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牙周炎牙龈组织基质金属蛋白酶活性及蛋白表达的研究 被引量:10
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作者 李莉娜 尹丽媛 +1 位作者 潘亚平 贾心善 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2002年第6期305-307,共3页
目的 :探讨来源于宿主的基质金属蛋白酶 (MMPs)在牙周炎发病机制中的作用。方法 :利用明胶酶活性分析 (zymography)和免疫组化方法 ,检测 15例牙周炎患者牙龈组织中和 4例健康牙龈中MMP - 2、MMP - 9的酶活性及蛋白表达。结果 :牙周炎... 目的 :探讨来源于宿主的基质金属蛋白酶 (MMPs)在牙周炎发病机制中的作用。方法 :利用明胶酶活性分析 (zymography)和免疫组化方法 ,检测 15例牙周炎患者牙龈组织中和 4例健康牙龈中MMP - 2、MMP - 9的酶活性及蛋白表达。结果 :牙周炎牙龈组织以及正常的牙龈组织中均能检测到MMP - 2、MMP - 9的前体形式 (pro -MMP - 2和pro -MMP - 9) ,只有在牙周炎牙龈组织中发现活化形式的MMP - 2 ,没有见到活化形式的MMP - 9。免疫组化结果显示 :15例成人牙周炎组牙龈组织中MMP - 2在炎性结缔组织中较正常牙龈阳性表达 ,而且经图像分析较正常牙龈组织MMP - 2阳性细胞表达显著增强 (P <0 .0 0 5 )。结论 :提示基质金属蛋白酶MMP - 2参与牙周组织破坏过程 ,在细胞外基质的降解。 展开更多
关键词 牙周炎 基质金属蛋白酶 凝胶酶谱 免疫组化
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免疫组化、明胶酶谱、Western Blot检测涎腺肿瘤中基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9表达的比较与评价 被引量:10
2
作者 田鲲 彭敏 +1 位作者 陈宇 耿宁 《实用医院临床杂志》 2010年第5期17-21,共5页
目的评价免疫组化、明胶酶谱、Western blot检测涎腺良恶性肿瘤中基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9表达的优点与局限性。方法分别运用免疫组化、明胶酶谱、Western blot对34例涎腺良恶性肿瘤进行MMP-2、MMP-9定位、半定量、定量检测和活性酶... 目的评价免疫组化、明胶酶谱、Western blot检测涎腺良恶性肿瘤中基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9表达的优点与局限性。方法分别运用免疫组化、明胶酶谱、Western blot对34例涎腺良恶性肿瘤进行MMP-2、MMP-9定位、半定量、定量检测和活性酶含量的分析,比较各方法检测结果的差异。结果免疫组化方法能定位、半定量检测出基质金属蛋白酶在良恶性肿瘤间的差异;Western blot能定量说明基质金属蛋白酶在良恶性肿瘤间的差异;明胶酶谱法能检测出MMP-2、MMP-9酶原和活性酶在良恶性肿瘤间的差异。结论免疫组化、Western blot、明胶酶谱三种方法结合,既发挥免疫组化细胞定位的优势,又克服了免疫组化法非精确定量的弱点,并打破其不能辨别酶原与活性酶的局限性,更加客观准确反映各型肿瘤组织中MMP-2、MMP-9的实际表达。 展开更多
关键词 免疫组化 明胶酶谱 WESTERNBLOT 涎腺肿瘤 基质金属蛋白酶
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乌司他丁对脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障通透性和MMP-9活性的影响 被引量:9
3
作者 李青 白宏英 +1 位作者 曾志磊 王波 《中风与神经疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期123-125,共3页
目的观察乌司他丁对大鼠局灶脑缺血再灌注损伤后血脑屏障(BBB)通透性和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)活性的影响。方法采用栓线法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,腹腔注射乌司他丁,于脑缺血再灌注后6h、24h、48h、72h处死大鼠,通过测定... 目的观察乌司他丁对大鼠局灶脑缺血再灌注损伤后血脑屏障(BBB)通透性和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)活性的影响。方法采用栓线法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,腹腔注射乌司他丁,于脑缺血再灌注后6h、24h、48h、72h处死大鼠,通过测定损伤侧脑组织中伊文思蓝(EB)含量来观察BBB通透性的改变,用明胶酶谱法检测同侧脑部MMP-9活性变化。结果脑缺血再灌注损伤后,大鼠EB含量增加,24h最明显;MMP-9活性明显升高,48h达高峰。乌司他丁处理组EB含量及MMP-9活性水平明显低于脑缺血再灌注组(P<0.05)。结论乌司他丁可抑制脑缺血再灌注后大鼠MMP-9的活性,减轻BBB通透性的破坏。 展开更多
关键词 乌司他丁 基质金属蛋白酶9 血脑屏障 明胶酶谱
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蓝圆鲹肌肉中丝氨酸蛋白酶的分离纯化及性质研究 被引量:6
4
作者 王梦想 钟婵 +3 位作者 蔡秋凤 刘光明 苏文金 曹敏杰 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2012年第19期58-62,67,共6页
鱼类死后肌肉容易发生软化现象。研究表明,这与肌肉中的丝氨酸蛋白酶有着密切的关系。本研究通过硫酸铵盐析、DEAE-Sephacel、Q-Sepharose及Capto Q等柱层析相结合的方法,从蓝圆鲹肌肉中纯化得到一种具有分解明胶能力的丝氨酸蛋白酶,SDS... 鱼类死后肌肉容易发生软化现象。研究表明,这与肌肉中的丝氨酸蛋白酶有着密切的关系。本研究通过硫酸铵盐析、DEAE-Sephacel、Q-Sepharose及Capto Q等柱层析相结合的方法,从蓝圆鲹肌肉中纯化得到一种具有分解明胶能力的丝氨酸蛋白酶,SDS-PAGE结果显示其分子量约为60ku,该酶最适温度及最适pH分别为40℃和9.0。丝氨酸蛋白酶抑制剂Pefabloc SC、Benzamidine、MBTI、PMSF和LBTI均能明显的抑制该酶的活性,而其他蛋白酶抑制剂对其活性没有明显的影响。底物特异性表明其能有效的降解丝氨酸蛋白酶荧光底物Boc-Leu-Lys-Arg-MCA,但进一步研究发现,该酶对I型胶原蛋白及明胶有明显的分解能力,同时对肌球蛋白重链也有一定的分解作用,说明该酶可能参与鱼肉保鲜中肌肉软化的过程。 展开更多
关键词 蓝圆鲹 丝氨酸蛋白酶 明胶酶谱 纯化 性质分析
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鲤鱼红色肉中金属蛋白酶的分离纯化与性质分析 被引量:6
5
作者 伍久林 卢宝驹 +3 位作者 杜明华 刘光明 苏文金 曹敏杰 《集美大学学报(自然科学版)》 CAS 2008年第4期289-294,共6页
通过硫酸铵盐析、DEAE—Sephacel离子交换、Sephacryl S-200凝胶过滤、High-Q离子交换和Gelatin—Sepharose亲和层析等方法,从鲤鱼红色肉中纯化得到分子量为75ku的金属蛋白酶.该酶在碱性条件下显示活性,活性温度范围为30~50℃.金... 通过硫酸铵盐析、DEAE—Sephacel离子交换、Sephacryl S-200凝胶过滤、High-Q离子交换和Gelatin—Sepharose亲和层析等方法,从鲤鱼红色肉中纯化得到分子量为75ku的金属蛋白酶.该酶在碱性条件下显示活性,活性温度范围为30~50℃.金属蛋白酶抑制剂EDTA和EGTA能够完全抑制该酶的活性,而其他蛋白酶类抑制剂则不起抑制作用.进一步研究发现,该酶能够有效分解Ⅰ型胶原蛋白和明胶,说明其在鱼体死后肌肉软化过程中起着重要作用. 展开更多
关键词 鲤鱼 明胶酶谱 金属蛋白酶 纯化 性质分析 胶原蛋白
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基质金属蛋白酶-2在退变椎间盘髓核组织中的表达 被引量:4
6
作者 王子亮 庄文权 +1 位作者 陈伟 杨建勇 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期557-559,共3页
【目的】检测退变椎间盘髓核组织中MMP-2的表达,进一步阐明椎间盘退变的机制。【方法】利用RT-PCR、Westernblot技术和明胶酶谱法对45例退变椎间盘髓核、12例非突出椎间盘髓核的MMP-2进行了检测。【结果】正常髓核内有一定量的MMP-2表达... 【目的】检测退变椎间盘髓核组织中MMP-2的表达,进一步阐明椎间盘退变的机制。【方法】利用RT-PCR、Westernblot技术和明胶酶谱法对45例退变椎间盘髓核、12例非突出椎间盘髓核的MMP-2进行了检测。【结果】正常髓核内有一定量的MMP-2表达,退变髓核MMP-2mRNA、蛋白质表达水平和酶活性明显升高,分别是正常组的2.30,2.01和1.75倍,差异显著(P<0.01,P<0.01,P<0.01)。【结论】MMP-2和髓核退变关系密切。 展开更多
关键词 髓核组织 MMP-2 退变椎间盘 蛋白质表达 正常 基质金属蛋白酶-2 blot技术 RNA 酶活性 RT-PCR
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冬凌草甲素对人乳腺癌细胞侵袭的抑制作用及机制 被引量:5
7
作者 彭延延 施秋萍 +2 位作者 杨大朋 王海啸 马长艳 《苏州大学学报(医学版)》 CAS 2012年第3期318-321,375,共5页
目的检测冬凌草甲素对人乳腺癌细胞MDA-MB 231侵袭的影响并探讨其作用的分子机制。方法用Transwell实验检测冬凌草甲素对人乳腺癌细胞MDA-MB 231侵袭的影响;明胶酶谱实验检测冬凌草甲素对基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP... 目的检测冬凌草甲素对人乳腺癌细胞MDA-MB 231侵袭的影响并探讨其作用的分子机制。方法用Transwell实验检测冬凌草甲素对人乳腺癌细胞MDA-MB 231侵袭的影响;明胶酶谱实验检测冬凌草甲素对基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)酶活性的影响;荧光素酶报告基因实验检测冬凌草甲素对MMP-2和MMP-9启动子活性的影响。结果冬凌草甲素明显抑制MDA-MB 231细胞的侵袭,且明显下调MMP-2和MMP-9的启动子活性和酶活性(P<0.05或<0.01)。结论冬凌草甲素能显著抑制乳腺癌细胞的侵袭,且这种抑制作用可能通过下调MMP-2和MMP-9的启动子活性和酶活性而实现。 展开更多
关键词 冬凌草甲素 乳腺癌 侵袭 明胶酶谱 荧光素酶报告基因分析
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Matrix Metalloproteinase MMP-9 Promotes K/BxN Serum Induced Arthritis in Mice 被引量:2
8
作者 Narendiran Rajasekaran Harald Illges 《Open Journal of Rheumatology and Autoimmune Diseases》 2014年第1期22-28,共7页
Matrix metalloproteinases (MMPs) are matrix-degrading enzymes that are over-expressed in joints of rheumatoid arthritis (RA) patients. However, the contribution of specific MMPs for the development of arthritic joints... Matrix metalloproteinases (MMPs) are matrix-degrading enzymes that are over-expressed in joints of rheumatoid arthritis (RA) patients. However, the contribution of specific MMPs for the development of arthritic joints is unknown. This study is aimed at studying the role of matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) in mice, using the K/BxN serum-transfer model of RA. Arthritis was induced in Balb/c mice by injecting K/BxN serum. Development of arthritis was followed in these mice by measuring ankle thickness and clinical index score. MMP-9 expression in the joints of mice killed at various time points during the disease progression was determined by gelatin zymography using ankle lysates. We found that MMP-9 expression increased with the severity of arthritis. Importantly MMP-9 deficient mice injected with K/BxN serum showed a milder form of arthritis in comparison to the control C57BL/6 mice injected with K/BxN serum. We therefore conclude that MMP-9 promotes arthritis in mice. 展开更多
关键词 MMP-9 ANTIBODY INDUCED ARTHRITIS K/BxN gelatin zymography
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TGF-β_1在后发性白内障形成中的作用——TGF-β_1对牛晶状体上皮细胞明胶酶表达的影响 被引量:1
9
作者 杨鑫 郭海科 +1 位作者 金海鹰 张洪洋 《眼外伤职业眼病杂志》 北大核心 2004年第4期220-222,共3页
目的 探讨转化生长因子 β1(TGF β1)对牛晶状体上皮细胞明胶酶活性的影响及其在后发性白内障形成中的作用。方法 对牛晶状体上皮细胞进行体外原代及传代培养。分别收集原代、1代、2代、3代体外培养牛晶状体上皮细胞培养液 ;对1代细... 目的 探讨转化生长因子 β1(TGF β1)对牛晶状体上皮细胞明胶酶活性的影响及其在后发性白内障形成中的作用。方法 对牛晶状体上皮细胞进行体外原代及传代培养。分别收集原代、1代、2代、3代体外培养牛晶状体上皮细胞培养液 ;对1代细胞加入TGF β1(终浓度 10ng/mL) ,收集 12h、2 4h、3 6h、48h和 72h细胞培养液 ,酶谱法检测明胶酶活性。结果 不加TGF β1的原代、1代、2代、3代细胞培养液中未检测到明胶酶活性 ;加入TGF β1后各个时间点均能检测到明胶酶活性 ,且条代密度随时间呈上升趋势。结论 TGF β1能够诱导牛晶状体上皮细胞明胶酶的表达。TGF β1和明胶酶共同作用 ,可能加速后发性白内障的形成。 展开更多
关键词 TGF-Β1 后发性白内障 TGF-Β1 牛晶状体上皮细胞 明胶酶 表达
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基质金属蛋白酶在牙髓炎症中的活性及表达 被引量:2
10
作者 冯瑾 陈新梅 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期610-613,共4页
目的探讨来源于宿主的基质金属蛋白酶在牙髓炎发病机制中的作用。方法利用免疫组化和明胶酶谱法,检测健康和炎症牙髓中MMP-2、MMP-9的表达定位及酶活性。结果MMP-2、MMP-9在正常和炎症牙髓中均有表达,定位于成牙本质细胞及牙髓成纤维细... 目的探讨来源于宿主的基质金属蛋白酶在牙髓炎发病机制中的作用。方法利用免疫组化和明胶酶谱法,检测健康和炎症牙髓中MMP-2、MMP-9的表达定位及酶活性。结果MMP-2、MMP-9在正常和炎症牙髓中均有表达,定位于成牙本质细胞及牙髓成纤维细胞,炎症浸润区表达强阳性。明胶酶谱分析,MMP-9酶原在正常和炎症牙髓均被检测到,且炎症组表达高于正常组。结论MMP-9可能参与牙髓组织破坏过程,在炎症牙髓组织降解过程中起重要作用。 展开更多
关键词 牙髓炎 基质金属蛋白酶 凝胶酶谱 免疫组化
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人脑胶质瘤中MMP-2与MMP-9酶活性改变和蛋白的表达及其意义 被引量:3
11
作者 王力夫 孔令非 +1 位作者 赵跃武 刘正国 《河南医学研究》 CAS 2006年第2期101-105,共5页
目的:探讨基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)与基质金属蛋白酶9(matrix metallopro-teinase 9,MMP-9)的表达与人脑胶质瘤恶性行为之间的关系。方法:采用明胶酶谱与免疫组化方法对50例人脑胶质瘤和4例正常脑组织中的MM... 目的:探讨基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)与基质金属蛋白酶9(matrix metallopro-teinase 9,MMP-9)的表达与人脑胶质瘤恶性行为之间的关系。方法:采用明胶酶谱与免疫组化方法对50例人脑胶质瘤和4例正常脑组织中的MMP-2及MMP-9进行检测。结果:各级别组中,MMP-2和MMP-9的酶原形式无差别;在正常、Ⅰ级和Ⅱ级的胶质瘤组织中无活性酶存在,在Ⅲ级和Ⅳ级胶质瘤组织中,MMP-2活性酶的含量分别为42.586±10.245A.mm2/g.L和62.983±6.454A.mm2/g.L,MMP-9酶的含量分别为74.559±8.398A.mm2/g.L和176.117±11.922A.mm2/g.L,经免疫组化染色,从正常脑组织到Ⅳ级胶质瘤组织,MMP-2的阳性率分别为25%,0,23.8%,70%,87.5%;MMP-9的阳性率为0,33.3%,19%,60%,87.5%,MMP-2,9的酶含量及阳性率在各级别中的差异具有统计学意义。结论:在人脑胶质瘤中,MMP-2和MMP-9酶的活性变化与其病理分级密切相关,可作为判断胶质瘤恶性程度的重要参考指标。 展开更多
关键词 胶质瘤 明胶酶谱 基质金属蛋白酶2 基质金属蛋白酶9
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胶质母细胞瘤中MMP-2中介体与肿瘤细胞侵袭力的相关性 被引量:3
12
作者 王力夫 张俊霞 +2 位作者 龚智泉 赵跃武 孔令非 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期426-430,共5页
目的探讨胶质母细胞瘤中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)活性酶及其中介体对原代培养肿瘤细胞侵袭力的影响。方法对21例胶质母细胞瘤组织进行明胶酶谱检测、原代培养及Boyden小室侵袭性实验,分析MMP-2酶原、活性酶... 目的探讨胶质母细胞瘤中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)活性酶及其中介体对原代培养肿瘤细胞侵袭力的影响。方法对21例胶质母细胞瘤组织进行明胶酶谱检测、原代培养及Boyden小室侵袭性实验,分析MMP-2酶原、活性酶及其中介体与原代培养肿瘤细胞侵袭能力之间的关系。结果 21例胶质母细胞瘤组织中9例出现MMP-2中介体,有中介体表达组原代培养的肿瘤细胞侵袭能力高于无中介体表达组(F=15.275,P=0.001),MMP-2活性酶的含量与各时段肿瘤细胞侵袭力均呈正相关(r均>0,P均<0.05),pro-MMP-2及中介体含量与肿瘤细胞侵袭力无相关性(P>0.05)。结论胶质母细胞瘤组织中MMP-2活性酶的含量及中介体的有无是决定肿瘤细胞侵袭能力的关键因素。 展开更多
关键词 胶质瘤 明胶酶谱 原代培养 MMP-2中介体 侵袭性
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高级别胶质瘤中基质金属蛋白酶-2及其中介体含量与预后相关分析 被引量:3
13
作者 王力夫 孔令非 赵跃武 《中华实用诊断与治疗杂志》 2011年第10期955-957,共3页
目的探讨高级别胶质瘤中基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2活性及其中介体与患者预后的关系。方法 26例高级别胶质瘤患者,进行明胶酶谱定量检测,将MMP-2及其中介体的表达情况与患者术后生存时间进行统计学分析。结果Ⅲ级... 目的探讨高级别胶质瘤中基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2活性及其中介体与患者预后的关系。方法 26例高级别胶质瘤患者,进行明胶酶谱定量检测,将MMP-2及其中介体的表达情况与患者术后生存时间进行统计学分析。结果Ⅲ级和Ⅳ级胶质瘤MMP-2水平差异有统计学意义(P=0.000),MMP-2水平与分级呈正相关(rs=0.727,P=0.000);Ⅲ级和Ⅳ级胶质瘤中均有MMP-2中介体出现,在Ⅳ级胶质瘤中出现中介体的患者生存时间少于未出现中介体的患者(P=0.002);Cox回归分析显示,高级别胶质瘤中MMP-2的水平及其中介体的有无是影响患者生存时间的独立预后因子(P=0.003,P=0.004)。结论高级别胶质瘤中MMP-2水平与其中介体的存在与否是影响患者术后生存时间的重要因素。 展开更多
关键词 胶质瘤 明胶酶谱 基质金属蛋白酶-2 基质金属蛋白酶-2中介体 预后
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高温蛋白酶生产菌BY25不同培养基下产酶差异研究 被引量:3
14
作者 朱泓 王一明 +1 位作者 林先贵 高云才 《土壤》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期899-904,共6页
枯草芽孢杆菌是一种广泛存在于土壤中的产酶细菌,在环境领域也具有广阔的应用前景。本文以一株产高温蛋白酶枯草芽孢杆菌BY25为研究对象,比较添加不同有机氮源的产酶培养基进行发酵时,各处理中枯草芽孢杆菌胞外蛋白酶的组成和产量的差异... 枯草芽孢杆菌是一种广泛存在于土壤中的产酶细菌,在环境领域也具有广阔的应用前景。本文以一株产高温蛋白酶枯草芽孢杆菌BY25为研究对象,比较添加不同有机氮源的产酶培养基进行发酵时,各处理中枯草芽孢杆菌胞外蛋白酶的组成和产量的差异;并对不同培养基发酵液的粗酶液组分进行酶学性质分析和明胶酶谱检测。结果表明,枯草芽孢杆菌BY25在不同培养基条件下会出现差异性产酶,产酶培养基中添加麸皮有利于中性金属蛋白酶(Npr)的产生,而添加豆饼粉则有利于枯草菌素(Apr)的产生。 展开更多
关键词 明胶酶谱 产酶培养基 酶学性质 丝氨酸蛋白酶
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口腔癌成纤维细胞对口腔癌细胞MMP-2、9表达的影响 被引量:1
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作者 施琳 孙善珍 +2 位作者 王东关 王霞 王振光 《临床口腔医学杂志》 2005年第8期456-459,共4页
目的:研究口腔癌成纤维细胞对口腔癌细胞MMP-2、9表达的影响。方法:采用明胶酶谱法和免疫细胞化学法分析MMP-2、MMP-9在口腔癌细胞与口腔癌成纤维细胞(CAFs)中共培养前后表达的变化。结果:①单独培养的Tca-8113细胞中未检测到MMP-2、9表... 目的:研究口腔癌成纤维细胞对口腔癌细胞MMP-2、9表达的影响。方法:采用明胶酶谱法和免疫细胞化学法分析MMP-2、MMP-9在口腔癌细胞与口腔癌成纤维细胞(CAFs)中共培养前后表达的变化。结果:①单独培养的Tca-8113细胞中未检测到MMP-2、9表达,单独培养的CAFs中只检测到微弱活性的MMP-2,未检测到活性形式的MMP-9。直接共培养后,上清液中MMP-9的活性随CAFs细胞数量的增加而增加,各条带的平均积分灰度值分别为82.15±0.45、96.40±0.32、103.87±0.47,各组间比较有显著性差异(P<0.05)。而MMP-2活性略有升高。间接共培养后,MMP-2的活性随CAFs细胞数量的增加而增加,各条带的平均积分灰度值分别为84.15±0.25、94.40±0.38、105.87±0.57,各组间比较有显著性差异(P<0.05)。未检测到活性形式的MMP-9。②免疫组化结果表明直接共培养(1∶3比例)后,Tca-8113表达MMP-9较对照组增强,尤其在被CAFs环绕的Tca-8113表达更强。间接共培养(1∶3比例)后,Tca-8113表达MMP-2也较对照组增强。结论:MMP-2表达增加可能受到源自口腔癌相关成纤维细胞可溶性因子的旁分泌介导,而MMP-9表达可能需要口腔癌细胞与癌相关成纤维细胞的直接接触。 展开更多
关键词 口腔癌 共培养 明胶酶 基质金属蛋白酶 明胶酶谱
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Amlodipine inhibits matrix metalloproteinases expression and secretion in mouse macrophage
16
作者 Yamin CAO Shiwen WANG Haiyun WU 《Journal of Geriatric Cardiology》 SCIE CAS CSCD 2005年第4期240-242,共3页
Objective To investigate whether the calcium channel blocker amlodipine could inhibit macrophage matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) and matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) expression and secretion. Methods Peritoneal m... Objective To investigate whether the calcium channel blocker amlodipine could inhibit macrophage matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) and matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) expression and secretion. Methods Peritoneal macrophages were isolated from BALB/C mice and incubated with low (5μg/L ), middle (15μg/L) and high (305μg/L) concentrations of amlodipine, or in the medium alone (controls) for 24 hours, and the expression and secretion of MMP-2 and MM-9 of the cells were analyzed by RT-PCR and gelatin zymography. Results Compared with controls, amlodipine at low concentration had no significant effects on the expression and secretion of either MMP-2 and MMP-9 (P>0.05) at middle concentrationit it could inhibited MMP-2 and MMP-9 expressions completely and significantly reduced the secretion of MMP-9 (P<0.05); but it had no effect on the secretion of MMP-2. At high concentration it also inhibited MMP-2 and MMP-9 expression completely. Conclusion Amlodipine at 15 ig/L inhibited the expression of MMP-2 and MMP-9 and reduced the secretion of MMP-9, suggesting that amlodipine may stabilize atherosclerotic plaque. 展开更多
关键词 AMLODIPINE macrophage matrix METALLOPROTEINASE reverse transcriptase POLYMERASE chain reaction gelatin zymography.
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优化明胶酶谱法检测自发性高血压大鼠血浆MMP-2和MMP-9活性 被引量:2
17
作者 李炳蔚 苑晓晨 +4 位作者 王冰 秦伟伟 李宏伟 刘淑英 修瑞娟 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2013年第7期845-848,共4页
目的以优化明胶酶谱法检测自发性高血压大鼠(SHR)血浆基质金属蛋白酶-2(MMP-2)与-9(MMP-9)的活性。方法以含明胶的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳酶谱法为基础,改变孵育时间、工作液成份,采用不同pH值的孵育液及不同冻融次数的样品,观察对基质... 目的以优化明胶酶谱法检测自发性高血压大鼠(SHR)血浆基质金属蛋白酶-2(MMP-2)与-9(MMP-9)的活性。方法以含明胶的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳酶谱法为基础,改变孵育时间、工作液成份,采用不同pH值的孵育液及不同冻融次数的样品,观察对基质金属蛋白酶(MMPs)活性的影响。并以优化的酶谱法检测Wistar及自发性高血压大鼠血浆MMPs的相对活性。结果凝胶孵育时间由42 h缩短为17 h不影响酶谱法检测结果。省略漂洗步骤及洗脱液仅使用2.5%Triton X-100、孵育液中去除NaN3及NaCl且电泳后步骤将去离子水更换为蒸馏水也不影响实验结果。孵育液pH值在7.2~8.8范围内均可用于酶谱法。血浆样品反复冻融多达6次不影响酶谱法检测结果。用优化的酶谱法检测结果显示,与Wistar大鼠相比,SHR大鼠血浆MMP-2与MMP-9活性显著增高。结论优化酶谱法与常规方法相比更为简便经济,检测大鼠血浆MMP-2与MMP-9活性所得结果一致。 展开更多
关键词 明胶酶谱 基质金属蛋白酶 高血压
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难治性颞叶癫痫患者颞叶皮层金属基质蛋白酶-9的表达 被引量:2
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作者 李松 余思逊 +6 位作者 贺教江 张春青 树海峰 阴金波 刘仕勇 安宁 杨辉 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期492-495,共4页
目的研究成人难治性颞叶癫痫患者颞叶皮层中金属基质蛋白酶-9(MMP-9)的表达,探讨其在难治性癫痫发病中的作用机制。方法收集新桥医院神经外科手术切除的成人难治性颞叶癫痫颞叶皮层标本24例,与15例正常对照皮层比较,运用RT-PCR、明胶酶... 目的研究成人难治性颞叶癫痫患者颞叶皮层中金属基质蛋白酶-9(MMP-9)的表达,探讨其在难治性癫痫发病中的作用机制。方法收集新桥医院神经外科手术切除的成人难治性颞叶癫痫颞叶皮层标本24例,与15例正常对照皮层比较,运用RT-PCR、明胶酶谱法和免疫组织化学方法检测MMP-9在致痫灶中的表达分布。结果在难治性颞叶癫痫患者颞叶皮层中,MMP-9在mRNA、酶活性较对照组明显升高(P<0.05)。免疫组化结果显示,在正常皮层中MMP-9弱至中等强度表达于神经元上,偶见胶质细胞表达,而在致痫灶中强表达于锥体神经元和星形胶质细胞上,免疫染色强度明显高于正常皮层[染色强度值:(2.13±0.56)vs(1.52±0.69);相对光密度值:(55.60±7.20)vs(37.10±8.70);P<0.05]。结论难治性颞叶癫痫患者颞叶致痫皮层中MMP-9表达增高可能与癫痫发病密切相关,有可能成为新的难治性癫痫的药物靶点。 展开更多
关键词 难治性颞叶癫痫 金属基质蛋白酶9 RT-PCR 明胶酶谱法 免疫组织化学
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膀胱癌分子标志物基质金属蛋白酶1的可溶性表达和尿液中的活性分析 被引量:2
19
作者 晋学飞 孔祥波 +2 位作者 张丹 刘婷婷 王凯臣 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2015年第4期582-587,共6页
通过分离人胚胎肾细胞(HEK293)中基质金属蛋白酶1(MMP1)基因序列,利用基因工程技术在大肠杆菌中表达并纯化了包涵体复性的MMP1;采用融合表达硫氧还蛋白(Thioredoxin,Trx A)的方法获得了可溶性的MMP1-Trx A复合蛋白,在Trx A蛋白和MMP1活... 通过分离人胚胎肾细胞(HEK293)中基质金属蛋白酶1(MMP1)基因序列,利用基因工程技术在大肠杆菌中表达并纯化了包涵体复性的MMP1;采用融合表达硫氧还蛋白(Thioredoxin,Trx A)的方法获得了可溶性的MMP1-Trx A复合蛋白,在Trx A蛋白和MMP1活性中心之间引入了一个肠激酶切割位点,通过酶切作用获得可溶性MMP1。明胶酶谱分析法对体外表达的MMP1和体内(尿液中)MMP1进行了分析比较。结果表明,Trx A蛋白能够显著提高MMP1的可溶性,且可溶性MMP1的明胶降解活性是复性的MMP1降解活性的1.54倍,与尿液中的MMP1的明胶酶降解活性相当。因此,明胶酶谱法是一种有效的、高灵敏的MMP1检测方法,所表达的可溶性MMP1为小分子探针筛选提供了更可靠的分子靶点。 展开更多
关键词 膀胱癌生物标志物 基质金属蛋白酶 分子探针筛选 明胶酶谱
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明胶酶谱实验方法的优化 被引量:1
20
作者 章淑平 骆建民 王俐 《生物技术通讯》 CAS 2014年第1期102-104,共3页
目的:优化明胶酶谱实验方法,并检测不同浓度凝血酶刺激人皮肤成纤维细胞分泌的明胶酶B(MMP-9)活性的变化。方法:用含明胶的聚丙烯酰胺凝胶电泳分开上清中各蛋白条带,经2.5%Triton X-100洗脱、明胶酶缓冲液孵育、考马斯亮蓝染色液染色及... 目的:优化明胶酶谱实验方法,并检测不同浓度凝血酶刺激人皮肤成纤维细胞分泌的明胶酶B(MMP-9)活性的变化。方法:用含明胶的聚丙烯酰胺凝胶电泳分开上清中各蛋白条带,经2.5%Triton X-100洗脱、明胶酶缓冲液孵育、考马斯亮蓝染色液染色及脱色液脱色后,经光密度扫描记录,应用ImageJ软件进行密度计量分析。结果:凝血酶刺激人皮肤成纤维细胞分泌MMP-9具有浓度依赖性。结论:利用优化的明胶酶谱实验方法可做出高质量的明胶酶谱图片,对检测明胶酶活性有重要意义。 展开更多
关键词 明胶酶谱 基质金属蛋白酶 聚丙烯酰胺凝胶
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