路,继而通过Caspase-3途径激活细胞凋亡来实现的。 展开更多
关键词 肺肿瘤 h446细胞 JNK丝裂原活化蛋白激酶类 CASPASE-3 细胞增殖
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Notch3诱导人小细胞肺癌H446细胞G_0/G_1期阻滞及其机制 被引量:2
9
作者 刘辉 陈红莲 袁磊 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期791-795,共5页
目的探究Notch3对人小细胞肺癌H446细胞增殖和细胞周期的影响及其分子机制。方法将人Notch3真核表达质粒、人HES1真核表达质粒、人鼠双微基因2(MDM2)基因沉默表达质粒及其空质粒分别转染H446细胞,采用流式细胞术检测细胞周期,采用RT-PC... 目的探究Notch3对人小细胞肺癌H446细胞增殖和细胞周期的影响及其分子机制。方法将人Notch3真核表达质粒、人HES1真核表达质粒、人鼠双微基因2(MDM2)基因沉默表达质粒及其空质粒分别转染H446细胞,采用流式细胞术检测细胞周期,采用RT-PCR法检测Notch3和MDM2的mRNA水平,采用Western blotting方法检测Notch3、HES1、MDM2、Rb和P21蛋白表达水平。结果 Notch3可抑制H446细胞增殖并导致G_0/G_1期阻滞(P<0.05),上调HES1蛋白表达水平和下调MDM2蛋白表达水平(P<0.05);HES1高表达也能使MDM2蛋白表达水平下降(P<0.05),但对其mRNA水平无影响;沉默MDM2基因可抑制H446细胞增殖(P<0.05),并使H446细胞中Rb和P21蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论 Notch3可通过HES1抑制MDM2蛋白表达,进而上调Rb和P21蛋白表达水平,抑制H446细胞增殖并阻滞H446细胞于G_0/G_1期。 展开更多
关键词 NOTCh3 小细胞肺癌 h446细胞 鼠双微基因2 细胞周期 流式细胞术
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不同IL-15基因转染对NCI-H446肿瘤细胞增殖的影响 被引量:2
10
作者 王智华 王润田 +3 位作者 丁军颖 张征峥 邓郁青 王平 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期639-641,共3页
目的探讨不同形式IL-15基因转染对人小细胞肺癌细胞株NCI-H446细胞增殖的影响。方法用本室已构建的3种转染不同IL-15基因(原型、成熟肽及以IL-2信号肽替代IL-15信号肽的改型IL-15基因)的NCI-H446细胞模型:CIL-15、CIL-15mp和CIL-2sp-IL-... 目的探讨不同形式IL-15基因转染对人小细胞肺癌细胞株NCI-H446细胞增殖的影响。方法用本室已构建的3种转染不同IL-15基因(原型、成熟肽及以IL-2信号肽替代IL-15信号肽的改型IL-15基因)的NCI-H446细胞模型:CIL-15、CIL-15mp和CIL-2sp-IL-15mp,以野生株NCI-H446细胞(CW)为对照,台盼蓝拒染计数法测定细胞生长曲线、MTT法检测细胞增殖、流式细胞术分析细胞周期的变化、RT-PCR法检测cyclinD1和cyclinE的表达。结果与CW相比,CIL-15、CIL-15mp和CIL-2sp-IL-15mp增殖速率依次减慢、G0/G1期细胞比例依次增加、S期细胞和细胞周期蛋白cyclinE表达依次减少、cyclinD1表达无变化。结论3种IL-15基因转染均有使NCI-H446细胞增殖明显减慢的作用,强度依次为改型>成熟肽>原型;这种作用与降低NCI-H446细胞cyclinE的表达有关(r=0.953,P<0.05),与cyclinD1的表达无关(r=0.155,P>0.05)。 展开更多
关键词 IL-15 基因转染 NCI-h446 细胞增殖 细胞周期
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热化疗对H446细胞增殖的影响 被引量:1
11
作者 王琳 徐春燕 +1 位作者 刘新奎 师国珍 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2010年第3期375-378,共4页
目的:研究热化疗对人小细胞肺癌H446细胞增殖的影响及其可能机制。方法:H446细胞分为单纯化疗组(单纯使用120μg/L紫杉醇处理细胞)、热化联合组(采用43℃加热联合120μg/L紫杉醇处理细胞)、抑制剂组(采用43℃加热联合120μg/L紫杉醇及1... 目的:研究热化疗对人小细胞肺癌H446细胞增殖的影响及其可能机制。方法:H446细胞分为单纯化疗组(单纯使用120μg/L紫杉醇处理细胞)、热化联合组(采用43℃加热联合120μg/L紫杉醇处理细胞)、抑制剂组(采用43℃加热联合120μg/L紫杉醇及1μmol/LAkt特异抑制剂wortmannin处理细胞),以未处理的H446细胞作对照。应用MTT法检测各组细胞增殖率的变化,采用WesternBlot检测各组细胞磷酸化Akt水平。结果:对照组、单纯化疗组、热化联合组和抑制剂组细胞增殖率分别为(100.00±0.00)%、(69.16±2.95)%,(59.83±3.36)%和(40.65±0.14)%,磷酸化AKt水平分别为(1.52±0.01),(1.04±0.42),(0.69±0.03)和(0.00±0.00),4组细胞增殖率及磷酸化Akt水平相比,差异均有统计学意义(F=68.231和6.232,P均<0.05)。与对照组和单纯化疗组相比,热化联合组细胞增殖率及磷酸化Akt水平均降低(P<0.05),wortmannin可进一步抑制H446细胞的磷酸化,且降低细胞的增殖率(P<0.05)。结论:热化疗联合应用可抑制H446细胞增殖,其作用可能是通过抑制Akt信号转导通路实现的。 展开更多
关键词 h446细胞 化疗 热化疗 AKT 细胞增殖
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葛根素和葛根粗提物对H446细胞生长及对PCNA基因表达的影响 被引量:1
12
作者 韩萍 吕慧丽 +3 位作者 裴兰英 李娟 许东 张洪全 《第四军医大学学报》 北大核心 2008年第21期1948-1951,共4页
目的:比较葛根素(standard of purepuerarin,SP)和葛根粗提物(pueraria crude extract,CP)对小细胞肺癌H446生长的影响.方法:运用MTT法、流式细胞术、细胞免疫化学方法观察SP和CP对H446细胞生长、凋亡、细胞周期分布以及对PCNA基因表达... 目的:比较葛根素(standard of purepuerarin,SP)和葛根粗提物(pueraria crude extract,CP)对小细胞肺癌H446生长的影响.方法:运用MTT法、流式细胞术、细胞免疫化学方法观察SP和CP对H446细胞生长、凋亡、细胞周期分布以及对PCNA基因表达的影响.结果:CP组和SP组细胞凋亡率分别为14.71%和2.61%,差异具有统计学意义(P<0.05);G0/G1期细胞构成比分别为79.20%和72.20%,G2/M期细胞构成比分别为8.94%和10.50%,与对照组相比,差异均具有统计学意义(P<0.05);CP作用于H446细胞后,PCNA蛋白表达量减少,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05).结论:CP和SP均可抑制H446细胞增殖,且CP强于SP;SP和CP可诱导细胞凋亡,其机制可能与其导致细胞G0/G1期阻滞、PCNA表达下调有关. 展开更多
关键词 葛根素 葛根粗提物 小细胞癌 肺肿瘤 h446细胞 凋亡
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热化联合对人小细胞肺癌H446细胞凋亡的影响
13
作者 王琳 刘新奎 +2 位作者 高姗 吴拥军 吴逸明 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期112-114,共3页
目的研究热化联合对肺部肿瘤细胞生长的影响及其可能的机制。方法参考临床常用剂量,采用43℃加热联合120μg/L紫杉醇(热化联合组)、43℃加热联合120μg/L紫杉醇并加入30μmol/L活性氧(ROS)特异抑制剂NAC(NAC组)、单纯使用120μg/L紫杉醇... 目的研究热化联合对肺部肿瘤细胞生长的影响及其可能的机制。方法参考临床常用剂量,采用43℃加热联合120μg/L紫杉醇(热化联合组)、43℃加热联合120μg/L紫杉醇并加入30μmol/L活性氧(ROS)特异抑制剂NAC(NAC组)、单纯使用120μg/L紫杉醇(单纯化疗组)处理H446细胞,以未处理的H446细胞作对照,应用流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,荧光法检测细胞内活性氧(ROS),蛋白免疫印记法(Western blotting)检测Caspase-3的表达,SPSS 13.0对数据进行统计分析。结果热化联合组细胞凋亡率高于其余各组(P<0.05);ROS在热化联合组增高(P<0.05),NAC可抑制其表达;Caspase-3表达在热化联合组中表达明显增高(P<0.05),但可被NAC抑制(P<0.05)。结论热化联合应用可以明显诱导H446细胞发生凋亡,可能是通过诱导ROS的产生,通过caspase途径实现的。 展开更多
关键词 h446细胞 热化联合治疗 凋亡 小细胞肺癌
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顺铂联合葛根素纯品和葛根粗提物对H446细胞增殖及Bax、Bcl-2蛋白表达的影响
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作者 韩萍 赵妍娟 +3 位作者 裴兰英 朱明君 王旗 时宝庆 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2010年第3期477-480,共4页
目的:观察顺铂(DDP)单独及联合葛根素纯品(SP)和(或)葛根粗提物(CP)对小细胞肺癌H446细胞增殖及Bax、Bcl-2蛋白表达的影响。方法:取对数生长期的H446细胞,随机分为16组,运用噻唑蓝法测定不同质量浓度DDP(1.0、2.0、4.0和8.0mg/L)单独及... 目的:观察顺铂(DDP)单独及联合葛根素纯品(SP)和(或)葛根粗提物(CP)对小细胞肺癌H446细胞增殖及Bax、Bcl-2蛋白表达的影响。方法:取对数生长期的H446细胞,随机分为16组,运用噻唑蓝法测定不同质量浓度DDP(1.0、2.0、4.0和8.0mg/L)单独及联合80mg/LSP和(或)CP对H446细胞的增殖抑制率,运用免疫细胞化学染色法测定16组细胞中Bcl-2和Bax蛋白的表达,运用析因设计方差分析法分析检测结果。结果:析因设计方差分析结果显示:不同质量浓度DDP(F=3973.386,P<0.001)、SP(F=468.017,P<0.001)和CP(F=789.757,P<0.001)对H446细胞的增殖抑制不同,随着DDP质量浓度的增高,联合80mg/LSP和80mg/LCP对H446细胞的抑制越明显;DDP联合SP(F=70.686,P<0.001)、DDP联合CP(F=87.191,P<0.001)及DDP联合SP和CP(F=28.471,P<0.001)对H446细胞增殖抑制作用增强。DDP、SP和CP上调Bax蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达。结论:联合应用SP、CP能增强DDP对H446细胞的增殖抑制作用,该作用可能与上调Bax蛋白表达、下调Bcl-2蛋白表达有关。 展开更多
关键词 葛根素 葛根粗提物 顺铂 h466细胞 BAX BCL-2
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刺五加多糖诱导人小细胞肺癌H446细胞凋亡 被引量:22
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作者 赵俊霞 闫永鑫 +2 位作者 赵娟 王彦玲 闫蕴力 《细胞生物学杂志》 CSCD 2008年第2期239-242,共4页
研究刺五加多糖(Acanthopanax senticosus polysaccharide,ASPS)诱导H446细胞凋亡及其可能的作用机制。采用MTT法检测ASPS对小细胞肺癌H446细胞增殖的抑制作用;Hoechst33258染色和流式细胞技术检测经ASPS处理后H446细胞凋亡的形态特征... 研究刺五加多糖(Acanthopanax senticosus polysaccharide,ASPS)诱导H446细胞凋亡及其可能的作用机制。采用MTT法检测ASPS对小细胞肺癌H446细胞增殖的抑制作用;Hoechst33258染色和流式细胞技术检测经ASPS处理后H446细胞凋亡的形态特征及凋亡率的变化;Western印迹方法检测凋亡相关基因bax、bcl-2、p53表达的变化。MTT分析表明,ASPS作用48h后可明显抑制H446细胞的增殖,半数抑制浓度(IC50值)为476.36μg/ml;Hoechst染色结果:H446细胞在ASPS诱导下出现典型的凋亡形态;流式细胞术检测结果显示:对照组及浓度为240、480、960μg/ml药物处理组凋亡率分别是(5.02±0.4)%、(11.12±1.8)%、(19.89±2.5)%、(22.54±1.8)%;Western印迹显示:在ASPS的诱导下bax、p53的表达量提高,而bcl-2的表达量下降。研究表明,ASPS对H446细胞增殖有抑制作用,并能促进其凋亡;ASPS通过上调bax、p53表达,下调bcl-2表达促进H446细胞凋亡。 展开更多
关键词 刺五加多糖 小细胞肺癌h446细胞株 BAX基因 BCL-2基因 P53基因
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澳洲茄碱诱导肺癌细胞株H446凋亡及其机制探讨 被引量:12
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作者 黄文斯 王颖 +3 位作者 朱海涛 吴荧荧 谢晓东 王冬青 《中国肺癌杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期416-421,共6页
背景与目的肺癌的发病率和病死率都急剧上升,小细胞肺癌首选化疗而不能手术,而中医药副作用小,有研究表明中药澳洲茄碱具有抗肿瘤活性作用。本研究旨在探讨澳洲茄碱对肺癌细胞株H446凋亡作用的影响。方法用CCK8试剂盒筛选药物作用的合... 背景与目的肺癌的发病率和病死率都急剧上升,小细胞肺癌首选化疗而不能手术,而中医药副作用小,有研究表明中药澳洲茄碱具有抗肿瘤活性作用。本研究旨在探讨澳洲茄碱对肺癌细胞株H446凋亡作用的影响。方法用CCK8试剂盒筛选药物作用的合适浓度和时间,以药物浓度为0μmol/L、3.4μmol/L、6.8μmol/L、13.6μmol/L分4组,作用于H446细胞24 h后,倒置显微镜观察细胞形态的变化,DAPI核染观察细胞核变化,流式细胞术检测药物对细胞凋亡的影响,Western blot检测凋亡相关蛋白BCL2、BAX、CASP3表达的变化。结果澳洲茄碱可降低H446细胞的存活率,抑制其增殖,具有剂量相关性,存活率可降低至16.77%(P<0.001),最高凋亡率为44.62%(P<0.001);H446有明显的细胞凋亡形态学变化;Western blot显示凋亡相关蛋白BAX、CASP3表达上调(P<0.05),凋亡抑制基因蛋白BCL2表达下调(P<0.05)。结论澳洲茄碱可抑制H446细胞的增殖,上调促凋亡相关蛋白表达,下调抑凋亡蛋白表达,从而促进细胞的凋亡。 展开更多
关键词 澳洲茄碱 凋亡 肺癌细胞株h446
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bcl-2对人小细胞肺癌细胞系H446/DDP多药耐药性的影响 被引量:7
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作者 戢福云 钱桂生 +4 位作者 钱频 陈琰 郭芮伶 李淑萍 黄桂君 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期156-160,共5页
目的探讨bc l-2表达上调对人小细胞肺癌(SCLC)多药耐药的影响及相关机制。方法通过定向克隆方法,构建bc l-2正义RNA真核表达载体pLXSN-bc l-2;同时,体外合成bc l-2反义硫代磷酸寡核苷酸(AS-PS-ODNs),然后采用脂质体分别将其转染至人SCLC... 目的探讨bc l-2表达上调对人小细胞肺癌(SCLC)多药耐药的影响及相关机制。方法通过定向克隆方法,构建bc l-2正义RNA真核表达载体pLXSN-bc l-2;同时,体外合成bc l-2反义硫代磷酸寡核苷酸(AS-PS-ODNs),然后采用脂质体分别将其转染至人SCLC H446细胞及H446/DDP细胞,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和W estern b lot方法检测转染细胞中bc l-2 mRNA和蛋白的表达水平;流式细胞仪DNA倍性分析观察顺铂(DDP)诱导转染细胞凋亡情况。转染时细胞分3组,pLXSN-bc l-2转染组[或bc l-2 AS-PS-ODNs转染组(AS-PS-ODNs转染组)]、pLXSN转染组[或bc l-2无义硫代磷酸寡核苷酸转染组(NS-PS-ODNs转染组)]和对照组(H446细胞组、H446/DDP细胞组)。结果(1)W estern b lot检测结果表明,对照H446细胞组、pLXSN转染组、pLXSN-bc l-2转染组间Bc l-2蛋白表达水平差异有统计学意义(F=11 221,P<0.05)。转染pLXSN-bc l-2的H446细胞强表达Bc l-2蛋白(灰度值0.854±0.016),与对照H446细胞组(灰度值为0.103±0.005)相比差异有统计学意义(t=2.45,P<0.01);NS-PS-ODNs转染组的H446/DDP细胞,AS-PS-ODNs转染组的H446/DDP细胞,对照H446/DDP细胞组间Bc l-2蛋白表达水平差异有统计学意义(F=11 028,P<0.01)。转染bc l-2AS-PS-ODNs的H446/DDP细胞表达Bc l-2蛋白水平(灰度值为0.695±0.014),与对照H446/DDP细胞组(灰度值为0.942±0.018)相比,显著下降(t=2.26,P<0.01),但仍高于亲代H446细胞Bc l-2表达水平(t=2.31,P<0.01)。(2)流式细胞仪DNA倍性分析结果显示,转染pLXSN-bc l-2的H446细胞,经5μg/m l DDP诱导后凋亡率为(20.9±0.2)%,明显低于对照H446细胞组的(31.1±0.21)%,差异有统计学意义(t=2.45,P<0.01);5μg/m l DDP诱导转染AS-PS-ODNs的H446/DDP细胞的凋亡率为(31.5±0.4)%,对照H446/DDP细胞组的凋亡率为(9.0±0.1)%,转染细胞的凋亡率显著增加(P<0.05)。结论靶向性抑制抗凋亡相关基因bc l-2的表达可能是克服SCLC化疗耐药的重要的基因治疗方法之一。 展开更多
关键词 小细胞 细胞系 h446 多药耐药细胞系 h446/DDP 药物耐药性 药物 筛选试验 抗肿瘤 基因 BCL-2
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肺癌细胞株APC基因启动子甲基化对其转录的影响 被引量:10
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作者 张丽霞 潘世扬 +7 位作者 陈丹 谢而付 高丽 束永前 陆祖宏 程璐 杨迪 张寄南 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第6期576-580,共5页
背景与目的:抑癌基因家族性腺瘤样结肠息肉病易感基因(adenomatous polyposis coli,APC)启动子区的高甲基化在很多肿瘤中被发现,与这些肿瘤的发生发展相关。本实验室在肺癌患者肿瘤组织中检测到APC甲基化率达47%,为了研究其在肺癌细胞... 背景与目的:抑癌基因家族性腺瘤样结肠息肉病易感基因(adenomatous polyposis coli,APC)启动子区的高甲基化在很多肿瘤中被发现,与这些肿瘤的发生发展相关。本实验室在肺癌患者肿瘤组织中检测到APC甲基化率达47%,为了研究其在肺癌细胞株中的甲基化情况,并进一步了解甲基化对其转录的影响,本研究检测了3株肺癌细胞的抑癌基因APC启动子甲基化状态及其对该基因转录水平的影响。方法:提取3株肺癌细胞株(肺腺癌细胞株SPC-A1、小细胞肺癌细胞株NCI-H446、大细胞肺癌细胞株NCI-H460)的DNA,以经转甲基处理和未做处理的脐带血DNA为阳性、阴性对照,亚硫酸氢盐化学修饰后,用甲基化特异性基因扩增(methylation specific-polymerase chain reaction,MSP)和甲基化基因芯片对APC基因启动子1ACpG岛甲基化进行研究,并用实时荧光定量PCR(real time-polymerase chain reaction)技术,以Sybr-GreenⅠ为荧光染料,β-actin基因为内参照,检测mRNA转录;对甲基化阳性的NCI-H460细胞,分别用1、5、10、15μmol/L的5′-杂氮-2'-脱氧胞嘧啶(5-aza-2-deoxycytidine,5-aza-dC)试剂进行脱甲基化,提取RNA,荧光定量检测其转录变化。结果:SPC-A1和NCI-H446细胞APC甲基化阴性,NCI-H460细胞APC甲基化阳性;甲基化芯片检测NCI-H460细胞在APC启动子1A5个CpG位点均存在甲基化(687、707、714、719、726),SPC-A1和NCI-H446甲基化阴性,荧光定量结果NCI-H460的APC转录较SPC-A1和NCI-H446有明显的下降,仅为二者平均的30.04%;经5-aza-dC脱甲基化作用后,NCI-H460细胞的APC表达增加了约5~10倍,其中10μmol/L浓度作用下,APC表达增加最多。结论:肺癌细胞株NCI-H460中存在APC基因高甲基化,5-aza-dC脱甲基化试剂可以激活其转录。 展开更多
关键词 肺癌细胞株 APC MSP 甲基化芯片 5-AZA-DC 实时荧光定量PCR
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辐射相关基因芯片的制备及其在肺癌细胞中的应用 被引量:6
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作者 郭万峰 林汝仙 +2 位作者 黄坚 郭国祯 王升启 《中华放射医学与防护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期107-110,共4页
目的寻找参与肺癌细胞辐射抗性的基因。方法构建辐射相关的基因芯片,初步筛选出在不同辐射敏感性肺癌细胞系中差异表达的基因。为了评价芯片结果的可靠性,我们对一些差异表达基因进行了RTPCR验证。结果和辐射敏感的NCIH446细胞相比,辐... 目的寻找参与肺癌细胞辐射抗性的基因。方法构建辐射相关的基因芯片,初步筛选出在不同辐射敏感性肺癌细胞系中差异表达的基因。为了评价芯片结果的可靠性,我们对一些差异表达基因进行了RTPCR验证。结果和辐射敏感的NCIH446细胞相比,辐射抗性的A549中有18个基因有明显的改变,8个基因是上调,10个基因是下调。在照射后6h和24h,A549细胞中分别有22个基因(19个基因上调,3个下调)和26个基因(8个上调,18个下调)的差异表达;NCIH446细胞中分别有17个基因(9个基因上调,8个下调)和18个基因(6个上调,12个下调)差异表达。从这些基因中,我们发现一些参与细胞增殖和抗凋亡的基因,在照射后的A549细胞中是增高的,而在NCIH446细胞中是降低的。另外一些参与DNA修复的基因,在A549中比在NCIH446细胞中有更高的表达。结论一些参与细胞DNA修复、细胞周期调控、细胞增殖和抗凋亡作用的基因可能有助于A549细胞辐射抗性的形成。 展开更多
关键词 基因芯片 相关 h446细胞 A549细胞 DNA修复 制备 辐射抗性 RT-PCR 差异表达基因 细胞周期调控 细胞增殖 肺癌细胞系 辐射敏感性 抗凋亡作用 初步筛选 上调 下调 可靠性 24h 照射
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旋毛虫排泄分泌蛋白对小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡的影响 被引量:8
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作者 常红敏 赵蕾 +4 位作者 王小杰 方艳辉 李丹 罗婧梅 杜娈英 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期299-303,共5页
目的研究旋毛虫肌幼虫排泄分泌蛋白对人小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡的影响。方法旋毛虫肌幼虫培养24 h,收集培养液,取上清,即为旋毛虫肌幼虫排泄分泌蛋白。将人小细胞肺癌NCI-H446细胞(编号A054)随机分为3组,实验组(A组)和细胞凋亡组(B... 目的研究旋毛虫肌幼虫排泄分泌蛋白对人小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡的影响。方法旋毛虫肌幼虫培养24 h,收集培养液,取上清,即为旋毛虫肌幼虫排泄分泌蛋白。将人小细胞肺癌NCI-H446细胞(编号A054)随机分为3组,实验组(A组)和细胞凋亡组(B组)的NCI-H446细胞(5×106/ml)分别与旋毛虫排泄分泌蛋白(终浓度为0.3 mg/ml)和顺铂(6.4μg/ml)共培养24 h,空白对照组(C组)的NCI-H446细胞培养24 h,不作任何处理。RT-PCR检测3组NCI-H446细胞中凋亡抑制基因Bcl-2、凋亡相关基因Fas和Fas配体(Fasl)mRNA的表达水平。以抗原癌基因C-myc标签鼠单克隆抗体为一抗,蛋白质印迹(Western blotting)检测3组细胞C-myc蛋白的表达情况。免疫荧光检测3组NCI-H446细胞中C-myc蛋白阳性表达情况。结果 RT-PCR结果显示,经旋毛虫排泄分泌蛋白处理的NCI-H446细胞(A组),Bcl-2 mRNA相对表达水平最低,为(0.575±0.047),与B(0.850±0.073)、C组(0.975±0.069)比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。A组Fas mRNA相对表达量最高,为(0.975±0.115),B(0.817±0.121)、C组(0.769±0.061)相对较低(P<0.05)。A、B和C组细胞Fasl mRNA相对表达水平分别为0.669±0.051、0.787±0.124、0.875±0.125(P<0.05)。A、B和C组细胞Fas/Fasl mRNA比值分别为1.475、1.038和0.878。Western blotting分析结果显示,A组C-myc相对表达水平最低(0.566±0.054),B(1.074±0.069)、C组(1.172±0.026)相对较高(P<0.05)。免疫荧光定位结果显示,旋毛虫排泄分泌蛋白和顺铂作用后24 h,C-myc蛋白在细胞浆/细胞核表达。结论旋毛虫排泄分泌蛋白可促进人小细胞肺癌细胞系NCI-H446细胞凋亡,可能是通过调节凋亡蛋白C-myc表达、进而抑制Bcl-2 mRNA的表达并调节Fas/Fasl mRNA比例来实现的。 展开更多
关键词 旋毛虫 排泄分泌蛋白 小细胞肺癌 NCI-h446 凋亡基因 凋亡蛋白
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