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大鼠死后脑组织RNA降解与死亡时间推断的研究 被引量:33
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作者 刘季 宋贞柱 +2 位作者 谢润红 任广睦 王英元 《中国法医学杂志》 CSCD 2007年第4期226-228,232,共4页
目的探讨SD大鼠死后脑组织中甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)mRNA、18s rRNA含量的比值与死亡时间(PMI)的关系。方法SD大鼠处死后分别置于15℃、20℃环境中,采用TRIzol试剂提取SD大鼠在死后即刻、1、2、3、5、7d时脑组织中的总RNA,采用RT-PC... 目的探讨SD大鼠死后脑组织中甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)mRNA、18s rRNA含量的比值与死亡时间(PMI)的关系。方法SD大鼠处死后分别置于15℃、20℃环境中,采用TRIzol试剂提取SD大鼠在死后即刻、1、2、3、5、7d时脑组织中的总RNA,采用RT-PCR方法与凝胶图像分析技术检测18s rRNA和GAPDH mRNA的含量,并将二者的比值(GAPDHmRNA/18s rRNA)与PMI进行统计学回归分析。结果SD大鼠死后脑组织中GAPDH mRNA在2d时降解不明显,但到3、5、7d时降解程度显著增加,且随着温度的升高,降解速度增加;而18S rRNA降解缓慢,直到7d仍无显著性降解变化,且降解速度几乎不受温度的影响。对GAPDHmRNA/18s rRNA值(Y)与PMI(X)进行回归相关分析:20℃时,Y=0.62-0.004X(R=-0.981,P<0.001);15℃时,Y=0.965-0.001X(R=-0.709,P<0.001)。结论SD大鼠死后脑组织中GAPDHmRNA和18s rRNA基因的相对稳定性即GAPDHmRNA/18s rRNA值与PMI存在明显相关性。 展开更多
关键词 法医病理学 死后间隔时间 18s RRNA gapdh mRNA RT-PCR
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实时定量RT-PCR检测急性白血病患者骨髓细胞WT1基因表达 被引量:20
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作者 顾伟英 陈子兴 +8 位作者 曹祥山 胡绍燕 朱江 王志林 严峰 王玮 岑建农 沈慧玲 钱军 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第12期728-731,共4页
目的探讨急性白血病 (AL)患者骨髓细胞WT1基因表达水平。方法建立实时定量RT PCR方法 ,检测了 10 8例AL患者和 2 3例非白血病患者骨髓细胞WT1基因及内参照 β 胆色原脱氢酶 (GAPDH)基因的表达水平。结果初诊与复发AL患者骨髓细胞WT1基... 目的探讨急性白血病 (AL)患者骨髓细胞WT1基因表达水平。方法建立实时定量RT PCR方法 ,检测了 10 8例AL患者和 2 3例非白血病患者骨髓细胞WT1基因及内参照 β 胆色原脱氢酶 (GAPDH)基因的表达水平。结果初诊与复发AL患者骨髓细胞WT1基因中位表达水平经GAPDH校正后分别为 75 .10和 89.5 6 ,明显高于完全缓解组和对照组 (分别为 2 .0 7和 1.5 1) ,对照组与完全缓解组之间及初诊与复发组之间无统计学差异 ;70例初诊AL中急性淋巴细胞白血病、M1、M2 、M3 亚型WT1基因表达水平明显高于M5,即粒系表达明显高于单核系 ,且WT1基因表达水平与白细胞计数、骨髓原始细胞比例、mdr1基因表达无相关性 ,但与染色体核型有关。对其中 2例患者动态检测WT1基因表达可提示白血病复发情况。结论WT1基因在AL患者骨髓细胞高表达 ,可作为白血病疗效评价及监测残留病灶的指标。 展开更多
关键词 WT1基因 骨髓细胞 患者 表达水平 AL 初诊 急性白血病 实时定量 gapdh 高表达
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WT1基因水平动态检测对白血病患者异基因骨髓移植后微小残留病监测的意义 被引量:19
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作者 顾伟英 陈子兴 +7 位作者 胡绍燕 朱江 王志林 严峰 王玮 岑建农 沈慧玲 钱军 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期444-447,共4页
目的探讨白血病患者接受异基因骨髓移植(allo BMT)后骨髓中WT1的动态表达水平在监测微小残留病(MRD)中的意义。方法建立实时定量逆转录聚合酶链反应(RT PCR)方法,采用LightCyclerPCR仪检测了15例白血病患者allo BMT前后(111例次)和23例... 目的探讨白血病患者接受异基因骨髓移植(allo BMT)后骨髓中WT1的动态表达水平在监测微小残留病(MRD)中的意义。方法建立实时定量逆转录聚合酶链反应(RT PCR)方法,采用LightCyclerPCR仪检测了15例白血病患者allo BMT前后(111例次)和23例非白血病患者骨髓中WT1及内参GAPDH的表达水平,以WT1N=(WT1拷贝数/GAPDH拷贝数)×104计算WT1表达水平。结果初诊与复发白血病患者骨髓中WT1N的中位表达水平分别为40 18和125 89,明显高于完全缓解组和对照组(分别为4 80和1 47),对照组与完全缓解组之间及初诊与复发组之间差异无统计学意义;动态检测WT1N变化与相应融合基因变化具有很好的相关性, WT1N表达水平再次升高可提前40~180d预示白血病临床复发。结论实时定量RT PCR动态检测WT1在白血病患者allo BMT后骨髓中表达水平,可作为监测残留病的指标,提示复发。 展开更多
关键词 WT1 白血病患者 表达水平 骨髓 复发 微小残留病 监测 实时定量 gapdh PCR仪
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显齿蛇葡萄实时荧光定量PCR内参基因的筛选与验证 被引量:19
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作者 许明 伊恒杰 +3 位作者 赵帅 张玉文 杨志坚 郑金贵 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期1192-1198,共7页
目的筛选适用于显齿蛇葡萄Ampelopsis grossedentata实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)的内参基因。方法设计简并引物,采用RT-PCR从显齿蛇葡萄中克隆6个候选内参基因片段,包括肌动蛋白基因(Actin)、3-... 目的筛选适用于显齿蛇葡萄Ampelopsis grossedentata实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)的内参基因。方法设计简并引物,采用RT-PCR从显齿蛇葡萄中克隆6个候选内参基因片段,包括肌动蛋白基因(Actin)、3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(GAPDH)、18 S核糖体rRNA基因(18 S-rRNA)、α-微管蛋白基因(α-Tubulin)、β-微管蛋白基因(β-Tubulin)和多聚泛素酶基因(UBQ)。应用qRT-PCR技术检测这6个候选内参基因在显齿蛇葡萄不同组织器官中(茎尖、嫩叶、成熟叶、老叶、茎和根)的表达情况。借助Ge Norm、Norm Finder和Best Keeper 3种统计学软件综合评价6个内参基因的表达稳定性。通过苯丙氨酸解氨酶基因(Ag PAL)的表达分析对筛选出的内参基因进行稳定性验证。结果 18 S-rRNA、GAPDH和Actin的表达稳定性较好,适合作为显齿蛇葡萄不同组织基因表达研究的内参基因,以这3个基因为内参基因分析Ag PAL基因的相对表达量,结果发现它们在各组织器官中的表达变化趋势基本一致。结论确定显齿蛇葡萄qRT-PCR分析的合适内参基因,为后续相关基因表达研究奠定基础。 展开更多
关键词 显齿蛇葡萄 实时定量PCR 内参基因 看家基因 肌动蛋白基因 3-磷酸甘油醛脱氢酶基因 18 S核糖体rRNA基因 α-微管蛋白基因 β-微管蛋白基因 多聚泛素酶基因
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实时荧光定量聚合酶链反应技术在产前诊断唐氏综合征中的应用 被引量:12
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作者 郑明明 胡娅莉 +4 位作者 许争峰 王志群 史婷琦 叶晓东 崔恒宓 《中华妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期678-681,共4页
目的探讨实时荧光定量PCR技术用于产前诊断唐氏综合征的可行性。方法采用实时荧光定量PCR法,分别检测85例唐氏综合征高风险的中期妊娠妇女的羊水和7例智残儿外周血标本中,21号染色体上特异区域基因片段(DSCR3)和管家基因片段(GAPDH),并... 目的探讨实时荧光定量PCR技术用于产前诊断唐氏综合征的可行性。方法采用实时荧光定量PCR法,分别检测85例唐氏综合征高风险的中期妊娠妇女的羊水和7例智残儿外周血标本中,21号染色体上特异区域基因片段(DSCR3)和管家基因片段(GAPDH),并计算两者的比值。同时采用细胞遗传学方法分析其染色体核型。结果80例羊水细胞DNA检测DSCR3/GAPDH比值在046~130之间,染色体核型全部正常;而另5例羊水细胞和7例智残儿外周血DSCR3/GAPDH比值明显升高,达164~198,染色体核型均为21三体。5例中有3例核型为47,XY,+21;1例核型为47,XX,+21;另1例为易位型[46,XY,-15,+t(15;21)]。7例智残儿中4例为47,XY+21;3例为47,XX+21。结论实时荧光定量PCR技术可作为产前快速准确诊断唐氏综合征的有效方法。 展开更多
关键词 唐氏综合征 智残 染色体核型 产前诊断 实时荧光定量 羊水细胞 比值 gapdh 21号染色体 聚合酶链反应技术
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氨基胍与葛根素对糖尿病大鼠肾脏结缔组织生长因子表达的影响 被引量:10
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作者 顾秀锋 陆静 刘乃丰 《东南大学学报(医学版)》 CAS 2005年第1期13-16,共4页
目的 :探讨结缔组织生长因子 (CTGF)在糖尿病肾病发病中的作用及葛根素 (Pue)和氨基胍 (AG)对其表达的干预作用。方法 :将 60只雄SD大鼠随机均分成正常对照组、糖尿病组、氨基胍组和葛根素组 ,腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型。... 目的 :探讨结缔组织生长因子 (CTGF)在糖尿病肾病发病中的作用及葛根素 (Pue)和氨基胍 (AG)对其表达的干预作用。方法 :将 60只雄SD大鼠随机均分成正常对照组、糖尿病组、氨基胍组和葛根素组 ,腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型。氨基胍组在建模基础上喂食氨基胍进行干预 ,葛根素组采用腹腔注射葛根素干预。逆转录聚合酶链反应和免疫组织化学法观察各组肾组织中CTGF基因和蛋白的表达。结果 :糖尿病大鼠肾皮质CTGF GAPDHmRNA之值为 0 .44± 0 .0 3 ,明显高于葛根素组的 0 .2 2± 0 .0 2和氨基胍组的 0 .2 3± 0 .0 2 (均P <0 .0 1) ,后两组又高于正常对照组的 0 .16± 0 .0 2 (均P <0 .0 1)。免疫组织化学法显示 ,正常对照组大鼠肾小球CTGF阴性 ,葛根素组和氨基胍组染色相近 ,强于正常对照组 ,但显著弱于糖尿病组。结论 :糖尿病大鼠肾皮质CTGF表达增强 ,可能部分参与糖尿病肾病的发生发展过程 ,氨基胍和葛根素降低CTGF表达的作用可能是其肾脏保护的机理之一。 展开更多
关键词 氨基胍 葛根素 CTGF 糖尿病大鼠 表达 对照组 正常 gapdh RNA 基因
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粘虫飞行过程中四种相关酶的活性变化 被引量:12
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作者 李克斌 高希武 +2 位作者 罗礼智 尹姣 曹雅忠 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期643-647,共5页
对3日龄粘虫雌蛾吊飞过程中4种相关酶3-羟酰辅酶A脱氢酶(HOAD)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、3-磷酸甘油脱氢酶(GDH)和乳酸脱氢酶(LDH)的研究结果表明,在室内条件下,粘虫在吊飞过程中其能量代谢有以下特点: 在吊飞的初始5 min,所有与糖... 对3日龄粘虫雌蛾吊飞过程中4种相关酶3-羟酰辅酶A脱氢酶(HOAD)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、3-磷酸甘油脱氢酶(GDH)和乳酸脱氢酶(LDH)的研究结果表明,在室内条件下,粘虫在吊飞过程中其能量代谢有以下特点: 在吊飞的初始5 min,所有与糖代谢和脂肪代谢相关的酶活性都快速升高,这段时期脂肪代谢的酶活性也完全被活化,HOAD活性明显增强;但在随后的5~60 min持续吊飞期间与能量代谢有关的酶活性都有所下降,表明此时飞行活性趋于平稳.飞行中的粘虫具有极高的有氧代谢能力,也具备一定的无氧代谢能力.吊飞过程中HOAD∶GAPDH大于1,说明粘虫飞行过程中能源物质利用属于混合型,但动用脂肪比糖类要多. 展开更多
关键词 粘虫 吊飞 酶活性 3-羟酰辅酶A脱氢酶 3-磷酸甘油醛脱氢酶
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Critical protein GAPDH and its regulatory mechanisms in cancer cells 被引量:11
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作者 Jin-Ying Zhang Fan Zhang +5 位作者 Chao-Qun Hong Armando E.Giuliano Xiao-Jiang Cui Guang-Ji Zhou Guo-Jun Zhang Yu-Kun Cui 《Cancer Biology & Medicine》 SCIE CAS CSCD 2015年第1期10-22,共13页
Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH), initially identified as a glycolytic enzyme and considered as a housekeeping gene, is widely used as an internal control in experiments on proteins, mRNA, and DNA. H... Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH), initially identified as a glycolytic enzyme and considered as a housekeeping gene, is widely used as an internal control in experiments on proteins, mRNA, and DNA. However, emerging evidence indicates that GAPDH is implicated in diverse functions independent of its role in energy metabolism; the expression status of GAPDH is also deregulated in various cancer cells. One of the most common effects of GAPDH is its inconsistent role in the determination of cancer cell fate. Furthermore, studies have described GAPDH as a regulator of cell death; other studies have suggested that GAPDH participates in tumor progression and serves as a new therapeutic target. However, related regulatory mechanisms of its numerous cellular functions and deregulated expression levels remain unclear. GAPDH is tightly regulated at transcriptional and pnsttranscriptional levels, which are involved in the regulation of diverse GAPDH functions. Several cancer-related factors, such as insulin, hypoxia inducible factor-1 (HIF-1), p53, nitric oxide (NO), and acetylated histone, not only modulate GAPDH gene expression but also affect protein functions via common pathways. Moreover, posttranslational modifications (PTMs) occurring in GAPDH in cancer cells result in new activities unrelated to the original glycnlytic function of GAPDH. In this review, recent findings related to GAPDH transcriptional regulation and PTMs are summarized. Mechanisms and pathways involved in GAPDH regulation and its different roles in cancer cells are also described. 展开更多
关键词 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase gapdh MECHANISM REGULATION posttranslational modification (PTM) CANCER
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GAPDH基因表达与小麦生理型雄性不育花药败育的关系 被引量:12
9
作者 位明明 王俊生 +7 位作者 张改生 张龙雨 袁正杰 孙瑞 叶景秀 牛娜 马守才 李红霞 《分子植物育种》 CAS CSCD 2009年第4期679-684,共6页
为分析三磷酸-甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因与小麦(Triticum aestivum)生理型雄性不育花药败育的关系,本研究以新型小麦化学杀雄剂SQ-1作为诱导剂,普通小麦西农1376为材料,构建了西农1376不育和可育等生理系;采用半定量逆转录聚合酶链式反应... 为分析三磷酸-甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因与小麦(Triticum aestivum)生理型雄性不育花药败育的关系,本研究以新型小麦化学杀雄剂SQ-1作为诱导剂,普通小麦西农1376为材料,构建了西农1376不育和可育等生理系;采用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术分析了不育和可育等生理系不同发育时期花药中GAPDH基因的表达模式。结果表明,该基因在正常小麦花粉发育的单核期、二核期和三核期,表达丰度比较一致,没有明显变化,但在化学杀雄剂SQ-1诱导的生理型雄性不育花药中,不同发育期表达量存在显著差异,单核期表达最弱,二核期最高。与同期正常花药相比,GAPDH基因在生理型雄性不育花药三个发育期均呈下调表达,其中在大量花粉粒败育的单核期,表达量下调最显著,其次为三核期和二核期,证明化学杀雄剂SQ-1对GAPDH基因的表达具有明显抑制作用。因此,化学杀雄剂SQ-1诱导小麦生理型雄性不育形成过程中,可能与GAPDH基因表达减少导致细胞中能量供给不足有一定关系。 展开更多
关键词 三磷酸-甘油醛脱氢酶 小麦 生理型雄性不育 花药败育
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草鱼MYH mRNA表达量分析中采用的内参基因稳定性比较 被引量:11
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作者 周瑞雪 蒙涛 +4 位作者 赵发兰 成嘉 宾石玉 张建社 褚武英 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期896-900,共5页
本研究分别以β-actin、18SrRNA和GAPDH为内参基因,采用实时荧光定量PCR对草鱼早期发育时期肌球蛋白重链(myosin heavy light,MYH)基因的mRNA表达量进行分析,并比较不同内参基因对MYH基因mRNA表达水平检测结果的准确性。研究结果表明,以... 本研究分别以β-actin、18SrRNA和GAPDH为内参基因,采用实时荧光定量PCR对草鱼早期发育时期肌球蛋白重链(myosin heavy light,MYH)基因的mRNA表达量进行分析,并比较不同内参基因对MYH基因mRNA表达水平检测结果的准确性。研究结果表明,以β-actin和GAPDH作为内参,MYH基因mRNA表达水平完全一致,其表达量从原肠到仔鱼阶段逐次递增,仔鱼与原肠期阶段相比表达量差异显著;当采用18S rRNA作为内参时,MYH基因mRNA在发育阶段的表达量呈不稳定状态。因此,β-actin和GAPDH均可作为内参基因,用于草鱼早期发育中MYH基因mRNA的相对定量研究;而18S rRNA作为内参时,可能会对检测结果造成偏差。本研究不仅准确的揭示了草鱼MYH基因mRNA的表达特征,并且为荧光定量PCR技术在鱼类基因表达研究方面提供了有价值的参考。 展开更多
关键词 草鱼 肌球蛋白重链 Β-ACTIN 18S RRNA gapdh
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日本血吸虫疫苗候选抗原的研究进展 被引量:11
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作者 阎玉涛 刘述先 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期115-119,共5页
关键词 日本血吸虫病苗 抗原 GST 副肌球蛋白 gapdh
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巴戟天实时荧光定量PCR内参基因的选择 被引量:13
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作者 叶友杰 谢德金 +4 位作者 杨德明 黄霞 陈礼光 荣俊冬 郑郁善 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期1060-1068,共9页
目的选择合适的内参基因,用于巴戟天不同组织和不同处理的叶中目标基因表达量的分析检测。方法以巴戟天不同组织和不同处理的叶为材料,根据巴戟天转录组数据,选择甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、细胞色素P450(cytochrome P450,CYP)、微管... 目的选择合适的内参基因,用于巴戟天不同组织和不同处理的叶中目标基因表达量的分析检测。方法以巴戟天不同组织和不同处理的叶为材料,根据巴戟天转录组数据,选择甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、细胞色素P450(cytochrome P450,CYP)、微管蛋白α(tubulinalpha,TUA)和肌动蛋白(Actin)基因等10个内参基因作为候选基因。利用实时荧光定量技术,并结合geNorm、NormFinder和BestKeeper等软件分析内参基因的表达稳定性,从而筛选出巴戟天不同组织和不同处理叶中表达稳定的内参基因。选择合适的内参基因对巴戟天的1-脱氧木酮糖-5磷酸合成酶(DXS)和1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶(DXR)基因在不同组织和不同处理的叶中相对表达量进行分析。结果内参基因GAPDH和泛素(UBQ)在巴戟天不同组织中表达最稳定,GAPDH+UBQ的双内参组合能够更加准确地分析目的基因在巴戟天不同组织的相对表达量,而在不同处理的叶中GAPDH和Actin表达稳定性最好,选择GAPDH+Actin的双内参组合可以确保目的基因相对分析表达结果的可靠性。在巴戟天不同组织中,DXS目的基因的相对表达量为根<茎<叶,DXR的相对表达量为茎<根<叶。在巴戟天不同处理的叶中,DXS和DXR基因的相对表达量相对于未处理的叶(CK)都有所提高。结论筛选得到的稳定内参基因为后续巴戟天相关基因表达研究奠定基础,使用2个稳定内参的组合对目的基因进行均一化处理有利于提高目的基因表达分析的准确性。 展开更多
关键词 巴戟天 内参基因 实时荧光定量PCR 基因表达 甘油醛-3-磷酸脱氢酶 肌动蛋白
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南疆红枣黑斑病病原鉴定及其保守基因序列分析 被引量:12
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作者 宋博 徐兵强 +2 位作者 朱晓锋 阿布都克尤木.卡德尔 杨森 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期411-415,共5页
红枣黑斑病(jujube black spot)又称"烂果病"、"黑头病",在新疆南疆地区发生严重。2013—2014年阿克苏、和田地区红枣黑斑病发病率达20%-30%,重病枣园发病率高达40%-50%。红枣黑斑病严重制约着新疆红枣产业的健康发展。目前,国内... 红枣黑斑病(jujube black spot)又称"烂果病"、"黑头病",在新疆南疆地区发生严重。2013—2014年阿克苏、和田地区红枣黑斑病发病率达20%-30%,重病枣园发病率高达40%-50%。红枣黑斑病严重制约着新疆红枣产业的健康发展。目前,国内在红枣黑斑病病原认知上仍存在较大分歧,报道的病原主要为链格孢(Alternaria alternata),也有细极链格孢(Alternaria tenuissima)危害的报道[4]。本文通过对南疆红枣黑斑病菌形态特征研究和田间病原回接试验, 展开更多
关键词 红枣产业 黑斑病菌 病原鉴定 南疆地区 基因序列分析 保守 和田地区 形态特征
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甘油醛-3-磷酸脱氢酶结构的保守性 被引量:11
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作者 宋时英 郭剑 +1 位作者 李军 林政炯 《生物物理学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第3期401-406,共6页
对中国南海龙虾等五种种属的甘油醛-3-磷酸脱氢酶晶体结构进行了比较,结果显示该酶三维结构的高度保守性。结构类似性包括酶活性中心、与辅酶结合部位、二级结构、结构域组织、亚基排列以及许多有序水结构。位于分子中心的S-lo... 对中国南海龙虾等五种种属的甘油醛-3-磷酸脱氢酶晶体结构进行了比较,结果显示该酶三维结构的高度保守性。结构类似性包括酶活性中心、与辅酶结合部位、二级结构、结构域组织、亚基排列以及许多有序水结构。位于分子中心的S-loop区存在两种略有差别的构象,分别对应于耐热酶与不耐热酶。对其它细小的结构差别也进行了分析与讨论。 展开更多
关键词 晶体结构 结构保守性 gapdh
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乳腺癌klk6基因表达的实时荧光定量法的建立及初步应用 被引量:10
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作者 胡成进 沈茜 +1 位作者 陈英剑 闻新棉 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期610-612,共3页
目的建立人乳腺癌相关基因组织型激肽释放酶基因家族成员Kallikrein6(klk6)mRNA荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQPCR)检测方法,以检测正常乳腺和乳腺癌组织中klk6基因表达水平。方法以GAPDH作参照,用SYBRGreenI荧光定量技术,建立检测klk6m... 目的建立人乳腺癌相关基因组织型激肽释放酶基因家族成员Kallikrein6(klk6)mRNA荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQPCR)检测方法,以检测正常乳腺和乳腺癌组织中klk6基因表达水平。方法以GAPDH作参照,用SYBRGreenI荧光定量技术,建立检测klk6mRNA的FQPCR方法;并检测32份正常乳腺和乳腺癌组织标本的循环阈值(Ct),然后,通过REST软件分析klk6mRNA的表达水平。结果FQPCR方法对GAPDH和klk6mRNA的扩增效率分别为0.90和0.95,批内变异系数(CV)分别为1.0%~2.1%和0.8%~1.2%,批间CV分别为3.2%和3.9%。正常乳腺和乳腺癌组织的klk6对GAPDH的相对表达量分别为0.017±0.009和0.040±0.017。用REST软件分析,提示乳腺癌组织klk6表达水平上调。结论建立的klk6mRNAFQPCR检测方法简便,特异,重复性好,可信度高,可用于klk6基因表达水平与肿瘤相关性研究。 展开更多
关键词 实时荧光定量法 荧光定量逆转录聚合酶链反应 初步应用 变异系数(CV) 基因表达水平 乳腺癌组织 gapdh 乳腺癌相关基因 Q-PCR方法 PCR检测方法 mRNA 正常乳腺 荧光定量技术 软件分析 Green 癌组织标本 相关性研究 家族成员
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短双链RNA对鸡胚盘细胞外源绿荧光蛋白基因表达的影响 被引量:6
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作者 孟和 陈学辉 +2 位作者 王起山 崔芳岩 潘玉春 《动物学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第2期302-307,共6页
RNA干扰 (RNAinterference,RNAi)作为一种特异性沉默基因表达的方法 ,正在成为研究基因功能、胚胎发育及病毒性疾病治疗的重要工具。为了了解RNA干扰在禽类中的作用情况 ,实验将体外转录合成的绿荧光蛋白短双链干扰RNA (siGFP)和 3 磷... RNA干扰 (RNAinterference,RNAi)作为一种特异性沉默基因表达的方法 ,正在成为研究基因功能、胚胎发育及病毒性疾病治疗的重要工具。为了了解RNA干扰在禽类中的作用情况 ,实验将体外转录合成的绿荧光蛋白短双链干扰RNA (siGFP)和 3 磷酸甘油醛脱氢酶短双链干扰RNA (siGAPDH )分别同绿荧光蛋白(Greenfluorescentprotein ,GFP)表达载体 (pEGFP C1Vector)用脂质体转染试剂LipofectamineTM2 0 0 0共转染鸡胚盘细胞 ,并于转染后 36h在荧光显微镜下观察转染和干扰效果。对细胞绿荧光蛋白表达率的方差分析结果显示 ,不同处理组间差异达极显著水准 ,其中GFP组和GFP +siGAPDH组均同GFP +siGFP组差异极显著 ,GFP组同GFP +siGAPDH组差异不显著。实验结果说明 ,siGFP能特异、有效地敲低细胞绿荧光蛋白的表达。同线虫、真菌、拟南芥、水螅、锥虫、涡虫、果蝇、斑马鱼、小鼠等其它生物体一样 ,鸡胚盘细胞中也存在短双链干扰RNA (siRNA) 展开更多
关键词 RNA干扰 短双链RNA 鸡胚盘细胞 外源绿荧光蛋白基因 表达 RNAI
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日本血吸虫三磷酸甘油醛脱氢酶核酸疫苗小鼠体内的免疫应答特征 被引量:10
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作者 闫玉涛 李小红 +2 位作者 刘述先 宋光承 徐裕信 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期266-269,273,共5页
目的研究日本血吸虫大陆株三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因核酸疫苗免疫C57BL/6小鼠诱生的免疫应答特征和保护性。方法将用免疫筛库得到的日本血吸虫大陆株GAPDH编码基因以PCR扩增,扩增产物T-A克隆至载体pT-Adv而后与真核表达载体pcDNA3... 目的研究日本血吸虫大陆株三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因核酸疫苗免疫C57BL/6小鼠诱生的免疫应答特征和保护性。方法将用免疫筛库得到的日本血吸虫大陆株GAPDH编码基因以PCR扩增,扩增产物T-A克隆至载体pT-Adv而后与真核表达载体pcDNA3连接,构建成核酸疫苗(pcDNA3-SjGAPDH)。将纯化的pcDNA3-SjGAPDH经后腿胫前肌免疫C57BL/6小鼠。免疫荧光染色法研究pcDNA3-SjGAPDH在注射的局部肌肉表达特性;用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)、蛋白质印迹法(Westernblotting)、ELISA等方法分析pcDNA3-SjGAPDH所诱导的特异性免疫应答特征。结果pcDNA3-SjGAPDH免疫后24和48h即可在荧光显微镜下看到C57BL/6小鼠小腿胫前肌的局部肌肉的冰冻切片发出淡绿色荧光,表明有GAPDH蛋白的表达。pcDNA3-SjGAPDH免疫小鼠主要诱生IgG2a、IgG2b和IgG3亚类;免疫小鼠脾淋巴细胞体外经特异性抗原刺激主要诱生γ-干扰素(IFN-γ)和白介素-2(IL-2)细胞因子,未检出IL-4。另外,免疫鼠血清能够识别日本血吸虫SWAP中的天然GAPDH成分。结论pcDNA3-SjGAPDH核酸疫苗免疫C57BL/6小鼠主要诱导Th1类型细胞免疫应答。 展开更多
关键词 日本血吸虫 三磷酸甘油醛脱氢酶 核酸疫苗
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小麦生理型雄性不育花药中能量相关基因的表达 被引量:10
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作者 王俊生 袁蕾 +8 位作者 位明明 张改生 张龙雨 袁正杰 孙瑞 叶景秀 牛娜 马守才 李红霞 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期928-934,共7页
为揭示小麦(Triticum aestivumL.)生理型雄性不育机理,以化学杂交剂SQ-1为诱导剂,构建了普通小麦西农1376不育和可育生理系,用RT-PCR技术分析了3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)和NFUDP4基因在不同发育时期的不育和可育花药中的表达差异。结... 为揭示小麦(Triticum aestivumL.)生理型雄性不育机理,以化学杂交剂SQ-1为诱导剂,构建了普通小麦西农1376不育和可育生理系,用RT-PCR技术分析了3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)和NFUDP4基因在不同发育时期的不育和可育花药中的表达差异。结果表明,与同期对照相比,GAPDH和NFUDP4基因在不育花药单核期到三核期均下调表达,其中在大量花粉粒败育的单核期,GAPDH下调表达尤为显著。因此,小麦生理型雄性不育花药败育过程中,一方面由于GAPDH基因表达受抑制,使糖酵解受阻导致能量供应不足;另一方面,NFUDP4基因下调表达,可能引起线粒体某一Fe-S族蛋白装配需要的分子骨架减少而使其数量不足,从而可能引起Fe-S族蛋白参与的生化反应减弱,如呼吸链电子传递受阻引起能量供应不足,与小麦生理型雄性不育具有一定关系。 展开更多
关键词 小麦 生理型雄性不育 化学杂交剂 三磷酸甘油醛脱氢酶 NFUDP4
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脊尾白虾GAPDH基因的克隆及其内参基因稳定性分析 被引量:8
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作者 薛蓓 张培 +5 位作者 李志辉 赵莲 赖晓芳 高焕 李健 阎斌伦 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期1003-1012,共10页
为比较甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)、18S rRNA和β-actin基因在脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)作内参基因的优劣,本研究采用同源克隆和RACE技术,克隆了脊尾白虾GAPDH基因全长cDNA序列(Gen... 为比较甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)、18S rRNA和β-actin基因在脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)作内参基因的优劣,本研究采用同源克隆和RACE技术,克隆了脊尾白虾GAPDH基因全长cDNA序列(GenBank登录号:KX893516),通过实时荧光定量PCR(quantative real-time PCR,qPT-PCR)技术,检测3种基因在脊尾白虾不同组织及不同蜕壳后时间点的表达量变化,在此基础上进行内参稳定性分析。结果显示,脊尾白虾GAPDH基因全长1514 bp,开放读码框1002 bp,编码333个氨基酸,二级结构预测显示GAPDH蛋白具有一个高度保守的NAD^+结合功能域(NAD binding domain)和行使糖运输和代谢的催化功能域。分析qRT-PCR结果并结合ge Norm、Norm Finder和Best Keeper 3种软件的分析发现,在不同组织和不同蜕壳后时间点,3种内参基因的稳定性由高到低依次为18S r RNA、GAPDH、β-actin。因此,在脊尾白虾不同组织和不同蜕壳后时间点的定量分析中,选取单内参基因时,推荐使用18S rRNA为内参基因,双内参时推荐18S rRNA和GAPDH,而18S rRNA、β-actin和GAPDH在其他生理条件下作内参基因的稳定性还有待进一步研究。 展开更多
关键词 脊尾白虾 gapdh 内参基因 组织 蜕壳后时间点
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基于等位基因InDel快速检测黑木耳原生质体单核体 被引量:8
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作者 范秀芝 周雁 边银丙 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期273-279,共7页
以黑木耳Auricularia auricula‐judae栽培菌株Au916三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)两个等位基因中的InDel为基础,以原生质体再生菌株为研究材料,建立了基于InDel的黑木耳原生质体单核体检测技术,并采用荧光显微镜检和配对试验对此方法进行... 以黑木耳Auricularia auricula‐judae栽培菌株Au916三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)两个等位基因中的InDel为基础,以原生质体再生菌株为研究材料,建立了基于InDel的黑木耳原生质体单核体检测技术,并采用荧光显微镜检和配对试验对此方法进行了验证。应用InDel能清晰地区分黑木耳双核体和两种原生质体单核体,且不同的单核体之间可以进行交配,其杂交双核体能正常出耳,结果表明基于等位基因InDel标记可以快速准确地检测黑木耳原生质体单核体。在大规模测序获得真菌基因组信息的基础上,InDel标记在原生质体单核体鉴定中的应用将更加普遍。 展开更多
关键词 黑木耳 等位基因 INDEL 原生质体再生 单核体 gapdh 荧光显微镜检
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