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禽呼肠孤病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：19
1
作者 童桂香 谢芝勋 +5 位作者 黄琦 文艳玲 谢丽基 庞耀珊 刘加波 邓显文 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期767-771,共5页
为建立禽呼肠孤病毒（ARV）实时荧光定量RT-PCR检测方法，将PCR扩增的σC基因片段克隆到pGM-T载体，重组质粒经筛选、鉴定、SalⅠ单酶切，得到线性化转录模板DNA，将体外转录的RNA梯度稀释后作为阳性模板，用于标准曲线的制定。根据S1... 为建立禽呼肠孤病毒（ARV）实时荧光定量RT-PCR检测方法，将PCR扩增的σC基因片段克隆到pGM-T载体，重组质粒经筛选、鉴定、SalⅠ单酶切，得到线性化转录模板DNA，将体外转录的RNA梯度稀释后作为阳性模板，用于标准曲线的制定。根据S1基因σC结构蛋白基因保守区域序列设计了1对特异性引物，以体外转录的RNA作为标准品，应用SYBRGreenI染料法建立了检测ARV的一步法实时荧光定量RT-PCR方法。特异性、敏感性和重复性试验结果表明，制作的标准曲线定量浓度范围宽，比常规的RT-PCR敏感1×10^3倍，可检测到5．2×10^2个拷贝的标准品RNA，与NDV、IBDV、MG均不反应；从攻毒鸡的关节组织中可以检测到病毒，病毒含量为1×10^5～1×10^7个拷贝／μL.表明，建立的实时荧光定量RT-PCR具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点，可用于ARV的检测。 展开更多
关键词 禽呼肠孤病毒 体外转录 SYBR Green I 荧光定量rt-pcr
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血浆miRNA-20a和miRNA-210对肺癌的诊断价值评价 被引量：17
2
作者 夏贤斌 李坚 汪毅 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2017年第1期47-52,共6页
目的:探讨血浆miRNA-20a和miRNA-210表达水平用于肺癌诊断的可行性及临床价值。方法:采用荧光定量PCR法检测58例肺癌患者和46例良性肺疾病患者血浆miRNA-20a和miRNA-210的表达。同时分析血浆miRNA-20a和miRNA-210表达水平与患者临床病... 目的:探讨血浆miRNA-20a和miRNA-210表达水平用于肺癌诊断的可行性及临床价值。方法:采用荧光定量PCR法检测58例肺癌患者和46例良性肺疾病患者血浆miRNA-20a和miRNA-210的表达。同时分析血浆miRNA-20a和miRNA-210表达水平与患者临床病理特征的相关性。构建受试者工作特征(ROC)曲线,评估这两类miRNA诊断肺癌的效能。根据ROC曲线确定这两类血浆miRNAs诊断肺癌的折点(临界值),计算敏感性、特异性等,并与经典的肿瘤标志物癌胚抗原、细胞角蛋白19(Cyfra21-1)的测定结果进行比较。结果:肺癌患者血浆中miRNA-20a和miRNA-210的表达水平均明显高于良性肺疾病对照组(P<0.01)。血浆miRNA-20a的表达与患者的临床病理特征无相关性,而血浆miRNA-210表达水平与肺癌的组织学类型、分化程度及临床分期显著相关(P=0.008、P=0.041和P=0.016)。血浆miRNA-20a和miRNA-210的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.883(95%可信区间0.821~0.946)和0.824(95%可信区间0.745~0.904),高于癌胚抗原和Cyfra21-1的0.656(95%可信区间0.551~0.761)和0.754(95%可信区间0.658~0.847)。血浆miRNA-20a和miRNA-210诊断肺癌的敏感性(77.6%和75.9%)和准确性(81.7%和77.9%)高于癌胚抗原(44.8%和62.5%)和Cyfra21-1(56.9%和72.1%),这两种miRANs联合检测能进一步提高肺癌诊断的敏感性,但特异性略有下降。此外,两种miRANs联合癌胚抗原或Cyfra21-1能进一步提高对肺癌的诊断效能。结论:血浆miRNA-20a和miRNA-210有可能作为诊断肺癌的生物标志物。 展开更多
关键词 荧光定量pcr 肺癌 miRNA-20a miRNA-210 诊断
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猪IFN-γ mRNA TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：12
3
作者 韦天超 田志军 +5 位作者 周艳君 安同庆 肖燕 彭金美 姜一峰 童光志 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期168-172,共5页
为建立一种检测猪γ-干扰素（IFN-γ）的荧光定量RT—PCR方法，针对猪IFN-γ基因和管家基因cyclophilin A（CyPA）的核苷酸序列分别设计了特异性引物和TaqMan荧光探针，以重组质粒pMD18-T-IFN-γ和pMD18T-CyPA为标准品，进行实时荧光定... 为建立一种检测猪γ-干扰素（IFN-γ）的荧光定量RT—PCR方法，针对猪IFN-γ基因和管家基因cyclophilin A（CyPA）的核苷酸序列分别设计了特异性引物和TaqMan荧光探针，以重组质粒pMD18-T-IFN-γ和pMD18T-CyPA为标准品，进行实时荧光定量RT-PCR检测，并构建猪IFN-γ mRNA和CyPA的荧光定量RT—PCR标准曲线。结果表明，建立的方法在1×10^1～1×10^7copies／μL模板范围内具有良好的线性关系，相关系数产均高达0．999，扩增效率均高于99．0％；可检测至少为100 copies的阳性标准品。该方法具有快速、敏感性高、特异性强和重复性好等特点，可应用于临床样品的检测。 展开更多
关键词 猪 IFN-Γ 荧光定量rt-pcr TaqMan荧光探针
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葡萄SPL9和SPL10基因全长cDNA克隆、亚细胞定位和表达分析 被引量：12
4
作者 曹雪 王晨 +3 位作者 房经贵 杨光 于华平 宋长年 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期240-250,共11页
从‘夏黑’葡萄(Vitisvinifera×V.labrusca ‘Summer Black’)中克隆了SBP(Squamosa promoter binding protein)类重要转录因子基因SPL9和SPL10全长cDNA序列,在GenBank的登录号分别是HM018600和HM018601,序列分析表明二者均具备完... 从‘夏黑’葡萄(Vitisvinifera×V.labrusca ‘Summer Black’)中克隆了SBP(Squamosa promoter binding protein)类重要转录因子基因SPL9和SPL10全长cDNA序列,在GenBank的登录号分别是HM018600和HM018601,序列分析表明二者均具备完全保守的核定位信号序列(KKSR)、SBP结构域以及葡萄microRNA156a(Vv-miR156a)的靶序列。进一步构建Vv-SPL9和Vv-SPL10亚细胞定位表达载体,对其是否具有核定位功能进行了研究,并利用半定量、荧光定量RT-PCR研究了这两个基因与Vv-miR156a在葡萄不同组织的表达情况。结果表明:转录因子SPL9和SPL10均定位于细胞核中,而且两个基因在葡萄各个组织中均有表达,但表达量存在差异,两者均在小果中的表达量最高。Vv-miR156a的积累水平与这两个基因在各个组织中的表达呈现一定的消长关系,并且在小果中最为明显。 展开更多
关键词 葡萄 SPL9 SPL10 亚细胞定位 荧光定量rt-pcr
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牛病毒性腹泻-粘膜病病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：11
5
作者 陈其兵 薛霜 +5 位作者 漆世华 朱薇 张萍 谢红玲 温文生 吴玉石 《中国兽药杂志》 2012年第4期4-6,47,共4页
为建立一种牛病毒性腹泻-粘膜病病毒(BVDV)的快速检测方法,根据GenBank中登录的BVDV基因序列,针对5’UTR的保守序列,设计合成了一对特异性引物和一条TaqMan荧光探针。通过对反应条件和反应体系进行优化,建立了一种能快速定量检测BVDV的... 为建立一种牛病毒性腹泻-粘膜病病毒(BVDV)的快速检测方法,根据GenBank中登录的BVDV基因序列,针对5’UTR的保守序列,设计合成了一对特异性引物和一条TaqMan荧光探针。通过对反应条件和反应体系进行优化,建立了一种能快速定量检测BVDV的荧光定量RT-PCR检测方法。通过对20份胎牛血清样品和猪瘟细胞苗半成品进行检测,对该方法的特异性、敏感性和重复性进行试验。结果显示,建立的方法能检测到BVDV,而对CSFV、PRRSV和MDBK细胞的扩增结果均为阴性,具有高度的特异性。在所检测的20份样品中,BVDV阳性6份(30%)。对所构建的标准品进行检测,在102～108拷贝/μL的范围内可以得到良好的动力学曲线,能检测低至103～104拷贝/mL的病毒量。表明所建立的检测方法具有快速、特异、灵敏、重复性好等特点,可用于临床及科研中对BVDV的快速定量检测和对牛血清及猪瘟兔化弱毒疫苗等生物制品中是否污染BVDV进行监测。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻-粘膜病病毒 荧光定量rt-pcr 检测
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鸭坦布苏病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：10
6
作者 李庆阳 陈芳艳 +6 位作者 刘平 谢永福 冯金牛 况少祥 陈瑞爱 唐秀英 王林川 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第7期18-22,共5页
根据鸭坦布苏病毒(DTMUV)BYD-1株基因序列设计特异性引物和TaqMan探针,建立了快速检测DTMUV的实时荧光定量RT-PCR方法。特异性结果显示,DTMUV显示阳性,而3株非鸭坦布苏病毒均显示阴性,说明该方法具有高度特异性。其表达式为Ct=-3.32... 根据鸭坦布苏病毒(DTMUV)BYD-1株基因序列设计特异性引物和TaqMan探针,建立了快速检测DTMUV的实时荧光定量RT-PCR方法。特异性结果显示,DTMUV显示阳性,而3株非鸭坦布苏病毒均显示阴性,说明该方法具有高度特异性。其表达式为Ct=-3.32×lg Copy number+41.151,R2=0.998,R循环效率Eff%=100.072,DNA拷贝数在101～108范围内检测曲线有良好的线性关系,对质粒标准品最低检测限为1.0×101拷贝/μL,变异系数低于5%。利用该方法分别对攻毒感染具有典型鸭新型黄病毒病临床症状和病理变化的蛋鸭的脾脏和肝脏组织进行检测,阳性率均为100%,而用本实验室建立的普通RT-PCR方法检测的阳性检测率为85%(17/20)和75%(15/20)。建立的方法具有敏感性高、特异性好、稳定性强的特点,可用DTMUV早期感染的快速诊断和流行病学调查。 展开更多
关键词 鸭坦布苏病毒 TAQMAN探针 荧光定量rt—pcr
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荧光定量RT-PCR快速检测B型流感病毒的研究 被引量：8
7
作者 何建凡 张然 +2 位作者 吴春利 程小雯 吕星 《现代预防医学》 CAS 北大核心 2005年第8期981-983,共3页
目的:利用荧光定量RT-PCR技术建立一种快速检测B型流感病毒的方法。方法:根据B型流感病毒HA基因的相对保守序列分别设计一对引物及其相应的Taqman探针,建立、优化反应体系后,利用10倍稀释法检验方法的灵敏度并建立相对定量标准曲线;特... 目的:利用荧光定量RT-PCR技术建立一种快速检测B型流感病毒的方法。方法:根据B型流感病毒HA基因的相对保守序列分别设计一对引物及其相应的Taqman探针,建立、优化反应体系后,利用10倍稀释法检验方法的灵敏度并建立相对定量标准曲线;特异性检验后利用临床标本与普通RT-PCR法进行比较。结果:B型流感病毒检测反应的灵敏度为5.0×10-6TCID50,标准曲线相关系数为0.998,扩增效率为107.8%,5种非B型流感病毒病原体检测均为阴性,说明此方法具有很好的稳定性、重现性和特异性。结论:本研究建立荧光定量RT-PCR技术可以准确检测B型流感病毒,不仅灵敏度高、稳定性好,而且可以对病毒滴度进行定量检测。 展开更多
关键词 B型流感病毒 荧光定量rt-pcr 快速检测
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荧光定量RT-PCR快速检测A型流感病毒的研究 被引量：7
8
作者 张然 程小雯 +1 位作者 吴春利 吕星 《中国热带医学》 CAS 2006年第1期33-35,共3页
目的利用荧光定量RT-PCR技术建立一种快速检测A型流感病毒的方法。方法根据A型流感M基因的相对保守序列分别设计一对引物及其相应的Taqman探针,建立、优化反应体系后,利用10倍稀释法检验方法的灵敏度并建立相对定量标准曲线;特异性检验... 目的利用荧光定量RT-PCR技术建立一种快速检测A型流感病毒的方法。方法根据A型流感M基因的相对保守序列分别设计一对引物及其相应的Taqman探针,建立、优化反应体系后,利用10倍稀释法检验方法的灵敏度并建立相对定量标准曲线;特异性检验后利用临床标本与传统的血凝抑制法进行比较。结果A型流感病毒检测反应的灵敏度为2.56×10-6TCID50,标准曲线相关系数为0.999,扩增效率为108.5%,5种非A型流感病毒病原体检测均为阴性,说明此方法只有很好的稳定性、重现性和特异性。结论本研究建立荧光定量RT-PCR技术可以准确检测A型流感病毒,不仅灵敏度高、稳定性好,而且可以对病毒滴度进行定量检测。 展开更多
关键词 A型流感病毒 荧光定量rt—pcr 快速检测
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猪圆环病毒2型Taqman探针法实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：9
9
作者 石林 吴瑗 +8 位作者 巴少波 刘正奎 陈琳 王磊 邵春艳 孙静 周莹姗 王晓杜 宋厚辉 《浙江农林大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期1133-1138,共6页
猪圆环病毒2型(PCV2)是一种引起仔猪Sus scrofa多系统衰竭综合征、免疫抑制、皮肤肾病综合征等疾病的病原体。根据GenBank中PCV2 ORF1基因序列设计合成特异性引物和探针,以PCV2基因组DNA为模板,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增目的片段,并... 猪圆环病毒2型(PCV2)是一种引起仔猪Sus scrofa多系统衰竭综合征、免疫抑制、皮肤肾病综合征等疾病的病原体。根据GenBank中PCV2 ORF1基因序列设计合成特异性引物和探针,以PCV2基因组DNA为模板,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增目的片段,并将目的片段克隆至pMD18-T载体,构建阳性标准品。以阳性标准品为模板,优化荧光定量PCR反应条件,建立标准曲线,进行灵敏性、重复性和特异性验证,并应用此方法对临床样品进行检测。结果表明:阳性质粒标准品构建成功,该检测方法的引物与探针的最佳浓度皆为0.2μmol·L^(-1),线性检测范围为2.1×10^(13)~2.1×10~6拷贝·L^(-1),最低检测限值为8.828×10~6拷贝·L^(-1),且与其他相关疾病无交叉反应;各批次检测变异系数低,检测方法稳定性好。本研究建立的敏感性高、特异性好的实时荧光定量PCR方法,为PCV2的快速检测提供了新工具。 展开更多
关键词 动物学 猪圆环病毒2型 实时荧光定量pcr 灵敏性 特异性 检测方法
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荧光定量RT-PCR快速检测A、B型流感病毒的研究 被引量：8
10
作者 程小雯 吴春利 +4 位作者 吕星 胡应尤 叶宝英 房师松 何建凡 《中国热带医学》 CAS 2005年第9期1782-1785,共4页
目的利用荧光定量RT-PCR技术建立一种快速检测A、B型流感病毒的方法。方法根据A型流感M基因和B型流感HA基因的相对保守序列,分别设计一对引物及其相应的Taqman探针,建立、优化单一和双重反应体系后,利用10倍稀释法对已知滴度的流感病毒... 目的利用荧光定量RT-PCR技术建立一种快速检测A、B型流感病毒的方法。方法根据A型流感M基因和B型流感HA基因的相对保守序列,分别设计一对引物及其相应的Taqman探针,建立、优化单一和双重反应体系后,利用10倍稀释法对已知滴度的流感病毒进行梯度稀释,检验方法的灵敏度并建立相对定量标准曲线。结果A、B型流感病毒双重反应的灵敏度为分别为2·56×10-5和5·0×10-5TCID50,标准曲线相关系数分别为0·997和0·998,扩增效率分别为114·1%和107·8%,说明双重反应中A、B型的引物、探针、模板之间无相互干扰,具有很好的稳定性和重现性。结论研究建立的荧光定量RT-PCR技术可以准确同时检测A、B型流感病毒,不仅灵敏度高、稳定性好,而且可以对病毒滴度进行定量检测。 展开更多
关键词 流感病毒 荧光定量rt—pcr 快速检测
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荧光定量RT-PCR和RT-LAMP检测BVDV方法的建立及应用比较 被引量：6
11
作者 段进刚 樊新丽 +5 位作者 葛婷 卞赛赛 高窦 代婧 阿热阿依.海依拉提 雷程红 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第10期170-174,179,共6页
为建立一种快速、灵敏诊断牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)的方法,试验采用RT-LAMP和荧光定量RT-PCR两种检测方法,与通用RT-PCR方法在特异性、灵敏性、样品检出率、试验设计复杂程度、扩增反应效率、使用仪器简单... 为建立一种快速、灵敏诊断牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)的方法,试验采用RT-LAMP和荧光定量RT-PCR两种检测方法,与通用RT-PCR方法在特异性、灵敏性、样品检出率、试验设计复杂程度、扩增反应效率、使用仪器简单程度和检测成本高低七个方面对BVDV进行了综合性比较分析。结果表明:试验建立的RT-LAMP方法与荧光定量RT-PCR、通用RTPCR方法相比具有特异性强、灵敏度高、样品检出率和扩增反应效率高、操作简便快速、低成本等特点。说明RT-LAMP方法对快速、灵敏诊断牛病毒性腹泻病、防止疫情的扩散具有重要意义。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral DIARRHEA virus BVDV) 牛病毒性腹泻病 荧光定量rt-pcr rt-LAMP 通用rt-pcr 快速检测
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牙鲆变态中两种HSP90基因的不同表达及其与甲状腺激素的关系 被引量：6
12
作者 张俊玲 施志仪 +1 位作者 程琦 贾亮 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1478-1485,共8页
热休克蛋白90(heat shock protein90,HSP90)是细胞内主要的伴侣蛋白,在激素信号转导、细胞分化、细胞增殖与凋亡、形态发生与进化、变态发育及应激防御等多重调节路径中发挥关键作用。采用实时荧光定量RT-PCR技术检测了牙鲆两种HSP90基... 热休克蛋白90(heat shock protein90,HSP90)是细胞内主要的伴侣蛋白,在激素信号转导、细胞分化、细胞增殖与凋亡、形态发生与进化、变态发育及应激防御等多重调节路径中发挥关键作用。采用实时荧光定量RT-PCR技术检测了牙鲆两种HSP90基因在仔鱼发育和在成年组织中的表达变化。结果表明,HSP90α在成鱼骨骼肌、肠和胃中有较高的表达,而HSP90β在成鱼脑、脾脏和肾脏中有较高的表达。HSP90αmRNA水平在仔鱼变态期间迅速增加,至变态高峰G期达到最高水平;相反,HSP90β转录在仔鱼整个变态期间变化不是特别明显。鉴于甲状腺激素(thyroid hormone,TH)在牙鲆变态中的重要作用,还运用外源的TH及硫脲(thiourea,TU)处理牙鲆仔鱼来确定TH对HSP90基因转录的调节。与未处理组相比,HSP90α转录在TH处理8d和13d的仔鱼中显著增加,而在TU处理仔鱼中明显减少;但HSP90βmRNA水平不受药物处理影响。从上述结果分析,牙鲆中HSP90α的转录很可能被甲状腺激素上调,而且其在牙鲆的变态发育中发挥了重要作用。 展开更多
关键词 牙鲆 变态发育 热休克蛋白90 基因表达 甲状腺激素 硫脲 荧光定量rt-pcr
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基于M基因的新城疫病毒实时荧光定量RT-PCR的建立及其对临床样品中新城疫病毒检测的研究 被引量：4
13
作者 曹军平 胡顺林 +5 位作者 吴双 刘慧谋 刘晓文 王晓泉 吴艳涛 刘秀梵 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期1120-1125,共6页
根据新城疫病毒M基因的保守序列，设计合成1对引物和TaqMan探针，以作者实验室构建并保存的鹅源新城疫病毒ZJ1株M基因阳性重组质粒为标准品模板建立荧光定量PCR标准曲线，结合ABI公司的7300型荧光定量PCR仪，建立了一种敏感、特异、重... 根据新城疫病毒M基因的保守序列，设计合成1对引物和TaqMan探针，以作者实验室构建并保存的鹅源新城疫病毒ZJ1株M基因阳性重组质粒为标准品模板建立荧光定量PCR标准曲线，结合ABI公司的7300型荧光定量PCR仪，建立了一种敏感、特异、重复性好的快速检测新城疫病毒核酸载量的TaqMan荧光定量RT-PCR方法。该方法在106~101拷贝范围内具有良好的线性关系，可检测到初始模板中3拷贝.μL-1的病毒核酸，与传统的病毒分离方法具有相近的敏感性，二者对500份临床禽泄殖腔棉拭样品检测结果阳性数？阴性数符合率分别为90.0%、99.8%。经临床应用表明：荧光定量PCR的建立为早期诊断禽新城疫病毒、定量分析禽新城疫病毒感染程度奠定了基础。 展开更多
关键词 新城疫病毒 荧光定量rt-pcr 探针
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甲型肝炎病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立及在贝类检测中的应用 被引量：6
14
作者 袁亚迪 孙世洋 +6 位作者 卞莲莲 崔博沛 高帆 刘佩 刘令九 毛群颖 梁争论 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2020年第1期55-60,65,共7页
目的建立甲型肝炎病毒(hepatitis A,HAV)荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)检测方法,用于贝类中HAV的检测。方法选择HAV高度保守的5’UTR区设计引物及探针,以HAV质粒为标准品,HAV活病毒为样本,建立HAV qRT-PCR检测方法;验证该方法的特异性、... 目的建立甲型肝炎病毒(hepatitis A,HAV)荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)检测方法,用于贝类中HAV的检测。方法选择HAV高度保守的5’UTR区设计引物及探针,以HAV质粒为标准品,HAV活病毒为样本,建立HAV qRT-PCR检测方法;验证该方法的特异性、灵敏度、重复性、准确性及中间精密度;采用建立的方法检测HAV活病毒和贝类样本,并与我国贝类HAV检测国标方法(GB/T22287-2008法)进行比较。结果通过14对引物探针分别对HAV质粒(101~108拷贝/μL)检测结果的比较,选择灵敏度最优的Pan1引物,建立了HAV qRT-PCR检测方法(PAN法)。PAN法对CVA16、CVB3、EVA71、PV等11种RNA病毒均无阳性扩增;灵敏度达10 TCID50/mL;检测2.699~5.699 LgTCID50/mL各浓度HAV活病毒的回收率为82.9%~127.0%,单人和双人检测的变异系数分别为3.0%~7.0%和2.6%~8.4%。PAN法检测HAV活病毒的灵敏度(10 TCID50/mL)优于GB/T22287-2008法;两种方法对20份贝类样本的检测结果均为阴性,符合率为100%。结论建立的PAN法具有良好的特异性、灵敏度、准确性、重复性和中间精密度,可用于贝类样本中HAV的核酸定量快速检测。 展开更多
关键词 甲型肝炎病毒 荧光定量rt-pcr 贝类
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多胎与单胎山羊发情期卵巢褪黑素受体基因的差异表达研究 被引量：6
15
作者 汪运舟 曾启繁 +2 位作者 陈维云 王慧 王树迎 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2011年第3期262-267,共6页
为探明褪黑素受体(MTR1A)对山羊产羔数等繁殖性状的调控作用,并比较多胎高产的济宁青山羊与单胎的沂蒙黑山羊发情期卵巢组织中MTR1A的差异表达量。采用荧光定量差异显示PCR(DDRT-qPCR)技术,以持家基因GAPDH为分子内标,对比研究了褪黑素... 为探明褪黑素受体(MTR1A)对山羊产羔数等繁殖性状的调控作用,并比较多胎高产的济宁青山羊与单胎的沂蒙黑山羊发情期卵巢组织中MTR1A的差异表达量。采用荧光定量差异显示PCR(DDRT-qPCR)技术,以持家基因GAPDH为分子内标,对比研究了褪黑素受体1A(MTR1A)基因在多胎的济宁青山羊和单胎的沂蒙黑山羊发情期卵巢组织中的差异表达量。研究发现,MTR1A在两种山羊发情期的卵巢组织中均有表达,但是,在青山羊发情期卵巢组织中的表达量显著低于在沂蒙黑山羊卵巢组织中的表达量(P<0.05)。说明,发情期褪黑素受体基因在卵巢组织中的高表达是限制山羊卵巢排卵和产羔数的重要因素之一。研究结果提示:卵巢组织是褪黑素作用的重要靶器官,褪黑素对于山羊卵巢组织的发育、成熟和排卵具有重要影响。研究结果对于阐明褪黑素受体调控山羊生殖机能的作用机理提供了基础研究数据。 展开更多
关键词 济宁青山羊 沂蒙黑山羊 卵巢 褪黑素受体-1A 荧光定量差异显示pcr 发情期
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贺州市2009年-2011年流感病毒核酸检测结果分析 被引量：6
16
作者 饶贵平 邹喆 +1 位作者 赵书银 黎振坚 《中国卫生检验杂志》 北大核心 2014年第1期122-124,共3页
目的对疑似流感疫情标本进行核酸检测，了解流感病毒流行规律，为贺州市流感的防控提供科学依据。方法自2009年8月-2011年12月，由哨点医院（贺州市人民医院）采集送检流感样病例咽拭子标本，采用荧光定量PCR法进行流感病毒核酸分型检... 目的对疑似流感疫情标本进行核酸检测，了解流感病毒流行规律，为贺州市流感的防控提供科学依据。方法自2009年8月-2011年12月，由哨点医院（贺州市人民医院）采集送检流感样病例咽拭子标本，采用荧光定量PCR法进行流感病毒核酸分型检测，并且从性别、年龄、时间分布等多方面进行比较分析。结果1383份咽拭子标本中有359份流感病毒核酸检测呈阳性，阳性率为25．96％，其中A未分型、B型、新甲型Hl、季节性H3流感病毒检出率分别占阳性标本的37．05％、25．35％、34．26％、3．34％。男女两性的阳性率相差不大，发病几率无明显差异。35岁～59岁年龄段阳性检出率最高达63．55％，7岁～17岁年龄段在总阳性样本中占的比例高达45．13％。结论2009年-2011年贺州市流感疫情以甲型流感病毒为主，发病人群主要为35岁-59岁和7岁～17岁两个年龄段，是流感防控的重点人群。荧光定量PCR技术是流感疫情临床病例诊断可靠的快速诊断方法。 展开更多
关键词 流感病毒 核酸检测 荧光定量pcr
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牛病毒性腹泻病毒实时定量RT-PCR检测技术的建立及初步应用 被引量：4
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作者 任艳 陈创夫 +5 位作者 乔军 王鹏雁 盛金良 王远志 张沾 李臻 《畜牧兽医杂志》 2010年第5期4-7,共4页
以牛病毒性腹泻病毒（BVDV）的保守基因5＇-非编码区为参考,设计、优化一对特异的荧光定量PCR引物,应用Smart CycleⅡ分析系统,结合Eva Green荧光染料结合原理,建立一种快速、定量检测牛病毒性腹泻病毒的荧光定量PCR技术。该方法线形范... 以牛病毒性腹泻病毒（BVDV）的保守基因5＇-非编码区为参考,设计、优化一对特异的荧光定量PCR引物,应用Smart CycleⅡ分析系统,结合Eva Green荧光染料结合原理,建立一种快速、定量检测牛病毒性腹泻病毒的荧光定量PCR技术。该方法线形范围为101~106copies/μL,相关系数为R2=0.997,扩增效率为E=0.78。灵敏性比常规PCR高102倍。该方法具有良好的特异性,检测变异系数低于1%。应用本实验建立的方法检测25份不同地区采集的临床症状疑似BVDV感染的牛粪样品,阳性检出率为72%（18/25）,与病毒分离培养和电检观察相比,该方法具有快速、灵敏、特异、重复性好和能定量检测等优点,为实验室快速、准确检测BVDV奠定了基础。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 实时定量rt-pcr 检测
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乳牛瘦蛋白基因荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：5
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作者 张才 牛淑玲 +2 位作者 夏成 刘国文 王哲 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期393-395,共3页
根据GenBank中瘦蛋白(leptin)基因序列设计合成了引物和探针,对荧光定量PCR的方法进行了方法学的评估,建立了TaqmanMGB荧光定量RT-PCR检测方法。结果表明,由 pMD-18T瘦蛋白所构建的标准曲线线性关系良好,建立的瘦蛋白基因荧光定量PCR检... 根据GenBank中瘦蛋白(leptin)基因序列设计合成了引物和探针,对荧光定量PCR的方法进行了方法学的评估,建立了TaqmanMGB荧光定量RT-PCR检测方法。结果表明,由 pMD-18T瘦蛋白所构建的标准曲线线性关系良好,建立的瘦蛋白基因荧光定量PCR检测方法灵敏度高、特异性强(可检测出低于10个拷贝／μL的样品),准确可靠。 展开更多
关键词 乳牛 瘦蛋白基因 荧光定量rt-pcr
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应用实时荧光RT-PCR法检测水产品中诺如病毒 被引量：5
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作者 纪衍瑾 孙雯雯 +1 位作者 祝喆 杨松涛 《中国现代医生》 2015年第19期130-132,共3页
目的建立水产品样品中的诺如病毒检测方法。方法优化甘氨酸缓冲液处理水产品匀浆液,摸索PEG沉淀浓缩病毒的浓度,提取病毒RNA,采用荧光定量RT-PCR方法进行诺如病毒检测。结果应用优化后的方法检测72份样品,并用核苷酸序列测定法对阳性PC... 目的建立水产品样品中的诺如病毒检测方法。方法优化甘氨酸缓冲液处理水产品匀浆液,摸索PEG沉淀浓缩病毒的浓度,提取病毒RNA,采用荧光定量RT-PCR方法进行诺如病毒检测。结果应用优化后的方法检测72份样品,并用核苷酸序列测定法对阳性PCR产物进行验证,所得阳性PCR产物经核苷酸序列测序证实为诺如病毒。结论本研究方法可以应用于水产品中的诺如病毒检测,抚顺市海鲜市场上的水产品很少存在诺如病毒的污染。 展开更多
关键词 诺如病毒 水产品 富集 荧光定量rt-pcr
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新型鸭呼肠孤病毒一步法TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用 被引量：5
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作者 云涛 华炯钢 +3 位作者 叶伟成 倪征 陈柳 张存 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2020年第4期571-576,共6页
为建立一种快速、敏感和特异性检测新型鸭呼肠孤病毒(novel duck reovirus,NDRV)的方法,本研究根据GenBank数据库中NDRV S3基因保守序列设计1对特异性引物和1条MGB荧光探针,建立了一种检测NDRV的一步法MGB荧光定量RT-PCR方法,对其特异... 为建立一种快速、敏感和特异性检测新型鸭呼肠孤病毒(novel duck reovirus,NDRV)的方法,本研究根据GenBank数据库中NDRV S3基因保守序列设计1对特异性引物和1条MGB荧光探针,建立了一种检测NDRV的一步法MGB荧光定量RT-PCR方法,对其特异性、敏感性和重复性进行检验,并与普通RT-PCR进行比较。结果显示,扩增标准曲线相关系数为0.999,扩增产物的熔解曲线仅出现单特异峰。该方法对经典鸭呼肠孤病毒、H9N2禽流感病毒、鸭坦布苏病毒、A型鸭肝炎病毒、鸭新城疫病毒、鸭瘟病毒及番鸭细小病毒均未检测到信号,对NDRV的最小检出量为10拷贝·μL^-1。组内和组间变异系数均小于2%,重复性好。此外,利用该方法对239份疑似新型呼肠孤病毒病样品进行检测,常规RT-PCR检测时有75份为阳性,一步法TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR方法检测时有100份为阳性,而且常规RT-PCR检测出的阳性样品用一步法TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR检测时均为阳性,符合率为100%。该检测方法的建立为NDRV早期快速检测及定量分析提供新的方法。 展开更多
关键词 新型鸭呼肠孤病毒 MGB探针 荧光定量rt-pcr 检测方法
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