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纤维蛋白止血敷料的生物相容性研究 被引量：9
1
作者 赵雄 曹晓涵 +4 位作者 马玉媛 吕茂民 尹惠琼 刘明 章金刚 《中国输血杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期247-249,共3页
目的评价纤维蛋白止血敷料的生物相容性。方法对纤维蛋白止血敷料进行如下生物学检测:细胞毒性试验(MTT法)、急性全身毒性试验、皮肤刺激试验、皮内刺激试验和溶血试验,根据标准对实验数据进行分析和评估。结果纤维蛋白止血敷料的细胞... 目的评价纤维蛋白止血敷料的生物相容性。方法对纤维蛋白止血敷料进行如下生物学检测:细胞毒性试验(MTT法)、急性全身毒性试验、皮肤刺激试验、皮内刺激试验和溶血试验,根据标准对实验数据进行分析和评估。结果纤维蛋白止血敷料的细胞毒性分级0—1级;无急性全身毒性作用,无皮肤刺激反应、皮内刺激反应,无溶血性。结论纤维蛋白止血敷料具有良好的生物相容性。 展开更多
关键词 纤维蛋白止血敷料 生物相容性 细胞毒性试验 急性全身毒性试验 皮肤刺激试验 皮内刺激试验 溶血试验
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蛇毒中的直接溶解因子对人肿瘤细胞株的毒性作用 被引量：7
2
作者 苏秀容 潘启超 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1994年第4期302-304,共3页
用台盼蓝拒染法研究来源于眼镜蛇毒的纯化直接溶解因子（ＤＬＦ）对培养人肿瘤细胞株的毒性作用。结果表明ＤＬＦ对ＭＧＣ－８０３、ＣＮＥ－２、ＢＥＬ－７４０２、Ｒａｉｉ、ＨｅＬａ和Ｋ５６２等６种细胞株的ＩＣ５０分别为１．５４... 用台盼蓝拒染法研究来源于眼镜蛇毒的纯化直接溶解因子（ＤＬＦ）对培养人肿瘤细胞株的毒性作用。结果表明ＤＬＦ对ＭＧＣ－８０３、ＣＮＥ－２、ＢＥＬ－７４０２、Ｒａｉｉ、ＨｅＬａ和Ｋ５６２等６种细胞株的ＩＣ５０分别为１．５４、１．７２、３．６８、６．７６、７．２０和大于８０μｇ／ｍｌ。鉴于ＤＬＦ的ＩＣ５０和以前报道的对肌肉神经组织有效浓度的范围大致相同，提示肿瘤细胞和可兴奋细胞有相似ＤＬＦ的作用点。不同来源的肿瘤细胞株对ＤＬＦ敏感度不一致可能是这些结合部位量的差异引起的。 展开更多
关键词 蛇毒 溶解因子 肿瘤细胞 细胞毒性
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医用透明质酸钠的细胞毒性实验 被引量：8
3
作者 王昕 朱雪涛 施燕平 《食品与药品》 CAS 2006年第02A期31-33,共3页
目的研究医用透明质酸钠的细胞毒性。方法遵照ISO10993医疗器械生物学评价国际标准的实验原则,采用国际标准的两种实验方法,更全面地反应医用透明质酸钠的细胞毒性。结果医用透明质酸钠为0级反应。阴性和阳性对照组的反应符合规定。结... 目的研究医用透明质酸钠的细胞毒性。方法遵照ISO10993医疗器械生物学评价国际标准的实验原则,采用国际标准的两种实验方法,更全面地反应医用透明质酸钠的细胞毒性。结果医用透明质酸钠为0级反应。阴性和阳性对照组的反应符合规定。结论医用透明质酸钠无细胞毒性。 展开更多
关键词 医用透明质酸钠 细胞毒性 浸提液
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GB/T 16886.5—2017中体外细胞毒性试验的比较与分析 被引量：8
4
作者 徐玉茵 韩颖 +3 位作者 田林奇 周静 魏聪 张丹丹 《医疗卫生装备》 CAS 2019年第7期74-77,93,共5页
介绍了GB 16886 系列标准中固体样品和液体样品的制备方法,分析了GB/T 16886.5—2017《医疗器械生物学评价第5部分:体外细胞毒性试验》中浸提液试验、琼脂扩散试验、直接接触试验3 种定性试验和MTT 试验、中性红摄取(neutral red uptake... 介绍了GB 16886 系列标准中固体样品和液体样品的制备方法,分析了GB/T 16886.5—2017《医疗器械生物学评价第5部分:体外细胞毒性试验》中浸提液试验、琼脂扩散试验、直接接触试验3 种定性试验和MTT 试验、中性红摄取(neutral red uptake,NRU)试验、集落形成(clone forming assay,CFA)试验3 种定量试验的试验方法,比较了各试验方法的实验条件和判定标准。指出了选择合适的体外细胞毒性试验对正确评价样品潜在毒性的重要性。提出了应将体外细胞毒性试验结果与其他生物相容性试验结果结合,以获得对医疗器械更准确的生物风险评估。 展开更多
关键词 GB/T 16886.5-2017 医疗器械 细胞毒性试验 定性试验 定量试验 生物相容性 生物风险评估
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评价医疗器械体外细胞毒性的常用方法概述 被引量：7
5
作者 张世明 陶树清 《现代医学》 2020年第1期146-150,共5页
医疗器械和材料应用于临床之前需要进行生物相容性评价。国内外均将细胞毒性试验列在生物相容性评价的首位。细胞毒性试验分为三大类:浸提液试验、直接接触试验和间接接触试验。文章将对三种细胞毒性试验的核心要素和主要步骤加以介绍,... 医疗器械和材料应用于临床之前需要进行生物相容性评价。国内外均将细胞毒性试验列在生物相容性评价的首位。细胞毒性试验分为三大类:浸提液试验、直接接触试验和间接接触试验。文章将对三种细胞毒性试验的核心要素和主要步骤加以介绍,并对三种细胞毒性试验的敏感性特点及相互关系加以概述。 展开更多
关键词 生物相容性评价 细胞毒性试验 浸提液试验 直接接触试验 间接接触试验
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马钱子生物碱类的细胞毒性试验 被引量：5
6
作者 张伟佶 唐竹萍 《中药材》 CAS CSCD 北大核心 1995年第9期468-469,共2页
本文应用细胞培养方法对马钱子中提取分离的6种生物碱进行细胞毒性试验。观察不同浓度的生物碱影响HeLa细胞的形态变化及增殖抑制率,并计算出各生物碱的半数抑制量(IC50)。结果表明:异士的宁氮氧化物(ISO)抑制作用最强,异马钱子氮氧化物... 本文应用细胞培养方法对马钱子中提取分离的6种生物碱进行细胞毒性试验。观察不同浓度的生物碱影响HeLa细胞的形态变化及增殖抑制率,并计算出各生物碱的半数抑制量(IC50)。结果表明:异士的宁氮氧化物(ISO)抑制作用最强,异马钱子氮氧化物(IBO)抑制作用最弱。 展开更多
关键词 马钱子 生物碱 中药毒性 细胞毒性试验
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MTS法细胞毒试验的非线性关系研究 被引量：6
7
作者 梁永钜 符立梧 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期623-627,共5页
目的　探讨MTS法细胞毒试验的细胞数 OD关系以及药物剂量 -抑制率关系 ,为更好地应用MTS法提供提示。方法　采用HL 6 0和Raji细胞株。细胞数 OD关系试验 :96孔板接种不同浓度的细胞 ,加入MTS培养 1～ 5h后于 4 90nm波长测定OD ,用SPSS ... 目的　探讨MTS法细胞毒试验的细胞数 OD关系以及药物剂量 -抑制率关系 ,为更好地应用MTS法提供提示。方法　采用HL 6 0和Raji细胞株。细胞数 OD关系试验 :96孔板接种不同浓度的细胞 ,加入MTS培养 1～ 5h后于 4 90nm波长测定OD ,用SPSS 11 0软件对数据作曲线估计。细胞毒试验 :96孔板每孔接种细胞 ,加不同剂量的药物培养 72h ,加入MTS培养 3h后于 4 90nm波长测定OD ,用SPSS11 0软件对数据作曲线估计。结果　 2种细胞 5个时间点的细胞数 OD关系以三次项曲线拟合度最好 ,r2 为 0 997～1 0 0 0 ,均大于线性模型的r2 0 938～ 0 993。 3种药物对 2种细胞的剂量 -抑制率以三次项曲线拟合度最好 ,r2 为0 998～ 1 0 0 0 ,优于对数剂量 -概率单位线性模型的r20 94 8～ 0 987。结论　三次项曲线对MTS法细胞毒试验的细胞数 OD关系有很高拟合度且优于线性曲线模型。通过药物剂量 -抑制率的三次项曲线拟合方程可望得到比常用的概率单位回归法更准确的IC50 。 展开更多
关键词 MTS 细胞毒性试验 非线性
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羟基磷灰石生物安全性试验研究 被引量：3
8
作者 邹文 蔡永福 梁洁 《四川动物》 CSCD 北大核心 2008年第6期1126-1129,共4页
为了评价羟基磷灰石的生物安全性,依据相关的医疗器械行业标准和GB/T16886系列标准,对该材料进行了迟发型超敏反应试验、热原试验、急性全身毒性试验、细胞毒性试验等一系列生物安全性试验,并对试验数据进行了分析评价,结果表明,羟基磷... 为了评价羟基磷灰石的生物安全性,依据相关的医疗器械行业标准和GB/T16886系列标准,对该材料进行了迟发型超敏反应试验、热原试验、急性全身毒性试验、细胞毒性试验等一系列生物安全性试验,并对试验数据进行了分析评价,结果表明,羟基磷灰石具有良好的安全性。 展开更多
关键词 羟基磷灰石 迟发型超敏试验 热原试验 急性毒性试验 细胞毒性试验
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纤维素类可吸收止血材料的体外细胞毒性评价 被引量：7
9
作者 喻炎 马凤森 +1 位作者 陆佳骏 陈海波 《材料导报》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第6期874-880,887,共8页
通过体外细胞毒性试验评价速即纱、英洁尔、泰可聆三种可吸收止血材料的细胞相容性,旨在为纤维素类可吸收止血材料的临床安全应用提供参考。采用四唑盐比色法(MTT比色法)、细胞形态分析、琼脂扩散法以及滤膜扩散法,评价三种材料对L929... 通过体外细胞毒性试验评价速即纱、英洁尔、泰可聆三种可吸收止血材料的细胞相容性,旨在为纤维素类可吸收止血材料的临床安全应用提供参考。采用四唑盐比色法(MTT比色法)、细胞形态分析、琼脂扩散法以及滤膜扩散法,评价三种材料对L929成纤维细胞增殖活性的影响及细胞毒性反应。各材料按50.00mg/mL加入不完全细胞培养液浸提24h后,离心得浸提液,此浓度设为100%,依次稀释得50.0%、25.0%、12.5%、6.25%、3.13%、1.56%、0.78%、0.39%材料浸提液。MTT比色法结合细胞形态分析显示:英洁尔材料各浸提液浓度无明显的细胞毒性,速即纱与泰可聆材料浸提液在浓度稀释至25.0%以下时,才不会出现明显的细胞毒性。对于三种材料本身,琼脂扩散法与滤膜扩散法均显示英洁尔材料无明显的细胞毒性,而速即纱与泰可聆材料有明显的细胞毒性。三种不同止血材料的细胞相容性不同,须选择适宜的评价方法。 展开更多
关键词 细胞毒性试验 止血材料 MTT比色法 细胞形态分析 琼脂扩散法 滤膜扩散法
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傣百解体外细胞毒活性评价及其化学成分预实验 被引量：7
10
作者 李晓花 李海涛 +2 位作者 金玲钰 牛迎凤 张丽霞 《中国现代中药》 CAS 2017年第4期529-532,共4页
目的:研究傣百解不同溶剂提取物和不同萃取部位的体外抗肿瘤细胞增殖活性,探索活性部位的化学成分。方法:分别以水、50%乙醇水溶液、95%乙醇水溶液3种溶剂对傣百解进行回流提取,采用系统溶剂法对傣百解95%乙醇水溶液提取物进行萃取,采用... 目的:研究傣百解不同溶剂提取物和不同萃取部位的体外抗肿瘤细胞增殖活性,探索活性部位的化学成分。方法:分别以水、50%乙醇水溶液、95%乙醇水溶液3种溶剂对傣百解进行回流提取,采用系统溶剂法对傣百解95%乙醇水溶液提取物进行萃取,采用SRB法测定不同浓度提取物和萃取部位对人胃癌细胞SGC7901、人肝癌细胞HepG2、人宫颈癌细胞Hela、人卵巢癌细胞SKOV3和人胰腺癌细胞SW1990 5种肿瘤细胞增殖的影响;采用试管法、纸反应法等,对傣百解活性部位的化学成分进行初步研究。结果:傣百解抗肿瘤活性部位为乙酸乙酯萃取部位,对SGC7901、HepG2、Hela和SKOV3肿瘤细胞增殖的IC_(50)分别为8.5、20、18.2、12.2μg·mL^(-1)。乙酸乙酯部位可能含有甾体皂苷、挥发油和有机酸等化学成分。结论:傣百解95%乙醇水溶液提取物的乙酸乙酯萃取部位具有广谱细胞毒活性,化学成分以甾体皂苷为主。 展开更多
关键词 傣百解 细胞毒 预实验
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中药拮新康抗白血病细胞与免疫机能的研究 被引量：6
11
作者 谢兆霞 谭达人 +3 位作者 谢俊明 秦群 谭桂山 徐平声 《湖南医科大学学报》 CSCD 1999年第3期245-247,共3页
采用中药制剂拮新康对３４例白血病患者的白血病细胞进行体外细胞毒性试验，结果显示：长春新碱＋拮新康组较长春新碱组细胞毒性明显增加（Ｐ＜０．０１），其中２０例为难治与复发白血病患者对长春新碱已耐药，但加拮新康后细胞毒性作... 采用中药制剂拮新康对３４例白血病患者的白血病细胞进行体外细胞毒性试验，结果显示：长春新碱＋拮新康组较长春新碱组细胞毒性明显增加（Ｐ＜０．０１），其中２０例为难治与复发白血病患者对长春新碱已耐药，但加拮新康后细胞毒性作用增强（Ｐ＜０．０１）；同时拮新康本身对白血病细胞也有一定的抗肿瘤作用。采用环磷酰胺抑制小鼠免疫机能作实验模型，探讨“拮新康”对小鼠细胞免疫机能的影响，发现其对免疫损伤动物模型及正常动物的ＩＦＮｒ与ＮＫ活性水平较对照组明显增高（Ｐ＜０．０１）。提示“拮新康”有抗白血病细胞和提高细胞免疫机能的作用。 展开更多
关键词 拮新康 白血病 小鼠 中医药疗法 免疫机能
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纳米羟基磷灰石/胶原/聚乳酸新型可吸收材料的短期生物安全性 被引量：5
12
作者 高黎 王书岩 +4 位作者 王蕊 许永华 高静静 张丽 刘文涛 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第22期3530-3535,共6页
背景:课题组前期制备出具有良好生物活性的纳米羟基磷灰石/胶原/聚乳酸[nano-hydroxyapatite/collagen/poly(L-lactic)acid,nHAC/PLA]复合材料。目的:评估纳米羟基磷灰石/胶原/聚乳酸材料的生物安全性。方法:取含聚乳酸分别为100,150,20... 背景:课题组前期制备出具有良好生物活性的纳米羟基磷灰石/胶原/聚乳酸[nano-hydroxyapatite/collagen/poly(L-lactic)acid,nHAC/PLA]复合材料。目的:评估纳米羟基磷灰石/胶原/聚乳酸材料的生物安全性。方法:取含聚乳酸分别为100,150,200 g/L的nHAC/PLA材料,制备浸提液,分别记为nHAC/PLA1、nHAC/PLA2、nHAC/PLA3。①细胞毒性实验:采用nHAC/PLA1、nHAC/PLA2、nHAC/PLA3浸提液、细胞培养基培养L929细胞,采用MTT比色法评价材料的细胞毒性;②急性全身毒性实验:取C57小鼠(郑州大学动物实验中心提供),尾静脉分别注射nHAC/PLA1、nHAC/PLA2、nHAC/PLA3浸提液与生理盐水,注射后24,48,72 h,观察动物一般情况及体质量变化;③血清毒性实验:取SD大鼠(郑州大学动物实验中心提供),分别胃饲nHAC/PLA1、nHAC/PLA2、nHAC/PLA3浸提液与生理盐水,7 d后,采用酶联免疫法检测大鼠血清中白细胞介素1蛋白水平;④致敏实验:将25只白色豚鼠(郑州大学动物实验中心提供)随机分为5组:实验组采用nHAC/PLA1、nHAC/PLA2、nHAC/PLA3浸提液,阴性对照组采用生理盐水,阳性对照组采用体积分数5%甲醛溶液,经过皮内诱导、局部诱导和激发阶段后24,48,72 h,观察各组激发部位皮肤情况;⑤溶血实验:向nHAC/PLA1、nHAC/PLA2、nHAC/PLA3浸提液、生理盐水、蒸馏水中分别加入兔抗凝血,检测溶血率。实验方案经郑州大学伦理委员会审查批准。结果与结论:纳米羟基磷灰石/胶原/聚乳酸材料的体外细胞毒性为0级,急性全身毒性、血清毒性、致敏性和溶血实验结果均为阴性,表明纳米羟基磷灰石/胶原/聚乳酸材料均具有良好的生物安全性。 展开更多
关键词 纳米羟基磷灰石/胶原 聚乳酸 可吸收材料 生物安全性 细胞毒性实验 急性全身毒性实验 血清毒性实验 致敏实验 溶血实验
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羟基磷灰石涂层钛合金材料生物相容性研究初探 被引量：5
13
作者 朱丽丽 姜华 《生物医学工程与临床》 CAS 2014年第4期323-326,共4页
目的探讨一种新型的代骨材料--羟基磷灰石涂层的钛合金材料的生物相容性。方法制备羟基磷灰石涂层钛合金材料浸提液后,采用细胞毒性实验以观察实验样品浸提液对L929小鼠成纤维细胞的毒性反应;通过对小鼠尾静脉及腹腔注射试验样品浸提液... 目的探讨一种新型的代骨材料--羟基磷灰石涂层的钛合金材料的生物相容性。方法制备羟基磷灰石涂层钛合金材料浸提液后,采用细胞毒性实验以观察实验样品浸提液对L929小鼠成纤维细胞的毒性反应;通过对小鼠尾静脉及腹腔注射试验样品浸提液后,观察其对小鼠的急性全身毒性反应;Ames实验及迟发型超敏反应实验对其遗传毒性及致敏性进行安全性评价。结果羟基磷灰石涂层钛合金材料浸提液对L929小鼠成纤维细胞的相对增殖率(RGR)为96.9%,细胞毒性反应为1级,无细胞毒性反应;对小鼠亦无明显的急性全身毒性作用,实验样品组与阴性对照组动物体质量差异无统计学意义(P>0.05);遗传毒性Ames实验表明,在活化与非活化条件下,该材料浸提液对鼠伤寒沙门氏菌株的回变菌落数与对照组比均未增加2倍,对该菌株无诱变性;迟发型超敏反应实验显示,该材料浸提液无潜在的皮肤接触致敏性。结论羟基磷灰石涂层的钛合金材料具有良好的生物相容性。 展开更多
关键词 羟基磷灰石 钛合金 细胞毒性实验 急性全身毒性实验 AMES实验 迟发型超敏反应实验
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新型可注射性人工髓核的体外细胞毒性测试 被引量：6
14
作者 程晓非 邹德威 +6 位作者 吴继功 庹新林 王晓工 刘俊丽 马华松 张瑞娟 路浩军 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期412-415,共4页
目的检测前期制备的新型人工髓核材料的细胞毒性。方法材料分为4组，编号为1～4。样品1组为合成的聚碳酸酯型聚氨酯；样品2组为在室温下由硅氢加成反应制成的缩合硅橡胶材料；样品3组是在2号样品中添加二氧化硅后制成；样品4组为室温下... 目的检测前期制备的新型人工髓核材料的细胞毒性。方法材料分为4组，编号为1～4。样品1组为合成的聚碳酸酯型聚氨酯；样品2组为在室温下由硅氢加成反应制成的缩合硅橡胶材料；样品3组是在2号样品中添加二氧化硅后制成；样品4组为室温下固化的聚醚型聚氨酯。采用细胞培养基作为阴性对照组。采用小鼠成纤维细胞（L929细胞）在材料浸提液中培养的方法检测其细胞毒性，使用3-（4，5-二甲基-2-噻唑）-2，5-二苯基溴化四唑（MTT）比色法比较材料组与对照组间吸光度值和细胞相对增值率。结果材料组的吸光度值和L929细胞相对增殖率相对于对照组没有明显差异（P〉0．05），在细胞毒性分级中处于0～1级，属于合格材料。结论该材料没有细胞毒性，具有作为髓核替代材料的应用潜力。 展开更多
关键词 生物相容性材料 关节成形术 人工髓核 细胞毒性试验
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具药天然胶乳橡胶避孕套的细胞毒性试验 被引量：5
15
作者 王昕 施燕平 +1 位作者 朱雪涛 郝树彬 《齐鲁药事》 2005年第11期677-678,共2页
目的研究具药天然胶乳橡胶避孕套的细胞毒性。方法遵照ISO10993医疗器械生物学评价国际标准的试验原则,采用国际标准的试验方法,在此基础上进一步定量化,更精确的反应了产品的细胞毒性。结果及结论具药天然胶乳橡胶避孕套在浸提液浓度大... 目的研究具药天然胶乳橡胶避孕套的细胞毒性。方法遵照ISO10993医疗器械生物学评价国际标准的试验原则,采用国际标准的试验方法,在此基础上进一步定量化,更精确的反应了产品的细胞毒性。结果及结论具药天然胶乳橡胶避孕套在浸提液浓度大于1.5cm2.ml-1时具有重度细胞毒性。在浸提液浓度小于等于1cm2.ml-1时具有极轻的细胞毒性反应。 展开更多
关键词 具药天然胶乳橡胶避孕套 细胞毒性 浸提液
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Hela细胞MTT试验作为眼刺激替代试验的研究 被引量：5
16
作者 王红梅 马玲 穆效群 《实验动物科学》 2007年第2期65-68,共4页
目的探讨Hela细胞MTT试验(Hela-MTT)是否可作为家兔眼刺激试验(Draize test)的一种替代方法。方法用该方法对22种化妆品的眼刺激性进行检测,并与1999年卫生部颁布的《化妆品卫生规范》和新颁布的《化妆品卫生规范》(2002版)测定的眼刺... 目的探讨Hela细胞MTT试验(Hela-MTT)是否可作为家兔眼刺激试验(Draize test)的一种替代方法。方法用该方法对22种化妆品的眼刺激性进行检测,并与1999年卫生部颁布的《化妆品卫生规范》和新颁布的《化妆品卫生规范》(2002版)测定的眼刺激试验最大平均值(MASold和MASnew)分别进行相关性比较。结果Hela-MTT和MASold、MASnew的相关系数分别为-0.811、-0.639。结论Hela-MTT可作为替代方法用于眼刺激性的评价,是比较有潜力的眼刺激替代试验方法。 展开更多
关键词 眼刺激试验 替代方法 细胞毒性试验
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MTT法和LDH法评价纳米银抗菌凝胶的体外细胞毒性 被引量：5
17
作者 袁博 张娜 景明 《中国医疗器械信息》 2022年第23期24-26,31,共4页
目的:对纳米银抗菌凝胶进行体外细胞毒性评价。方法:试验选用L929小鼠成纤维细胞,通过MTT试验和LDH试验,对被测物进行研究。结果:MTT试验的LC50为0.047g/mL,LDH试验的LC50为0.048g/mL。结论:纳米银离子会破坏细胞线粒体和细胞膜完整性。
关键词 纳米银抗菌凝胶 细胞毒性 MTT试验 LDH试验
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猪链球菌3种毒力因子多细胞表位靶向DC重组蛋白DC3pep-SDZ的构建及安全性检测 被引量：5
18
作者 于恩远 潘晨浩 +7 位作者 姜轩 李颖 赵瑞利 张欣 曾君 荣睿璠 金天明 于晓雪 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期416-422,共7页
为了研制2、3、9型猪链球菌(SS)通用的重组亚单位疫苗,本研究通过生物信息学软件对SS分泌型核酸酶A(SsnA)、二氢硫辛酰胺脱氢酶(DLDH)、锌转运蛋白(ZnuA)3种毒力因子的蛋白质一级结构、B细胞及辅助T(Th)细胞抗原表位、亲疏水性及抗原性... 为了研制2、3、9型猪链球菌(SS)通用的重组亚单位疫苗,本研究通过生物信息学软件对SS分泌型核酸酶A(SsnA)、二氢硫辛酰胺脱氢酶(DLDH)、锌转运蛋白(ZnuA)3种毒力因子的蛋白质一级结构、B细胞及辅助T(Th)细胞抗原表位、亲疏水性及抗原性、二级结构进行综合分析后,预测获得了SsnA、DLDH和ZnuA具有亲水性和较好抗原性的B/Th细胞表位,将它们与12聚体树突状细胞靶向肽(DC3pep)序列串联后获得了重组氨基酸序列DC3pep-SDZ。经蛋白质理化分析DC3pep-SDZ分子质量约为44 ku,理论等电点(pI)为4.65,平均亲水性为-0.462,为亲水性蛋白。由生物公司构建重组原核表达载体pET28a-DC3pepSDZ,转化感受态细胞后经IPTG诱导表达后经western blot鉴定重组蛋白以可溶形式表达。表达产物利用亲和层析镍柱纯化,SDS-PAGE结果显示得到44 ku的纯化目的蛋白,纯化浓缩后经BCA蛋白浓度测定试剂盒检测,浓度为5.60 mg/mL。利用不同浓度纯化重组蛋白对2%猪红细胞悬液进行体外溶血试验,并对PK15、IPEC-J2细胞进行毒性试验,检测重组蛋白的生物安全性。体外溶血试验结果显示在5μg/mL~500μg/mL浓度范围内,DC3pep-SDZ蛋白对2%猪红细胞悬液溶血率低于5%;细胞毒性试验结果显示经500μg/mL DC3pep-SDZ蛋白孵育后,PK15与IPEC-J2细胞的相对增殖率(RGR)分别为98.5%和99.6%,与对照组RGR相比均无显著差异。表明,重组蛋白无明显毒性作用。本实验首次构建并表达了重组蛋白DC3pep-SDZ,该蛋白生物安全性良好,为后续分析其免疫保护效果、研发2、3、9型SS重组亚单位疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 猪链球菌 亚单位疫苗 重组蛋白 体外溶血试验 细胞毒性
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艰难梭菌临床分离株的毒素检测和MLST分型 被引量：5
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作者 贾红兵 杨辉 +5 位作者 杜鹏程 魏利龙 窘沁梅 陈晨 程颖 王靖 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期297-302,共6页
目的初步研究中日友好医院艰难梭菌临床分离株的毒素特征、核糖体分型和多位点序列分型情况．为进一步监测医院内艰难梭菌暴发流行奠定基础。方法收集2012年至2013年本院疑似艰难梭菌感染（Clostridium diffcile infection，CDI）的321... 目的初步研究中日友好医院艰难梭菌临床分离株的毒素特征、核糖体分型和多位点序列分型情况．为进一步监测医院内艰难梭菌暴发流行奠定基础。方法收集2012年至2013年本院疑似艰难梭菌感染（Clostridium diffcile infection，CDI）的321例腹泻患者的标本，采用表型培养法进行菌株分离和鉴定，并对分离菌株进行毒素B的细胞毒试验，分析菌株的毒素基因（tcdA、tcdB、cdtA、cdtB），采用核糖体分型（ribotyping，RT）和多位点序列分型（muhiloeus sequence typing，MLST）分析菌株间的同源性；收集患者临床信息，分析不同患者人群的CDI发生率。结果共从46名腹泻患者中分离到48株艰难梭菌菌株，其中3株菌株分离自同一患者；CDI发生率为14．3％（46／321），其中门诊患者为12．8％（5／39）、住院患者为14．5％（41／282）；所有菌株的毒素B细胞毒试验均为阳性，其中STl型较其他ST型菌株毒素作用更强；毒素基因tcdA（-）／tcdB（＋）型为20．8％（10／48），主要是ST37和ST81：所有菌株的RT和MLST结果一致，均为相同的9个型别，其中以STl／RT027为主。占27．1％（13／48），这些STl／RT027菌株毒素基因检测均为tcdA（＋）／tcdB（＋）、二元毒素基因检测均为cdtA（＋）／cdtB（＋），其中中医呼吸病区占84．6％（11／13），提示该病区存在STl／RT027型菌株的小范围暴发流行的可能。结论CDI在我院主要以医院感染为主，分离株主要为毒素基因，tcdA（＋）/tcdB（＋）的菌株，监测STl／RT027高产毒性流行株引发的暴发流行尤为重要。 展开更多
关键词 艰难梭菌 表型培养法 细胞毒试验 核糖体分型 多位点序列分型
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壳聚糖-丝素支架材料的细胞毒性检测 被引量：5
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作者 张文元 杨亚冬 房国坚 《中国卫生检验杂志》 CAS 2010年第10期2395-2397,共3页
目的:对壳聚糖-丝素(chitosan-silk fibroin)共混多孔支架体外进行细胞毒性实验,探讨壳聚糖-丝素支架对骨髓间充质干细胞的细胞毒性作用情况,为该材料临床应用提供依据。方法:制备壳聚糖-丝素共混多孔支架,并制备该支架材料的浸提液。通... 目的:对壳聚糖-丝素(chitosan-silk fibroin)共混多孔支架体外进行细胞毒性实验,探讨壳聚糖-丝素支架对骨髓间充质干细胞的细胞毒性作用情况,为该材料临床应用提供依据。方法:制备壳聚糖-丝素共混多孔支架,并制备该支架材料的浸提液。通过MTT法检测25%、50%、100%浓度的壳聚糖-丝素浸提液对兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)的细胞毒性作用,以第1,3,5,7天为检测时间点,观察细胞生长状况,计算细胞相对增殖率,并对材料的细胞毒性进行分级。以正常培养基为阴性对照组,含0.64%苯酚的培养液为阳性对照组。结果:BMSCs在不同浓度实验组及阴性对照组中生长均好,细胞呈长梭形等形态,细胞形态饱满有光泽,MTT法结果表明同一时间点各浓度实验组与阴性对照组间之间差异均无统计学意义(P>0.05),各时间点各浓度浸提液对BMSCs细胞的相对增殖率均在95%以上,毒性分级为0级或1级,基本上无毒性。结论:壳聚糖-丝素多孔支架材料细胞相容性良好,基本上无细胞毒性,符合生物材料细胞毒性试验的安全标准,是一种很有潜力的组织工程支架材料。 展开更多
关键词 壳聚糖 丝素 骨髓间充质干细胞 细胞毒性试验 MTT法
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