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中药制剂诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞的分化 被引量:14
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作者 王艳 王海萍 吕洋 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第1期155-160,共6页
背景:中药具有临床应用安全性高等特点,目前已有很多研究应用中药或单体成分体外诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化。目的:总结、分析中药诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的研究进展,并展望其应用前景。方法:应用计算机检索CNK... 背景:中药具有临床应用安全性高等特点,目前已有很多研究应用中药或单体成分体外诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化。目的:总结、分析中药诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的研究进展,并展望其应用前景。方法:应用计算机检索CNKI数据库中2001年1月至2013年1月关于中药诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞的文章,以"中药;骨髓间充质干细胞;心肌细胞"或"bone marrow mesenchymal stem cells,myocardial cells"为检索词进行检索,排除陈旧及重复实验文章,重点对36篇文献进行分析。结果与结论:经三七总皂苷、丹酚酸B、加味丹参饮、淫羊藿苷、黄芪甲苷等不同的中药诱导制剂诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化,诱导后细胞免疫组化和RT-PCR检测结果显示肌细胞纤维蛋白、心肌肌钙蛋白I和主要组织相容性复合体表达均呈阳性,阳性细胞呈梭形和成纤维细胞样形态,即表明有促进增殖分化的作用。结果显示中药诱导骨髓间充质干细胞定向分化为心肌细胞已成为国内外该领域的研究热点,为临床治疗心肌梗死等缺血性心脏病提供理论基础。 展开更多
关键词 干细胞 骨髓干细胞 骨髓间充质干细胞 中药 心肌样细胞 三七总皂苷 加味丹参饮 淫羊藿苷 黄芪甲苷
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间充质干细胞增殖、衰老及分化:Wnt信号通路经典与非经典的调控作用 被引量:13
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作者 施剑明 邬亚华 +1 位作者 耿书国 殷明 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第41期6719-6724,共6页
背景:间充质干细胞作为再生医学及组织工程领域中的重要种子细胞来源,对其不同生物学特性的调控机制一直是目前研究的热点。目的:综述Wnt信号通路调控间充质干细胞增殖、衰老及分化的研究进展。方法:应用计算机检索2002至2014年PubMed... 背景:间充质干细胞作为再生医学及组织工程领域中的重要种子细胞来源,对其不同生物学特性的调控机制一直是目前研究的热点。目的:综述Wnt信号通路调控间充质干细胞增殖、衰老及分化的研究进展。方法:应用计算机检索2002至2014年PubMed数据库及CNKI数据库,以"mesenchymal stem cells,Wnt signaling pathway,proliferation,senescence,differentiation"或"间充质干细胞,Wnt信号通路,增殖,衰老,分化"为关键词进行检索,重点对44篇文章进行分析。结果与结论:Wnt信号通路广泛参与调控间充质干细胞多种生物学特性。经典Wnt信号通路对间充质干细胞增殖及向成骨细胞分化具有双向调控作用,并能够促进其衰老及向神经细胞分化,抑制其向脂肪细胞分化;非经典Wnt信号通路则参与促进间充质干细胞衰老及向成骨细胞分化,抑制其增殖及向脂肪细胞分化,不参与其向神经细胞分化,为其应用于骨组织工程、神经损伤修复等领域提供了新的研究靶点。 展开更多
关键词 干细胞 分化 间充质干细胞 WNT信号通路 增殖 衰老 国家自然科学基金
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联合共培养系统诱导骨髓间充质干细胞分化为视网膜色素上皮样细胞 被引量:7
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作者 郑学栋 徐国兴 +1 位作者 侯泽江 陈金国 《中华眼视光学与视觉科学杂志》 CAS 2011年第2期88-93,共6页
目的 探讨添加脑源性神经生长因子(BDNF)、表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的培养基联合人类视网膜色素上皮细胞(HRPECs)共培养对骨髓间充质干细胞(BMSCs)定向诱导分化的影响.方法 实验研究.实验分三组:HRP... 目的 探讨添加脑源性神经生长因子(BDNF)、表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的培养基联合人类视网膜色素上皮细胞(HRPECs)共培养对骨髓间充质干细胞(BMSCs)定向诱导分化的影响.方法 实验研究.实验分三组:HRPECs+BDNF、EGF、bFGF+BMSCs共培养组、BDNF、EGF、bFGF+BMSCs共培养组和对照组(单独BMSCs).第一组取第3代HRPECs接种在双层培养板的上层,将第3代人BMSCs接种于下层培养板中,在双层六孔板的每孔中加入混合有20 ng/mlbFGF、20 ng/ml EGF、20 ng/ml BDNF及10%胎牛血清(FBS)的DMEM-LG培养液(需做免疫细胞化学染色应同时在下层放入18 mm×18 mm盖玻片进行细胞爬片).第二组取第3代人BMSCs接种在六孔培养板中,每孔中加入含20 ng/ml bFGF、20 ng/ml EGF、20 ng/ml BDNF及10%FBS的DMEM-LG培养液.第三组将第3代人BMSCs接种于六孔培养板中,加入10%FBS的DMEM-LG培养液.在倒置相差显微镜下观察细胞形态学变化.2周后停止培养,采用免疫细胞化学染色法和RT-PCR检测角蛋白18、RPE65蛋白存诱导细胞中的表达.数据采用Holm-Sidak法进行分析.结果 诱导2周后,第一组BMSCs细胞呈圆形、类圆形、不规则形、短棒状外观,细胞内有色素颗粒形成,其他两组没有类似改变.三组间免疫细胞化学染色法检测RPE65蛋白、角蛋白18,光密度值结果显示第一组和第二组间、第一组和第三组间差异有统计学意义(RPE65:t=37.416、36.236,P<0.05;角蛋白18:t=38.611、37.532,P<0.05).而第二组和第三组间差异没有统计学意义(RPE65:t=1.180,P>0.05;角蛋白18:t=1.079,P>0.05).RT-PCR检测相对mRNA表达量,结果显示第一组和第二组间、第一组和第三组间差异有统计学意义(RPE65/β-actin:t=176.110、174.820,P<0.05;角蛋白18/β-actin:t=243.230、241.560,P<0.05).而第二组和第三组间差异无统计学意义(RPE65/β-actin:t=1.283.P>0.05;角� 展开更多
关键词 间质干细胞 骨髓 色素上皮 细胞分化 细胞培养技术
原文传递
人牙周膜干细胞与牙周膜细胞生物学特性的比较 被引量:7
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作者 封艳 粱学萍 +2 位作者 赵今 孙玉亮 钟良军 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第28期4510-4516,共7页
背景:牙周膜干细胞生物作用是目前牙周病治疗研究的热点,牙周膜成纤维细胞是其分化的终末功能细胞之一,也是其主要的支持细胞,两者生物学特性的差异研究鲜有报道。目的:比较牙周膜干细胞与牙周膜细胞生物学特性的差异。方法:用组织块法... 背景:牙周膜干细胞生物作用是目前牙周病治疗研究的热点,牙周膜成纤维细胞是其分化的终末功能细胞之一,也是其主要的支持细胞,两者生物学特性的差异研究鲜有报道。目的:比较牙周膜干细胞与牙周膜细胞生物学特性的差异。方法:用组织块法体外对牙周膜细胞以及单细胞克隆分离纯化后的人牙周膜干细胞两种细胞分别进行显微镜下形态观察,CCK8法检测并绘制2种细胞的生长曲线。流式细胞分析比较2种细胞的细胞周期以及细胞表面标记物的表达、实时PCR对2种细胞碱性磷酸酶、增殖细胞核抗原和Scleraxis基因进行检测。结果与结论:牙周膜干细胞与牙周膜成纤维细胞外观差别明显,人牙周膜干细胞的生长曲线培养前5 d要低于牙周膜细胞,但在5 d后明显高于牙周膜细胞。人牙周膜干细胞与牙周膜细胞的细胞周期分别为41.1%和23.9%。表面标记物检测结果显示2种细胞虽有相似的表达,但在表达率差异有有显著性意义。实时荧光定量PCR结果显示,人牙周膜干细胞在碱性磷酸酶、增殖细胞核抗原以及Scleraxis基因的表达检测均高于牙周膜细胞。表明牙周膜干细胞在成骨增殖等生物学功能上比牙周膜细胞具有更强的潜能。 展开更多
关键词 干细胞 培养 牙周膜干细胞 牙周膜细胞 成骨 增殖 生物学特性 表面标志物 新疆维吾尔自治区自然科学基金
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Distribution and localization of fibroblast growth factor-8 in rat brain and nerve cells during neural stem/progenitor cell differentiation 被引量:4
5
作者 Jiang Lu Dongsheng Li Kehuan Lu 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2012年第19期1455-1462,共8页
The present study explored the distribution and localization of fibroblast growth factor-8 and its potential receptor, fibroblast growth factor receptor-3, in adult rat brain in vivo and in nerve cells during differen... The present study explored the distribution and localization of fibroblast growth factor-8 and its potential receptor, fibroblast growth factor receptor-3, in adult rat brain in vivo and in nerve cells during differentiation of neural stem/progenitor cells in vitro. Immunohistochemistry was used to examine the distribution of fibroblast growth factor-8 in adult rat brain in vivo. Localization of fibroblast growth factor-8 and fibroblast growth factor receptor-3 in cells during neural stem/progenitor cell differentiation in vitro was detected by immunofluorescence. Flow cytometry and immunofluorescence were used to evaluate the effect of an anti-fibroblast growth factor-8 antibody on neural stem/progenitor cell differentiation and expansion in vitro. Results from this study confirmed that fibroblast growth factor-8 was mainly distributed in adult midbrain, namely the substantia nigra, compact part, dorsal tier, substantia nigra and reticular part, but was not detected in the forebrain comprising the caudate putamen and striatum. Unusual results were obtained in retrosplenial locations of adult rat brain. We found that fibroblast growth factor-8 and fibroblast growth factor receptor-3 were distributed on the cell membrane and in the cytoplasm of nerve cells using immunohistochemistry and immunofluorescence analyses. We considered that the distribution of fibroblast growth factor-8 and fibroblast growth factor receptor-3 in neural cells corresponded to the characteristics of fibroblast growth factor-8, a secretory factor. Addition of an anti-fibroblast growth factor-8 antibody to cultures significantly affected the rate of expansion and differentiation of neural stem/progenitor cells. In contrast, addition of recombinant fibroblast growth factor-8 to differentiation medium promoted neural stem/progenitor cell differentiation and increased the final yields of dopaminergic neurons and total neurons. Our study may help delineate the important roles of fibroblast growth factor-8 in brain activities and neural stem/proge 展开更多
关键词 fibroblast growth factor-8 fibroblast growth factor receptor-3 neural stem/progenitor celldifferentiation dopaminergic neurons MIDBRAIN neural regeneration
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骨髓间充质干细胞的旁分泌能影响成骨细胞生物学功能 被引量:6
6
作者 李成 周海斌 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第10期1477-1483,共7页
背景:有研究表明骨髓间充质干细胞移植可促进骨缺损的修复,但受损组织的缺血、缺氧和炎症反应限制了其临床应用。目的:观察骨髓间充质干细胞旁分泌作用对成骨细胞MG63增殖、迁徙、分化功能的影响。方法:Ficoll-Paque密度梯度离心法分离... 背景:有研究表明骨髓间充质干细胞移植可促进骨缺损的修复,但受损组织的缺血、缺氧和炎症反应限制了其临床应用。目的:观察骨髓间充质干细胞旁分泌作用对成骨细胞MG63增殖、迁徙、分化功能的影响。方法:Ficoll-Paque密度梯度离心法分离骨髓间充质干细胞,制备骨髓间充质干细胞条件培养基培养成骨细胞MG63。CCK-8法检测MG63细胞增殖能力变化;细胞划痕法检测MG63细胞迁徙能力变化;微板检测MG63细胞合成碱性磷酸酶能力的变化;Real-time PCR法检测碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原及骨钙素基因表达量的变化;茜素红染色检测其矿化能力的变化。结果与结论:骨髓间充质干细胞表型为CD44、CD73、CD90表达强阳性,CD34表达阴性。与普通培养基(DMEM)相比,在骨髓间充质干细胞条件培养基作用下,MG63细胞的增殖速度明显加快;细胞划痕结果示其迁徙能力明显提高;诱导第4,7天后碱性磷酸酶基因表达量及蛋白合成量明显增多(P<0.01);Ⅰ型胶原及骨钙素基因表达量在诱导第4天后差异无显著性意义,诱导第7天后较对照组明显升高(P<0.05);茜素红染色示骨髓间充质干细胞条件培养基诱导MG63细胞21 d后钙结节形成增多,矿化沉积作用增强。结果证实,骨髓间充质干细胞的旁分泌物质可以显著促进成骨细胞的增殖、迁徙、分化和矿化能力。 展开更多
关键词 干细胞 骨髓干细胞 骨髓间充质干细胞 旁分泌 成骨细胞 增殖 分化 矿化
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人羊膜间充质干细胞生物学特征及向多巴胺能神经元样细胞的分化 被引量:5
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作者 周文然 李新 +3 位作者 王文波 谢燕霞 唐娜 阎影 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第23期3682-3690,共9页
背景:羊膜间充质干细胞具有类似胚胎干细胞多潜能的特点,在再生医学等多种领域的临床应用具有广泛的实用性和明确的良好前景。然而,目前对于羊膜间充质干细胞的生物学特性和分化潜能的认识仍然了解甚少。目的:建立体外分离和纯化人羊膜... 背景:羊膜间充质干细胞具有类似胚胎干细胞多潜能的特点,在再生医学等多种领域的临床应用具有广泛的实用性和明确的良好前景。然而,目前对于羊膜间充质干细胞的生物学特性和分化潜能的认识仍然了解甚少。目的:建立体外分离和纯化人羊膜间充质干细胞的方法,检测羊膜间充质干细胞的体外分化特点,确定羊膜间充质干细胞在体外诱导条件下向多巴胺能神经元样细胞分化的潜能。方法:采用胰蛋白酶和胶原酶Ⅱ分步消化法从羊膜中分离羊膜间充质干细胞和羊膜上皮细胞;采用percoll梯度离心方法对羊膜间充质干细胞和羊膜上皮细胞进行纯化;流式细胞术检测羊膜间充质干细胞的表面标志,确定羊膜间充质干细胞细胞表面抗原的表达特征;对体外培养的羊膜间充质干细胞进行成脂肪和成骨诱导,确定其多向分化的潜能;采用神经细胞条件培养体系诱导羊膜间充质干细胞向多巴胺神经细胞分化,通过免疫荧光染色和激光共聚焦荧光显微镜观察和鉴定诱导后多巴胺神经元样细胞的生成。结果与结论:从羊膜组织成功分离、纯化和培养出羊膜间充质干细胞和羊膜上皮细胞。羊膜来源的间充质干细胞不仅具有典型的间充质干细胞标志,而且保留了一些胚胎干细胞的OCT-4,SOX-2和KLF4等特有干细胞标志,可以诱导分化成为脂肪细胞和骨细胞,显示羊膜间充质干细胞保持了较为原始的胚胎干细胞的特点,具有多向分化的潜能。诱导分化之前的原代羊膜间充质干细胞表达固有的多种神经细胞标记,体外诱导后羊膜间充质干细胞可分化成为β-微管蛋白Ⅲ、神经元特异性核蛋白、酪氨酸羟化酶、胶质纤维酸性蛋白、髓鞘碱性蛋白和巢蛋白等阳性表达的多巴胺能神经元样细胞。结果表明人羊膜来源的间充质干细胞所保留的多向分化潜能和有效分化成为多巴胺能神经元样细� 展开更多
关键词 干细胞 培养 分化 羊膜 间充质干细胞 羊膜上皮细胞 诱导分化 多巴胺能神经元
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诱导多能干细胞建系及体外造血祖细胞定向分化体系的建立 被引量:5
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作者 沈洁 李金辉 +5 位作者 阮静 邱云 朱殷 崔大祥 范志宏 汪铮 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第19期3005-3011,共7页
背景:目前,大量文献报道了诱导多能性干细胞系的建立,但大规模体外诱导分化造血祖细胞的研究还缺乏深入的探讨。目的:建立诱导多能性干细胞体外定向诱导形成造血祖细胞的方法。方法:采用慢病毒感染的方法将含有Oct4、Sox2、Nanog和Lin2... 背景:目前,大量文献报道了诱导多能性干细胞系的建立,但大规模体外诱导分化造血祖细胞的研究还缺乏深入的探讨。目的:建立诱导多能性干细胞体外定向诱导形成造血祖细胞的方法。方法:采用慢病毒感染的方法将含有Oct4、Sox2、Nanog和Lin28全能性基因的慢病毒颗粒转导人皮肤成纤维细胞,获得了诱导多能性干细胞;在诱导分化体系中添加了Y-27632,克服干细胞扩增中的凋亡现象;运用OP9细胞产生的条件培养液建立诱导多能性干细胞体外定向分化形成造血祖细胞的分化体系。结果与结论:①前3代细胞克隆传代时,诱导多能性干细胞发生凋亡的现象很多,很难大规模扩增培养。培养基中添加阻断ROCK活化的抑制剂,能够明显抑制胚胎干细胞的凋亡。②诱导多能性干细胞在OP9细胞条件培养液作用下,经过体外诱导分化,形成CD34+造血祖细胞。 展开更多
关键词 干细胞 培养 诱导多能性干细胞 类胚体 造血祖细胞 体外分化
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软骨细胞上清液诱导滑膜间充质干细胞微团培养成软骨 被引量:4
9
作者 邵博 龚忠诚 +7 位作者 刘慧 凌彬 克热木 尹小朋 胡露露 王冰 宁晓婷 林兆全 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第1期100-105,共6页
背景:滑膜间充质干细胞在体外具有多向分化的能力,有望成为软骨组织工程中治疗软骨缺损的种子细胞,在其向软骨细胞分化过程中,合适的生长因子起了重要作用。目的:利用富含生长因子的软骨细胞上清液诱导滑膜间充质干细胞向软骨细胞分化,... 背景:滑膜间充质干细胞在体外具有多向分化的能力,有望成为软骨组织工程中治疗软骨缺损的种子细胞,在其向软骨细胞分化过程中,合适的生长因子起了重要作用。目的:利用富含生长因子的软骨细胞上清液诱导滑膜间充质干细胞向软骨细胞分化,并对其鉴定。方法:采用消化法分别获得SD大鼠滑膜间充质干细胞、软骨细胞。收集软骨细胞上清液离心、过滤冻存备用。培养滑膜间充质干细胞至第3代后离心成微团,并用软骨细胞上清液进行成软骨诱导分化,通过形态学观察、免疫组织化学法、RT-PCR检测进行鉴定。结果与结论:滑膜间充质干细胞使用软骨细胞上清液成软骨诱导21 d后,微团可见似软骨样组织。免疫组化法进行Ⅱ型胶原鉴定,基质能被Ⅱ型胶原染色,细胞染色呈现棕黄色。RT-PCR结果显示诱导后的微团表达软骨特异性基因Ⅱ型胶原和蛋白聚糖。证实软骨细胞分泌的可溶性因子可以诱导大鼠滑膜间充质干细胞向软骨方向分化。 展开更多
关键词 干细胞 诱导 滑膜间充质干细胞 软骨形成 软骨细胞 可溶性因子 生长因子 种子细胞 三维培养 新疆维吾尔自治区自然科学基金
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褪黑素通过视黄酸相关孤儿受体α可抑制骨髓间充质干细胞的成脂肪分化 被引量:3
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作者 张良明 王璇 +2 位作者 高文杰 黄东生 戎利民 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第19期2968-2974,共7页
背景:前期研究发现,褪黑素能够抑制骨髓间充质干细胞向脂肪细胞诱导分化,但其作用机制有待进一步研究。目的:探索褪黑素是否通过核受体视黄酸相关孤儿受体α介导抑制骨髓间充质干细胞向脂肪细胞诱导分化的作用机制。方法:无菌采集骨髓样... 背景:前期研究发现,褪黑素能够抑制骨髓间充质干细胞向脂肪细胞诱导分化,但其作用机制有待进一步研究。目的:探索褪黑素是否通过核受体视黄酸相关孤儿受体α介导抑制骨髓间充质干细胞向脂肪细胞诱导分化的作用机制。方法:无菌采集骨髓样本,采用密度梯度离心结合贴壁培养分离培养人骨髓间充质干细胞,用流式细胞仪鉴定细胞表面表型。然后将细胞分为褪黑素组、CGP52608组和对照组,分别以含褪黑素、CGP52608脂肪维持液和正常的脂肪诱导液进行诱导,用荧光定量PCR和Western blot法检测核受体视黄酸相关孤儿受体α在骨髓间充质干细胞以及其成脂肪分化过程中的表达特征。用受体特异性激活剂CGP52608,考察核受体视黄酸相关孤儿受体α激活状态下,骨髓间充质干细胞成脂肪分化的影响。结果与结论:原代分离的骨髓间充质干细胞生长旺盛,呈纤维梭状,流式鉴定间充质干细胞表型结果示,CD34和CD45表达阴性,CD29,CD44与CD105表达阳性。荧光定量PCR发现骨髓间充质干细胞高表达褪黑素核受体视黄酸相关孤儿受体α,而且褪黑素能够呈浓度依赖性促进骨髓间充质干细胞表达视黄酸相关孤儿受体α;Western blot检测结果也证实褪黑素呈浓度依赖性促进视黄酸相关孤儿受体α在蛋白水平的表达。在成脂肪分化过程中,褪黑素在早期明显上调视黄酸相关孤儿受体α表达,但在中后期就维持在相对低水平。最后,用CGP52608激活视黄酸相关孤儿受体α后,骨髓间充质干细胞成脂肪分化被抑制。因此,褪黑素通过核受体视黄酸相关孤儿受体α抑制骨髓间充质干细胞成脂肪分化,褪黑素在调节脂肪细胞分化过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 干细胞 骨髓干细胞 间充质干细胞 褪黑素 骨髓 脂肪细胞 脂肪分化 褪黑素受体 视黄酸相关孤儿受体α 国家自然科学基金
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阻断钙调磷酸酶/激活T细胞核因子通路对聚甲基丙烯酸甲酯颗粒抑制骨祖细胞向成骨细胞分化的影响 被引量:3
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作者 李茂强 朱振安 +5 位作者 刘凤祥 王刚 毛远青 刘铭 赵鑫 侯长举 《中华创伤骨科杂志》 CAS CSCD 2010年第2期156-161,共6页
目的探讨VIVIT肽阻断钙调磷酸酶(Cn)/激活T细胞核因子(NFAT)信号通路对聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)颗粒抑制骨祖细胞向成骨细胞分化的影响。方法体外分离培养Sprague-Drawlev大鼠胎鼠颅骨原代细胞(包含大量骨祖细胞),根据处理条... 目的探讨VIVIT肽阻断钙调磷酸酶(Cn)/激活T细胞核因子(NFAT)信号通路对聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)颗粒抑制骨祖细胞向成骨细胞分化的影响。方法体外分离培养Sprague-Drawlev大鼠胎鼠颅骨原代细胞(包含大量骨祖细胞),根据处理条件不同分为4组:对照组、PMMA组、PMMA/VIVIT组和VIVIT组。细胞培养2、4、7和14d用MTT法检测细胞增殖情况,7d和14d用碱性磷酸酶(ALP)定量反映细胞分化;细胞培养14d后茜素红染色观察细胞矿化,RT-PCR法观察ALP、骨钙素、Ⅰ型胶原、Fra-2(与成骨细胞分化有关的转录因子)、NFATc1的基因表达,Western Blot法检测细胞核和细胞质中NFATc1蛋白的表达。结果PMMA组较对照组NFATc1基因和蛋白表达增加,并伴有NFATc1蛋白转位入核明显增加,成骨细胞分化、矿化和相关基因表达明显降低。PMMA/VIVIT组较PMMA组细胞分化、矿化和相关基因表达增加,但低于VIVIT组,NFATc1基因表达降低,转位入核的NFATc1蛋白明显减少。各组细胞增殖差异均无统计学意义(P〉0.05)。结论PMMA颗粒抑制骨祖细胞向成骨细胞分化与Cn/NFAT信号通路激活有关,VIVIT肽阻断Cn/NFAT信号通路可促进PMMA颗粒抑制的骨祖细胞向成骨细胞分化。 展开更多
关键词 成骨细胞 细胞分化 骨祖细胞 肽类 聚甲基丙烯酸类
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转化生长因子β及周期性拉伸应变条件下骨髓间充质干细胞向软骨样细胞的分化 被引量:3
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作者 郝耀 乔梁 +1 位作者 郝永壮 向川 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第28期4429-4436,共8页
背景:研究表明转化生长因子β对骨髓间充质干细胞的软骨方向分化具有显著的诱导作用。周期性拉伸应变可以模拟软骨细胞在体内的力学环境,对细胞的增殖和分化起着重要的调节作用。目的:探讨转化生长因子β及周期性拉伸应变在诱导骨髓间... 背景:研究表明转化生长因子β对骨髓间充质干细胞的软骨方向分化具有显著的诱导作用。周期性拉伸应变可以模拟软骨细胞在体内的力学环境,对细胞的增殖和分化起着重要的调节作用。目的:探讨转化生长因子β及周期性拉伸应变在诱导骨髓间充质干细胞向软骨样细胞分化过程中是否具有协同作用。方法:取2月龄新西兰大白兔10只,骨穿针穿入股骨髓腔内,抽取骨髓3.0-4.0 mL并分离培养骨髓间充质干细胞,传至3代后随机分为4组,分别为空白组、转化生长因子β组、周期性拉伸应变组以及周期性拉伸应变+转化生长因子β组,作用1,3,6 d后取出相应细胞,番红O染色观察大体形态,阿尔新蓝染色检测糖胺聚糖水平,ELISA检测上清液基质金属蛋白酶13及基质金属蛋白酶组织抑制剂1水平,RT-PCR检测Ⅱ型胶原、基质金属蛋白酶13及基质金属蛋白酶组织抑制剂1 mRNA相对表达量。结果与结论:番红O染色可见细胞呈长梭形或不规则三角形样改变,各实验组较空白组细胞数量及基质分泌增多。作用第3天时转化生长因子β组、周期性拉伸应变+转化生长因子β组上清液糖胺聚糖水平较空白组均升高(P<0.05),周期性拉伸应变+转化生长因子β组Ⅱ型胶原mRNA相对表达量较空白组增高(P<0.05)。结果提示转化生长因子β及周期性拉伸应变均可诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化,二者具有明显的协同作用。 展开更多
关键词 干细胞 骨髓干细胞 骨髓间充质干细胞 转化生长因子Β 周期性拉伸应变 软骨细胞 分化
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脂多糖诱导炎症反应对甲状腺相关眼病眼眶前脂肪细胞分化的影响 被引量:3
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作者 易文殊 许雪亮 《中华眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期156-161,共6页
目的观察脂多糖诱导炎症反应对甲状腺相关眼病(TAO)眼眶前脂肪细胞分化的影响,探讨TAO眼眶脂肪增殖的发病机制。方法实验研究。眼眶组织取TAO行开眶减压术的患者。将体外培养的TAO眼眶成纤维细胞,分为A组与B组,A组采用1mg/L的脂... 目的观察脂多糖诱导炎症反应对甲状腺相关眼病(TAO)眼眶前脂肪细胞分化的影响,探讨TAO眼眶脂肪增殖的发病机制。方法实验研究。眼眶组织取TAO行开眶减压术的患者。将体外培养的TAO眼眶成纤维细胞,分为A组与B组,A组采用1mg/L的脂多糖作用8h,然后常规用诱导分化液I和Ⅱ诱导直至分化结束,B组仅用诱导分化液I和Ⅱ诱导至分化结束。采用油红O染色法测定分化后脂肪细胞相对含量,逆转录聚合酶链反应法与Western blot法检测环氧化酶2(COX2)与过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)mRNA与蛋白的表达,酶联免疫吸附实验检测上清液中前列腺素E2(PGE2)的表达。两样本均数比较采用t检验,多样本比较采用单因素方差分析,两两比较采用SNK检验。结果分化后油红O染色显示两组细胞形态上无明显差异。A组细胞吸光度(A)值(1.02±0.08)较B组(0.74±0.06)明显升高,差异具有统计学意义(t=8.502,P=0.000)。A组细胞分化后PPARγ mRNA(1.74±0.19)与蛋白(0.47±0.04)的表达分别较分化前PPARγ mRNA(0.30±0.07)与蛋白(0.08±0.02)的表达明显增强(P〈0.05);B组细胞分化后PPARγmRNA(1.15±0.18)与蛋白(0.35±0.03)的表达分别较分化前PPARγ mRNA(0.13±0.04)与蛋白(0.03±0.01)的表达明显增强(P〈0.05);A组细胞分化后COX2 mRNA(0.28±0.07)与蛋白(0.24±O.03)的表达分别较分化前COX2mRNA(1.54±0.10)与蛋白(O.49±0.03)的表达明显减弱(P〈0.05);B组细胞分化后COX2mRNA的表达(0.08±0.03)较分化前(0.19±0.07)明显减弱(P〈0.05),而COX2蛋白的表达(0.01±0.01)与分化前(0.03±0.01)比较差异无统计学意义(P〉0.05)。分化后A组细胞上清液中PGE2分泌水平(208.43±15.06)ng/L较分化前(898.75±21.09) 展开更多
关键词 脂多糖类 GRAVES眼病 环氧化酶2 PPARγ 细胞分化
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不同培养条件下脂肪干细胞与成骨细胞的共培养 被引量:2
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作者 张扬 刘大诚 杨效宁 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第37期6003-6007,共5页
背景:成骨细胞与骨髓干细胞共培养后可以诱导骨髓干细胞向成骨细胞分化,成骨细胞与脂肪干细胞共培养是否也能诱导向成骨细胞分化呢?目的:观察脂肪干细胞与成骨细胞共培养后能否向成骨细胞分化。方法:分离新西兰大白兔脂肪干细胞和成骨细... 背景:成骨细胞与骨髓干细胞共培养后可以诱导骨髓干细胞向成骨细胞分化,成骨细胞与脂肪干细胞共培养是否也能诱导向成骨细胞分化呢?目的:观察脂肪干细胞与成骨细胞共培养后能否向成骨细胞分化。方法:分离新西兰大白兔脂肪干细胞和成骨细胞,待脂肪干细胞生长至3代,成骨细胞生长至2代时,进行共培养。根据培养时血清浓度不同分为10%胎牛血清共培养组和5%胎牛血清共培养组,共培养14 d。结果与结论:共培养7 d后,2组脂肪干细胞均出现部分变圆。14 d后,脂肪干细胞高度分化与成熟成骨细胞相似,碱性磷酸酶染色阳性、茜素红染色阳性,其Ⅰ型胶原和骨钙素mRNA表达均增高,以10%胎牛血清培养组更为明显。提示脂肪干细胞与成骨细胞经过共培养后可以向成骨细胞分化,高浓度血清培养可以促进诱导作用。 展开更多
关键词 干细胞 脂肪干细胞 成骨分化 共培养 细胞培养 胎牛血清
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骨髓间充质干细胞及其向肝样细胞分化的潜能 被引量:2
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作者 范敬静 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第28期4578-4582,共5页
背景:研究表明,在一定条件下骨髓间充质干细胞可诱导分化为肝样细胞,为治疗急性肝衰竭等终末期肝病提供了新的思路。目的:对骨髓间充质干细胞的发现、分离培养、诱导分化及应用前景等方面做一综述。方法:计算机检索中国期刊网全文数据... 背景:研究表明,在一定条件下骨髓间充质干细胞可诱导分化为肝样细胞,为治疗急性肝衰竭等终末期肝病提供了新的思路。目的:对骨髓间充质干细胞的发现、分离培养、诱导分化及应用前景等方面做一综述。方法:计算机检索中国期刊网全文数据库以及PubMed数据库1999至2014年期间有关骨髓间充质干细胞及其向肝样细胞分化的文章。检索词分别为"肝样细胞,骨髓间充质干细胞,细胞分化"和"hepatocyte-like cells,bone marrow mesenchymal stem cells,differentiation"。最后选择52篇文章纳入结果分析。结果与结论:目前,肝组织工程的首要问题是寻找性状稳定具有肝特异性功能的种子细胞,成熟肝细胞获取难度较大,并具有产生免疫排斥反应、体外培养困难等缺陷,严重限制了肝移植的开展。骨髓间充质干细胞具有多向分化、自我更新快、易于扩增及培养等优点,被认为是最有前途的细胞来源。已有研究表明骨髓间充质干细胞在体内外均可分化为肝细胞,并具有肝细胞的合成和分泌功能。但如何大量扩增此类细胞的同时又能保持其良好的分化潜能、体外培养的最佳条件、诱导分化机制和临床应用的安全性等尚需进一步研究和探讨。 展开更多
关键词 干细胞 骨髓干细胞 肝样细胞 骨髓间充质干细胞 细胞分化 肝细胞生长因子 成纤维生长因子4
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川芎含药血清对小鼠胚胎干细胞增殖和分化的影响 被引量:2
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作者 蒋德菊 罗艺 +1 位作者 鲍倩 夏荃 《广州中医药大学学报》 CAS 2017年第3期401-404,共4页
【目的】观察川芎含药血清对小鼠胚胎干细胞(ES细胞)增殖及分化的影响。【方法】川芎含药血清与ES细胞共培养,采用CCK-8法检测细胞活性,逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)法检测心肌细胞特异基因肌球蛋白重链(β-MHC)m RNA的表达水平。【结... 【目的】观察川芎含药血清对小鼠胚胎干细胞(ES细胞)增殖及分化的影响。【方法】川芎含药血清与ES细胞共培养,采用CCK-8法检测细胞活性,逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)法检测心肌细胞特异基因肌球蛋白重链(β-MHC)m RNA的表达水平。【结果】与大鼠血清组和胎牛血清组比较,川芎含药血清组的ES细胞活性差异无统计学意义(P>0.05),川芎含药血清组心肌细胞特异基因β-MHC表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。【结论】川芎含药血清对ES细胞向心肌细胞分化有促进作用。 展开更多
关键词 川芎/药理学 胚胎干细胞/病理学 细胞增殖 细胞分化 细胞培养 基因表达调控
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骨形态发生蛋白2诱导慢性腱病大鼠肌腱干细胞体外成骨、成软骨分化 被引量:2
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作者 林禹丞 王宸 +2 位作者 芮云峰 成心锟 马良彧 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第19期3075-3081,共7页
背景:目前临床对于慢性腱病缺乏有效的治疗手段,原因在于其发病机制至今尚未阐明。目的:研究体外骨形态发生蛋白2对胶原酶诱导的大鼠慢性腱病模型髌腱来源肌腱干细胞的成骨、成软骨分化的作用。方法:从大鼠慢性腱病模型的髌腱中分离培... 背景:目前临床对于慢性腱病缺乏有效的治疗手段,原因在于其发病机制至今尚未阐明。目的:研究体外骨形态发生蛋白2对胶原酶诱导的大鼠慢性腱病模型髌腱来源肌腱干细胞的成骨、成软骨分化的作用。方法:从大鼠慢性腱病模型的髌腱中分离培养出原代肌腱干细胞,传代培养至第3代细胞,行成骨、成脂、成软骨诱导分化鉴定其干细胞的特性。将肌腱干细胞(P3)单层培养至细胞融合,用重组人骨形态发生蛋白2干预。7 d后分别行茜素红染色,并行茜素红染色定量分析。将肌腱干细胞体外三维微球培养后分为2组,诱导组用重组人骨形态发生蛋白2干预,对照组不进行干预。21 d后三维微球行苏木精-伊红染色,阿利辛蓝染色以及Sox9和Ⅱ型胶原免疫组织化学染色。结果与结论:慢性腱病大鼠来源原代肌腱干细胞体外培养呈克隆样集落生长,传代后细胞主要表现为多突的纺锤形和星形的扁平细胞,具有成纤维细胞样的特征。肌腱干细胞(P3)成脂诱导10 d,油红O染色阳性;成骨诱导7 d,茜素红染色阳性;成软骨诱导14 d,苏木精-伊红染色阳性可见软骨样细胞,Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性。单层培养的肌腱干细胞用重组人骨形态发生蛋白2诱导7 d茜素红染色阳性,对照组为阴性,茜素红染色定量检测显示差异有显著性意义。重组人骨形态发生蛋白2诱导肌腱干细胞21 d,苏木精-伊红染色可见软骨样细胞形成、阿利辛蓝染色可见细胞内糖胺多糖沉积、Sox9和Ⅱ型胶原免疫组织化学染色均呈阳性。可见体外重组人骨形态发生蛋白2可以诱导慢性腱病来源的肌腱干细胞成骨、成软骨分化。这为进一步研究慢性腱病的发病机制提供了细胞生物学依据。 展开更多
关键词 干细胞 诱导 慢性腱病 肌腱干细胞 成骨分化 成软骨分化 骨形态发生蛋白2 国家自然科学基金
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胰岛素样生长因子-1和肿瘤坏死因子-α对C2C12骨骼成肌细胞增殖和分化的影响 被引量:1
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作者 黄政渊 陈思曾 林永堃 《福建医科大学学报》 2007年第6期518-520,共3页
目的观察胰岛素样生长因子-I(IGF-I)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对体外培养的C2C12小鼠骨骼成肌细胞增殖、分化的影响。方法体外培养C2C12小鼠骨骼成肌细胞,分别采用IGF-I、TNF-α和IGF-I+TNF-α干预细胞,以MTT法、肌酸激酶(CK)活性测定... 目的观察胰岛素样生长因子-I(IGF-I)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对体外培养的C2C12小鼠骨骼成肌细胞增殖、分化的影响。方法体外培养C2C12小鼠骨骼成肌细胞,分别采用IGF-I、TNF-α和IGF-I+TNF-α干预细胞,以MTT法、肌酸激酶(CK)活性测定法检测处理后的细胞在增殖、分化方面的变化。结果IGF-I组24,48和72h增殖程度均高于对照组(P<0.05),且增殖作用具有时间效应(P<0.05)。IGF-I组和TNF-α组CK活性均低于对照组(P<0.05),但随着时间延长IGF-I组CK活性呈升高趋势。结论IGF-I促进C2C12骨骼成肌细胞的增殖,延迟其分化;TNF-α抑制C2C12骨骼成肌细胞的分化。 展开更多
关键词 胰岛素样生长因子-Ⅰ 肿瘤坏死因子-Α 成肌细胞 细胞增殖 细胞分化 细胞 培养的
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骨髓间充质干细胞防护肾脏衰老的作用及其机制 被引量:1
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作者 李艳菊 刘洋 +2 位作者 王季石 孟伟 黄懿 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第19期2999-3004,共6页
背景:骨髓间充质干细胞具有分化成肾小管上皮细胞的功能,故推测,间充质干细胞可能具有治疗慢性肾功能减退的作用。目的:研究骨髓来源的大鼠间充质干细胞防护肾脏衰老的作用及其可能的机制。方法:实验建立衰老大鼠模型,尾静脉移植骨髓来... 背景:骨髓间充质干细胞具有分化成肾小管上皮细胞的功能,故推测,间充质干细胞可能具有治疗慢性肾功能减退的作用。目的:研究骨髓来源的大鼠间充质干细胞防护肾脏衰老的作用及其可能的机制。方法:实验建立衰老大鼠模型,尾静脉移植骨髓来源的大鼠间充质干细胞,应用荧光染料羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂标记体外培养大鼠骨髓来源的间充质干细胞,将其回输肾脏衰老大鼠体内,应用荧光显微镜下观察间充质干细胞是否能够归巢于肾脏;全自动生化仪测定各组大鼠血清中尿素氮及肌酐水平变化;采用免疫荧光法,利用计算机图像叠加技术,观察蓝色荧光4’,6-二脒基-2-苯基吲哚分别与红色荧光的肾小管上皮细胞特异性蛋白-角蛋白的叠加情况。结果与结论:骨髓来源的大鼠间充质干细胞能够归巢到衰老大鼠的肾脏。与衰老大鼠模型组相比,经过间充质干细胞生物治疗后的衰老大鼠血清中尿素氮及肌酐水平显著降低(P<0.05),肾脏组织可见少量4’,6-二脒基-2-苯基吲哚及异硫氰酸荧光素标记的角蛋白双染阳性细胞。结果显示,骨髓来源的大鼠间充质干细胞通过向肾小管上皮分化,这可能是其改善衰老大鼠肾脏的机制之一。 展开更多
关键词 干细胞 骨髓干细胞 间充质干细胞 衰老 肾脏 肾小管上皮细胞 免疫荧光法 D-半乳糖 角蛋白 分化
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人脐带间充质干细胞的分离鉴定及多向诱导分化 被引量:1
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作者 李茂 黄文 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第19期3012-3016,共5页
背景:脐带间充质干细胞取材方便、无创,不受伦理学限制,比一般干细胞原始,免疫原性小,其应用前景广阔,是一种理想的种子细胞。目的:分离鉴定脐带间充质干细胞,并诱导其向成骨细胞和成脂细胞分化。方法:组织块贴壁法分离纯化脐带间充质... 背景:脐带间充质干细胞取材方便、无创,不受伦理学限制,比一般干细胞原始,免疫原性小,其应用前景广阔,是一种理想的种子细胞。目的:分离鉴定脐带间充质干细胞,并诱导其向成骨细胞和成脂细胞分化。方法:组织块贴壁法分离纯化脐带间充质干细胞,取对数生长期的第3代细胞,观察细胞形态、生长方式;流式细胞仪检测干细胞表型CD90、CD105、CD34和CD45的表达情况,并在体外检测能否将其诱导分化为成脂细胞及成骨细胞。结果与结论:用组织块法成功分离培养出脐带间充质干细胞,流式细胞学鉴定显示细胞强表达CD90和CD105,不表达CD34和CD45;能在体外将其成功诱导为脂肪细胞和成骨细胞。结果显示组织块贴壁法能够从人脐带中分离出间充质干细胞,该细胞可向成脂细胞及成骨细胞分化。 展开更多
关键词 干细胞 脐带脐血干细胞 脐带间充质干细胞 分化 成脂细胞 成骨细胞
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